LSIVet™ Ruminant Q Fever - Serum/Milk

2. Waschschritt
Entleeren Sie die Vertiefungen und waschen Sie 3mal mit der verdünnten Waschlösung („Vorbereitung der
Reagenzien“). Dazu füllen Sie für jeden Waschschritt alle Vertiefungen vollständig (Volumen pro
Vertiefung: 300 µl). Entleeren Sie sämtliche Flüssigkeit aus den Vertiefungen indem Sie die Platte fest auf
einem absorbierenden Papier ausschlagen. Alternativ können Sie auch einen automatischen PlattenWaschapparat verwenden, wobei Sie die Platte 3 mal waschen bei einem Vertiefungsvolumen von 300 µl.
Lassen Sie die Platte nicht an der Luft trocknen.
3. Verteilung des Konjugats
LSIVet™ Ruminant Q Fever - Serum/Milk
Enzymimmunoassay zum spezifischen Nachweis von Antikörpern gegen Coxiella
burnetii im Serum und in der Milch von Rinder, Schafe und Ziegen
Fügen Sie 100 µl des 1/100 verdünnten HRP-Konjugats („Vorbereitung der Reagenzien“) in jede
Vertiefung. Vorsichtig mischen und die Platte mit einem Klebestreifen verschliessen. Inkubieren Sie 1
Stunde bei 37 ± 2°C.
Gebrauchsinformation: Die deutsche Gebrauchsinformation ist nach §17c TierSG
zugelassen.
Produktreferenz DELISACOXLS5
4. Waschschritt
Publikationsnummer MAN0007797 Version A.0
Den oben beschriebenen „Waschschritt“ wiederholen.
Verfahren
5. Reaktion
Fügen Sie 100 µl der C - Substratlösung in jede Vertiefung. Mischen Sie die Platte vorsichtig für
2 Sekunden und stellen sie bei Raumtemperatur (21 ± 4°C) für 10 Minuten ohne Abdeckung dunkel.
Fügen Sie 100 µl der D - Stopplösung in jede Vertiefung. Fügen Sie die Stopplösung nach dem gleichen
Schema wie die Substratlösung hinzu. Mischen Sie die Platte vorsichtig für 2 Sekunden.
6. Ablesen
Wischen Sie die Unterseite der Mikrotiterplatte mit einem weichen Tuch ab. Messen Sie die Platte innerhalb
von 30 Minuten nach dem Hinzufügen der Stopplösung mit einem Mikrotiterplatten-Reader bei 450 nm
oder bei einer dualen Wellenlänge von 450-620 nm.
„ Berechnungen
Berechnen Sie die durchschnittliche Optische Dichte (OD) der Negativkontrolle (NK) Serum und/oder
Milch: ODm NK.
Berechnen Sie die durchschnittliche Optische Dichte der Positivkontrolle (PK) Serum und/oder Milch:
ODm PK.
Berechnen Sie für jede Probe das S/P-Verhältnis (Probe/Positivkontrolle):
S/P% = [(OD Probe – ODm NK) / (ODm PK – ODm NK)] x 100
HINWEIS: Bei negativen Proben ist es möglich ein negatives S/P-Ergebnis zu erhalten.
„ Validierung
„ Interpretation der Ergebnisse
SERUM
S/P% ≤ 40
40 < S/P% ≤ 100
100 < S/P% ≤ 200
200 < S/P% ≤ 300
S/P% > 300
ERGEBNIS
MILCH
S/P% ≤ 40
40 < S/P% ≤ 100
100 < S/P% ≤ 200
S/P% > 200
NEGATIV
+ POSITIV
++ POSITIV
+++ POSITIV
++++ POSITIV
5791 Van Allen Way | Carlsbad, CA 92008 USA
Phone +1 760 603 7200 | Toll Free in USA 800 955 6288
Visit lifetechnologies.com/support | Email [email protected]
lifetechnologies.com
20 November 2013
ERGEBNIS
S/P% ≤ 30
30 < S/P% ≤ 100
100 < S/P% ≤ 200
S/P% > 200
Probenart
Protokoll
Serum
Einzelproben
Einzelproben
Tankmilchproben
Kurze Inkubation
Milch
Lange Inkubation
Deutsche amtliche Zulassung nach § 17 c TierSG: FLI-B 563
„ Allgemeine Informationen
Q-Fieber (Query Fieber) ist eine endemisch und weltweit, mit Ausnahme von Neuseeland, vorkommende
Zoonose. Die Erkrankung wird durch Coxiella burnetii, ein strikt intrazellulär vorkommendes Bakterium,
welches eine Vielzahl von Tieren (Wiederkäuer, Hunde, Katzen, Vögel, Arthropoden) und auch den
Menschen infizieren kann, verursacht.
Das Antigen (Phase I und II) des LSIVet™ Ruminant Q Fever - Serum/Milk wurde von INRA in Nouzilly
(Frankreich) von den domestizierten Rinder, Schafe und Ziegen isoliert. Es handelt sich um einen ovinen
Stamm, der verantwortlich ist für Aborte bei Schafe.
Die Untersuchungsergebnisse von INRA und Life Technologies zeigen deutlich, dass der
DELISACOXLS5 Test-Kit eine größere Sensitivität besitzt, als die Test-Kits, die den Stamm Nine Miles
verwenden. Dadurch ist eine bessere Diagnostik zur Erkennung von Ausscheidern gewährleistet.
„ Testprinzip
Das Test-Kit basiert auf dem Prinzip eines indirekten ELISA.
2 - Nach dem Waschschritt bleibt das am Antikörper (Mikrotiterplatte) gebundene Antigen zurück. Im
nächsten Schritt wird ein zweiter Antikörper (HRP-Konjugat) zugegeben, der sich ebenfalls an das Antigen
bindet.
INTERPRETATION DER PROBE
INTERPRETATION DER
EINZELMILCHPROBE
NEGATIV
+ POSITIV
++ POSITIV
+++ POSITIV
Probenmaterial
Rinder
Schafe
Ziegen
1 - Proben und Kontrollen werden der mit Coxiella burnetii-Antigen beschichteten Mikrotiterplatte
beigefügt. Falls vorhanden binden sich die spezifischen Antikörper des Q-Fiebers an das Antigen und
bilden den Antigen-Antikörper-Komplex.
Der Test gilt als validiert, wenn: ODm PK > 0,400 und ODm PK / ODm NK > 2
ERGEBNIS
Indirekte ELISA-Einzeltests –
Streifenplatten
Tierart
3 - Ungebundenes Konjugat wird durch den nachfolgenden Waschschritt ausgewaschen, bevor die
chromogene Substratlösung hinzugefügt wird.
4 - Nach dem Stoppen der Reaktion kommt es zu einer Gelbfärbung. Die Ergebnisse werden mit Hilfe eines
ELISA-Mikrotiterplatten-Reader abgelesen.
INTERPRETATION DER
SAMMELMILCHPROBE
NEGATIV
+ POSITIV
++ POSITIV
+++ POSITIV
Positive Proben zeigen eine Gelbfärbung. Die Farbintensität in jeder Vertiefung steht in Abhängigkeit
zum Gehalt des spezifischen Q-Fieber-Antikörpers der Probe.
Für tierärztlichen Gebrauch. Ausschließlich für in vitro zu verwenden.
werden. Verwenden Sie vornehmlich ungefrorene Milch. Versuchen Sie so wenig wie möglich Rahm zu
verwenden.
„ Inhaltsstoffe
Komponenten
Bezeichnung
Menge
Beschreibung
1 – Mikrotiterplatte Q Fieber
Q-Fieber-beschichtete Platte; 12 Streifen
mit 8 Vertiefungen
5 Einheiten
2a – Negativkontrolle Q Fieber (Serum)
2b – Negativkontrolle Q Fieber (Milch)
Serum-Negativkontrolle (NK) für Q-Fieber
Milch-Negativkontrolle (NK) für Q-Fieber
600 µl
12 ml
3 – Positivkontrolle Q Fieber
Positivkontrolle (PK) Q-Fieber
600 µl
4 - Konjugat (100x) Q Fieber
G-Protein-HRP-Konjugat, 100-fach
konzentriert, Q-Fieber (rot)
900 µl
A – Waschlösung (10x)
B1 - Proben-Verdünner Q Fieber
B2 - Konjugat-Verdünner Q Fieber
C – Substratlösung
D – Stopplösung
Platten-Klebestreifen
Waschlösung, 10-fach konzentriert
Proben-Verdünnungspuffer Q Fieber
(grün), gebrauchsfertig
Konjugat-Verdünnungspuffer Q Fieber,
gebrauchsfertig
Substratlösung
Stopplösung
Lagerung
480 Tests
B1 - Proben-Verdünner Q Fieber, B2 - Konjugat-Verdünner Q Fieber, C - Substratlösung, D Stopplösung sind gebrauchsfertig
#
• Milch-Positivkontrolle: Die Milch-Positivkontrolle wird hergestellt aus einer Serum-Positivkontrolle
(3 - Positivkontrolle): Es ist eine 1/20 Vorverdünnung herzustellen:z. B.: 10 µl der 3 - Positivkontrolle +
190 µl der 2b - Negativkontrolle (Milch). Mischen Sie vorsichtig die 1/20 Vorverdünnung und testen diese
wie eine Milchprobe.
*
5 ± 3°C
250 ml
250 ml
100 ml
60 ml
60 ml
10
• A - Waschlösung (10x): Die Waschlösung (10x) muss mit destilliertem Wasser 1/10 verdünnt werden.
Z. B.: Für 1 Streifen: Verdünnen Sie 2 ml der konzentrierten A - Waschlösung (10x) mit 18 ml destilliertem
Wasser; für 1 Platte: Verdünnen Sie 25 ml der konzentrierten A - Waschlösung (10x) mit 225 ml destilliertem
Wasser und vermischen es anschließend. Die verdünnte Waschlösung kann bei 5 ± 3°C gelagert werden und
muss innerhalb eines Monats verbraucht werden.
HINWEIS: Aufgrund der hohen Konzentration von Salzen kann die A - Waschlösung (10x) Kristalle
enthalten. Durch Schütteln können diese gelöst werden. Wir empfehlen, die Lösung vor der Verdünnung
zu homogenisieren.
UT**
#Unbenutzte Streifen können im verschlossenen Beutel mit Trockenmittel (im Lieferumfang des Testkits enthalten) bei
5 ± 3°C bis zum Verfallsdatum des Kits gelagert werden.
*Die verdünnte Konjugatlösung ist sofort nach der Zubereitung zu verwenden.
**Umgebungstemperatur
„ Benötigtes Material, welches nicht im Lieferumfang enthalten ist
Zentrifuge (2000 x g)
Präzisionspipetten, Multikanalpipetten
Vorverdünnungsplatte
Destilliertes Wasser oder hochqualitatives
gereinigtes Wasser
Mikrotiterplatten-Inkubator (37 ± 2°C)
„ Vorbereitung der Reagenzien
Zentrifugenröhrchen und Mikroröhrchen
Einweg-Pipettenspitzen
Vortex Schüttelgerät (oder Ähnliches)
Manueller, halbautomatischer oder vollautomatischer
Mikrotiterplatten-Waschapparat
ELISA-Mikrotiterplatten-Reader mit 450-nm Filter oder 450- und
620-nm Filter
„ Informationen zu Proben
Individuelle Serumproben sowie Kontrollen werden 1/400 verdünnt getestet. Frische, gekühlte (8 Tage
bei 5 ± 3°C) oder vorher gefrorene (1 Jahr, < –16°C) Serumproben können verwendet werden.
A - Probenmaterial und Kontrollen werden 1/20 in dem B1 - Proben-Verdünner Q Fieber vorverdünnt.
Z. B.:
1. Geben Sie 5 µl jedes Probenmaterials und der Kontrollen in die Vertiefung der Vorverdünnungsplatte.
Befolgen Sie genau die Reihenfolge, welche auch bei der beschichteten Mikrotiterplatte Anwendung findet.
2. Geben Sie 95 µl dem B1 - Proben-Verdünner Q Fieber in jede, von Probenmaterial oder Kontrollen
befüllte Vertiefung. Mischen Sie vorsichtig die Platte.
3. Lassen Sie die Serumverdünnung in dem B1 - Proben-Verdünner Q Fieber bei Raumtemperatur für 5
Minuten stehen, bevor Sie sie auf die mit Q-Fieber-Antigen beschichtete Mikrotiterplatte überführen.
4. Verdünntes Serum sollte innerhalb von 24 Stunden getestet werden.
B - Verdünnen Sie vorverdünntes Probenmaterial und Kontrollen 1/20 mit dem B1 - Proben-Verdünner
Q Fieber in der mit Q-Fieber-Antigen beschichteten Mikrotiterplatte. Z. B.:
1. Geben Sie jeweils 5 μl des 1/20 vorverdünnten Probenmaterials und der Kontrollen in die Vertiefungen
der beschichteten Mikrotiterplatte.
• 4 - Konjugat (100x): Das Konjugat muss in dem B2 - Konjugat-Verdünner Q Fieber 1/100 verdünnt und
anschließend vermischt werden. Verwenden Sie das verdünnte Konjugat unmittelbar nach der Herstellung.
„ Testdurchführung
HINWEIS: Alle Reagenzien vor der Verwendung auf Raumtemperatur (21 ± 4°C) bringen. Die Toleranz für
die Inkubationszeiten beträgt ± 10%.
1. Verteilung von Kontrollen und Proben
A. Serumproben, 2a - Negativkontrolle (Serum) und 3 - Positivkontrolle werden 1/400 verdünnt in
Proben-Verdünnungspuffer getestet („Informationen zu Proben“):
• Geben Sie 5 µl der 1/20 vorverdünnten Serum-Negativkontrolle in die Vertiefung A1 und B1
(„Informationen zu Proben“).
• Geben Sie 5 µl der 1/20 vorverdünnten Serum-Positivkontrolle in die Vertiefung C1 und D1
(„Informationen zu Proben“).
• Geben Sie 5 µl des 1/20 vorverdünnten Probenmaterials zur Testung in die verbleibenden Vertiefungen
der 1 – Mikrotiterplatte Q Fieber.
• Als Nächstes fügen Sie 95 µl vom B1 - Proben-Verdünner Q Fieber in jede, von Probenmaterial oder
Kontrollen befüllte Vertiefung.
Vorsichtig mischen und die Platte mit einem Klebestreifen verschließen. Inkubieren Sie 1 Stunde bei
37 ± 2°C.
B. Milchproben, 2b - Negativkontrolle (Milch) und Milch-Positivkontrollen (bereits 1/20 vorverdünnt,
„Vorbereitung der Reagenzien“) werden 1/20 verdünnt in Proben-Verdünnungspuffer getestet
(„Informationen zu Proben“).
• Geben Sie 5 µl der 2b - Negativkontrolle (Milch) in die Vertiefung C1 und D1 („Informationen zu
Proben“).
• Geben Sie 5 µl der Milch-Positivkontrolle (aus 1/20 vorverdünnten 3 - Positivkontrolle „Vorbereitung
der Reagenzien“) in die Vertiefung A1 und B1 („Informationen zu Proben“).
• Geben Sie 5 µl der Milchprobe zur Testung in die verbleibenden Vertiefungen der 1 – Mikrotiterplatte
Q Fieber.
• Als Nächstes fügen Sie 95 µl vom B1 - Proben-Verdünner Q Fieber in jede, von Probenmaterial oder
Kontrollen befüllte Vertiefung.
Vorsichtig mischen und die Platte mit einem Klebestreifen verschließen. Inkubieren Sie 16-18 Stunden
bei 5 ± 3°C.
2. Geben Sie 95 μl dem B1 - Proben-Verdünner Q Fieber in jede, von Proben oder Kontrolle befüllte
Vertiefung. Mischen Sie vorsichtig die Platte.
Einzelmilch- oder Sammelmilchproben sowie Kontrollen werden 1/20 verdünnt getestet. Frische,
gekühlte (8 Tage bei 5 ± 3°C) oder vorher gefrorene (1 Jahr, < –16°C) Milchproben können verwendet
2
LSIVet™ Ruminant Q Fever - Serum/Milk Gebrauchsinformation (MAN0007797)
LSIVet™ Ruminant Q Fever - Serum/Milk Gebrauchsinformation (MAN0007797)
3
werden. Verwenden Sie vornehmlich ungefrorene Milch. Versuchen Sie so wenig wie möglich Rahm zu
verwenden.
„ Inhaltsstoffe
Komponenten
Bezeichnung
Menge
Beschreibung
1 – Mikrotiterplatte Q Fieber
Q-Fieber-beschichtete Platte; 12 Streifen
mit 8 Vertiefungen
5 Einheiten
2a – Negativkontrolle Q Fieber (Serum)
2b – Negativkontrolle Q Fieber (Milch)
Serum-Negativkontrolle (NK) für Q-Fieber
Milch-Negativkontrolle (NK) für Q-Fieber
600 µl
12 ml
3 – Positivkontrolle Q Fieber
Positivkontrolle (PK) Q-Fieber
600 µl
4 - Konjugat (100x) Q Fieber
G-Protein-HRP-Konjugat, 100-fach
konzentriert, Q-Fieber (rot)
900 µl
A – Waschlösung (10x)
B1 - Proben-Verdünner Q Fieber
B2 - Konjugat-Verdünner Q Fieber
C – Substratlösung
D – Stopplösung
Platten-Klebestreifen
Waschlösung, 10-fach konzentriert
Proben-Verdünnungspuffer Q Fieber
(grün), gebrauchsfertig
Konjugat-Verdünnungspuffer Q Fieber,
gebrauchsfertig
Substratlösung
Stopplösung
Lagerung
480 Tests
B1 - Proben-Verdünner Q Fieber, B2 - Konjugat-Verdünner Q Fieber, C - Substratlösung, D Stopplösung sind gebrauchsfertig
#
• Milch-Positivkontrolle: Die Milch-Positivkontrolle wird hergestellt aus einer Serum-Positivkontrolle
(3 - Positivkontrolle): Es ist eine 1/20 Vorverdünnung herzustellen:z. B.: 10 µl der 3 - Positivkontrolle +
190 µl der 2b - Negativkontrolle (Milch). Mischen Sie vorsichtig die 1/20 Vorverdünnung und testen diese
wie eine Milchprobe.
*
5 ± 3°C
250 ml
250 ml
100 ml
60 ml
60 ml
10
• A - Waschlösung (10x): Die Waschlösung (10x) muss mit destilliertem Wasser 1/10 verdünnt werden.
Z. B.: Für 1 Streifen: Verdünnen Sie 2 ml der konzentrierten A - Waschlösung (10x) mit 18 ml destilliertem
Wasser; für 1 Platte: Verdünnen Sie 25 ml der konzentrierten A - Waschlösung (10x) mit 225 ml destilliertem
Wasser und vermischen es anschließend. Die verdünnte Waschlösung kann bei 5 ± 3°C gelagert werden und
muss innerhalb eines Monats verbraucht werden.
HINWEIS: Aufgrund der hohen Konzentration von Salzen kann die A - Waschlösung (10x) Kristalle
enthalten. Durch Schütteln können diese gelöst werden. Wir empfehlen, die Lösung vor der Verdünnung
zu homogenisieren.
UT**
#Unbenutzte Streifen können im verschlossenen Beutel mit Trockenmittel (im Lieferumfang des Testkits enthalten) bei
5 ± 3°C bis zum Verfallsdatum des Kits gelagert werden.
*Die verdünnte Konjugatlösung ist sofort nach der Zubereitung zu verwenden.
**Umgebungstemperatur
„ Benötigtes Material, welches nicht im Lieferumfang enthalten ist
Zentrifuge (2000 x g)
Präzisionspipetten, Multikanalpipetten
Vorverdünnungsplatte
Destilliertes Wasser oder hochqualitatives
gereinigtes Wasser
Mikrotiterplatten-Inkubator (37 ± 2°C)
„ Vorbereitung der Reagenzien
Zentrifugenröhrchen und Mikroröhrchen
Einweg-Pipettenspitzen
Vortex Schüttelgerät (oder Ähnliches)
Manueller, halbautomatischer oder vollautomatischer
Mikrotiterplatten-Waschapparat
ELISA-Mikrotiterplatten-Reader mit 450-nm Filter oder 450- und
620-nm Filter
„ Informationen zu Proben
Individuelle Serumproben sowie Kontrollen werden 1/400 verdünnt getestet. Frische, gekühlte (8 Tage
bei 5 ± 3°C) oder vorher gefrorene (1 Jahr, < –16°C) Serumproben können verwendet werden.
A - Probenmaterial und Kontrollen werden 1/20 in dem B1 - Proben-Verdünner Q Fieber vorverdünnt.
Z. B.:
1. Geben Sie 5 µl jedes Probenmaterials und der Kontrollen in die Vertiefung der Vorverdünnungsplatte.
Befolgen Sie genau die Reihenfolge, welche auch bei der beschichteten Mikrotiterplatte Anwendung findet.
2. Geben Sie 95 µl dem B1 - Proben-Verdünner Q Fieber in jede, von Probenmaterial oder Kontrollen
befüllte Vertiefung. Mischen Sie vorsichtig die Platte.
3. Lassen Sie die Serumverdünnung in dem B1 - Proben-Verdünner Q Fieber bei Raumtemperatur für 5
Minuten stehen, bevor Sie sie auf die mit Q-Fieber-Antigen beschichtete Mikrotiterplatte überführen.
4. Verdünntes Serum sollte innerhalb von 24 Stunden getestet werden.
B - Verdünnen Sie vorverdünntes Probenmaterial und Kontrollen 1/20 mit dem B1 - Proben-Verdünner
Q Fieber in der mit Q-Fieber-Antigen beschichteten Mikrotiterplatte. Z. B.:
1. Geben Sie jeweils 5 μl des 1/20 vorverdünnten Probenmaterials und der Kontrollen in die Vertiefungen
der beschichteten Mikrotiterplatte.
• 4 - Konjugat (100x): Das Konjugat muss in dem B2 - Konjugat-Verdünner Q Fieber 1/100 verdünnt und
anschließend vermischt werden. Verwenden Sie das verdünnte Konjugat unmittelbar nach der Herstellung.
„ Testdurchführung
HINWEIS: Alle Reagenzien vor der Verwendung auf Raumtemperatur (21 ± 4°C) bringen. Die Toleranz für
die Inkubationszeiten beträgt ± 10%.
1. Verteilung von Kontrollen und Proben
A. Serumproben, 2a - Negativkontrolle (Serum) und 3 - Positivkontrolle werden 1/400 verdünnt in
Proben-Verdünnungspuffer getestet („Informationen zu Proben“):
• Geben Sie 5 µl der 1/20 vorverdünnten Serum-Negativkontrolle in die Vertiefung A1 und B1
(„Informationen zu Proben“).
• Geben Sie 5 µl der 1/20 vorverdünnten Serum-Positivkontrolle in die Vertiefung C1 und D1
(„Informationen zu Proben“).
• Geben Sie 5 µl des 1/20 vorverdünnten Probenmaterials zur Testung in die verbleibenden Vertiefungen
der 1 – Mikrotiterplatte Q Fieber.
• Als Nächstes fügen Sie 95 µl vom B1 - Proben-Verdünner Q Fieber in jede, von Probenmaterial oder
Kontrollen befüllte Vertiefung.
Vorsichtig mischen und die Platte mit einem Klebestreifen verschließen. Inkubieren Sie 1 Stunde bei
37 ± 2°C.
B. Milchproben, 2b - Negativkontrolle (Milch) und Milch-Positivkontrollen (bereits 1/20 vorverdünnt,
„Vorbereitung der Reagenzien“) werden 1/20 verdünnt in Proben-Verdünnungspuffer getestet
(„Informationen zu Proben“).
• Geben Sie 5 µl der 2b - Negativkontrolle (Milch) in die Vertiefung C1 und D1 („Informationen zu
Proben“).
• Geben Sie 5 µl der Milch-Positivkontrolle (aus 1/20 vorverdünnten 3 - Positivkontrolle „Vorbereitung
der Reagenzien“) in die Vertiefung A1 und B1 („Informationen zu Proben“).
• Geben Sie 5 µl der Milchprobe zur Testung in die verbleibenden Vertiefungen der 1 – Mikrotiterplatte
Q Fieber.
• Als Nächstes fügen Sie 95 µl vom B1 - Proben-Verdünner Q Fieber in jede, von Probenmaterial oder
Kontrollen befüllte Vertiefung.
Vorsichtig mischen und die Platte mit einem Klebestreifen verschließen. Inkubieren Sie 16-18 Stunden
bei 5 ± 3°C.
2. Geben Sie 95 μl dem B1 - Proben-Verdünner Q Fieber in jede, von Proben oder Kontrolle befüllte
Vertiefung. Mischen Sie vorsichtig die Platte.
Einzelmilch- oder Sammelmilchproben sowie Kontrollen werden 1/20 verdünnt getestet. Frische,
gekühlte (8 Tage bei 5 ± 3°C) oder vorher gefrorene (1 Jahr, < –16°C) Milchproben können verwendet
2
LSIVet™ Ruminant Q Fever - Serum/Milk Gebrauchsinformation (MAN0007797)
LSIVet™ Ruminant Q Fever - Serum/Milk Gebrauchsinformation (MAN0007797)
3
2. Waschschritt
Entleeren Sie die Vertiefungen und waschen Sie 3mal mit der verdünnten Waschlösung („Vorbereitung der
Reagenzien“). Dazu füllen Sie für jeden Waschschritt alle Vertiefungen vollständig (Volumen pro
Vertiefung: 300 µl). Entleeren Sie sämtliche Flüssigkeit aus den Vertiefungen indem Sie die Platte fest auf
einem absorbierenden Papier ausschlagen. Alternativ können Sie auch einen automatischen PlattenWaschapparat verwenden, wobei Sie die Platte 3 mal waschen bei einem Vertiefungsvolumen von 300 µl.
Lassen Sie die Platte nicht an der Luft trocknen.
3. Verteilung des Konjugats
LSIVet™ Ruminant Q Fever - Serum/Milk
Enzymimmunoassay zum spezifischen Nachweis von Antikörpern gegen Coxiella
burnetii im Serum und in der Milch von Rinder, Schafe und Ziegen
Fügen Sie 100 µl des 1/100 verdünnten HRP-Konjugats („Vorbereitung der Reagenzien“) in jede
Vertiefung. Vorsichtig mischen und die Platte mit einem Klebestreifen verschliessen. Inkubieren Sie 1
Stunde bei 37 ± 2°C.
Gebrauchsinformation: Die deutsche Gebrauchsinformation ist nach §17c TierSG
zugelassen.
Produktreferenz DELISACOXLS5
4. Waschschritt
Publikationsnummer MAN0007797 Version A.0
Den oben beschriebenen „Waschschritt“ wiederholen.
Verfahren
5. Reaktion
Fügen Sie 100 µl der C - Substratlösung in jede Vertiefung. Mischen Sie die Platte vorsichtig für
2 Sekunden und stellen sie bei Raumtemperatur (21 ± 4°C) für 10 Minuten ohne Abdeckung dunkel.
Fügen Sie 100 µl der D - Stopplösung in jede Vertiefung. Fügen Sie die Stopplösung nach dem gleichen
Schema wie die Substratlösung hinzu. Mischen Sie die Platte vorsichtig für 2 Sekunden.
6. Ablesen
Wischen Sie die Unterseite der Mikrotiterplatte mit einem weichen Tuch ab. Messen Sie die Platte innerhalb
von 30 Minuten nach dem Hinzufügen der Stopplösung mit einem Mikrotiterplatten-Reader bei 450 nm
oder bei einer dualen Wellenlänge von 450-620 nm.
„ Berechnungen
Berechnen Sie die durchschnittliche Optische Dichte (OD) der Negativkontrolle (NK) Serum und/oder
Milch: ODm NK.
Berechnen Sie die durchschnittliche Optische Dichte der Positivkontrolle (PK) Serum und/oder Milch:
ODm PK.
Berechnen Sie für jede Probe das S/P-Verhältnis (Probe/Positivkontrolle):
S/P% = [(OD Probe – ODm NK) / (ODm PK – ODm NK)] x 100
HINWEIS: Bei negativen Proben ist es möglich ein negatives S/P-Ergebnis zu erhalten.
„ Validierung
„ Interpretation der Ergebnisse
SERUM
S/P% ≤ 40
40 < S/P% ≤ 100
100 < S/P% ≤ 200
200 < S/P% ≤ 300
S/P% > 300
ERGEBNIS
MILCH
S/P% ≤ 40
40 < S/P% ≤ 100
100 < S/P% ≤ 200
S/P% > 200
NEGATIV
+ POSITIV
++ POSITIV
+++ POSITIV
++++ POSITIV
5791 Van Allen Way | Carlsbad, CA 92008 USA
Phone +1 760 603 7200 | Toll Free in USA 800 955 6288
Visit lifetechnologies.com/support | Email [email protected]
lifetechnologies.com
20 November 2013
ERGEBNIS
S/P% ≤ 30
30 < S/P% ≤ 100
100 < S/P% ≤ 200
S/P% > 200
Probenart
Protokoll
Serum
Einzelproben
Einzelproben
Tankmilchproben
Kurze Inkubation
Milch
Lange Inkubation
Deutsche amtliche Zulassung nach § 17 c TierSG: FLI-B 563
„ Allgemeine Informationen
Q-Fieber (Query Fieber) ist eine endemisch und weltweit, mit Ausnahme von Neuseeland, vorkommende
Zoonose. Die Erkrankung wird durch Coxiella burnetii, ein strikt intrazellulär vorkommendes Bakterium,
welches eine Vielzahl von Tieren (Wiederkäuer, Hunde, Katzen, Vögel, Arthropoden) und auch den
Menschen infizieren kann, verursacht.
Das Antigen (Phase I und II) des LSIVet™ Ruminant Q Fever - Serum/Milk wurde von INRA in Nouzilly
(Frankreich) von den domestizierten Rinder, Schafe und Ziegen isoliert. Es handelt sich um einen ovinen
Stamm, der verantwortlich ist für Aborte bei Schafe.
Die Untersuchungsergebnisse von INRA und Life Technologies zeigen deutlich, dass der
DELISACOXLS5 Test-Kit eine größere Sensitivität besitzt, als die Test-Kits, die den Stamm Nine Miles
verwenden. Dadurch ist eine bessere Diagnostik zur Erkennung von Ausscheidern gewährleistet.
„ Testprinzip
Das Test-Kit basiert auf dem Prinzip eines indirekten ELISA.
2 - Nach dem Waschschritt bleibt das am Antikörper (Mikrotiterplatte) gebundene Antigen zurück. Im
nächsten Schritt wird ein zweiter Antikörper (HRP-Konjugat) zugegeben, der sich ebenfalls an das Antigen
bindet.
INTERPRETATION DER PROBE
INTERPRETATION DER
EINZELMILCHPROBE
NEGATIV
+ POSITIV
++ POSITIV
+++ POSITIV
Probenmaterial
Rinder
Schafe
Ziegen
1 - Proben und Kontrollen werden der mit Coxiella burnetii-Antigen beschichteten Mikrotiterplatte
beigefügt. Falls vorhanden binden sich die spezifischen Antikörper des Q-Fiebers an das Antigen und
bilden den Antigen-Antikörper-Komplex.
Der Test gilt als validiert, wenn: ODm PK > 0,400 und ODm PK / ODm NK > 2
ERGEBNIS
Indirekte ELISA-Einzeltests –
Streifenplatten
Tierart
3 - Ungebundenes Konjugat wird durch den nachfolgenden Waschschritt ausgewaschen, bevor die
chromogene Substratlösung hinzugefügt wird.
4 - Nach dem Stoppen der Reaktion kommt es zu einer Gelbfärbung. Die Ergebnisse werden mit Hilfe eines
ELISA-Mikrotiterplatten-Reader abgelesen.
INTERPRETATION DER
SAMMELMILCHPROBE
NEGATIV
+ POSITIV
++ POSITIV
+++ POSITIV
Positive Proben zeigen eine Gelbfärbung. Die Farbintensität in jeder Vertiefung steht in Abhängigkeit
zum Gehalt des spezifischen Q-Fieber-Antikörpers der Probe.
Für tierärztlichen Gebrauch. Ausschließlich für in vitro zu verwenden.
LSIVet™ Ruminant Q Fever - Serum/Milk
Fortsetzung
Ref. DELISACOXLS5
Publikationsnr. MAN0007797 Version A.0
Vorsichtsmassnahmen
1. Keine Reagenzien aus unterschiedlichen Kit-Chargen zusammen verwenden.
2. Einmalartikel zum Pipettieren verwenden, um Kontamination der Reagenzien zu vermeiden.
3. Nicht mit dem Mund pipettieren.
ACHTUNG! Sicherheitsdatenblätter (SDB) lesen und Handlungsanweisungen befolgen.
Angemessene persönliche Schutzausrüstung (PSA) tragen (Brille, Kleidung, Handschuhe). Die
Sicherheitsdatenblätter (SDB) sind abzurufen unter www.lifetechnologies.com/support.
ACHTUNG! BIOLOGISCHE GEFAHRENSTOFFE! Sicherheitshinweise für biologische Gefahren des
Produkts lesen; abzurufen unter www.lifetechnologies.com. Angemessene persönliche
Schutzausrüstung (PSA) tragen (Brille, Kleidung, Handschuhe).
Für tierärztlichen Gebrauch. Ausschließlich für in vitro zu verwenden
6 Allée des Ecureuils - Parc Tertiaire de Bois-Dieu | 69380 Lissieu – Frankreich
The information in this guide is subject to change without notice.
DISCLAIMER: LIFE TECHNOLOGIES CORPORATION AND/OR ITS AFFILIATE(S) DISCLAIM ALL WARRANTIES WITH
RESPECT TO THIS DOCUMENT, EXPRESSED OR IMPLIED, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO THOSE OF
MERCHANTABILITY, FITNESS FOR A PARTICULAR PURPOSE, OR NON-INFRINGEMENT. TO THE EXTENT ALLOWED BY
LAW, IN NO EVENT SHALL LIFE TECHNOLOGIES AND/OR ITS AFFILIATE(S) BE LIABLE, WHETHER IN CONTRACT, TORT,
WARRANTY, OR UNDER ANY STATUTE OR ON ANY OTHER BASIS FOR SPECIAL, INCIDENTAL, INDIRECT, PUNITIVE,
MULTIPLE OR CONSEQUENTIAL DAMAGES IN CONNECTION WITH OR ARISING FROM THIS DOCUMENT, INCLUDING BUT
NOT LIMITED TO THE USE THEREOF.
NOTICE TO PUCHASER: LIMITED LICENSE
The purchase of this product conveys to the purchaser the limited, non-transferable right to use the purchased amount of
the product only to perform veterinary diagnostic services including reporting the results of such services for a fee, and
internal research for the sole benefit of the purchaser. No right to resell, repackage, or distribute this product, or any of
its components, is conveyed expressly, by implication, or by estoppel. For information on obtaining additional rights, please
contact [email protected] or Out Licensing, Life Technologies, 5791 Van Allen Way, Carlsbad, California 92008.
© 2013 Life Technologies Corporation. All rights reserved. The trademarks mentioned herein are the property of Life
Technologies Corporation and/or its affiliate(s) or their respective owners.
5791 Van Allen Way | Carlsbad, CA 92008 USA
Phone +1 760 603 7200 | Toll Free in USA 800 955 6288
Visit lifetechnologies.com/support | Email [email protected]
lifetechnologies.com
20 November 2013
Dokumentation und Kundendienst
„ Anforderung von Sicherheitsdatenblätter (SDB)
Die
SDB
sind
auf
unserer
www.lifetechnologies.com/support.
Website
unter
der
folgenden
Adresse
abzurufen:
HINWEIS: Zur Anforderung der SDB von Chemikalien, die nicht von Life Technologies vertrieben werden,
wenden Sie sich bitte an den jeweiligen Anbieter des Produkts.
„ Supportanfragen
Allgemeine E-Mail-Adresse: [email protected].
E-Mail-Adresse technischer Support: [email protected].
Weitere
Serviceleistungen
und
www.lifetechnologies.com/support.
Informationen
finden
Sie
auf
unserer
Website:
„ Produkt mit eingeschränkter Gewährleistung
Life Technologies Corporation und ihre Tochtergesellschaften übernehmen die Gewährleistung für ihre
Produkte im Rahmen der allgemeinen Geschäftsbedingungen, die auf der Website
www.lifetechnologies.com/termsandconditions abzurufen sind. Wenn Sie Fragen haben, erreichen Sie den
Kundendienst von Life Technologies unter folgender Internetadresse: www.lifetechnologies.com/support.
LSIVet™ Ruminant Q Fever - Serum/Milk
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Vorsichtsmassnahmen
1. Keine Reagenzien aus unterschiedlichen Kit-Chargen zusammen verwenden.
2. Einmalartikel zum Pipettieren verwenden, um Kontamination der Reagenzien zu vermeiden.
3. Nicht mit dem Mund pipettieren.
ACHTUNG! Sicherheitsdatenblätter (SDB) lesen und Handlungsanweisungen befolgen.
Angemessene persönliche Schutzausrüstung (PSA) tragen (Brille, Kleidung, Handschuhe). Die
Sicherheitsdatenblätter (SDB) sind abzurufen unter www.lifetechnologies.com/support.
ACHTUNG! BIOLOGISCHE GEFAHRENSTOFFE! Sicherheitshinweise für biologische Gefahren des
Produkts lesen; abzurufen unter www.lifetechnologies.com. Angemessene persönliche
Schutzausrüstung (PSA) tragen (Brille, Kleidung, Handschuhe).
Für tierärztlichen Gebrauch. Ausschließlich für in vitro zu verwenden
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MULTIPLE OR CONSEQUENTIAL DAMAGES IN CONNECTION WITH OR ARISING FROM THIS DOCUMENT, INCLUDING BUT
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20 November 2013
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Die
SDB
sind
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der
folgenden
Adresse
abzurufen:
HINWEIS: Zur Anforderung der SDB von Chemikalien, die nicht von Life Technologies vertrieben werden,
wenden Sie sich bitte an den jeweiligen Anbieter des Produkts.
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Allgemeine E-Mail-Adresse: [email protected].
E-Mail-Adresse technischer Support: [email protected].
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Life Technologies Corporation und ihre Tochtergesellschaften übernehmen die Gewährleistung für ihre
Produkte im Rahmen der allgemeinen Geschäftsbedingungen, die auf der Website
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Kundendienst von Life Technologies unter folgender Internetadresse: www.lifetechnologies.com/support.