COTININ TEST (COT) # 008A086

COTININ TEST (COT)
# 008A086
Einstufiger Immunassay zum qualitativen Nachweis von Cotinin in menschlichem Urin.
NUR FÜR DEN IN-VITRO-DIAGNOSTISCHEN PROFESSIONELLEN GEBRAUCH
Verwendungszweck
Der Cotinin Test ist ein einstufiger Immunoassay zum qualitativen Nachweis von Cotinin – dem wichtigsten Metabolit des Nikotins in menschlichem Urin.
Der Cut-Off beträgt 200 ng/ml.
Dieser Assay ermöglicht nur ein vorläufiges analytisches Testergebnis. Eine spezifischere alternative chemische Methode wie z.B. HPLC oder
Gaschromatographie/Massenspektrometrie (GC/MS) sollte angewandt werden, um ein bestätigtes analytisches Ergebnis zu erhalten.
Zusammenfassung
Der weitverbreitete Gebrauch von Tabakprodukten hat in der Gesellschaft immense Kosten verursacht.
Es gibt ca. 20 Metaboliten des Nikotins, die im Urin identifiziert werden können. Cotinin ist ein wichtiges Metabolit des
Nikotins, und es sammelt sich im Körper bei regelmäßigem Rauchen an. Nikotin und Cotinin werden durch dasselbe
Leberenzym metabolisiert. Es wird berichtet, daß Cotinin in Körperflüssigkeiten stabil ist und eine relativ lange
Halbwertzeit von voraussichtlich 17 Stunden hat, daher ist es weniger abhängig vom Zeitpunkt der Probennahme als
Nikotin oder andere Metaboliten. Analysemethoden des Cotinins in biologischen Flüssigkeiten schließen GasChromatographie mit ein, Gas-Chromatographie-Massenspektrometrie, HPLC, HPLC-Massen-Spektrometrie und RIA.
Diese Methoden erfordern gewöhnlich eine spezielle Ausrüstung und komplizierte Prozeduren.
Prinzip
Der Cotinin Test arbeitet nach dem Prinzip der kompetitiven Antigen-Antikörper-Bindung. Der Test enthält eine Membran, die mit Cotinin-Antigen auf der
Testlinienregion vorbeschichtet ist. Ein Cotinin-Antikörper-Goldkonjugat-Kissen ist am Ende der Membran plaziert. In Cotinin-freiem Urin bewegt sich die
Lösung des farbigen Antikörper-Goldkonjugats und Urins chromatographisch durch Kapillaraktion entlang der Membran. Diese Lösung wandert dann zu
der immobilisierten Testlinie, die Cotinin-Antigen enthält, und bildet eine sichtbare Linie, wenn der Antikörper an das Antigen bindet. Wenn der Test negativ
ist, bildet sich also eine sichtbare Linie in der Testzone. Wenn Cotinin im Urin präsent ist, konkurriert es mit dem an der T-Linie immobilisierten Antigen um
die Antikörper-Bindungsstellen. Wenn die Cotinin-Konzentration im Urin ausreichend hoch ist, werden alle Antikörper abgesättigt. Dies verhindert die
Anbindung der farbigen Antikörper- Goldkonjugate in der Test-Region. Daher zeigt die Abwesenheit einer farbigen Linie in der Testregion ein positives
Ergebnis an (Raucher).
Eine Kontrolllinie dient zur Bestätigung, daß der Test korrekt abgelaufen ist.
Aufbewahrung und Stabilität
Der Testkit kann eingefroren oder bei einer Raumtemperatur von 2– 30°C in der versiegelten Verpackung während der Gültigkeitsdauer aufbewahrt
werden.
Vorsichtsmaßnahmen
•
Nur für die In-vitro-Diagnostik
•
Nur für den IN-VITRO-DIAGNOSTISCHEN Gebrauch
•
Urinproben können potentiell infektiös sein. Korrekte Handhabung und Entsorgung sollten gewährleistet sein.
•
Vermeiden Sie Kreuzkontamination von Urinproben durch den Gebrauch von neuen Probenbehältern und Pipetten für jede Urinprobe.
•
Test nicht mehr nach Ablauf des Haltbarkeitsdatums verwenden.
•
Test nicht verwenden, wenn Folienverpackung beschädigt war.
Lieferumfang
•
Jede Folienverpackung enthält je 1 Test und 1 Einwegpipette. Jeder Test enthält eine Membran, beschichtet mit Drogen-Protein-Konjugat und ein
kolloidales Goldkonjugat-Pad, beschichtet mit anti-Cotinin-Antikörpern.
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Gebrauchsanweisung
Nicht im Lieferumfang enthalten
•
Probensammelbehälter
•
Zeitnehmer
Probengewinnung- und Handhabung
Der Cotinintest wurde für Urinproben entwickelt. Frischer Urin benötigt keine spezielle Handhabung oder Vorbehandlung. Der Test sollte bald nach der
Probengewinnung durchgeführt werden, vorzugsweise am selben Tag. Die Probe kann für 3 Tage bei 2 – 8°C gekühlt werden, oder bei –20°C für einen
längeren Zeitraum eingefroren werden. Gekühlte Proben müssen vor dem Testen auf Raumtemperatur gebracht werden, eingefrorene Proben müssen
aufgetaut, auf Raumtemperatur gebracht und vor dem Testen gründlich gemischt werden.
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COTININ TEST (COT)
# 008A086
Testdurchführung
Test, Patientenproben und Kontrollen müssen vor Gebrauch auf Raumtemperatur (20 – 30°C) gebracht werde n. Öffnen Sie die Verpackung erst kurz vor
der Durchführung des Assays.
1.
Nehmen Sie den Test aus der Verpackung (bringen Sie den Test auf Raumtemperatur vor dem Öffnen der Verpackung, um Kondensation der
Flüssigkeit auf der Membran zu vermeiden). Beschriften Sie den Test mit der Patienten- oder Kontrollidentifikation.
2.
Ziehen Sie die Urinprobe in der Pipette auf. Füllen Sie 3 Tropfen Urin in die Probenvertiefung. Benutzen Sie jeweils eine neue Pipette und einen
neuen Test für jede Probe oder Kontrolle.
3.
Lesen Sie das Ergebnis innerhalb von 3 – 8 Minuten nach der Zugabe der Probe ab. Nach 8 Minuten nicht mehr ablesen.
Interpretation der Ergebnisse
Negativ
Positiv
Ungültig
Ungültig
Negativ:
Sowohl die Testlinie (T) als auch die Kontrolllinie (C) sollen im Ergebnisfenster erscheinen. Die Intensität der Testlinie kann schwächer oder
stärker als die der Kontrolllinie sein.
Positiv:
Nur eine farbige Linie erscheint in der Kontrolllinienregion (C). In der Testlinienregion (T) erscheint keine farbige Linie.
Ungültig:
In der Kontrollregion erscheint keine farbige Linie. Unter keinen Umständen sollte ein positives Ergebnis identifiziert werden, bevor nicht die
Kontrolllinie (C) im Schaufenster erscheint. Falls die Kontrolllinie (C) nicht erscheint, ist das Testergebnis nicht eindeutig und die Bestimmung
muß wiederholt werden.
Anmerkung:
Eine sehr schwache Linie auf der Testregion zeigt an, daß die Cotinin-Konzentration im Urin nahe dem Cut-off-Level für den Test ist.
Diese Proben sollten nochmals getestet oder durch eine spezifischere Methode bestätigt werden, bevor ein positives Ergebnis bestimmt wird.
Verfahrensbegrenzungen
Der Test wurde ausschließlich für den Gebrauch mit menschlichem Urin entwickelt.
Ein positives Ergebnis zeigt nur an, daß die Cotininkonzentration in der Probe oberhalb der Nachweisgrenze. Es zeigt oder misst nicht die Intoxikation.
•
Es besteht die Möglichkeit, daß Fehler bei der Testdurchführung das Ergebnis verfälschen oder andere Substanzen oder nicht aufgeführte Faktoren
mit dem Test interferieren und falsche Ergebnisse verursachen. Beachten Sie den Abschnitt „Spezifität“ wegen möglicher Kreuzreaktionen.
•
Bei Verdacht auf falsche Kennzeichnung oder zu lange Lagerung sollte eine neue Probe gesammelt und der Test wiederholt werden.
Qualitätskontrolle
Gute Laborpraxis erfordert den Gebrauch von Kontrollmaterialien zur Sicherstellung der korrekten Test-Durchführung. Kontrollsubstanzen sind kommerziell
erhältlich. Beim Testen der positiven und negativen Kontrollen gehen Sie genauso vor wie bei Urinproben.
Durchführungscharakteristika
Spezifität
Die Spezifität des Cotinin Tests wurde durch die Zugabe von verschiedenen Drogen, Drogen-Metaboliten und anderen Verbindungen, die wahrscheinlich
im Urin anwesend sind, getestet. Alle Verbindungen wurden in drogenfreiem normalem menschlichem Urin präpariert.
Die folgenden strukturell verwandten Verbindungen ergeben positive Ergebnisse, wenn sie in einer Konzentration gleich oder größer als 350 µg/ml
vorliegen.
(-)-Nikotin.
Die folgenden Verbindungen ergaben keine Kreuzreaktivität beim Test bei Konzentrationen bis zu 100 µg/ml.
Acetaminophen
Amitriptyline
D-Amphetamine
Ampicillin
Aspartame
Aspirin
Atropine
Benzocaine
Benzoylecgonine
[+]-Brompheniramine
Caffeine
Chloroquine
Diazepam
Dopamine
Doxylamine
Ecgonine methyl ester
(-)-Ephedrine
(+/-)-Ephedrine
Erythromycin
EDDP
Furosemide
Glucose
Guaiacol glyceryl ether
Hydrocodone
(+)-Chlorpheniramine
Hydromaphone
(+/-)-Chlorpheniramine
Codeine
Lidocaine
Meperidine
(+/-)-Epinephrine
Chlorprothixene
r-Cyclodextrin
Cyclobenzaprine
5,5-Diphenylhydantoin
Nicotinic
Methampetamin
Methaqualone
Methadone
(+/-)3,4-MDMA
Morphine
Morphine-3+dglucuronide
(1R,2S)-(-)-N-MethylEphedrine
Naloxone
Naltrexone
Creatine
(-)-Deoxyephedrine
Dextromethorphan
Methadol
Maprotiline
DL-Homatropine
(+)-Naproxen
Nortriptyline
Oxalic Acid
Penicillin-G
Pentobarbital
Pheniramine
Phenothiazine
L-Phenylephrine
4- Dimethylaminoantipyrine
p-Phenylethylamine
Phertermine
Procaine
Promethazine
d-Propoxyohene
Secobarbital
Tyramine
Vitamin C
Theophylline
p-Naphthaleneacetic acid
D(+)Trehalose
(+/-)-Soproterenol
(+)-Ephedrine
(+/-)-Phenylpropanolamine
Methapyrilene
(+/-)-Phenylpropanolamine
Methapyrilene
(+/-)-Phenylpropanolamine
Sodium Chloride
Acid Acetylsalicylic Acid
Tenocyclidine
11-nor-_ 9-Tetrahydrocannabinol
-9-carboxylic acid
Thioridazine
Trimethobenzamide
Trifluoperazine
Triprolidine Hydrochloride
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COTININ TEST (COT)
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Literatur
1. Zevin S, Jacob P and Benowitz N. Cotinine effects on nicotine metabolism. Clinical Pharmacology & Therapeutics, 1997 June 61(6): 649-54.
2. Zuccaro P, Pichini S, Altieri I, Rosa M, Pellegrini M and Pacifici R. Interference of nicotine metabolites in cotinine determination by RIA. Clinical
Chemistry, 1997 Jan 43(1): 180-1.
3. Benowitz NL. Cotinine as biomarker of environmental tobacco smoke exposure. Epidemiologic Reviews, 1996 18(2): 188- 204.
4. Curvall M and Vala FK. Nicotine and metabolites: analysis and levels in body fluids. Nicotine and related alkaloids: absorption, distribution, metabolism
and excretion. Edited by Gorrod JW and Wahren J. Published in 1993 by Chapman & Hall, London. ISBN 0 142 55740 l.
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April 2008 / E
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