Auswertung von Haemoccult

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Auswertung von Haemoccult ®
PCD Europe, Krefeld, Jan 2007
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Ist das positiv ?
Nein !
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Ja !
Im deutschen Krebsfrüherkennungsprogramm haben nur etwa 1 % der Frauen und
1,5 % der Männer ein positives Haemoccult® -Ergebnis, da dieser Test eine extrem
hohe Spezifität hat, wie sie für ein Screening von gesunden, asymptomatischen
Personen erforderlich ist. Diese seltenen positiven Testergebnisse müssen aber
sicher erkannt werden. Dazu soll Ihnen diese Präsentation helfen!
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Der Nachweis von Blut im Stuhl ist positiv, wenn sich bei einem oder mehreren der 6 Testfelder innerhalb von 60 Sekunden die für Haemoccult® typische blaue Farbe entwickelt.
Wenn Sie den Test auswerten wollen, dürfen Sie also nicht farbenblind für blau sein!
Wenn Sie Haemoccult® im Screening einsetzen – also bei gesunden Personen zur Früherkennung von Darmkrebs, lassen Sie die Stuhlproben vor der Auswertung mindestens
48 h trocknen! So vermeiden Sie falsch-positive Ergebnisse aufgrund nicht-verdauter
pflanzlicher Peroxidasen aus der Nahrung. Dies kann manchmal vorkommen bei Personen,
die große Mengen an ungekochtem Gemüse und rohem Obst zu sich nehmen.
In den getrockneten Stuhlproben ist Hämoglobin sehr stabil. Vom Auftragen der Stuhlprobe
bis zur Auswertung haben Sie 14 Tage Zeit !
Bei einem positiven Testergebnis wird das Guajak-Harz im Reagenzpapier durch Wasserstoffperoxid (H2O2) in der Entwicklerlösung oxidiert und dadurch blau gefärbt. Dazu muss aber
ein Hämoglobin-Molekül als Katalysator mitwirken, das ein Sauerstoff-Atom vom H2O2 auf
das Guajak-Molekül überträgt! Jedes einzelne Hämoglobin-Molekül in der Stuhlprobe
wiederholt diesen Vorgang immer wieder, solange noch Guajak und H2O2 in der Nähe ist.
Die blaue Farbe kann nur dort entstehen, wo das Hämoglobin ist, nämlich innerhalb der Stuhlprobe! Sie wandert aber mit der Entwicklerlösung nach außen und ist dort gut zu erkennen.
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1. Rückgabebeutel überprüfen
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2. Testbriefe überprüfen
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Wurden alle 3 Testbriefe zurückgegeben?
Ist der Name des Patienten/der Patientineingetragen?
Daten der Stuhlproben ( 3 verschiedene Tage, mindestens 48 Stunden alt? )
3. Testbriefe auswerten
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Ist der Patient /die Patientin eindeutig identifizierbar?
PC- Datei öffnen zur Dokumentation des Ergebnisses
Die drei Testbriefe öffnen und nebeneinander legen
Auf alle 6 Testfelder zentral zunächst 1 Tropfen Entwicklerlösung
Im zweiten Durchgang zentral jeweils einen 2. Tropfen
Bei großflächigen Stuhlproben weitere Tropfen
Testfelder bis zu 60 Sekunden beobachten
4. Ergebnis eintragen
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Wie sieht ein negatives Testergebnis aus?
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Keine Blaufärbung auf oder am Rande der Stuhlprobe
Keine blauen Schlieren
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Wie sieht ein positives Testergebnis aus?
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Blaufärbung auf oder am Rande der Stuhlprobe
Blaue Schlieren von der Stuhlprobe ausgehend
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Bei diesen Proben aus Kunststuhl, der das Reagenzpapier nicht so durchdringt wie natürlicher Stuhl,
können Sie deutlich sehen, dass die Blaufärbung im Bereich der Stuhlprobe entsteht.
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Positives Testergebnis (rechts)
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Bei diesen Proben aus Kunststuhl können Sie deutlich sehen,
dass die Blaufärbung innerhalb der Stuhlprobe entsteht.
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Bei diesen Proben aus Kunststuhl können Sie deutlich sehen,
dass die Blaufärbung innerhalb der Stuhlprobe entsteht.
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Die Blaufärbung verblasst:
nach 30 Sekunden
2 Minuten später
Weil die Blaufärbung nicht beständig ist, muss die Ablesung des Ergebnisses innerhalb
von 60 Sekunden erfolgen! Bei einem positiven Test werden Sie meist schon nach
10 - 20 Sekunden erkennen, wie sich die blaue Farbe bildet, und können dann genau
beobachten, wie diese mit der Entwicklerlösung in Schlieren aus der Stuhlprobe herauswandert. Sie sollten sich also bei der Auswertung von niemandem stören lassen, nicht
weggehen und mit den Augen genau hinsehen, wenn ein Test positiv wird.
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Die Blaufärbung verblasst:
nach 30 Sekunden
2 Minuten später
Die Auswertung soll innerhalb von 60 Sekunden erfolgen, da die Blaufärbung relativ
schnell verblasst. Dabei bleibt zwar das Blau an Stellen mit intensiver Färbung (wie hier
nahe der Front der Entwicklerlösung) meist wochenlang erhalten, allerdings verändert
sich der Farbton schon innerhalb von 2 Minuten von einem mehr rötlichen zu einem
„schmutzigen“ Blau. Sie sehen aber auch, dass eine nur schwache Blaufärbung nach
2 Minuten bereits verblasst ist und nicht mehr erkennbar sein würde.
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Kleine Proben
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negatives Ergebnis
nach 30 Sekunden
nach 60 Sekunden
In der Anleitung werden die Patienten/Patientinnengebeten, mit der Stuhlprobe die
Testfelder ganz oder nahezu ganz auszufüllen. Je größer die Kontaktfläche zwischen
Stuhlprobe und Guajak-Papier ist, desto wahrscheinlicher ist es, dass in der Probe
vorhandenes Hämoglobin auch bei nicht-homogener Verteilung am Reagenzpapier
anliegt und die Reaktion katalysiert. Im oben gezeigten Beispiel sind beide Proben
(Kunststuhl) negativ, es gibt keine Blaufärbung! Sie sehen auch, dass sich der Kreis der
Entwicklerlösung zwischen 30 und 60 Sekunden weiter vergrößert hat.
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Kleine Proben
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positives Ergebnis (rechts)
nach 30 Sekunden
nach 60 Sekunden
Selbstverständlich wird auch eine kleine Stuhlprobe, wenn sie das typische Blau eines
positiven Testergebnisses zeigt, als positiv bewertet. Die Blaufärbung belegt ja, dass
Hämoglobin (oder auch Häm als erstes Abbauprodukt, wenn die Proteinkette des Globin oft
bereits verdaut ist!) die Oxidation des Guajak-Harzes katalysiert hat. Auch hier können Sie
gut sehen, wie sich der Kreis der Entwicklerlösung von 30 auf 60 Sekunden weiter vergrößert
hat. Dabei wird die Blaufärbung mitgenommen und etwas „verdünnt“.
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Kleine Proben
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positives Ergebnis (links)
nach 30 Sekunden
nach 60 Sekunden
Hier ein weiteres Beispiel kleiner Proben (Kunststuhl). Auch hier gibt es keine Frage, dass
das linke Testfeld positiv ist. Damit ist das Testergebnis für den Patienten/die Patientin
positiv, auch wenn dies das einzige positive Testfeld auf den drei Testbriefen ist. Die Ursache
der Blutung muss abgeklärt werden. Dies erfolgt normalerweise durch eine Koloskopie.
Soweit die Pflicht -
...und jetzt die Kür !
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Bläuliche Verfärbungen, z.B. durch Sonnenlicht, UV, Ozon
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unbenutzte Testbriefe
normale Farbe
gebläutes Guajakpapier
Bei dem rechten Testbrief erkennen Sie eine gleichmäßige, leicht bläuliche Verfärbung des
Reagenzpapiers durch Oxidation des Guajak-Harzes durch Licht oder Gas.
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unbenutzte Testbriefe
normale Farbe
Gibt man die Entwicklerlösung auf das Reagenzpapier (ohne Stuhlprobe), bildet sich ein
hellbrauner Ring, weil sich dort das fast farblose und sonst kaum sichtbare Guajak-Harz
konzentriert. War jedoch das Reagenzpapier leicht bläulich verfärbt, so wird diese Farbe
von der Front der Entwicklerlösung mitgenommen, im Innern wird die Fläche hell, im
deutlich sichtbaren Rand mischt sich blau mit hellbraun. Durch ordnungsgemäße
Lagerung der Testbriefe lässt sich die Bläuung verhindern.
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negatives Testergebnis
normale Farbe
Es wird Ihnen jetzt nicht schwer fallen festzustellen, dass weder bei dem linken (normalen)
Testbrief, noch bei dem rechten (gebläuten) Testbrief die typische Blaufärbung einer
positiven Haemoccult®-Reaktion zu entdecken ist. Trotz der äußeren bläulichen Verfärbung
können Sie für den rechten Testbrief eindeutig sagen: Das Ergebnis ist negativ!
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positives Testergebnis
normale Farbe
Auch dieses Ergebnis können Sie eindeutig abzulesen: Unabhängig von der leicht
bläulichen Verfärbung des Reagenzpapiers im rechten Testbrief ist jeweils beim rechten
Testfeld die typische Blaufärbung einer positiven Haemoccult®-Reaktion zu sehen, die mit
der Entwicklerlösung in blauen Schlieren nach außen wandert! Beide linke Testfelder sind
negativ. (Als Proben haben wir wieder Kunststuhl verwendet.)
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Getrocknetes Blut
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bei sichtbarem Blut im Stuhl, z.B. durch Hämorrhoiden, bleibt der Test negativ,
wenn die Erythrozyten unverletzt eingetrocknet sind. Ein Gewinn an Spezifität !
auf dem jeweils linken Testfeld:
getrocknetes Vollblut
auf dem jeweils rechten Testfeld:
hämolysiertes Blut (ca. 200-fach verdünnt)
Links sehen Sie, wie das frische Blut nach 48 Stunden Trocknung aussieht, bevor die Entwicklerlösung aufgetropft wird. (Auf dem rechten Testfeld wird es Ihnen nur in einem verdunkelten Raum
gelingen, den Kreis des kleinen Wassertropfens mit hämolysiertem Blut zu entdecken! Er liegt
etwas außerhalb der Seiten des Quadrates.) Das rechte Photo zeigt denselben Testbrief mit
getrocknetem Vollblut nach Zugabe der Entwicklerlösung auf das linke Testfeld: Durch die Feuchtigkeit wird das Rot etwas schwärzer, die typische Blaufärbung erfolgt aber nicht!
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Getrocknetes Blut
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bei sichtbarem Blut im Stuhl, z.B. durch Hämorrhoiden, bleibt der Test negativ,
wenn die Erythrozyten unverletzt eingetrocknet sind.
auf dem jeweils linken Testfeld:
getrocknetes Vollblut
auf dem jeweils rechten Testfeld:
hämolysiertes Blut (ca. 200-fach verdünnt)
Erst nach Zugabe der Entwicklerlösung auf das rechte Testfeld erhält man ein Gefühl für
die unglaublich hohe Empfindlichkeit von Haemoccult® auf Blut, die darauf beruht, dass
jedes einzelne Hämoglobin- oder Häm-Molekül die Bildung der blauen Farbe wohl viele
hundertmal katalysiert, solange noch Guajak- und H2O2-Moleküle in erreichbarer Nähe
sind. Dadurch wird so viel blauer Farbstoff gebildet, dass man ein positives Testergebnis
gut mit den Augen erkennen kann.
Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit !

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