Template for Electronic Submission of Organic Letters
Transcrição
Template for Electronic Submission of Organic Letters
Sociedade Brasileira de Química (SBQ) Estudo dos efeitos na cinética antimicrobiano homotarsinina 1 de 1 dimerização do 2 peptídeo Carlos F. Guimarães (PG)*, Rodrigo M. Verly (PQ), Jarbas M. Resende (PQ), Dorila Piló-Veloso (PQ). [email protected] 1 2 2 Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 39.100-000, Diamantina/MG, Brasil. Universidade Federal de Minas Gerais, 31270-901, Belo Horizonte/MG, Brasil Palavras Chave: Peptídeos antimicrobianos, síntese em fase sólida, dimerização, Phyllomedusa tarsius. Introdução B) A) A homotarsinina (Htr) é um peptídeo antimicrobiano isolado do anuro Phyllomedusa tarsius, que habita 1 florestas brasileiras . Sua estrutura homodimérica é composta por cadeias de 24 resíduos de aminoácidos unidas por uma ligação de dissulfeto entre resíduos de cisteína (Figura 1). C) D) Figura 1. Estrutura primária da Htr com uma ligação dissulfeto entre as duas cadeias. No entanto, o estudo de sua estrutura e atividade fica limitado devido à pequena quantidade de Htr que se consegue na natureza, havendo a necessidade de sintetizá-la. Contudo, são poucos os estudos relatando a síntese de peptídeos diméricos. Desse modo, o presente trabalho teve como objetivo a síntese química da cadeia monomérica, sua caracterização, purificação e o estudo da cinética de dimerização em solução tampão e em meios que mimetizam ambientes de membranas. Resultados e Discussão A síntese da cadeia monomérica (Htr-m) foi realizada empregando-se a técnica de síntese em 2 fase sólida, estratégia fmoc . A purificação e o acompanhamento cinético da dimerização foram realizados por cromatografia líquida de alta resolução (RP-HPLC) e a caracterização por espectrometria de massas (MALDI-TOF). Os resultados da síntese do monômero estão apresentados na Figura 2A e B. Em seguida, fez-se a dimerização em três meios distintos: (i) solução tampão 100 mM Tris-HCl, pH 8,5, (ii) solução micelar de SDS, pH 8,5 e (iii) solução 30% TFE/H2O contento 100 mM Tris-HCl. Os resultados estão apresentados na Figura 2C. É possível verificar que em solução micelar de SDS a reação se completa em aproximadamente 4h, enquanto que em solução de TFE e solução tampão são necessárias 36h e 48h, respectivamente. Resultados estruturais de CD (Figura 2D) nas com36a Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química Figura 2. A) Perfil cromatográfico e B) espectro de massas (MALDI) da amostra bruta de Htr-m. C) Acompanhamento cinético da dimerização e D) espectros de CD nos meios reacionais estudados. dições de síntese mostram que Htr apresenta conformação randômica em solução tampão TrisHCl, enquanto tende a adotar estrutura -hélice em solução de TFE e micelas de SDS. Portanto, os resultados do acompanhamento cinético indicam que a estruturação do peptídeo e a diminuição de sua mobilidade, imposta pelas micelas de SDS, facilitam a aproximação adequada das cadeias monoméricas favorecendo a formação da ligação de dissulfeto. Conclusões A cinética de dimerização de Htr está relacionada a fatores estruturais e de mobilidade das cadeias monoméricas, embora este último seja predominante na cinética de dimerização. Agradecimentos CNPq, CAPES, FAPEMIG. ________________ 1 Prates, M. V. Peptídeos Catiônicos de Phyllomedusa tarsius (Amphibia): estrutura e atividade biológica. Dissertação de Mestrado, Departamento de Biologia Molecular, UNB, Brasília, 1999. 2 Chan, W. C.; White, P. D.; Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach. 2000, Oxford: Oxford University Press.