ScanGel™ ABO Complete/RH/K Duo - Bio-Rad

ScanGel™
ABO Complete/RH/K Duo
86719
2 x 24 cards
86709
2 x 144 cards
Cards ScanGel ABO Complete/RH1 Duo
e ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo
GEL FORMULADO COM REAGENTES
MONOCLONAIS DE ORIGEM MURINA OU HUMANA
OU GEL NEUTRO
Determinação de grupos sanguíneos ABO.
Determinação dos Ag RH1, RH2, RH3, RH4, RH5, KEL1
IVD
Todos os produtos fabricados e comercializados pela empresa Bio-Rad são
submetidos a um sistema de garantia de qualidade, desde a recepção das
matérias primas até à comercialização dos produtos acabados. Cada lote de
produto acabado é objecto de um controlo de qualidade, sendo
comercializado apenas quando em conformidade com os critérios de
aceitação. A documentação relativa à produção e ao controlo de cada lote é
conservada pelo fabricante.
53
I - UTILIZAÇÃO E PRINCÍPIO DO TESTE
Estas placas são estritamente reservadas a aplicações profissionais no
diagnóstico in vitro.
Para a determinação de grupos sanguíneos ABO e a determinação dos
antigénios RH1 (D), RH2 (C), RH3 (E), RH4 (c), RH5 (e), KEL1 (K) o teste
combina os princípios de aglutinação e filtração em gel.
A reacção é obtida e lida após centrifugação de microtubos especialmente
concebidos, cheios com gel impregnado do reagente específico do
antigénio eritrocitário a determinar (teste globular de grupo ABO e
determinação dos antigénios RH1, RH2, RH3, RH4, RH5, KEL1), ou com gel
neutro, para teste sérico de grupo ABO.
A suspensão de glóbulos vermelhos e o plasma ou soro (para teste sérico
de grupo ABO) são depositados no poço de cada microtubo e
imediatamente centrifugados. Os glóbulos vermelhos não aglutinados
concentram-se no fundo do microtubo, enquanto que os aglutinados são
retidos à altura do gel, consoante a sua dimensão. A posição no gel
determina a intensidade da reacção.
-
+
++
+++
++++
II - CARACTERÍSTICAS DOS REAGENTES
NOTA IMPORTANTE : A placa ScanGel ABO Complete/RH1 Duo
deve ser obrigatoriamente utilizada em simultâneo com a placa
ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo
1. Card ScanGel ABO Complete/RH1 Duo
Os três primeiros microtubos da card ScanGel ABO Complete/RH1 Duo
contêm, cada um, um gel impregnado de um reagente monoclonal de
origem murina, respectivamente de especificidade anti-ABO1 (A),
anti-ABO2 (B) e anti-ABO3 (AB). Estes anticorpos são produzidos a partir
dos seguintes clones :
• anti-ABO1 (A) : 15750F7
• anti-ABO2 (B) : X9
• anti-ABO3 (AB) : AB5-63A5A2 / X9
O quarto microtubo contém um gel impregnado de um reagente monoclonal de
origem humana e de especificidade anti-RH1 (D). Este anticorpo monoclonal é
uma IgM segregada pelo clone B9A4-B2A6A6A1A1. Este anti-RH1 (D) não
permite a detecção do fenotipo RH1 parcial, categoria VI (DVI).
54
O quinto e o sexto microtubos contêm gel neutr.
Estes reagentes contêm azida de sódio (< 0,1%) como conservante.
O código do produto e o número de cards por embalagem são
mencionados no rótulo da embalagem.
2. Card ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo
Os cinco primeiros microtubos da card ScanGel Monoclonal RH/K
Phenotypes Duo contêm, cada um, um gel impregnado de um reagente
monoclonal de origem murina, respectivamente de especificidade anti-RH2
(C), anti-RH3 (E), anti-RH4 (c), anti-RH5 (e) e anti-KEL1 (K). Estes anticorpos
são produzidos a partir dos seguintes clones :
• Anti-RH2 (C) : MS-24
• Anti-RH3 (E) : MS-260/MS-258
• Anti-RH4 (c) : MS-33
• Anti-RH5 (e) : MS-63/MS-21/MS-16
• Anti-KEL1 (K) : MS-56
O sexto microtubo contém o gel sem anticorpo e corresponde ao
controlo (Ctl) válido para as duas placas, ScanGel ABO Complete/RH1
Duo e ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo.
Estes reagentes contêm azida de sódio (< 0,1%) como conservante.
O código do produto e o número de cards por embalagem são
mencionados no rótulo da embalagem.
III - CONSERVAÇÃO - VALIDADE
A data limite de utilização e as condições de armazenamento são indicados
na embalagem.
As cards devem ser conservadas à temperatura ambiente de +15°C a +25°C.
As cards devem ser armazenadas verticalmente, ao abrigo de qualquer fonte
de calor e num local com reduzida variabilidade de temperatura e higrometria.
IV - ADVERTÊNCIAS E PRECAUÇÕES
A fiabilidade dos resultados depende da execução correcta das seguintes
Boas Práticas de Laboratório :
• Não utilizar reagentes que excedam o prazo de validade indicado no
rótulo.
• Não utilizar cards que apresentem sinais de secagem, bolhas ou o selo de
vedação danificado.
• Os reagentes presentes nos microtubos são diferentes, assim é
essencial tomar precauções por forma a evitar contaminação
entre os microtubos e, particularmente, durante a remoção da
tira protectora de alumínio bem como durante as fases de
distribuição de reagentes.
55
• Utilizar uma ponta de pipeta diferente para cada amostra.
• Verificar a precisão e o bom funcionamento das pipetas e outros equipamentos.
• Usar luvas e óculos de protecção durante a manipulação de reagentes e de
amostras.
• Nunca pipetar directamente para a boca.
• Evitar derramamentos. Em caso de derramamento, lavar por meio de
lixívia 12°Cl, diluída a 1/10, e limpar com papel absorvente. O material
utilizado para limpar deverá ser eliminado num recipiente para resíduos
contaminados.
• Os consumíveis e outros produtos que tenham estado em contacto com
amostras ou reagentes contendo material de origem humana devem ser
eliminados depois da sua descontaminação.
• As fichas de segurança podem ser adquiridas a pedido.
V - COLHEITA E TRATAMENTO DAS AMOSTRAS
O sangue deve ser assepticamente recolhido num tubo sem ou com
anti-coagulante (EDTA, CPD).
A análise deve ser realizada o mais brevemente possível após a colheita. As
amostras que não puderem ser analisadas rapidamente deverão ser
conservadas a uma temperatura entre +2°C e +8°C e submetidas a análise
nas 48 horas seguintes. Em nenhum caso deverá ser visível hemólise.
Não aquecer as amostras.
VI - TÉCNICAS
Material fornecido
ABO Complete/RH/K Duo 2 x 24 cards incluindo
• ScanGel ABO Complete/RH1 Duo 24 cards
• ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo 24 cards
ABO Complete/RH/K duo 2 x 144 cards incluindo
• ScanGel ABO Complete/RH1 Duo 144 cards
• ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo 144 cards
Outros materiais necessários mas não fornecidos
• Meio de suspensão de glóbulos vermelhos
86441 ScanLiss 100 ml
86442 ScanLiss 500 ml
86448 ScanSol 100 ml
86449 ScanSol 500 ml
• IH QC : Controlo serológico de grupo sanguíneo
86745 IH QC 4 x 6 ml
• ReverScan : Teste de glóbulos vermelhos para grupo ABO
86790 ReverScan A1, B, 2 x 5 ml
56
• Centrifugadora : ScanGel Centrifuge
• Pipetas automáticas ou semi-automáticas
• Pontas de pipeta
• Tubos descartáveis
• Recipiente para resíduos de risco biológico
• Lixívia
• Luvas de látex
• Papel absorvente
• Óculos de protecção
Controlos
• Determinação de grupos sanguíneos ABO e determinação dos Ag
RH1, RH2, RH3, RH4, RH5, KEL1
Testemunhos positivo e negativo : glóbulos vermelhos comprovadamente
positivos e negativos para o antigénio estudado, testados simultaneamente
com os glóbulos vermelhos da amostra a analisar, para validar a actividade
própria do reagente.
• Teste de glóbulos vermelhos para grupo ABO
controlo positivo (plasma ou soro conhecido contendo, pelo menos, um
anticorpo específico), controlo negativo (plasma ou soro conhecido não
contendo anticorpos). IH QC : Controlo serológico de grupo sanguíneo.
Procedimento
O procedimento deve ser estritamente seguido.
A placa ScanGel ABO Complete/RH1 Duo deve ser obrigatoriamente
utilizada em simultâneo com a placa ScanGel Monoclonal RH/K
Phenotypes Duo, com igual suspensão de glóbulos vermelhos a testar.
Todos os reagentes devem ser levados à temperatura ambiente antes da
utilização.
Por centrifugação separar o soro ou o plasma dos glóbulos vermelhos da
amostra a analisar.
No caso de o sangue ser recolhido em tubo seco, o soro deve ser
recentrifugado.
VI.1 - Suspensão em ScanLiss
a) Preparação extemporânea de uma suspensão de glóbulos vermelhos 1% em
ScanLiss
• Distribuir 1 ml de ScanLiss num tubo descartável identificado.
• Adicionar 10 μl de fundo globular.
• Misturar.
• A suspensão de glóbulos vermelhos está pronta a ser utilizada.
57
b) Técnica
1. Identificar cada placa ScanGel ABO Complete/RH1 Duo e ScanGel
Monoclonal RH/K Phenotypes Duo pelo nome ou número de amostra
correspondente.
Retirar cuidadosamente as linguetas de alumínio dos cards para evitar
contaminações entre cavidades.
Ressuspender as hemácias antes da sua utilização.
2. Distribuir 50 μl de ReverScan A1 no poço de microtubo 5 da card ScanGel
ABO Complete/RH1 Duo.
3. Distribuir 50 μl de ReverScan B no poço de microtubo 6 da card ScanGel
ABO Complete/RH1 Duo.
4. Adicionar 50 μl de plasma ou de soro a testar no poço dos microtubos 5 e
6 da card ScanGel ABO Complete/RH1 Duo.
5. Distribuir 50 μl de suspensão globular a testar no poço dos microtubos 1,
2, 3 e 4 da card ScanGel ABO Complete/RH1 Duo e no poço de cada
microtubo da card ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo.
6. Centrifugar durante 10 minutos, na ScanGel Centrifuge.
7. Ler as reacções.
VI.2 - Suspensão em ScanSol
a) Preparação extemporânea de uma suspensão de glóbulos vermelhos 5% em
ScanSol
• Distribuir 0,5 ml de ScanSol num tubo descartável identificado.
• Adicionar 25 μl de fundo globular.
• Misturar.
• A suspensão de glóbulos vermelhos está pronta a ser utilizada.
b) Técnica
1. Identificar cada placa ScanGel ABO Complete/RH1 Duo e ScanGel
Monoclonal RH/K Phenotypes Duo pelo nome ou número de amostra
correspondente.
Retirar cuidadosamente as linguetas de alumínio dos cards para evitar
contaminações entre cavidades.
Ressuspender as hemácias antes da sua utilização.
2. Distribuir 50 μl de ReverScan A1 no poço de microtubo 5 da card
ScanGel ABO Complete/RH1 Duo.
3. Distribuir 50 μl de ReverScan B no poço de microtubo 6 da card ScanGel
ABO Complete/RH1 Duo.
4. Adicionar 50 μl de plasma ou de soro a testar no poço dos microtubos 5
e 6 da card ScanGel ABO Complete/RH1 Duo.
58
5. Distribuir 10 μl de suspensão globular a testar no poço dos microtubos 1,
2, 3 e 4 da card ScanGel ABO Complete/RH1 Duo e no poço de cada
microtubo da card ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo.
6. Centrifugar imediatamente, durante 10 minutos, na ScanGel Centrifuge.
A diferença entre o fim da distribuição e o início da centrifugação não
deve exceder 10 minutos.
7. Ler as reacções.
VII - RESULTADOS E INTERPRETAÇÃO
• A presença de aglutinados à superfície ou dispersos no gel corresponde a
um resultado positivo.
• Um fundo de glóbulos vermelhos concentrados na base do microtubo
corresponde a um resultado negativo.
• Uma reacção positiva em um dos microtubos 1 a 4 da card ScanGel ABO
Complete/RH1 Duo ou nos microtubos 1 a 5 da card ScanGel Monoclonal
RH/K Phenotypes Duo só pode ser validada se o microtubo de Ctl da card
ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo for negativo.
Se o microtubo Ctl apresentar uma reacção positiva :
Lavar os glóbulos vermelhos em solução salina isotónica (NaCl 0,9%).
Repetir o procedimento, tal como descrito em VI.1 ou VI.2.
Se o microtubo de Ctl for negativo, a interpretação para os microtubos 1 a
4 da card ScanGel ABO Complete/RH1 Duo é a seguinte :
Resultado positivo
++++
Resultado positivo fraco
+ a +++
Resultado negativo
-
Se o microtubo de Ctl for negativo, a interpretação para os microtubos da
card ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo é a seguinte :
Resultado positivo
+++ a ++++
Resultado positivo fraco
+ a ++
Resultado negativo
-
Se o microtubo de controlo continuar a apresentar uma reacção positiva,
realizar de novo o teste segundo uma técnica diferente da filtração por gel.
• A interpretação dos microtubos 5 e 6 da card ScanGel ABO
Complete/RH1 Duo é a seguinte :
Resultado positivo
+ a ++++
Resultado negativo
-
• Os resultados são válidos unicamente se os controlos positivo e
negativo fornecerem os resultados esperados.
59
a) Interpretação do grupo ABO
Um grupo ABO completo comporta 2 testes complementares : o teste globular
realizado com os reagentes anti-ABO1 (A), anti-ABO2 (B) e anti-ABO3 (AB), e o
teste sérico realizado com os glóbulos vermelhos de teste A1 e B. Os perfis
das reacções esperadas com os reagentes anti-ABO1 (A), anti-ABO2 (B),
anti-ABO3 (AB) e os glóbulos vermelhos de teste A1, B bem como as
respectivas interpretações, são apresentados no quadro seguinte :
GRUPPOS
TESTE GLOBULAR
Anti-ABO1 (A)
TESTE SÉRICO
Anti-ABO2 (B) Anti-ABO3 (AB) ReverScan A1
ReverScan B
A
+
-
+
-
+
B
-
+
+
+
-
AB
+
+
+
-
-
O
-
-
-
+
+
O teste globular e o teste sérico devem ser concordantes. Qualquer
divergência entre os testes globular e sérico deve ser resolvida antes de se
confirmar um resultado do grupo ABO.
Sempre que se observe uma divergência entre os testes globular e sérico,
dever-se-á proceder a testes complementares com os controlos apropriados.
b) Interpretação do microtubo RH1 (D)
Um resultado positivo no microtubo RH1 (D) indica a presença do antigénio
RH1 (D) à superfície dos glóbulos vermelhos.
Apesar dos seus desempenhos, o anti-RH1 (D) da placa ScanGel ABO
Complete/RH1 Duo não permite a detecção de todos os antigénios RHW1
(D fraco), nem a detecção do fenotipo RH1 parcial categoria VI (DVI). Se for
necessário proceder à detecção destes antigénios particulares, efectuar um
teste complementar com o reagente ScanGel Monoclonal Anti-RH1
(D)/RHW1 asociado à card ScanGel COOMBS Anti-IgG, -C3d.
c) Interpretação dos microtubos RH2 (C), RH3 (E), RH4 (c) e RH5 (e)
Um resultado positivo em um dos microtubos RH2 (C), RH3 (E), RH4 (c) e
RH5 (e) indica a presença do antigénio correspondente à superfície dos
glóbulos vermelhos testados.
d) Interpretação do microtubo KEL1 (K)
Um resultado positivo no microtubo KEL1 (K) indica a presença do
antigénio KEL1 (K) à superfície dos glóbulos vermelhos testados.
60
VIII - DESEMPENHOS
a) Desempenhos específicos dos reagentes anti-ABO1 (A),
anti-ABO2 (B) e anti-ABO3 (AB)
Os reagentes anti-ABO1 (A), anti-ABO2 (B) e anti-ABO3 (AB) foram
avaliados num painel de 1641 amostras globais (1150 dadores, 332 doentes
e 159 recém-nascidos) completado por um painel de amostras especiais
(antigénios fracos ou variantes).
Cada resultado foi comparado com o obtido através da técnica placa, tubo,
microplaca ou filtração por gel.
As 1641 amostras revelaram resultados conformes com os esperados.
Foi testado um painel de 17 amostras especiais (Ax, B3, AxB, Bh, CisAB,
A3B, ABf). Todas foram detectadas com uma reactividade de 1+ a 3+.
Os antigénios B adquiridos testados não foram detectados com o
anti-ABO2 (B) da placa ScanGel ABO Complete/RH1 Duo.
Os reagentes anti-ABO1 (A), anti-ABO2 (B) e anti-ABO3 (AB) da card
ScanGel ABO Complete/RH1 Duo apresentam boa reprodutibilidade tanto
intra como inter-ensaio.
b) Desempenhos específicos do reagente anti-RH1 (D)
O reagente anti-RH1 (D) foi avaliado num painel de 1641 amostras globais
(1150 dadores, 332 doentes e 159 recém-nascidos) completado por um
painel de amostras especiais (antigénios fracos ou variantes).
Cada resultado foi comparado com o obtido através da técnica placa, tubo,
microplaca ou filtração por gel.
As 1641 amostras revelaram resultados conformes com os esperados.
Foi testado um painel de 24 amostras particulares (Ag fracas, variantes e
fenotipos especiais).
Todas as variantes e fenotipos particulares foram detectados, à excepção
de uma amostra de um fenotipo RH1 parcial, categoria VI (DVI). 94% dos
antigénios RHW1 (D fraco) testados foram detectados.
O reagente anti-RH1 (D) da card ScanGel ABO Complete/RH1 Duo
apresenta boa reprodutibilidade tanto intra como inter-ensaio.
c) Desempenhos específicos do reagente neutro (poços A1 e B,
posição 5 e 6 da card ScanGel ABO Complete/RH1 Duo)
As hemácias ReverScan (A1, B) foram avaliadas num painel de 1132 amostras.
Cada resultado foi comparado com o obtido em técnica de placa,
microplaca ou filtração em gel.
No total das amostras, 1130 deram resultados conformes com os
esperados e 2 apresentaram discordâncias com um dos métodos utilizados
em paralelo, as quais puderam ser eliminadas após confrontação com o
teste globular.
61
Qualquer que seja a amostra testada, as hemácias ReverScan associadas
às card ScanGel ABO Complete/RH1 Duo apresentam boa
reprodutibilidade, tanto intra como inter-ensaio.
d) Desempenhos específicos da card ScanGel Monoclonal RH/K
Phenotypes Duo
Os desempenhos da card ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo
foram avaliados em painéis de 1518 amostras globais (1149 dadores, 332
doentes e 37 recém-nascidos) completado por um painel de amostras
especiais (antigénios fracos)
Cada resultado foi comparado com o obtido através da técnica placa, tubo,
microplaca ou filtração por gel.
As 1518 amostras revelaram resultados conformes com os esperados.
Foi testado um painel de 13 amostras fracas e fenotipos raros. Todas foram
detectadas com uma reactividade de 2+ a 4+.
Os reagentes da card ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo
apresentam boa reprodutibilidade tanto intra como inter-ensaio.
LIMITAÇÕES
A obtenção de resultados anómalos pode ser provocada por :
• uma contaminação bacteriana ou química do soro, do plasma, dos
glóbulos vermelhos ou do material.
• uma medicação ou um estado patológico do doente, fornecendo uma
reacção cruzada.
• a utilização de um meio de suspensão de glóbulos vermelhos diferente do
preconizado.
• uma preparação de glóbulos vermelhos diferente da preconizada.
• uma hemólise dos glóbulos vermelhos de teste.
• a presença de fibrina (imagem de um fundo celular compacto na base de
um microtubo, acompanhada de uma fina faixa rosada no cimo do gel,
correspondente aos glóbulos vermelhos retidos pelos resíduos de fibrina).
• contaminação entre os microtubos.
• utilização de outro procedimento para além do descrito em seguida.
“Sob licença da DIAMED SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Suíça”
62
Bio-Rad
3, bd Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette - France
Tél.: +33 1 47 95 60 00
Fax.: +33 1 47 41 91 33
05/2008
Code: 470187