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DESENVOLVIMENTO DO TESTE DE IMUNOFENOTIPAGEM PARA A CONTAGEM DE LINFÓCITOS TCD4+. Marli Sidoni Bio‐Manguinhos/Fiocruz Panorama da AIDS no Brasil 656.701 casos de aids notificados desde de 1980 a junho de 2012. 36 mil novos caso/ano em média. Taxa de prevalência de 0,4% de HIV na população geral. Aproximadamente 11,5 mil óbitos por ano. Investimento em Prevenção, Tratamento e Diagnóstico pelo MS: ≈1 bilhão e 200 mil reais (780 milhões destinaram‐se ao fornecimento de medicamentos) 217 mil pessoas tem acesso ao tratamento para a aids de forma gratuita. Fonte: Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais/SVS/MS Monitoramento de esquemas terapêuticos a serem utilizados na infecção pelo HIV Monitoramento de esquemas terapêuticos a serem utilizados na infecção pelo HIV Uma única empresa fornece os kits para a Rede Nacional de Laboratórios de CD4+CD8+/MS Objetivo: Desenvolver um kit alternativo de contagem de linfócitos T CD4+ e implantação na Rede Nacional de Laboratórios de CD4 + /CD8 +. Linha do tempo 2012 Conclusão da Etapa I do contrato Avaliação de outros citometros de fluxo 2011 Assinatura do contrato com CIM/Cuba 2010 2009 2008 2013 4º escopo‐ Modelo”on source” Kit Quadriplex Validação do anti‐CD45 do CIM/Cuba 3º escopo‐ Inclusão do anti‐CD45 no kit de BM Inclusão das microesferas no kit de BM Inicio dos processos de conjugação dos AcMn em BM 2007 2006 2005 2004 2º escopo‐ FK – negociações interrompidas Fornecimento de Produto + Equipamentos (citometros de fluxo com 1 laser‐ 3 cores) Identificação do CIM/Cuba e FK como fornecedor dos hibridomas. Contato com possíveis fornecedores dos hibridomas secretores dos AcMn – sem sucesso 28 de maio de 2004‐ Diário Oficial da União‐ MS 1º escopo‐ Fornecimento de anti‐CD3/CD4/CD8 conjugados para o MS. Conjugação dos anticorpos monoclonais a fluorocromos • anti‐CD3 • anti‐CD4 FITC PE • anti‐ CD8 PE/CY7 Cy5 • anti‐ CD45 Avaliação dos AcMn conjugados em BM frente aos disponibilizados para a Rede Nacional de Laboratórios de CD4+CD8+ anti‐CD3 anti‐CD4 anti‐CD8 anti‐CD45 BM BM BM BM BD BD BD BD IM= Média Geométrica Positivo – Média Geométrica Negativo 2 x Desvio Padrão do Negativo Avaliação das microesferas comerciais frente as disponibilizadas para a Rede Nacional de Laboratórios de CD4+CD8+ (valores percentuais) Avaliação das microesferas comerciais frente as disponibilizadas para a Rede Nacional de Laboratórios de CD4+CD8+ (contagem absoluta) Procedimento técnico para a execução do ensaio 50µL de sangue total 20µL de AcMn conjugados Incubar /15 min/ TA/escuro 450µL de solução de lise Incubar /15 min/ TA/escuro 50µL de microesferas comerciais Aquisição e analise no citometro de fluxo Composição do Kit (AcMn + Conjugação + T. Lise + T. Lavagem + Microesferas + Assist. Téc. Produto) Estudo de Viabilidade Equipamentos e Assistência Técnica Técnica e Econômica Treinamentos + Workshop Custos Indiretos EVTE Conclusão Os insumos para o kit em desenvolvimento em Bio‐Manguinhos poderá ser utilizado visando o monitoramento da evolução clínica de indivíduos infectados pelo HIV ou quando da introdução de terapias com antirretrovirais em novos pacientes. Esse monitoramento possibilita a adoção de terapias preventivas às infecções oportunistas e busca a efetividade do tratamento. Cumpre ressaltar que, é necessário negociar os equipamentos e assistência técnica (citômetros de fluxo e acessórios), seguindo o modelo “one source”‐ Produto + Equipamentos + Serviço + treinamentos + Gerenciamento de rede complexa, estoques etc) para implantação do kit nos laboratórios da Rede Nacional de Laboratórios CD4+CD8+ . Agradecimentos 1. Lab.de AIDS e Imunologia Molecular/ Depto. de Imunologia/IOC Dra. Mariza Morgado Dra. Carmem Gripp Monick Lindenmeyer Guimarães 2. Lab. de Imunoparasitologia/Depto. de Imunologia/IOC Dr. Álvaro Luiz Bertho 3. PDTIS – Programa de Desenvolvimento Tecnológico em Insumos para a Saúde RID‐ Rede de Desenvolvimento de Insumos para Diagnóstico “Contribuir para a melhoria dos padrões de saúde pública brasileira, por meio de inovação, desenvolvimento tecnológico e produção de imunobiológicos e prestação de serviços para atender prioritariamente às demandas de saúde do país”. Obrigada. [email protected]