COULTER CLONE Mo1-FITC

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COULTER CLONE Mo1-FITC
Specicity
Clone
Hybridoma
Immunogen
Ig Chain
Species
Source
Purication
Fluorescence
Conjugation
Molar Ratio
Mo1-FITC
CD11b
941
NS1-AG4 x BALB/c
Human adherent mononuclear cell
IgM
Mouse
Ascites uid
Ion exchange chromatography
FITC (Green): Excites at 468-509 nm
Emits at 504-541 nm
FITC (Fluorescein Isothiocyanate)
FITC/Protein 20-30
6602573
ANALYTE SPECIFIC REAGENT
Analytical and performance characteristics are not established.
ANTIBODY SPECIFICITY
Mo1 (CD11b) identies the integrin α chain (αM) which is noncovalently associated with CD18.2 It is also
the receptor for C3bi.3 Mo1 (CD11b) α chain has a molecular weight of 165 kd and is expressed on
monocytes, granulocytes and natural killer cells.4,5,6,7 It is involved in adhesion to endothelial cells and
extracellular matrix proteins.2 In neutrophils, Mo1 density increases tenfold as a result of activation by
degranulating stimuli.8 Within lymphoid tissues, Mo1 is expressed by histiocytic cells in spleen and lymph
node.1
REAGENTS
See table above.
REAGENT CONTENTS
The antibody concentration is 500 µg. The nal concentration of nonantibody reagents when reconstituted
is 0.2% gelatin, 0.01 M potassium phosphate, 0.15 M NaCl and 0.1% NaN3.
WARNING AND PRECAUTIONS
1. This reagent contains 0.1% sodium azide. Sodium azide under acid conditions yields hydrazoic acid,
an extremely toxic compound. Azide compounds should be ushed with running water while being
discarded. These precautions are recommended to avoid deposits in metal piping in which explosive
conditions can develop. If skin or eye contact occurs, wash excessively with water.
2. Specimens, samples and all material coming in contact with them should be handled as if capable
of transmitting infection and disposed of with proper precautions.
3. Never pipet by mouth and avoid contact of samples with skin and mucous membranes.
4. Do not use reagent beyond the expiration date on the vial label.
5. Minimize exposure of reagent to light during storage or incubation.
6. Avoid microbial contamination of reagents or erroneous results may occur.
7. Use Good Laboratory Practices (GLP) when handling this reagent.
8. Harmful if swallowed.
9. After contact with skin, wash immediately with plenty of water.
GHS HAZARD CLASSIFICATION
Not classied as hazardous
© 2014 Beckman Coulter, Inc. All rights reserved.
Safety Data Sheet is available at techdocs.beckmancoulter.com.
EUROPEAN HAZARD CLASSIFICATION
Mo1-FITC
Xn;R22
R22
S28
Harmful if swallowed.
After contact with skin, wash
immediately with plenty of water.
STORAGE AND HANDLING CONDITIONS AND STABILITY
RECONSTITUTION PROCEDURE
Reconstitute the lyophilized Mo1-FITC reagent by adding 500 µL of distilled water to the vial. This is the
stock solution. Centrifuge the stock solution at 20-25°C at 100,000 x g for 10 minutes to optimize staining
results. Use this liquid reagent directly from the vial as the stock solution to prepare the reagent working
solution.
The reagent working solution* is prepared as follows (volume listed is on a per test basis):
Add 5 µL stock solution to 195 µL PBS**.
*Diluted reagent working solution is good for day of preparation only.
**PBS - Phosphate Buffered Saline (pH=7.2).
Bring reagent to 20-25°C prior to use.
FREEZING PROCEDURE
MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED
PBS - Phosphate Buffered Saline (pH=7.2) PN 6603369
PBS containing 2% heat-inactivated fetal or newborn calf serum (FCS). Dilute 2 mL of calf serum to 100
mL with PBS.
1. Dilute the reconstituted stock solution of the COULTER CLONE reagent with PBS containing 2%
FCS prior to freezing as follows:
Add 5 µL of reconstituted stock solution (1 test*) to 100 µL PBS with 2% FCS**.
*These may be frozen in multiple test volume aliquots.
**This yields 2x the concentration of the working solution.
2. Prior to use, allow the frozen aliquot to reach 20-25°C.
3. The frozen aliquot, at 2x the nal concentration, must be further diluted to equal the total volume as
calculated in the Reconstitution Procedure section. Dilute each aliquot with the appropriate volume
of PBS without 2% FCS and mix well.
4. Avoid repeated freeze/thaw cycles. This will denature the antibody protein.
5. Do not store in a self-defrosting freezer.
STORAGE AND STABILITY
Unreconstituted lyophilized reagent is stable to the expiration date on the vial label when stored at 2-8°C.
Do not freeze. Minimize exposure to light.
The stock solution of reconstituted lyophilized reagent is stable as follows:
• 6 months when stored at 2-8°C or 0 to -20°C when reconstituted using the Reconstitution Procedure.
If all of a reconstituted reagent is not to be used within 6 months, follow the Freezing Procedure.
• 1 year when stored at -70°C using the Freezing Procedure.
EVIDENCE OF DETERIORATION
Any change in the physical appearance of this reagent*, or any major variation in values obtained for
control samples may indicate deterioration and the reagent should not be used. If the lyophilized material
appears moist, do not use.
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*Normal Appearance of Reagent
FITC labeled:
Lyophilized-white to yellow-orange plug
Reconstituted-clear, colorless to
yellow-green liquid
PRODUCT AVAILABILITY
COULTER CLONE Mo1-FITC
6602573 - 0.5 mL
TRADEMARKS
The Beckman Coulter stylized logo is a trademark of Beckman Coulter, Inc., and is registered in the
USPTO.
For additional information, or if damaged product is received, call Beckman Coulter Customer Service at
800-526-7694 (USA or Canada) or contact your local Beckman Coulter Representative.
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Especicidade
Clone
Hibridoma
Imunogénio
Cadeia de Ig
Espécie
Fonte
Puricação
Fluorescência
Conjugação
Razão molar
Mo1-FITC
CD11b
941
NS1-AG4 x BALB/c
Célula mononuclear aderente humana
IgM
Rato
Líquido ascítico
Cromatograa de permuta iónica
FITC (Verde): Excita a 468-509 nm
Emite a 504-541 nm
FITC (Isotiocianato de uoresceína)
FITC/Proteína 20-30
COULTER CLONE Mo1-FITC
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REAGENTE ESPECÍFICO DE ANÁLISE
Não estão estabelecidas as características analíticas e de desempenho.
ESPECIFICIDADE DO ANTICORPO
O Mo1 (CD11b) identica a cadeia α integrina (αM) que está associada de forma não-covalente ao
CD18.2 É igualmente o receptor para o C3bi.3 A cadeia α do Mo1 (CD11b) tem um peso molecular de
165 kd e é expressa em monócitos, granulócitos e células NK.4,5,6,7 Está envolvido na adesão às células
endoteliais e às proteínas da matriz extracelular.2 Nos neutrólos, a densidade do Mo1 aumenta 10 vezes
em resultado da activação por estímulos de desgranulação.8 Nos tecidos linfóides, o Mo1 é expresso por
células histiocíticas nos gânglios linfáticos e baço.1
REAGENTES
Ver tabela acima.
CONTEÚDO DOS REAGENTES
A concentração de anticorpos é de 500 µg. A concentração nal de reagentes não-anticorpos, quando
reconstituídos, é gelatina a 0,2%, fosfato de potássio a 0,01 M, NaCl a 0,15 M e NaN3 a 0,1%.
ADVERTÊNCIA E PRECAUÇÕES
1. Este reagente contém azida sódica a 0,1%. A azida sódica em condições ácidas produz ácido
hidrazóico, um composto extremamente tóxico. Os compostos de azida deverão ser lavados com
água corrente, durante a respectiva eliminação. Estas precauções são recomendadas para evitar
a acumulação de depósitos na canalização metálica, onde se podem desenvolver condições para
explosão. Em caso de contacto com a pele ou olhos, lavar abundantemente com água.
2. Todas as amostras ou colheitas, assim como todo o material que entre em contacto com aquelas,
deve ser manipulado como uma substância susceptível de transmitir infecções e eliminado utilizando
as precauções adequadas.
3. Nunca coloque a pipeta na boca e evite o contacto das amostras com a pele e membranas mucosas.
4. Não utilize o reagente além da data de validade mencionada no rótulo do frasco.
5. Limitar ao máximo a exposição do reagente à luz durante a sua conservação ou a incubação.
6. Evite contaminação microbiana dos reagentes. Esta pode originar resultados falsos.
7. Respeitar as Boas Práticas de Laboratório (BPL) durante a manipulação deste reagente.
8. Nocivo por ingestão.
9. Após contacto com a pele, lavar imediatamente com água em abundância.
CLASSIFICAÇÃO DE PERIGO GHS
Não classicado como perigoso
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A Ficha de dados de segurança está disponível em techdocs.beckmancoulter.com.
CLASSIFICAÇÃO EUROPEIA DE PERIGOSIDADE
Mo1-FITC
Xn;R22
R22
S28
Nocivo por ingestão.
Após contacto com a pele, lavar
imediatamente com água em
abundância.
CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO E MANUSEAMENTO E ESTABILIDADE
PROCEDIMENTO DE RECONSTITUIÇÃO
Reconstitua o reagente Mo1-FITC liolizado, adicionando ao tubo 500 µl de água destilada. Esta é a
solução de reserva. Centrifugue a solução de reserva entre 20 e 25°C a 100.000 x g durante 10 minutos
para optimizar os resultados de coloração. Utilize este reagente líquido directamente a partir do tubo
como solução de reserva, para preparar a solução de trabalho do reagente.
A solução de trabalho do reagente* é preparada de acordo com a descrição seguinte (o volume indicado
é para um teste):
Adicione 5 µl de solução de reserva a 195 µl de PBS**.
*A solução de trabalho de reagente diluída só pode ser utilizada no dia da preparação.
**PBS - Solução Tampão Salina de Fosfato (pH=7,2).
Espere que o reagente atinja uma temperatura entre 20 e 25°C antes da respectiva utilização.
PROCEDIMENTO DE CONGELAÇÃO
MATERIAIS NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS
PBS - Solução Tampão Salina de Fosfato (pH=7,2) PN 6603369.
PBS contendo soro fetal ou de bovino recém-nascido a 2% inactivado pelo calor (FCS). Dilua 2 ml de
soro bovino até 100 ml com PBS.
1. Dilua a solução de reserva reconstituída do reagente COULTER CLONE com PBS contendo FCS a
2% antes de congelar, do seguinte modo:
Adicione 5 µl da solução de reserva reconstituída (1 teste*) até 100 µl de PBS com FCS a 2%**.
*Este volume pode ser congelado em múltiplas alíquotas de volume de teste.
**Isto rende 2x a concentração da solução de trabalho.
2. Antes de utilizar, deixe a alíquota atingir uma temperatura de 20 a 25°C.
3. A alíquota congelada, em 2x a concentração nal, tem de ser adicionalmente diluída até igualar o
volume total, conforme calculado na secção Procedimento De Reconstituição. Dilua cada alíquota
com o volume apropriado de PBS sem FCS a 2% e misture bem.
4. Evite a repetição de ciclos de congelação/ descongelação. Este procedimento irá desnaturar a
proteína do anticorpo.
5. Não armazene num frigoríco autodescongelante.
ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE
O reagente liolizado, não reconstituído, permanece estável até ao m do prazo de validade impresso
na etiqueta do respectivo tubo, quando armazenado entre 2 e 8°C. Não congele. Minimize a exposição
à luz.
A solução de reserva reconstituída do reagente liolizado permanece estável durante:
• 6 meses quando armazenada entre 2 e 8°C ou 0 a -20°C quando reconstituída com o Procedimento
de Reconstituição. Se não utilizar o reagente reconstituído na totalidade no prazo de seis (6) meses,
siga o Procedimento de Congelação.
• 1 ano quando armazenada a -70°C, utilizando o Procedimento de Congelação.
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SINAL DE DETERIORAÇÃO
Qualquer alteração das características físicas deste reagente*, ou qualquer variação relevante dos
valores em relação a amostras de controlo, podem indicar deterioração, pelo que o reagente não deverá
ser utilizado. Se o material liolizado parecer húmido, não utilize.
*Aparência Normal do Reagente
Identicação FITC: Tampão liolizado-branco para
amarelo-alaranjado
Reconstituído-líquido transparente
incolor a amarelo-esverdeado
DISPONIBILIDADE DO PRODUTO
COULTER CLONE Mo1-FITC
6602573 - 0,5 ml
MARCAS COMERCIAIS
O logótipo estilizado da Beckman Coulter é uma marca comercial da Beckman Coulter, Inc. e está
registado no USPTO (Gabinete de Patentes dos EUA).
Para obter informações adicionais ou se o produto recebido estiver danicado, contacte a assistência
ao cliente da Beckman Coulter através do número 800-526-7694 (EUA e Canadá) ou contacte o seu
representante Beckman Coulter local.
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REFERENCES
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Todd RF, Bhan AK, Kabawat SE and Schlossman SF. 1984. Human myelomonocytic differentiation antigens dened by monoclonal
antibodies. In: Leukocyte Typing, eds. Bernard A, Boumsell L, Dausset J, Milstein C and Schlossman SF. p. 424.
Larson RS and Springer TA. 1990. Structure and function of leukocyte integrins. Imm Rev 114:181-217.
Arnaout MA, Todd RF, Dana N, Melamed J, Schlossman SF and Colten HR. 1983. Inhibition of phagocytosis of complement C3- or
Immunoglobulin G- coated particles and of C3bi binding by monoclonal antibodies to a monocyte-granulocyte membrane glycoprotein
(Mo1). J Clin Invest 72:171.
Shaw S. 1995. Leukocyte Differentiation Antigen Database (LDAD). Ver 1.12C. National Institutes of Health and 5th International
Workshop on Leukocyte Differentiation Antigens.
Todd RF and Schlossman SF. 1982. Analysis of antigenic determinants on human monocytes and macrophages. Blood 59:775.
Todd RF and Schlossman SF. 1984. Differentiation antigens on human monocytes and macrophages dened by monoclonal antibodies.
In: Mononuclear Phagocyte Biology, eds. New York, NY: Volkman A, Dekker M. p. 129.
Biondi A, Rossing TH, Bennett J and Todd RF. 1984. Surface membrane heterogeneity among mononuclear phagocytes. J Immunol
132:1237.
Todd RF, Arnaout MA, Rosin RE, Crowley CA, Peters WA and Babior BM. 1984. The subcellular localization of Mo1 (Mo1 formerly,
gp 110) a surface glycoprotein associated with neutrophil adhesion. J Clin Invest 74:1280.
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