Reagente de Cálcio Dimension

DADE BEHRING
DIAGNOSTICA SÃO PAULO
REAGENTE DE CÁLCIO DIMENSION
Código DF23A
USO DO PRODUTO - O método CA empregado no sistema de química clínica DIMENSION é uma análise de
diagnóstico in vitro, que tem por objetivo a determinação quantitativa de cálcio no soro, plasma e urina.
RESUMO - O método CA é uma modificação da reação cálcio o-cresolftaleína complexona (OCPC) descrita
originalmente por Schwartzenbach, et al. Mais tarde, Stern and Lewis adaptaram esta reação para um ensaio
colorimétrico de cálcio. Connerty e Briggs demonstraram o uso do 8-quinolinol para reduzir as interferências
pelo magnésio, e Sarkar e Chauhan4 descreveram o emprego deste procedimento para determinar cálcio sérico
sem precipitação protéica. Este método incorpora o emprego de 8-quinolinol para reduzir interferências de
magnésio e glicina como tampão para controle do pH.
PRINCÍPIO DE PROCEDIMENTO - O cálcio reage com o OCPC para formar um complexo de cor púrpura.
A quantidade de complexo assim formado é proporcional a concentração de cálcio e a medição é feita
empregando-se uma técnica bicromática de ponto final (577, 540 nm). Íons de magnésio, que também formam
um complexo colorido com o OCPC, são removidos da reação mediante a formação de complexos com 8quinolinol.
Ca+++ + OCPC→Complexo Ca-OCPC pH 9.7
(absorbe a 577 nm)
Mg++ + 8-quinolinol→Quinolinato magnésico ( não absorbe a 577 nm)
REAGENTES
Compartimentos Forma
1-6
Líquido
7-8c
Líquido
Ingredientes
Concentração
Tampão Glicina
0.22 mmol/L
OCPC/
0.39 mmol/L
8-Quinolinol
6.60 mmol/L
a. Os compartimentos estão enumerados consecutivamente a partir do extremo fim do cartucho.
b. Valor normal por análise por fabricação.
c. Ver PRECAUÇÕES.
PRECAUÇÕES - IRRITANTE. O COMPARTIMENTO 7 CONTÉM 6.5 ML DE REAGENTE OCRESOLFTALEÍNA / 8-QUINOLINOL E O COMPARTIMENTO 8 CONTÉM 3.3 ML DE REAGENTE OCRESOLFTALEÍNA / 8-QUINOLINOL. AMBOS SÃO IRRITANTES PARA OS OLHOS E A PELE.
ENXAGÜAR A ÁREA AFETADA COM ÁGUA POR PELO MENOS 15 MINUTOS E CONSULTAR UM
MÉDICO. AS CUBETAS USADAS CONTENDO FLUÍDOS ORGÂNICOS HUMANOS, DEVEM SER
MANIPULADAS COM CUIDADO APROPRIADO PARA EVITAR CONTATO COM A PELE OU
INGESTÃO. 5
Para uso diagnóstico IN VITRO
DILUIÇÃO E MISTURA - A diluição e mistura de reagente e amostra é efetuada automaticamente pelo
sistema Dimension. O copo da amostra deve ter capacidade de volume suficiente para conter a amostra e o
“volume morto”; não é necessário o volume exato do copo. O volume morto é de 30µl para um copo de
capacidade de 1.5ml.
CONSERVAÇÃO - Guardar em ambiente refrigerado de 2 - 8 ºC.
PRAZO DE VALIDADE - Verificar o prazo de validade na caixa de cada cartucho de reativo fechado. Os
compartimentos fechados e não hidratados de cartuchos dentro do equipamento são estáveis por 30 dias. Os
compartimentos 1-6 uma vez abertos pelo instrumento são estáveis por 24 horas. Os compartimentos 7-8 uma
vez abertos pelo instrumento são estáveis por 10 dias.
TOMADA DE AMOSTRA - Para as amostras a serem analisadas por este método, deve-se empregar os
métodos e procedimentos normais de coleta e armazenamento, para conservação de soro e plasma.5 Soro deve
ser separado dos glóbulos vermelhos e analisados imediatamente.6 A coleta de urina 24 horas deve ser feita em
recipientes contendo 10 ml de HCL 6M.5
SUBSTÂNCIA DE INTERFERÊNCIA CONHECIDA - Interferências devidas ao magnésio são
insignificantes nos níveis normalmente encontrados no soro humano. Uma interferência positiva máxima de 0.7
mg/dl[0.17 mmol/L] ocorre num nível de magnésio de 7 mg/dl(2.9 mmol/L). As substâncias seguintes não têm
efeitos significativos no método CA nas concentrações indicadas:
Acetaminofeno
Ampicilina
Bilirrubina
Diazepan
Digoxina
Etanol
Gentamicina
Hemoglobina
Heparina Lítica
Lipemia
Nortriptilina
Fenobarbital
Fenitoína
Salicilato
Fluoreto Sódico
Teofilina
200 µg/ml
20 µg/ml
20 mg/dL
20 µg/dl
20 ng/ml
800 mg/dl
16 µg/ml
500 mg/dL
280 U/mL
600 mg/dl
1000 ng/ml
80 µg/ml
30 µg/ml
100 mg/dl
400 mg/dL
100 µg/ml
[ 1.3mmol/l]
[ 57 µmol/l]
[342 µmol/L]
[ 70 µmol/l]
[ 25.6 nmol/l]
[174 mmol/l]
[ 29.4 µmol/l]
[0.31 mmol/L (monômero)]
[280000 U/L]e
[6.86 mmol/l] triglicérides
[3797 nmol/l]
[344 µmol/l]
[119 µmol/l]
[ 7.24 mmol/l]
[4 g/L]e
[555 µmol/l]
EDTA quando presente a 200 mg/dL [2 g/L]e e Oxalato Potássico quando presente a 500 mg/dL [5g/L] reduz os
resultados de CA a valores inferiores aos limites analíticos do método. Os tubos de coleta de sangue Corvac e
SST não afetam os resultados de CA. Cada laboratório deve estabelecer as normas de aceitação de seus tubos de
coleta de amostra de sangue, como também os produtos para separação de soro. Já que estes produtos podem
apresentar variações de um fabricante para outro e às vezes entre lotes do mesmo fabricante.
Corvac é uma marca registrada de Monoject, Division of Sherwood Medical, St. Louis, MO.
SST é uma marca registrada da Becton - Dickinson, Rutherford, NJ.
d. As unidades do Sistema internacional de unidades estão entre parênteses.
e. Concentrações normalmente presentes em tubos de coleta de sangue.
PROCEDIMENTO
MATERIAIS NECESSÁRIOS
CAL Flex Cartucho de reagente
Papel para impressa
Copos para amostras ( 1,5 ml)
Água purificada ou equivalente (diluente)f
Cartucho de cubetas
f- referência no manual de seu Dimension.
CATALÓGO NÚMERO
DF23A
D827
DSC4
710615901
D828
2
PROCESSO DE ANÁLISE - O sistema de química clínica Dimension Dade Behring processa a amostra
automaticamente através das etapas necessárias e imprime os resultados.
CONDIÇÕES DO TESTE
Volume da amostra:
Volume de Reativo 1:
\Volume de Reativo 2:
Volume de diluente:
Temperatura do ensaio:
Comprimento de onda:
Tipo de medição:
5 µl
145 µl
33 µl
258 µl
37 ºC
577 e 540 nm
bicromática de ponto final
CALIBRAÇÃO - O procedimento geral de calibração é descrito no manual do seu sistema Dimension. As
seguintes informações devem ser consideradas quando da calibração do método CA:
Limite de ensaio:
Material de referência:
Níveis de Calibração recomendados:
Esquema de Calibração:
Freqüência de Calibração:
Coeficiente linear:
5.0-15.0 mg/dL[1.25-3.74 mmol/L]
Calibradores secundários, como o Calibrador Química I Dade
Behring ( CAT.NO.DC18).
7, 10, 13mg/dL(1.8, 2.5, 3.2 mmol/L]
Três níveis em triplicata.
A cada novo lote de reagente ou a cada 3 meses para um mesmo
lote.
Co 1.000
C1 0.090
CONTROLE DE QUALIDADE - Pelo menos uma vez ao dia, analisar uma solução em dois níveis de um
controle com concentrações conhecidas. Os resultados obtidos devem estar dentro dos limites de variabilidade
diária do sistema, medida no laboratório do usuário. Se os resultados não estiverem dentro dos limites aceitáveis
do laboratório do usuário, seguir os procedimentos descritos no manual de seu sistema Dimension. Existe a
possibilidade de um funcionamento incorreto do instrumento, se for observada a precisão seguinte em 5 testes
consecutivos:
*Concentração
7.0 mg/dL [1.75 mmol/L]
13.5 mg/dL [3.37 mmol/L]
D. P. ( desvio padrão)
> 0.17 mg/dL [0.04 mmol/L]
> 0.23 mg/dL [0.06 mmol/L]
RESULTADOS - O instrumento calcula e imprime automaticamente a concentração de cálcio em mg/dL
[mmol/L] usando o esquema de cálculo ilustrado no manual do seu sistema Dimension.
LIMITAÇÕES DOS PROCEDIMENTOS - Os resultados com excesso de 15.0 mg/dL [3.75 mmol/L] devem
ser repetidos após se diluir a amostra com Água Purificada DuPont ou equivalente para se obter uma
concentração dentro dos limites do ensaio. O resultado deve ser multiplicado pelo fator de diluição para se
obter a concentração da amostra não diluída. O sistema de informações do instrumento contém mensagens de
erro que advertem o operador sobre falhas específicas de funcionamento. Qualquer informação que contenha
estas mensagens de erro deve ser guardada para comprovação.
INTERVALO DE REFERÊNCIA
Soro: 8.8-10.5 mg/dL [2.20-2.62 mmol/L]
Urina: 42-353 mg/24hr [1.0-8.8 mmol/24hr]
População de referência:
52 homens, com idades entre 17-61 anos
3
49 mulheres, com idades entre 17-61 anos
O intervalo de referência foi calculado não parametricamente e representa 95% central da população. Cada
laboratório deve estabelecer seu próprio intervalo de referência para as análises de Cálcio processadas no
sistema Dimension.
CARACTERÍSTICAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMENTO g
REPRODUTIBILIDADE h
Material
Média
Desvio Padrão(%CV)
Dentro do mesmo dia Total
mg/dL[mmol/L]
Moni-Trol
Soro
Nível 1
9.2[2.3]
0.08[0.02](0.8)
0.16[0.04](1.7)
Nível 2
12.9[3.2]
0.12[0.03](0.9)
0.24[0.06](1.9)
LYPHOCHEK
Urine Control
Urina
Normal
8.4[2.1]
0.06[0.02](0.7)
0.08[0.02](0.9)
Moni-Trol é marca registrada de Baxter Healthcare Corp., Miami, FL 33152.
LYPHOCHEK é marca regitrada de Bio-Rad, Anaheim, CA 92806
CORRELAÇÃO
Estatísticas de Regressão
Método
Comparativo
Pendente
Soro
Método
CALCM
no
analisador
clínico
ACA 0.95
DuPont Urina
Método
CALCM
no 0.97
analisador clínico ACA Dade
Behring
Interseção
Coeficiente de
Correlação
0.22[0.06]
0.96
0.12[0.03]
0.987
n
106
112
g.Todos os ensaios para definir as características específicas de funcionamento, foram processados depois que
se efetuaram as comprovações normais e recomendadas de controle de qualidade do equipamento.
h. As amostras foram analisadas durante 20 dias em duplicata para cada nível, o desvio padrão intradia e total
foram calculados pelo método de análise de variância.
i. O modelo da equação para os cálculos estatísticos de regressão é: [resultado do sistema Dimension]=
inclinação X [resultado do método comparativo] + intercessão.
ESPECIFICIDADE ANALÍTICA - Para maiores detalhes ver a seção de Substâncias de interferência
conhecida descrita anteriormente.
BIBLIOGRAFIA
1. Anderegg, G, Flaschka, H, Sallmann, R, Schwartzenbach, G, Metallindikatoren VII ein auf Erdalkaluonen
ansprechendes Phtalein und seine analytyische Veswendung HELV, Chim Acta 1954; 37:113-120.
2. Stern, J, Lewis, WHP, The colorimetric estimation of calcium in serum with O-cresolphtalein complexone,
Clin Chim Acta 1957; 2:576-580.
3. Connerty, HV, Briggs, AR, Determination of serum calcium by means of O-cresolphtalein complexone, Am J
Clin Path 1966; 45:290-296.
4. Sarker, B, Ray, C, Chauhan, UPS, A new method for determining micro-quantities of calcium in biological
materials, Anal Biochem 1967; 20:155-166.
4
5. Tietz, NW, Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, PA 1986, pp 52-53(techniques
and procedures to minimize laboratory infections) and pp 478-497 (specimen collection and storage
recommendations).
6. Henry, RJ, Clinical Chemistry, Principles and Technics, Harper and Row, New York, NY, 1974, p 656.
7. Henry, JB, and LaFever, D, An Evaluation of a Calcium Method for the Dade Behring ACA, Dade Behring
Company, Wilimington, DE (1974).
Diagnóstica São Paulo – Produtos e Equipamentos para Laboratórios Ltda
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Site: diagnosticasp.com.br – E:mail: [email protected]
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