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CREATININA UV Liquid One Step FINALIDADE MATERIAIS NECESSÁRIOS, MAS NÃO FORNECIDOS Kit para a determinação do creatinina no soro, plasma e urina pelo método enzimático UV. 1. Espectrofotômetro para 340 nm (Hg 334 ou 366 nm). 2. Cubetas de leitura. 3. Pipetas e micropipetas para os volumes citados em PROCEDIMENTO DO TESTE. 4. Cronômetro 5. Banho ou bloco para 37ºC 6. Água destilada ou deionizada. O uso de Água Ultrapure Tipo 2, fornecida separadamente pela GT Lab, é recomendado. SIGNIFICADO CLÍNICO A concentração da creatinina no soro e a depuração da creatinina endógena são aceitos como parâmetros de confiança para a avaliação da filtração glomerular e usados no controle da função do rim. PRINCÍPIO DO ENSAIO CDI Creatinina + H2O —-—-—-—> N-methylhydanotoina + NH4+4+ GLDH 4+ 2-oxolgutarato + NADH —-—-—-—> glutamato + NAD++ Onde: CDI: creatinina deiminasa GlDH: glutamato dehidrogenasa A diminuição da concentração do NADH, que é proporcional à concentração do creatinina na amostra, é monitorada em 340 nm. REAGENTES FORNECIDOS Código 812104: 1 x 45 ml Reagente 1: 1 x 30 ml. Pronto para uso. Reagentes 2: 1 x 15 ml. Pronto para uso. Enzima 1: 1 vial que contem reagente em pó para dissolver num frasco do Reagente 1. Enzima 2: 1 vial que contem reagente em pó para dissolver num frasco do Reagente 2. Padrão: 1 x 4 ml. Pronto para uso. Composição dos reagentes fornecidos Reagente 1: cloreto de magnésio 5 mmol/l, 2-oxolgutarato de sódio 8 mmol/l em tampão Tris 50 mmol/l, pH = 8.20. Reagente 2: cloreto de magnésio 5 mmol/l, 2-oxoglutarato de sódio 8 mmol/l 2-oxoglutarato de sódio em tampão Tris 50 mmol/l, pH = 8.20. Enzima 1: reagente em pó para obter uma solução no Reagente 1 acima mencionado para ter uma solução de: NADH………… 0.4 mmol/l GlDH………… 12000 U/l. Enzima 2: reagente em pó para obter uma solução no Reagente 2 acima mencionado para ter uma solução de: CDI………………16500 U/l. Padrão: solução de creatinina 2 mg/dl (177 µmol/l), referenciado ao Standard Reference Material #909b (National Institute of Standards and Technology, EEUU). Sinais de instabilidade ou deterioração dos reagentes O pó comprimido no Reagente 2 e a coloração ou o sedimento no Padrão ou no Reagente 1 são indicativos da deterioração, rendendo o jogo inútil para o uso. Conservação e estabilidade dos reagentes - Conserve-se em refrigerador (2-8ºC). - Todos os reativos são estáveis até a data de vencimento marcada no rótulo. Cuidados e precauções O kit é destinado somente para uso diagnóstico in vitro. A caixa e os frascos neste produto não podem ser reutilizados. Eles devem ser descartados como resíduos perigosos de acordo com a legislação vigente. O pessoal que manipula-los, deve ser devidamente treinado para a manipulação e eliminação pela instituição ou pelo laboratório que usa-lo. COLETA E OBTENÇÃO DA AMOSTRA Soro ou plasma Heparine e EDTA são os anticoagulantes de eleição quando usar plasma. As células ou o coagulo devem ser separados pela centrifugação dentro dos 30 minutos depois de coletar a amostra. Urina (espécime de 2 ou 24 horas) Deve-se coletar em recipientes limpos. O espécime deve ser diluído 1/50 com água destilada ou deionizada livre de amônio antes do ensaio. Condição de conservação da amostra: Refrigerador (2-8ºC): 24 horas Freezer (-20ºC): 3 meses Substâncias Interferentes Os componentes usuais dos espécimes não mostraram para interferir no ensaio. Os componentes Jaffé positivos, que interferem em métodos baseados no uso do ácido pícrico, não reagem no teste enzimático. Recomenda-se ler o trabalho de D.S. Young (veja Bibliografia). REAGENTE DE TRABALHO Preparação Reagente R1 de Trabalho: adicione o conteúdo do vial de Enzima 1 em o frasco de Reagente 1. Homogênese até dissolução. Reagente R2 de Trabalho: adicione o conteúdo do vial de Enzima 2 em o frasco de Reagente 2. Homogênese até dissolução. Composição do Reagente de Trabalho GlDH……….............................900 U/l Tris……… ...............................50 mmol/l, pH = 8.2 CDI………… ...........................1500 U/l 2-oxoglutarato de sódio ………4.8 mmol/l NADH…...................................0.24 mmol/l Cloreto de Magnésio ………….3.0 mmol/l Conservação e estabilidade dos Reagentes de Trabalho Um mês refrigerado (2-8ºC). Proteger da luz. Sinais de deterioração do Reagente de Trabalho A leitura do reagente, sem adicionar amostra, deve ser al menos 1.2 D.O. Si for menor, o reagente no deve-se usar. PROCEDIMENTO DO TESTE Condições de ensaio: Comprimento de onda: 340 nm (Hg 334 ou 366 nm) Temperatura: 30-37 ºC Traga os reagentes e os espécimes na temperatura de quarto (15-30 ºC) antes do uso. Rotule 2 cubetas P (Padrão) e A (Amostra) e proceda como a seguir (Nota 2) P A Reagente R1 de Trabalho 300 µl 300 µl Padrão 50 µl ---- ---- 50 µl Amostra Homogeneizar bem. Incubar a 37 ºC por exatamente 5 minutos. Registrar as leituras iniciais P1 e A1 em 340 nm (Nota 3). Depois adicionar: Reagente R2 de Trabalho 150 µl 150 µl Homogeneizar bem. Incubar a 37 ºC por exatamente 5 minutos. Registrar as leituras P2 e A2 em 340 nm. CÁLCULOS Creatinina em soro ou plasma A1 – A2 ----------- x 2,0 = mg/dl creatinina P1 – P2 Creatinina em urina Urina de 24 horas: A1 – A2 2,0 50 ----------- x ------ x ---- x diurese (ml) = g creatinina/24 h P1 – P2 1000 100 1. Jaffe M: Über den Niederschlag welchen Pikrinesäure in normalen Harn Erzeugt und über eine neue Reaktion des Kreatinins. Z.Physiol.Chem. 10:391-400;1880. 2. Perrone RD, Madias NE, Levey AS: Soro creatinina as an index of renal function; new insights into old concepts. Clin Chem 38:1933-53; 1992. 3. Lorenzo LE, Demaria I, Setta F, Taborda M: Clin. Chem. 36/6:935; 1992. 4. Sontagg O, Büttner J: Evaluation of an UV method for the determination of creatinina compared with Ektachem 700 and Fuller’s earth method. Clin.Chem. 36/6:1179;1990. 5. Young DS: Effects of disease on Clinical Lab. Tests. 4th Ed. AACC Press, 2001. INFORMAÇÃO AOS CLIENTES Garantia 1. Linearidade: até 10 mg/dl. Para valores maiores, repita o teste com uma dedução da amostra em água destilada. Multiplique o resultado obtido pela dedução efetuada. 2. Especificidade: Os componentes Jaffé positivos, que interferem em métodos baseados no uso do ácido pícrico, não reagem no teste enzimático. A amônia endógena é eliminada na primeira etapa da incubação, rendendo um resultado específico para creatinina. 3. Sensibilidade: 0,02 mg/dl em 340 nm. 4. Precação: Intraensayo Media DS mg/dl ± C.V.%± 3 mg/dl 1,29 4,42 9,79 0,045 0,115 0,212 3,5 2,6 2,2 1 mg/dl 2 mg/dl 3 mg/dl 1,32 4,65 9,73 0,065 0,210 0,347 4,9 4,5 3,6 Interensayo Espécime n=10 Media DS mg/dl ± C.V.%± NOTAS: 1. Os volumeis da amostra e dos reagentes podem ser modificados tanto quanto as proporções indicadas no PROCEDIMENTO DO TESTE são mantidas. 2. Aplicações para aparelhos automáticas estão disponíveis ao pedido do cliente e a web: www.gtlab.com.ar . 3. Leituras iniciais foram inferiores a 0.800 D.O. indicam contaminação da amostra com amônia. Neste caso, deve-se coletar uma nova amostra. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS DESEMPENHO DO TESTE: 2 mg/dl VALORES DE REFERÊNCIA Soro ou plasma: 0.5-1.2 mg/dl Urina: 0.8-2.0 g/24 hs DCE.: 80-140 ml/min (adulto até 60 anos) Cada laboratório deve estabelecer sua própria escala de acordo com a sua população. Código 812104: 1 x 45 ml A1 – A2 ------------ x volume (l) x 12 = g creatinina/24 h P1 – P2 Depuração de Creatinina Endógena (DCE): g urina creatinina /24 h DCE = ------------------------------- x 69,4 = ml/min mg/dl soro creatinina Unidades internacionais (SI): µmol/l = mg/dl x 88.5 1 mg/dl As boas praticas de laboratório (GLP) recomendam processar amostras normais e anormais a diário. APRESENTAÇÃO A1 – A2 ----------- x diurese (l) = g creatinina/24 h P1 – P2 Urina de 2 horas: A1 – A2 2.0 50 -----------x---------x------ x volume (ml) x 12 = g creatinina/24 h P1 – P2 1000 100 Espécime n=10 CONTROLE DE QUALIDADE GT Laboratório S.R.L. fabrica e comercializa reagentes para diagnóstico in vitro sob Boas Práticas de Fabricação (Good Manufacturing Practices) certificadas de acordo com O.M.S./W.H.O. Technical Report Series 908/2003, C.E.E. Res. 91/536 e A.N.M.A.T. Disp. Nº 3623/1997, ISO 9001:2008 e ISO 13485:2003. Os termos e as condições da qualidade são absolutos dentro das responsabilidades que correspondem a GT Laboratório S.R.L. Fabricado pela GT Laboratorio S.R.L. Necochea 3274 – Rosário - Argentina Uso profissional exclusivo. Autorizado pela A.N.M.A.T. PM 121-42. Diretor técnico: Daniel Gazzola, Bioquímico INFORMAÇÕES DE CONTATO E-mail: [email protected] Site: www.gtlab.com.ar Código de revisão: 82090000/14
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