AmniSure® Teste de Ruptura das Membranas Fetais

AmniSure® Teste de Ruptura das Membranas Fetais
INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO PARA DIAGNÓSTICO IN VITRO
USO A QUE SE DESTINA
O AmniSure Teste de Ruptura das Membranas Fetais é um
teste imunocromatográfico qualitativo rápido, não instrumental para a detecção in vitro de líquido amniótico na
secreção vaginal de mulheres grávidas. O teste destina-se a
ser usado por profissionais de saúde para ajudar à detec-ção
de ruptura das membranas fetais em mulheres grávi-das em
que haja essa suspeita.1
RESUMO E EXPLICAÇÃO DO TESTE
A ruptura prematura das membranas fetais (PROM em inglês) ocorre em cerca de 10% das gestações. Até à data a
PROM tem constituído um dos mais importantes dilemas
terapêuticos na prática obstétrica corrente.1 A PROM
constitui, provavelmente, o diagnóstico mais comum associado ao parto prematuro e a complicações neonatais requerendo hospitalização em unidades de cuidados intensi-vos
neonatais. O tratamento da doente com PROM e PPROM
(PROM pré-termo) é dispendioso e continua a colocar um
dilema perinatal relevante ao médico que pro-cura um
equilíbrio entre o risco de prolongar a gestação contra os
riscos de infecção.2
Os riscos da PROM de termo estão associados a consequências neonatais graves, tais como parto pré-termo,3 stress
do feto, prolapso do cordão umbilical, abruptio placentae e
infecção.4 A PPROM é referente à PROM que ocorre antes
das 37 semanas de gestação. Contribui com 20% a 40% para
as PROM e a incidência é duplicada nas gestações múltiplas.
A PPROM está associada com 20% a 50% dos nascimentos
prematuros, morbilidade infecciosa na mãe e no feto,
hipoplasia pulmonar do feto, prolapso do cordão umbilical,
desenvolvimento de deformidades fetais, endometrite pósnatal.
Todas
estas
consequências
aumentam
Amostra de secreção vaginal
é colhida pela zaragatoa
significativamente a morbilidade e mortalidade materna e
fetal.5 O período de latência na PPROM está in-versamente
relacionado com a idade gestacional aumen-tando, por isso,
os riscos das consequências em crianças muito prematuras e
das suas mães. Uma vez que a PPROM está associada com
20% a 50% dos nascimentos prematuros, a PPROM também é
responsável pelos pro-blemas neonatais resultantes da
prematuridade.6
A não identificação das doentes com PROM pode condu-zir a
uma não implementação de medidas obstétricas salu-tares
(por exemplo, a Sépsis Neonatal ocorre quando a PROM é
diagnosticada mais de 32 horas após a sua inci-dência actual).
Contrariamente, o falso diagnóstico de ruptura das
membranas pode conduzir a intervenções ina-dequadas (por
exemplo hospitalização ou indução do par-to). Como tal, o
diagnóstico correcto e atempado desta desordem é de
importância crucial para o clínico.7 O diagnóstico preciso
de rupturas das membranas fetais continua a levantar,
contudo, um problema clínico fre-quente na obstetrícia.8 O
diagnóstico atempado desta de-sordem é crucial dado que a
PROM está associada a con-sequências neonatais e maternas
graves. Infelizmente não existe, actualmente, um "gold
standard" à disposição para o diagnóstico de ruptura das
membranas na prática clíni-ca. Os testes correntemente
disponíveis são imprecisos e, em certa medida, invasivos. Os
testes prevalecentes Nitra-zina e Ferning apresentam uma
fiabilidade muito reduzi-da, tornando-se progressivamente
imprecisos quando de-corre mais de uma hora desde a ruptura
das membranas e não apresenta qualquer fiabilidade
decorridas 24 horas. Conclui-se assim que, nos casos de
PROM prolongada, estes testes não proporcionam melhores
informações de diagnóstico que as obtidas através de uma
simples avalia-ção clínica.9
AmniSure® resolve estes problemas. Trata-se de um teste
rápido em tira que permite detectar uma ruptura das membranas fetais, proporcionando um diagnóstico de PROM
atempado e de grande precisão. Consequentemente, po-dem
ser tomadas medidas atempadamente para prevenir
complicações (uso profiláctico de antibióticos, fármacos
tocolíticos ou corticosteróides, indução do parto, etc).
BENIFÍCIOS DO TESTE
O kit de teste AmniSure é um sistema completo de teste, que
proporciona resultados qualitativos que excedem, em termos
de rapidez, precisão, sensibilidade, especificidade e
fiabilidade, os métodos presentemente disponíveis. AmniSure é um teste que abrange o espectro completo das
necessidades de diagnóstico – desde casos simples que requerem um diagnóstico de confirmação até aos casos mais
difíceis em que não há quaisquer indícios de fuga de líqui-do
amniótico (as denominadas rupturas sub-clínicas). O teste não
requer um exame por espéculo utilizado por roti-na
actualmente no diagnóstico da PROM.
PRINCÍPIO DO TESTE
A amostra de líquido amniótico (obtida por zaragatoa vaginal) é colocada num frasco com solvente. O solvente extrai
a amostra da zaragatoa durante um minuto, após o qual a
zaragatoa é eliminada. A tira teste AmniSure (dipstick – um
mecanismo de fluxo lateral) é seguidamen-te mergulhada no
frasco. A substância da amostra flui da zona absorvente da
tira para a zona de teste. A leitura do resultado do teste é
realizada visualmente, decorridos 5-10 minutos, pela presença
de uma ou duas linhas.
AmniSure® Kit de Teste
Zaragatoa vaginal é mergulhada
no frasco com solvente
Linha Controlo
Linha Teste
Zona Absorvente
O teste de ruptura das membranas AmniSure utiliza os
princípios de imunocromatografia para detecção da pro-teína
PAMG-1 ( 1-microglobulina placentária) humana presente
no líquido amniótico de mulheres grávidas. A Microglobulina
Placentária foi escolhida como marcador de ruptura das
membranas fetais devido às suas caracterís-ticas únicas, isto
é, o seu nível elevado no líquido amnió-tico, nível reduzido
no sangue e nível basal extremamente reduzido (50-220
picogramas/ml) nas secreções cervico-vaginais quando as
membranas fetais estão intactas.
O teste utiliza anticorpos monoclonais altamente sensí-veis,
que detectam a proteína mesmo em quantidades mí-nimas,
que está presente nas secreções cervico-vaginais a-pós a
ruptura das membranas fetais. Para minimizar a fre-quência
de resultados falsos, seleccionaram-se dois anti-corpos
monoclonais para estabelecer a um nível inferior ideal o
limiar de sensibilidade do AmniSure®. Este nível permite a
detecção de quantidades extremamente peque-nas de líquido
amniótico nas secreções vaginais (0,05-0,005 de uma gota). A
concentração basal de PAMG-1 que utiliza esta combinação
de anticorpos monoclonais é de aproximadamente 50-220
picogramas (ou seja 0,05-0,22 ng) por 1 ml de secreção
vaginal. O valor cut-off de sensibilidade do nosso teste é 5-7
ng/ml, ou seja, pelo me-nos 20 vezes superior à concentração
basal. Este intervalo permitiu aumentar a precisão do nosso
teste para mais de 99%, uma vez que eliminou eficazmente os
resultados fal-so positivos e falso negativos.
Durante o teste, a Microglobulina Placentária da amostra ligase a um anticorpo monoclonal (A-Mab) conjugado com as
partículas do marcador, e seguidamente a outro anticorpo
monoclonal (B-Mab), imobilizado num agente de transporte
insolúvel. Quando os A-Mabs entram em contacto com a
PAMG-1 na Zona Absorvente, ligam-se à PAMG-1 e
transportam-na para a Zona de Teste. A Zona de Teste da tira
apresenta B-Mabs imobilizados na sua su-perfície. Os BMabs “encontram” a PAMG-1 ligada a A-Mabs que flui da
Zona Absorvente. Este “encontro” imo-biliza o sistema
PAMG-1/A-Mabs, produzindo uma Linha Teste de cor
castanho/amarela, que se torna visível na Zo-na de Teste. Esta
Linha é produzida por partículas de ouro ligadas aos
anticorpos A e é indicativa de ruptura das membranas fetais.
A segunda Linha de Controlo foi in-cluída para proporcionar
um indicador de que o Teste fun-ciona adequadamente. Esta
linha aparece quando o anti-corpo IgG de coelho anti-ratinho
encontra o anticorpo A de ratinho, marcado com partículas de
ouro. São estas partículas de ouro que produzem a cor da
linha resultante.
REAGENTES E COMPONENTES
Materiais Incluídos: 1. Instruções de uilização 2. Tira Teste
AmniSure (“dipstick”- mecanismo fluxo lateral) em
embalagem de folha de alumínio com exsicante. Cada Ti-ra
Teste contém: a) Anticorpo A-Monoclonal (produzido por
hibridoma de ratinho)
b) Anticorpo B-Monoclonal
imobilizado (produzido por um hibridoma de ratinho diferente) c) Partículas de ouro coloidal, ligadas ao anticorpo AMonoclonal d) IgG de ratinho marcada e) Anticorpo IgG de
coelho anti-ratinho 3. Zaragatoa vaginal de poliés-ter
esterilizada 4. Frasco de plástico com solvente aquo-so. A
solução solvente contém: a) 0.9% NaCl b) 0.1% Tritão X100
c) 0.01% NaN3
PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS
*O kit de teste AmniSure destina-se exclusivamente para uso
de diagnóstico in vitro. Exclusivamente para uso ex-terno.
*Leia e cumpra exactamente as instruções de utili-zação. O
não cumprimento das instruções de utilização poderá conduzir
à obtenção de resultados imprecisos. *Deverão ser observadas
precauções de segurança na co-lheita, manuseio e eliminação
da amostra do teste. *Não utilize componentes do teste que se
encontrem danifica-dos. *Os kits de teste usados são
biologicamente perigo-sos. *Utilize as precauções adequadas
quando manuseia/ elimina kits de teste usados. *Não utilizar
após a data ins-crita em “Utilizar até”, impressa na
embalagem do teste e no rótulo da caixa. *Não reutilize os
components do kit de teste. *Não dobre a Tira Teste (dipstick)
nem a embala-gem de folha de alumínio que a contém.
ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE
*Armazene o kit em local seco, a uma temperatura entre 4 e
20oC (40 a 68oF). NÃO CONGELAR. *Quando armaze-nado
na embalagem à temperatura recomendada, o teste é estável
até à data de ”Prazo de Validade” inscrito na em-balagem. *O
Tira Teste é mergulhada
dentro do frasco
teste AmniSure deve ser utilizado no inter-valo de seis (6)
horas após a remoção da embalagem.
PROCEDIMENTO DO TESTE
1. Pegue no frasco de solvente pela tampa e agite
bem de forma a garantir que todo o líquido no frasco
fica depositado no fundo. Abra o frasco de solvente e
coloque-o numa posição vertical.
2. Utilize a zaragatoa de poliéster esterilizada fornecida para recolher uma amostra da superfície da vagina. Remova a zaragatoa esterilizada da respectiva
embalagem de acordo com as instruções nela inscritas. A ponta de poliéster não deve tocar em nada, antes da sua inserção na vagina. Segure na zaragatoa
pelo meio da haste e, com a doente deitada de costas,
insira cuidadosamente a ponta de poliéster da zaragatoa na vagina até que os dedos toquem na pele (não
mais que 5-7 cm de profundidade). Retire a zaragatoa
da vagina passado 1 minuto.
3. Coloque a ponta de poliéster da zaragatoa dentro
do frasco e lave-a com movimentos rotativos no solvente durante um minuto.
4. Remova e elimine a zaragatoa.
5. Abra a bolsa de folha de alumínio pelo corte de
abertura e remova a tira teste AmniSure.
6. Mergulhe a ponta branca da tira teste (marcada
com setas) no frasco com solvente durante não menos que 5 minutos e não mais que 10 minutos. Perdas significativas de líquido amniótico produzirão
resultados visíveis mais cedo (após 5 min.), enquanto que perdas muito pequenas demorarão os 10
minutos.
7. Remova a tira teste se forem claramente visíveis
duas linhas no frasco (nunca antes de 5 minutos) ou
depois de 10 minutos certos. Leia os resultados colocando o teste sobre uma superfície limpa, seca e plana. Não leia nem interprete resultados depois de passados 15 minutos desde a introdução da tira teste no
frasco.
2.
3.
6.
INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
Uma linha, NÃO HÁ RUPTURA MEMBRANAS:
Duas linhas, HÁ UMA RUPTURA:
Sem linhas, TESTE INVÁLIDO, faça outro teste:
** O escurecimento das linhas pode variar. O Teste é válido mesmo que as linhas estejam esbatidas ou não uniformes. Não tente interpretrar o resultado do teste com base no
escurecimento das linhas.
CONTROLO QUALIDADE
Cada teste AmniSure tem integrado um reagente e contro-los
operacionais para garantir que funciona conveniente-mente. O
aparecimento de uma ou duas linhas na área de resultados do
teste confirma a integridade do procedimen-to do teste. Se só
for visível uma Linha Controlo o resul-tado do teste é
negativo. Se ambas as linhas de Controlo e de Teste forem
visíveis, o resultado do teste é positivo. Se não forem visíveis
quaisquer linhas, o resultado do teste é inválido.
LIMITAÇÕES DO TESTE
• O Teste de Ruptura das Membranas Fetais destina-se à
detecção in vitro da proteína PAMG-1 ( -1 Microglobuli-na
Placentária) no líquido amniótico humano na secreção vaginal
da mulher grávida. O teste deve ser usado para avaliar doentes
com suspeita de e/ou sinais clínicos/sinto-mas sugestivos de
ruptura das membranas fetais
• Deve seguir todas as instruções cuidadosamente para obter
uma leitura precisa dos resultados
• Cada teste é uma unidade de utilização única descartá-vel e
não pode ser reutilizada
• Os resultados do Teste de Ruptura das Membranas Fetais
AmniSure são qualitativos. Não deve ser feita qualquer
interpretação quantitativa baseada nos resultados do teste
• Quando há uma perda significativa de sangue (ponta
poliéster da zaragatoa vermelha), o teste pode funcionar mal e
não é recomendado. Em casos de quantidades vesti-giais de
sangue (zaragatoa poliéster rosada), o teste conti-nua a
funcionar adequadamente.
• Em casos muito raros, quando uma amostra é obtida 12 ou
mais horas após a ruptura, pode ocorrer um resultado falso
negativo.
• AmniSure® não deve ser usado antes de 6 horas após a
remoção de quaisquer soluções desinfectantes ou medicamentos da vagina.
VALORES ESPERADOS
A fuga de líquido amniótico é indicativo de ruptura das
membranas fetais em todas as mulheres. Estudos da pro-teína
1-microglobulina placentária (PAMG-1) estabele-ceram-na
como marcador do líquido amniótico. Foi medi-da a
concentração de PAMG-1 em secreções cervicais e vaginais
de mulheres grávidas sem complicações na gra-videz e tem
um intervalo de 0,05 até 0,22 ng/ml. Quando estão presentes
uma vaginite ou mistura não significativa de soro sanguíneo,
o valor basal de PAMG-1 pode atingir o máximo de 3 ng/ml.
As concentrações de PAMG-1 no líquido amniótico estão
compreendidas num intervalo en-tre 2 000-25 000 ng/ml. A
perda clinicamente significati-va de líquido amniótico
aumenta a concentração de PAMG-1 nas secreções cervicovaginais na ordem dos milhares. O limiar de sensibilidade do
Teste AmniSure es-tá definido por um factor 20 vezes acima
do nível basal de PAMG-1 (AmniSure detecta 5-7 ng/ml de
PAMG-1). Isto eliminou a dependência dos resultados do
teste em possí-veis variações dos valores esperados (níveis de
PAMG-1) em qualquer população.
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO
O desempenho clínico do teste AmniSure foi determinado em
dois ensaios clínicos independentes. Um estudo envol-veu um
único centro em Moscovo, Rússia. O outro estudo envolveu
dois centros na Califórnia, E.U.A..
Resultados dos ensaios clínicos:
Sensibilidade: 99%. Especificidade: 100%. VPP (Valor
Preditivo Positivo): 100%. VPN (Valor Preditivo Negativo):
99%.
À semelhança dos testes Nitrazina e Ferning, as mulheres
admitidas foram testadas com AmniSure. Subsequente-mente,
em especial quando havia uma discrepância entre os
resultados obtidos pelo AmniSure vs. outros testes, a doente
foi colocada sob observação clínica cuidadosa. Em todos os
casos, quando houve uma discrepância entre os resultados
obtidos pelo AmniSure e os dos outros testes, a observação
subsequente da doente provou o AmniSure como o teste que
forneceu o diagnóstico correcto. O pro-cedimento descrito
acima originou 2 tipos de dados finais, “resultados corrigidos”
e “resultados não corrigidos”. Os resultados não corrigidos
foram compilados assumindo que o AmniSure deu um
resultado errado, nos casos em que foi observada uma
discrepância entre Amnisure e os testes correntemente
prevalecentes. Dado que essa discre-pância originou a
posterior observação e realização de tes-tes à doente e que em
todos os casos de discrepância o AmniSure provou dar o
resultado correcto, os “dados cor-rigidos” foram compilados.
Por isso, os resultados corrigi-dos incorporaram a resolução
da discrepância, reflectindo a superioridade comprovada do
AmniSure relativamente a outros testes.
Estudos de Interferência
Infecções vaginais ou urina não interferem com os resul-tados
do teste AmniSure. Investigação e análises detalha-das
mostraram que a concentração de PAMG-1 nos exsu-dados
vaginais durante as infecções nunca excedem o ní-vel de 3
ng/ml. O nível de sensibilidade do AmniSure é de 5-7 ng/ml,
excluindo quaisquer interferências resultantes de infecções.
Descobriu-se que a concentração de PAMG-1 no esperma não
excede os 4 ng/ml. A concentração de PAMG-1 do esperma
nas secrecões vaginais é ainda mais baixa devido ao efeito de
diluição de cerca de 4 vezes du-rante o teste. Por isso, durante
o desenvolvimento do AmniSure e durante os ensaios
clínicos, não houve nenhu-ma interferência do factor esperma
nos resultados. O mês-mo se aplica à urina. Foi estudada a
concentração de PAMG-1 em quinze amostras de urina pelo
método de ELISA. A sensibilidade do método de ELISA era
de 0,5 ng de PAMG-1 por 1 ml de solução. Paralelamente,
tam-bém foi utilizado o AmniSure para detectar PAMG-1 na
urina. As amostras foram obtidas de mulheres grávidas entre
as 25-40 semanas de gravidez. Ambos os métodos deram
resultados negativos: não foi encontrada PAMG-1.
Reacções Cruzadas
A especificidade dos anticorpos monoclonais utilizados no
AmniSure foi testada pelo estudo da sua reactividade cruzada
de ligação às proteínas: alfa-2-microglobulina de fertilidade,
gonadotrofina coriónica humana, glicoproteína beta-1
trofoblástica, lactogénio placentário humano, alfafetoproteína, albumina sérica humana e algumas proteínas
IGFBP. Os anticorpos monoclonais “A” e “B” utilizados no
AmniSure não tiveram reacções cruzadas com outras
proteínas, à excepção do anitcorpo “B” utilizado na Linha de
Teste que teve reacção cruzada com a proteína IGFBP-3 no
método ELISA. Foi mostrado que a concentração de IGFBP-3
na secreção vaginal de mulheres grávidas atinge 680 ng/ml,
mas esta concentração não influencia a sensi-bilidade do teste
AmniSure para a PAMG-1.
Estabilidade dos Resultados
Os resultados do teste AmniSure podem ser lidos em 5-10
min. após a introdução da tira teste no frasco. Foram conduzidos testes de estabilidade onde foi estudado um lote com
1000 kits de AmniSure. Foi utilizada PAMG-1 puri-ficada em
concentrações de 10 ng e 5 ng de PAMG-1 por 1 ml de
solução fisiológica salina.
A duração/estabilidade dos resultados também foi medida.
Após o resultado se tornar visível (linhas apareceram na zona
de teste), permaneceu estável durante, pelo menos, 5 min.
Este tipo de estabilidade é observada quando a con-centração
de PAMG-1 é muito pequena (5-10 ng/ml). Quando a
concentração é maior, as linhas permanecem es-táveis durante
horas. Assim, o AmniSure mostra uma es-tabilidade de
resultados de 5 min., quando são necessários 10 minutos
completos para o aparecimento dos resultados.
Tanela 1. Resultados dos Estudos de Estabilidade
Concentração de PAMG-1 purificada por 1 ml de solução salina (ng/ml)
10
5
BIBLIOGRAPY
1.
Cousins LM et al., “AmniSure Placental Alpha
Microglobulin-1 Rapid Immunoassay versus Standard
Diagnostic Methods for Detection of Rupture of
Membranes”, Am J Perinatol 2005; 22: 317-320.
2.
Philipson E.H., et al., Am. J. Perinatol., 1994, 11, No 6,
pp.416-420.
3.
Mercer B.M. et al., Am J Obstet Gynecol 2000, Sep;
183 (3):738-45.
4.
French J.I., McGregor J.A., The Pathobiology of
premature rupture of membranes. Seminars in
Perinatology, 1996, 20, No 5, pp. 344-368.
+55 31 2121 0008
5.
6.
7.
8.
9.
Tempo de espera antes do resultado aparecer na zona de teste do Teste AmniSure
~2.5 min
~5.5 min
Furman B. et al., Clinical significance and outcome of
preterm prelabor rupture of membranes: populationbased study. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 2000,
Oct; 92 (2):209-16.
Mercer B.M. et al., Am Journal Obstet Gynecol 2000,
Sep; 183 (3):738-45.
Lockwood C.J. et al., Am. J. Obstet. Gynecol. 1994,
171, No 1, pp.146-150.
Darj E. Lyrenas S., Acta Obstet. Gynecol. Scand.,1998,
77, pp.295-297
Gorodeski I.G, Haimovitz L., Bahari C.M., 1982,
Journal Perinat. Med; 10 (6):286-92
Rua João Ladeira de Sena, 28
Bairro Estoril . Belo Horizonte . MG . Brasil
CEP 30450. 500
Para assitência técnica, por favor
contactar:
AmniSure® International LLC
31 Sacramento Street, #5
Cambridge, MA 02138, USA
617-234-4441 Tel.
www.amnisure.com
10.
11.
D. Petrunin, “Immunochemical identification of organ
specific human placental alpha-globulin and its
concentration in amniotic fluid”, Akush Ginekol
(Mosk) 1977 Jan(1):64-5
Y. Tatarinov, D. Petrunin et al. 1980; “Two new
Human Placenta-Specific -Globulins: Identification,
Purification, Localization, and Clinical Investigation”,
The Human Placenta, Ed by A.Klopper et al., Acad.
Press, London-NY, pp.35-46
EC
REP
MT Promedt Consult. GmbH
Altenhofstrasse 80 D66386 St. Ingbert
Germany
2007/08
1- Registro no MS sob o número 10374660099