PARA USO DIAGNOSTICO IN VITRO SOMENTE PARA - D-Med

MANUAL DE INSTRUÇÃO
Kit ORANGE DIPSTICK® HIV 1/2
PARA USO DIAGNOSTICO IN VITRO
SOMENTE PARA USO PROFISSIONAL
Um Kit de Teste de Triagem Qualitativa para Detecção de Anticorpos para
HIV 1/2 em Soro, Plasma ou Sangue Total Humano, Venoso ou de Punção
Digital.
O sachê laminado contendo as tiras de teste só deve ser aberto imediatamente antes de
ser testado.
PRECAUÇÕES
Precauções de Segurança
1.
Não comer, beber ou fumar na área de manusear amostras ou reagentes.
Evitar qualquer contato com mãos, olhos ou boca durante a coleta de
amostras e testes.
2.
Vestir Equipamentos de Proteção Individual (EPI) apropriados tais como
jalecos, luvas descartáveis e óculos de proteção quando manuseando
amostras de pacientes.
3.
Descartar todas as amostras e materiais utilizados nos procedimentos de
teste em recipientes apropriados para descarte de material biológico. As
lancetas devem ser colocadas em um recipiente apropriado resistente a
punctura antes de descarte. O método recomendado de descarte de resíduos
biológicos é autoclavagem por um mínimo de uma hora a uma temperatura de
121°C. Materiais descartáveis podem ser incinerados. Resíduos líquidos
podem ser misturados a desinfetantes químicos apropriados. Uma solução
recente de 10% de água sanitária (solução de hipoclorito de sódio a 0,5%) é
recomendado por um prazo mínimo de 60 minutos de modo a assegurar
completa descontaminação.
ARMAZENAMENTO: Armazenar entre 8 e 30°C (46 a 86° F)
USO PREVISTO
O Teste ORANGE DIPSTICK™ HIV 1/2 é um teste rápido imunocromatográfico de triagem
de uso único para a detecção de anticorpos do Vírus da Imunodeficiência Humana Tipos 1
e 2 (HIV 1/2) em amostras de sangue total de punção digital, sangue total venoso, soro ou
plasma. O Teste ORANGE DIPSTICK™ HIV 1/2 é previsto para ser utilizado como um
teste laboratorial remoto (point-of-care- test) para ajudar no diagnostico de infecção com o
HIV 1 e HIV 2.Resultados reativos são evidências de exposição ao HIV 1 / 2 e pode ser
usado para apoiar um diagnóstico de HIV 1 e HIV 2. Resultado não reativo no entanto, não
deverá ser utilizado para excluir a infecção com o HIV 1 ou 2.
RESUMO E DESCRIÇÃO
Descoberta em 1983, o Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) é um retrovírus
identificado como sendo o agente etiológico da Síndrome de Imunodeficiência Adquirida
(AIDS) [1]. A AIDS é caracterizada por mudanças na população de células linfócitos T, que
desenvolvem um papel chave no sistema imunológico. O vírus causa uma redução da subpopulação das células T – denominadas células “T-helper” – no indivíduo infectado, o que
deixam estes pacientes suscetíveis a infecções oportunistas e certas doenças malignas. As
principais vias de transmissão são: contato sexual direto, contaminação por sangue ou
hemoderivados e a transmissão de mãe para filho no parto [2-4].
Apesar de ter ocorrido uma redução na taxa de infecção em certos paises, o número de
pessoas infectadas com o HIV tem aumentado globalmente. Havia aproximadamente 40,3
milhões de pessoas vivendo com HIV/AIDS no final de 2005, o que representa um aumento
comparado aos 37,5 milhões em 2003. É estimado que 5 milhões de pessoas adquiriram o
HIV/AIDS em 2005. Neste mesmo ano, mais de 3 milhões de pessoas morreram devido a
doenças relacionadas ao AIDS sendo que mais de 500,000 das vitimas eram crianças [5].
O HIV é constituído por uma molécula de RNA genômico, protegida por um capsídeo e um
envelope. O envelope do HIV constitui o principal alvo da resposta imune humoral por
anticorpos. A presença do vírus faz com que o sistema imune dos pacientes produza
anticorpos anti-HIV. A detecção destes anticorpos pode ser usada como uma ferramenta
de diagnóstico.
Testes como ELISA, Western Blot e técnicas de PCR além de diversos outros testes são
atualmente disponíveis para a detecção do HIV-1/2 [6-10]. O Teste ORANGE DIPSTICK™
HIV 1/2 é um teste imunocromatográfico rápido de uso fácil e simples. O Teste ORANGE
DIPSTICK™ HIV 1/2 utiliza antígenos de alta sensibilidade e especificidade fixados para a
detecção de anticorpos de HIV-1/2 em soro, plasma ou sangue total humano.
PRINCÍPIO DO TESTE
O Teste ORANGE DIPSTICK™ HIV 1/2 utiliza o principio de imunocromatografia e
emprega uma combinação única de uma proteína específica ligada a anticorpos conjugada
a partículas de ouro coloidal e antígenos de HIV-1/2 ligados a uma fase sólida (membrana).
A amostra e a solução tampão são aplicadas na almofada da amostra. A solução tampão
facilita o fluxo lateral da amostra através da membrana e promove a ligação dos anticorpos
aos antígenos.
As partículas conjugadas com o ouro migram sobre a membrana de nitrocelulose e são
capturadas pelo complexo anticorpo-antígeno na área de TESTE (T) produzindo uma linha
rosa / roxo. Na ausência de anticorpos de HIV 1/2 não há aparecimento de linha rosa / roxo
na área de teste (T). Partículas de ouro coloidal do conjugado, não ligadas, continuam a
migrar ao longo da membrana e produzem uma linha rosa / roxa na área do CONTROLE
(C) contendo proteína A. Este controle serve para demonstrar que a amostra e os
reagentes foram devidamente aplicados e que migraram através do dispositivo.
NOTA: Não colocar soluções contendo água sanitária na autoclave.
4.
Para maiores informações contatar: Orangelife Comércio e Indústria Ltda.
SAC 55-21-24421349 ou [email protected]
Precauções de Manuseio
1.
Não utilizar dispositivos cujo invólucro estiver violado.
2.
Cada dispositivo é para uso único.
3.
Sempre verificar a data de validade antes de realizar o teste.
4.
Não utilizar o teste após a data de validade impressa no invólucro.
5.
Não misturar os reagentes de lotes de kits de números diferentes.
6.
É necessária iluminação adequada para ler os resultados dos testes.
COLETA DAS AMOSTRAS
O teste ORANGE DIPSTICK HIV 1/2 pode ser realizado com amostras de sangue total
venoso ou de punção digital, soro ou plasma.
Sangue Total de Punção Digital
Seguindo procedimentos normais de laboratório, puncionar a extremidade do dedo e
descartar a primeira gota de sangue a surgir. Coletar a amostra da segunda gota utilizando
a alça coletora fornecida. Seguir as instruções de procedimento do teste.
Sangue Total Venoso
Seguindo procedimentos normais de laboratório, retirar sangue venoso. Dependendo do
uso previsto, transferir a amostra para um tubo contendo EDTA, heparina ou citrato de
sódio. Assegurar que o tubo contendo o sangue foi bem homogeneizado antes de realizar
a amostragem. Seguir as instruções de procedimento do teste.
Soro ou Plasma
Seguindo procedimentos normais de laboratório, transferir o soro ou plasma (EDTA) para
um recipiente limpo. Seguir as instruções de procedimento do teste.
As amostras de sangue dos pacientes geram melhores resultados quando testadas
imediatamente após a coleta. Quando não testadas imediatamente, estas amostras devem
ser refrigeradas entre 2 e 8°C (36 a 46° F) logo após a coleta, podendo ser usadas em até
3 dias após coleta. Amostras de soro ou plasma devem ser congeladas a -20°C ou menos
caso os testes não sejam realizados em até 3 dias após a coleta. NÃO CONGELAR
SANGUE TOTAL!
NOTA:
Quando precisam ser transportadas, as amostras devem ser
acondicionadas conforme as normas vigentes para o transporte de
agentes etiológicos.
CONFIRMAÇÃO DO DESEMPENHO DO TESTE
Ao término do teste, uma linha rosa/roxa aparecerá na área de CONTROLE (C) do
dispositivo de teste, tanto nas amostras não reagentes (negativas) quanto nas reagentes
(positivas). Esta linha serve de controle incorporado confirmando o acréscimo de amostra e
o desempenho adequado do teste. Linhas rosa/roxa em ambas as áreas de TESTE (T) e
CONTROLE (C) indicam uma amostra reagente (positiva).
MATERIAIS FORNECIDOS
Cada kit contém itens suficientes para realizar 20 testes:
•
20
Tiras DIPSTICK HIV 1/2
•
1
Solução tampão HIV (8 ml)
•
20
Alças Coletoras Descartáveis de 5µl
•
20
Lancetas estéreis
•
20
Cartões de Apoio
•
1
Manual de Instrução
MATERIAL COMPLEMENTAR NÃO FORNECIDO
•
Cronômetro ou relógio
•
Micropipetador calibrado para 5µl (pode ser empregado ao invés das alças
coletoras descartáveis fornecidas com o kit no caso de usar amostras obtidas
outras do que por punção digital)
•
Swab com álcool estéril (unicamente para amostras obtidas por punção
digital)
•
Dispositivos coletores para amostras obtidas por punção venosa
•
Recipiente seguro para descarte de material biológico
ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE
As tiras de teste HIV 1/2 DIPSTICK devem ser armazenadas em um sachê laminado com
desumidificador entre 8 e 30°C (46 a 86° F). Não congelar. Não utilizar após a data de
validade indicada. Os dispositivos de teste permanecem estáveis até a data de validade
impressa no invólucro quando devidamente armazenados. Tampão de corrida deve ser
armazenado entre 8 e 30°C (46 a 86°F) nos frascos de origem.
PROCEDIMENTO DO TESTE
Caso tenha sido armazenada refrigerada, deixar a amostra prestes a ser testada atingir a
temperatura ambiente antes de realizar o teste.
1.
2.
3.
4.
5.
Abrir o sache laminado e retirar o cartão de apoio a ser executado. Digite o
nome do paciente ou código de identificação no espaço marcado no cartão
“IDENTIFICAÇÃO”.
Retire a tira do teste DIPSTICK HIV ½ do sachê laminado.
Tomando cuidado para não tocar a membrana, remova a fita adesiva que
está no verso da tira de teste.
Coloque a tira de teste no cartão de apoio no espaço marcado com a fita
verde para cima e as setas em frente a fita na mesma direção das setas no
cartão de apoio. Monte a tira de teste no cartão de apoio numa superfície
limpa e plana.
COLETA DE AMOSTRA
A. Sangue Capilar Obtido de Punção Digital
I.
Seguindo o procedimento normal de laboratório, picar o dedo
com uma lanceta e desprezar a primeira gota.
II.
Coletar a segunda gota da amostra com a alça coletora 5 µL
fornecida no kit (Pule para o tópico 6.)
B. Soro, Plasma, Sangue Total Obtido por punção Venosa
I.
Tocar a alça coletora 5 µL fornecida no kit na amostra em
questão, permitindo que a alça se encha do liquido (soro,
plasma ou sangue total).
6.
Aplicar a amostra (soro, plasma ou sangue total) com a alça coletora 5 µL no
centro da almofada de teste da tira. Assegurar que a alça esteja na posição
vertical.
Verter o frasco da Solução Tampão e dispensar 3 gotas (~105µ L) lentamente,
gota a gota certo que cada gota foi absorvida antes de adicionar a próxima,
na Al mofada da Amostra e segurar verticalmente para garantir que o
volume dispensado seja o adequado.
7.
Resultado Inválido:
Um resultado inválido indica um problema ao realizar o teste, tanto relacionado à
amostra ou ao dispositivo de teste. Repetir o teste com um dispositivo novo e/ou
nova amostra. Caso os resultados inválidos persistirem, contatar Orangelife
Comercio e Industria Ltda (55-21-24422327 ou [email protected]).
NOTA: No caso de líquidos não começa a fluir para a membrana em 2 minutos,
adicionar uma gota adicional de tampão.
LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
8. Ler o resultado do teste 15 a 20 após a adição da Solução Tampão na Almofada da
Amostra. Em alguns casos a linha Teste pode aparecer em menos de 15 minutos, porém
são necessários no mínimo 15 minutos para considerar o resultado não-reativo. Ler o
resultado em área bem iluminada.
NOTA: No caso de líquidos não começar a fluir para a membrana em 2 minutos, adicionar
uma gota adicional de tampão.
1.
2.
PROCEDIMENTO ALTERNATIVO (em tubo)
3.
NOTA: Este procedimento requer tubos de amostra e um rack para prender dois tubos.
Se a amostra a ser testada estiver refrigerada, removê-lo da geladeira e deixar voltar à
temperatura ambiente antes do teste.
1.
Coloque o número adequado de tubos de ensaio em um rack de tubo de
ensaio.
2.
Retire a tampa do frasco da solução tampão e dispense 5 gotas de
solução tampão em cada tubo (~ 200 µL por tubo).
4.
5.
6.
7.
8.
3. COLETA DE AMOSTRA
A.
I.
II.
III.
Sangue total obtida por punção digital
Etiquete o tubo com o nome do paciente ou código de identificação.
Seguindo o procedimento normal de laboratório, picar o dedo com uma
lanceta e desprezar a primeira gota.
Coletar a segunda gota da amostra com a alça coletora 5 µL fornecida
no kit (Pule para o tópico 4.)
B. Soro, Plasma e Sangue Total Venoso
I. Tocar a alça coletora 5 µL fornecida no kit na amostra em questão, permitindo
que a alça se encha do liquido (soro, plasma ou sangue total).
4. Colocar a amostra da alça coletora diretamente no tubo de ensaio com
tampão. Agitar a solução suavemente com a alça coletora e depois removê-la e
descarta-la.
5. Remova a tira do teste DIPSTICK HIV 1/2 do sachê laminado.
6. Coloque a tira de teste no tubo de ensaio, contendo a mistura amostra +
tampão, com as setas voltadas para baixo.
7. Deixar a tira de teste em pé no tubo por 15 minutos. Não deixar por mais de
20 minutos.
8. Leia os resultados do teste de 15 a 20 minutos depois de colocar a tira de
teste imerso na mistura amostra + tampão. Alguns resultados reativos podem
aparecer em menos de 15 minutos, mas 15 minutos são necessários para
considerar um resultado não reativo.
Não considerar a leitura após 20 minutos.
NOTA: Descartar a alça coletora utilizada, tubo de ensaio e luvas em um
recipiente de resíduos de risco biológico.
9.
10.
O kit de teste ORANGE DIPSTICK HIV 1/2 deve somente ser utilizado com
sangue total venoso ou de punção digital, soro ou plasma. Outros tipos de
amostra ou testes com amostras de sangue total por venipuntura coletados
em tubos contendo anti-coagulantes outros que citratos, heparina ou EDTA
podem gerar resultados falhos. O sangue para amostras de soro deve ser
coletado sem anti-coagulantes.
O teste ORANGE DIPSTICK HIV 1/2 deve ser utilizado de acordo com as
instruções contidas neste Manual de Instrução de modo a obter resultados
precisos.
O acréscimo de mais do que três gotas de Tampão de Corrida à amostra de
sangue pode acarretar a formação de uma linha vermelha na base da janela
e deve ser evitado.
A leitura do resultado do teste antes dos 15 minutos previstos ou após 20
minutos poderá fornecer resultados falhos.
Não utilizar os conteúdos dos testes após a data de validade que consta no
rotulo.
Assegurar que a extremidade do dedo selecionado para a coleta de amostra
se encontra completamente limpa e seca antes de prosseguir com a punção
digital.
Ler os resultados em um local bem iluminado.
Um resultado reagente (positivo) mostrado no teste ORANGE DIPSTICK HIV
1/2 sugere a presença de anticorpos para o HIV-1 ou HIV-2 na amostra. O
teste ORANGE DIPSTICK HIV ½ é previsto para apoiar o diagnostico de
infecção com o HIV-1/2.
Um resultado não reagente (negativo) não exclui a possibilidade de
exposição ou infecção por o HIV. Uma resposta imunológica à uma exposição
recente pode levar alguns meses até atingir níveis detectáveis.
Um paciente infectado com o HIV-1 ou HIV-2 e recebendo Terapia Antiretroviral de Alta Potência pode gerar resultados falso-negativos.
RESULTADOS PREVISTOS
O teste ORANGE DIPSTICK HIV ½ é um teste de triagem qualitativa para detecção de
anticorpos para HIV 1/2 em Soro, Plasma ou Sangue Total. Conforme descrito na seção
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO abaixo, a sensibilidade deste teste foi
demonstrada ser substancialmente equivalente aos testes ELISA ou Western Blot quando
testados com seletos painéis de desempenho.
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO
Os dados de desempenho foram obtidos em três estudos externos usando o procedimento
de teste alternativo em um tubo. Em uma avaliação com 770 amostras da Organização
Mundial da Saúde (OMS), a sensibilidade final foi de 99,0% e especificidade foi de 100%
em comparação com os ensaios de referência. Neste estudo, nenhum dos resultados foi
registrado como indeterminado. Avaliações com 236 amostras da Zâmbia (125 reativas /
111 não reativos) e com 503 amostras da Uganda (90 reativos / 413 não reativos) ambos
resultaram em 100% de sensibilidade e especificidade de 100% para o teste ORANGE
DIPSTICK HIV ½.
PRECISÃO
Intraensaio
A precisão intra-corrida foi determinada utilizando 10 duplicatas de duas amostras
contendo diferentes níveis de anticorpos do HIV 1/2. Os resultados reagentes e não
reagentes foram identificados corretamente 100% das vezes.
Interensaio
A precisão inter-corrida foi determinada utilizando as duas mesmas amostras em 10
duplicatas diferentes com três lotes diferentes de dispositivos de teste. Novamente, Os
resultados reagentes e não reagentes foram identificados 100% das vezes.
CONTROLE DE QUALIDADE
Modo de Controle Incorporado
Uma linha rosa/roxa aparece na área de CONTROLE (C) quando o teste for corretamente
realizado e o dispositivo de teste estiver funcionando devidamente. Esta linha serve de
controle procedimental incorporado.
INTERPRETAÇÃO DE RESULTADOS
Resultados Não reagentes
Resultado Não reagente:
Uma linha rosa/roxa na área de CONTROLE (C) e nenhuma linha na área de
TESTE (T) indica um resultado não reagente (negativo). Um resultado não reagente
após 15 minutos significa que não existem anticorpos para o HIV detectáveis na
amostra. No entanto, um resultado não reagente não exclui a possibilidade de
infecção por HIV.
Resultados Reagentes
Resultado Reagente:
Linhas rosa/roxa ambas nas áreas de TESTE (T) e de CONTROLE (C) indica um
resultado reagente (positivo). A linha na área de TESTE (T) pode parecer diferente
da linha na área de CONTROLE (C).
NOTA:
A intensidade das linhas na área de TESTE (T) e na área de
CONTROLE (C) pode variar de acordo com a concentração de
anticorpos específicos, de pouco visível à muito escuro. No entanto, se
qualquer linha for visível na área de TESTE (T) e na área de
CONTROLE (C), o resultado é reagente (positivo).
Mesmo uma linha muito tênue na área teste deve ser considerada
reativa. Recomenda-se que um resultado reativo seja confirmado pelo
western blot e IFI, em conformidade com as recomendações do MS.
Resultados Inválidos
Reatividade Cruzada e Interferência
Não foi detectada nenhuma reatividade cruzada do teste ORANGE DIPSTICK HIV1/2 com
Hepatite B, Fator Reumatóide (~80UI/mL) e hCG (~500UI/mL). Além disto, não foi
observada nenhuma interferência com bilirrubina, hemoglobina ou triglicerídeos.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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Virus Res 53 : 71-88.
2.
Kanki, P.J., Hopper, J.R. e Essex, M. (1987) The origins of HIV-1 and HTLV-4/HIV/2.
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Disponivel em: www.unaids.org/epi/2005/doc/docs/PR EpiUpData:Nov05en.pdf: 1-3.
6.
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children. Pediatr Infect Dis J 14 : 948-954.
11.
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for the Management of Occupational Exposures to HIV and Recommendations for
Postexposure Prophylaxis. MMWR 2005; 54(RR09): 1-17.
Identificação do Paciente
1
8
SORO, PLASMA OU SANGUE TOTAL VENOSO
2
3
9
4
5
COLETA DE AMOSTRA
SANGUE TOTAL POR PUNÇÃO DIGITAL
10
6
11
7
15 Minutos...
PROCEDIMENTO ALTERNATIVO (NO TUBO)
15 Minutos...
Resultados
1
SANGUE TOTAL OU PLASMA
2
Reativo
Não Reativo
Inválido
Inválido
3
Fabricado por:
ORANGELIFE COMÉRCIO E INDÚSTRIA LTDA
Distribuido por:
4
5
Dmed Material Médico Laboratorial LTDA.
Rua Vaz da Costa 103 - Inhauma
CEP: 20760-510 Rio de Janeiro
Tels.: (21)2289.8089 / 2597.9021 Fax.: (21)2592.9161
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