Direct Androstenedione
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Direct Androstenedione ® Coat-A-Count Direct Androstenedione English Intended Use: Coat-A-Count Direct 125 Androstenedione is a solid phase I radioimmunoassay designed for the 4 quantitative measurement of Δ androstenedione in serum and EDTA or heparinized plasma. It is intended strictly for in vitro diagnostic use. sample. The quantity of androstenedione in the sample is determined by comparing the counts to a calibration curve. No Extraction: Androstenedione determinations by the Coat-A-Count Direct Androstenedione method require neither extraction nor chromatography. Reagents to Pipet: 1 Total Incubation Time: 2 Hours. Catalog Numbers: TKAN1 (100 tubes). Total Counts at Iodination: approximately 90,000 cpm. The 100-tube kit contains less than 6.5 microcuries (241 kilobecquerels) of 125 radioactive I androstenedione. Warnings and Precautions Summary and Explanation 4 Δ -Androstenedione is a steroid which serves as a major precursor for testosterone and estrone. Its clinical interest derives from the fact that it is often elevated in cases of abnormal hair growth (hirsutism) and virilization. Unlike the adrenal androgens dehydroepiandrosterone and its sulfate, circulating androstenedione originates both from the adrenals and from the ovaries. Plasma levels increase steadily from about the seventh year of life, then gradually decline after the third decade. Androstenedione exhibits a diurnal variation, being highest in the morning, and also a cyclical variation during the menstrual cycle, being highest near midcycle. During pregnancy, there is an increase in the plasma level. Principle of the Procedure The Coat-A-Count Direct Androstenedione procedure is a competitive immunoassay based on antibody-coated tubes. 125 I-labeled androstenedione competes with androstenedione in the patient sample for antibody sites. After incubation, separation of bound from free is achieved by decanting. The tube is then counted in a gamma counter, the counts being inversely related to the amount of androstenedione present in the patient 2 For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2–8°C in a refrigerator designated for incoming radioactive materials. Dispose of in accordance with applicable laws. Do not use reagents beyond their expiration dates. Some components supplied in this kit may contain human source material and/or other potentially hazardous ingredients which necessitate certain precautions. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dL, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Water: Use distilled or deionized water. Radioactivity A copy of any radioisotope license certificate (Specific or General) issued to a US customer must be on file with Siemens Healthcare Diagnostics before kits or components containing radioactive material can be shipped. These radioactive materials may be acquired by Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) any customer with the appropriate Specific license. Under a General license these radioactive materials may be acquired only by physicians, veterinarians in the practice of veterinary medicine, clinical laboratories and hospitals — and strictly for in vitro clinical or laboratory tests not involving external or internal administration of the radioactive material or its radiation to human beings or other animals. Its acquisition, receipt, storage, use, transfer and disposal are all subject to the regulations and a (General or Specific) license of the U.S. Nuclear Regulatory Commission or a State with which the NRC has entered into an agreement for the exercise of regulatory control. Handle radioactive materials according to the requirements of your General or Specific license. To minimize exposure to radiation, the user should adhere to guidelines set forth in the National Bureau of Standards publication on the Safe Handling of Radioactive Materials (Handbook No. 92, issued March 9, 1964) and in subsequent publications issued by State and Federal authorities. Wipe up spills promptly and decontaminate affected surfaces. Avoid generation of aerosols. Dispose of solid radioactive waste according to license requirements. General licensees (holders of NRC Form 483) may dispose of solid radioactive waste as nonradioactive waste, after removing labeling. Specific licensees (NRC Form 313) should refer to Title 10, Code of Federal Regulations, Part 20. Licensees in Agreement States should refer to the appropriate regulations of their own state. General licensees may dispose of liquid radioactive waste of the type contained in this product through a laboratory sink drain. Licensees must remove or deface labels from empty containers of radioactive materials before disposal of solid waste. Specific licensees may dispose of small quantities of liquid radioactive waste of the type used in this product through a laboratory sink drain. Refer to the appropriate regulations applicable to your laboratory. Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Materials Supplied: Initial Preparation Direct Androstenedione Ab-Coated Tubes (TAN1) Polypropylene tubes coated with rabbit polyclonal antibodies to androstenedione and packaged in zip-lock bags. Store refrigerated and protected from moisture, carefully resealing the bags after opening. Stable at 2–8°C until the expiration date marked on the bag. Color: fluorescent orange. TKAN1: 100 tubes. 125 I Direct Androstenedione (TAN2) 105 mL of Iodinated androstenedione, with preservative. Stable at 2–8°C for 30 days after opening, or until the expiration date marked on the vial. TKAN1: 1 vial. Direct Androstenedione Calibrators (TAN3–8) Six vials, labeled A through F, containing different concentrations of androstenedione in a human serum-based matrix, with preservative. The zero calibrator A contains 5 mL, and the remaining calibrators B through F contain 2 mL each. Stable at 2–8°C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at –20°C. TKAN1: 1 set. The nonzero calibrators represent, respectively, 0.15, 0.4, 1.5, 4.0 and 10 nanograms of androstenedione per milliliter (ng/mL); equivalently, 0.52, 1.4, 5.2, 14 and 35 nanomoles per liter (nmol/L). Intermediate calibration points may be obtained by mixing the calibrators in suitable proportions. Direct Androstenedione Controls (TANC1–2) 2 vials (2 mL each) of Direct Androstenedione Control 1 and 2, containing different concentrations of androstenedione in processed human serum, with preservatives. Stable at 2– 8°C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at –20°C. Refer to Direct Androstenedione control insert for the respective concentrations. TKAN1: 1 set. 3 Materials Required But Not Provided specimens by heating them in a waterbath. Gamma counter — compatible with standard 12x75 mm tubes Radioimmunoassay Procedure Vortex mixer Radioimmunoassay Plain 12x75 mm polypropylene tubes — for use as Total Counts and NSB tubes, available from Siemens Healthcare Diagnostics (catalog number: PPO) All components must be at room temperature (15–28°C) before use. 1 Because nonspecific binding in the Coat-A-Count procedure is characteristically low, the NSB tubes may be safely omitted without compromising accuracy or quality control. Micropipets with disposable tips: 100 µL and 1.0 mL. Foam decanting rack — available from Siemens Healthcare Diagnostics (catalog number: FDR) Logit-log graph paper Specimen Collection The patient need not be fasting, and no special preparations are necessary. 16 Collect blood by venipuncture into plain tubes, noting the time of collection, and separate the serum from the cells. Heparinized and EDTA plasma are also suitable. Plain Tubes: Label four plain (uncoated) 12x75 mm polypropylene tubes T (total counts) and NSB (nonspecific binding) in duplicate. Coated Tubes: Label twelve Direct Androstenedione Ab-Coated Tubes A (maximum binding) and B through F in duplicate. Label additional antibodycoated tubes, also in duplicate, for controls and patient samples. Calibrators ng/mL A (MB) 0 0 B 0.15 0.52 Icteric or grossly contaminated samples may give erroneous results. C 0.4 1.4 D 1.5 5.2 The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. E 4.0 14 F 10 35 Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. 2 Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. Coat-ACount Direct Androstenedione has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Before assay, allow the samples to come to room temperature (15–28°C) and mix by gentle swirling or inversion. Aliquot, if necessary, to avoid repeated thawing and freezing. Do not attempt to thaw frozen 4 Pipet 100 µL of the zero calibrator A into the NSB and A tubes, and 100 µL of each nonzero calibrator into the tubes marked B through F. Pipet 100 µL of each control and patient sample into the tubes prepared. Pipet directly to the bottom. It is good practice to use a disposabletip micropipet, changing the tip between samples, in order to avoid carryover contamination. Patient samples expected to contain androstenedione concentrations greater than the highest calibrator (10 ng/mL) should be diluted in the zero calibrator before assay. Volume Required: 100 µL of serum or plasma per tube Storage: 2–8°C for 2 days, or for up to 2 months frozen at –20°C. nmol/L 3 125 Add 1.0 mL of I Direct Androstenedione to every tube. Vortex. No more than 10 minutes should elapse during the dispensing of the Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) tracer. Set the T tubes aside for counting at step 6; they require no further processing. calibration points. We also recommend keeping track of these data reduction parameters: 4 Incubate for 2 hours at room temperature (15–28°C). T = Total Counts (as counts per minute) 5 Decant thoroughly. Removing all visible moisture will greatly enhance precision. Using a foam decanting rack, decant the contents of all tubes (except the T tubes) and allow them to drain for 2 or 3 minutes. Then strike the tubes sharply on absorbent paper to shake off all residual droplets. 6 Count for 1 minute in a gamma counter. Calculation of Results To obtain results in terms of concentration from a logit-log representation of the calibration curve, first calculate for each pair of tubes the average NSB-corrected counts per minute: Net Counts = (Average CPM) minus (Average NSB CPM) Then determine the binding of each pair of tubes as a percent of maximum binding (MB), with the NSB-corrected counts of the A tubes taken as 100%: Percent Bound = (Net Counts / Net MB Counts) × 100 The calculation can be simplified by omitting the correction for nonspecific binding; samples within range of the calibrators yield virtually the same results when Percent Bound is calculated directly from Average CPM.) Using logit-log graph paper, plot Percent Bound on the vertical (probability) axis against Concentration on the horizontal (logarithmic) axis for each of the nonzero calibrators, and draw a straight line approximating the path of these points. Results for the unknowns may then be read from the line by interpolation. It is good practice to inspect results for agreement within replicates, and to construct a graph of the calibration curve (even if the calculations are handled by computer) as a visual check on the appropriateness of the transformation used and as a way to detect deviant Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) %NSB = 100 × (Average NSB Counts / Total Counts) %MB = 100 × (Net Counts / Total Counts) And the 20, 50 and 80 percent "intercepts," where 20% = Concentration at 20 Percent Bound, etc. Note that other approaches, e.g. a sound implementation of the 4-parameter logistic, are also acceptable. See Dudley RA, et al. Guidelines for immunoassay data reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71. Example Run: For illustration only, not for calculating results from another run. (See “Example Run” table.) Quality Control Controls (or serum pools) with at least two androstenedione concentration levels — low and high — should routinely be assayed as unknowns. The Direct Androstenedione Controls supplied with the kit should be used as quality control material to monitor assay performance. Report patient results only if the control results for that assay meet your laboratory's established criteria for acceptability. It is good laboratory practice to record for each assay the lot numbers of the components used, as well as the dates when they were first reconstituted or opened. We also recommend charting control results from day to day — as described, for example, in Westgard JO, et al. A multi-rule chart for quality control. Clin Chem 1981;27:493-501. Note that repeat samples can serve as a valuable additional tool for monitoring interassay precision, and that pairs of control tubes can be spaced throughout the assay to help verify the absence of significant drift. Expected Values Males: A reference range study was performed on serum samples using the Coat-A-Count Direct Androstenedione procedure. The study included 124 males. The results showed a central 95% range 5 of approximately 0.8 to 3.0 ng/mL, with a median of 1.8 ng/mL. Calibration Range: 0.15 to 10 ng/mL (0.52 to 35 nmol/L). Females: In a study of 122 women, the results showed a central 95% range of approximately 0.5 to 3.7 ng/mL, with a median of 1.7 ng/mL. Analytical Sensitivity: 0.04 ng/mL (0.14 nmol/L). Laboratories should consider these results as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations The growing graafian follicle secretes androstenedione, and a two-fold increase in its production occurs near the midcycle. Specimens drawn during this time may therefore yield androstenedione results which fall above the upper central 95% 1,2 limit. Diurnal variation has been observed. For example, in 11 healthy men 18 to 30 years of age, the mean 24-hour androstenedione concentration was 0.93 ng/mL, with a circadian amplitude equaling 42% of the mean. The major acrophase occurred in the morning at 07:10 hours; the major nadir occurred in the evening at 23:00; and there was a secondary acrophase at 16:35. The 95% confidence interval for acrophase/nadir 13 was 68 minutes. Accordingly, the time of collection should be noted. It should be remembered that exercise can have a significant impact on circulating androstenedione levels. Thus, in a study of 18 professional soccer players, the mean androstenedione concentration increased from a baseline of approximately 0.9 ng/mL to 1.8 ng/mL at end of game, declining to 0.7 ng/mL ninety 14 minutes afterwards. In another study, the mean androstenedione level for 20 moderately trained men increased significantly, from a baseline mean of 1.11 ng/mL, to 1.41 ng/mL five minutes 15 after a one-hour swim. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the Coat-A-Count Direct Androstenedione kit's performance. Except as noted, all results in the sections below were obtained on serum samples. Results are expressed as ng/mL. Conversion Factor: ng/mL × 3.4916 → nmol/L 6 Intraassay Precision (Within-Run): Statistics were calculated for samples from the results of 20 pairs of tubes in a single assay. (See “Intraassay Precision” table.) Interassay Precision (Run-to-Run): Statistics were calculated for samples from the results of pairs of tubes in 20 different assays. (See “Interassay Precision” table.) Specificity: The Coat-A-Count Direct Androstenedione antiserum is highly specific for androstenedione, with an extremely low crossreactivity to other naturally occurring steroids or therapeutic drugs that may be present in patient samples. (See “Specificity” table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) End-of-Run Effect: None up to approximately 400 tubes. (See "End-ofRun Effect" table.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with five androstenedione solutions (4, 10, 20, 40 and 100 ng/mL) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Bilirubin: May cause a depression of values. (See “Bilirubin” Table.) Hemolysis: Presence of packed red blood cells in concentrations up to 30 µL/mL has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: May interfere with the assay. (See “Lipemia” Table.) Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 40 volunteers into plain, heparinized, EDTA and Becton ® Dickinson SST vacutainer tubes. All samples were assayed by the Coat-A-Count Direct Androstenedione procedure. (Heparin) = 0.95 (Serum) + 0.02 ng/mL r = 0.997 (EDTA) = 1.02 (Serum) – 0.01 ng/mL r = 0.997 (SST) = 1.00 (Plain Tubes) – 0.15 ng/mL r = 0.996 Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Means: 4.1 ng/mL (Serum) 3.9 ng/mL (Heparin) 4.2 ng/mL (EDTA) 3.9 ng/mL (SST) The results show that serum and both EDTA and heparinized plasma yield essentially equivalent results. Method Comparison 1: Sixty patient samples were simultaneously assayed by the Coat-A-Count Direct Androstenedione procedure and Coat-A-Count Androstenedione kit (extraction method), with androstenedione concentrations ranging from 0.25 to approximately 11 ng/mL. By linear regression. (See “Method Comparison 1” graph.) (CAC Direct) = 0.81 (CAC Extraction) + 0.39 ng/mL r = 0.952 Means: 2.5 ng/mL (Coat-A-Count Direct) 2.6 ng/mL (Coat-A-Count Extraction) Method Comparison 2: In another experiment, thirty-eight patient samples were assayed by the Coat-A-Count Direct Androstenedione procedure and a commercially available direct coated tube radioimmunoassay for androstenedione (Kit A), with androstenedione concentrations ranging from approximately 0.74 to 3.48 ng/mL. By linear regression. (See “Method Comparison 2” graph.) (CAC Direct) = 1.33 (Kit A) + 0.054 ng/mL r = 0.860 Means: 2.2 ng/mL (Coat-A-Count Direct) 1.6 ng/mL (Kit A) References 1) Abraham GE. Ovarian and adrenal contribution to peripheral androgens during the menstrual cycle. J Clin Endocrinol Metab 1974;39:340. 2) Baird DT. Ovarian steroid secretion and metabolism in women. In: James VHT, Serio M, Giusti G, editors. The Endocrine Function of the Human Ovary. New York: Academic Press, 1976: 125-33. 3) Fiet J et al. 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Exp Clin Endocrinol 1991;97:99-101. 16) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, 1998. Technical Assistance In the United States, contact Siemens Healthcare Diagnostics Technical Services department. Tel: 877.229.3711. To place an order: Tel: 800.255.3232. Outside the United States, contact your National Distributor. www.siemens.com/diagnostics The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Inc. is certified to ISO 13485:2003. 7 Interassay Precision (ng/mL) Tables and Graphs Mean1 1 0.27 0.04 14.8% 0.32 0.05 15.6% 3 0.87 0.09 10.3% 4 1.0 0.07 7.0% 5 1.7 0.07 4.1% 88,644 6 2.7 0.15 5.6% 780 7 4.7 0.22 4.7% 8 7.0 0.34 4.9% Duplicate Average Net Percent Tube1 CPM2 CPM3 CPM4 Bound5 88,472 88,816 (NSB) 777 782 8 Androstenedione 6 ng/mL 0 A 32,887 (MB)9 32,710 32,799 32,019 100% B 29,847 30,003 29,925 29,146 91% 0.15 C 27,231 27,764 27,498 26,718 83% 0.4 D 20,848 20,502 20,675 19,896 62% 1.5 E 14,176 13,679 13,928 13,148 41% 4.0 8,632 8,715 8,674 F CV3 2 Example Run T7 SD2 0 End-of-Run Effect (ng/mL) 7,894 25% 10 Unknowns10 X1 29,605 29,390 29,498 28,718 90% 0.20 X2 16,159 15,875 16,017 15,238 48% 3.0 X3 9,431 9,593 9,512 8,733 27% 8.5 Tubes1 90–101 Tubes Tubes Tubes Tubes 152–163 214–225 276–287 400–411 1 0.27 0.29 0.31 0.32 0.29 2 1.0 1.0 0.9 1.0 1.0 3 1.6 1.6 1.7 1.7 1.7 4 2.6 2.7 2.8 2.9 2.8 5 4.9 4.7 4.8 4.9 4.8 6 6.6 6.8 6.7 6.7 6.6 11 Quality Control Parameters: T7 = 88,644 cpm %NSB8 = 0.88% %MB9 = 36% 20% Intercept12 = 13.7 ng/mL 50% Intercept = 2.6 ng/mL 80% Intercept = 0.51 ng/mL Intraassay Precision (ng/mL) Mean1 8 SD2 CV3 1 0.32 0.03 9.4% 2 0.39 0.03 7.7% 3 0.94 0.08 8.5% 4 1.0 0.05 5.0% 5 1.7 0.07 4.1% 6 2.8 0.09 3.2% 7 4.7 0.20 4.3% 8 7.6 0.28 3.7% Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Specificity Linearity (ng/mL) Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4 ng/mL 2 Added Apparent 3 ng/mL % Cross4 reactivity Adrenosterone 1,000 1.35 0.135% 16 in 16 3.0 — — Aldosterone 10,000 ND ND 8 in 16 1.5 1.5 100% 5β-Androstan-3α,17β-diol 1,000 0.02 0.002% 4 in 16 0.75 0.75 100% 2 in 16 0.37 0.38 97% 1 in 16 0.18 0.19 95% 32 in 32 5.9 — — 16 in 32 3.0 3.0 100% 1 Compound Δ4-Androsten-11β-ol-3,17- 10,000 dione 6.30 1 0.063% Androsterone 10,000 1.65 0.017% Cholesterol 1,000 ND ND 2 5 Corticosterone 1,000 0.09 0.009% Cortisol 10,000 0.16 0.002% 8 in 32 1.4 1.5 93% 0.73 0.74 99% Cortisone 1,000 0.07 0.007% 4 in 32 Dexamethasone 1,000 ND ND 2 in 32 0.41 0.37 111% DHEA 1,000 1.64 0.164% 1 in 32 0.21 0.18 117% DHEA-SO4 100,000 3.01 0.003% 32 in 32 7.5 — — Deoxycorticosterone 10,000 6.86 0.069% 16 in 32 3.6 3.8 95% Estradiol-17β 10,000 ND ND Estriol 1,000 ND ND Estrone 1,000 0.13 0.013% 11-Ketotestosterone 10,000 0.25 0.003% Norethindrone 1,000 ND ND 17α-Hydroxypregnenolone 1,000 ND ND 17α-Hydroxyprogesterone 10,000 3.76 0.038% Pregnenolone 10,000 0.06 0.001% Prednisone 1,000 ND ND Progesterone 1,000 1.60 0.160% Spironolactone 1,000 1.09 0.109% 5α-Dihydrotestosterone 1,000 2.12 0.212% 100 1.49 1.49% Testosterone ND: not detectable Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) 3 4 5 8 in 32 1.9 1.9 100% 4 in 32 0.99 0.94 105% 2 in 32 0.43 0.47 91% 1 in 32 0.24 0.23 104% 32 in 32 8.5 — — 16 in 32 3.8 4.3 88% 8 in 32 2.0 2.1 95% 4 in 32 1.0 1.1 91% 2 in 32 0.53 0.53 100% 85% 1 in 32 0.23 0.27 64 in 64 9.5 — — 32 in 64 4.6 4.8 96% 16 in 64 2.3 2.4 96% 8 in 64 1.2 1.2 100% 4 in 64 0.65 0.59 110% 2 in 64 0.30 0.30 100% 1 in 64 0.15 0.15 100% 9 Recovery (ng/mL) 1 2 3 4 5 Lipemia 2 Expected 3 4 Solution Observed — 0.5 — % O/E — A 0.7 0.7 100% B 1.0 1.0 100% C 1.4 1.5 93% D 2.1 2.5 84% E 5.4 5.5 98% — 0.8 — — A 1.0 1.0 100% B 1.2 1.3 92% C 1.7 1.8 94% D 2.8 2.8 100% E 5.7 5.8 98% — 1.0 — — A 1.2 1.2 100% B 1.5 1.5 100% C 2.0 2.0 100% D 3.1 3.0 103% E 6.5 6.0 108% — 1.1 — — A 1.3 1.2 108% B 1.5 1.5 100% C 2.0 2.0 100% D 3.1 3.0 103% E 6.4 6.0 107% — 1.2 — — A 1.5 1.3 115% B 1.7 1.6 106% C 2.0 2.1 95% D 3.1 3.1 100% E 5.4 6.1 89% Bilirubin Bilirubin Unspiked1 100 mg/L 200 mg/L 1 1.8 1.3 1.4 2 2.1 1.5 1.7 3 4.3 3.7 3.6 4 6.5 5.7 5.9 5 8.2 7.6 7.8 Triglycerides Added Observed2 Expected3 %O/E4 mg/dL1 1 2 3 4 5 unspiked5 1.8 — — 500 1.7 1.8 94% 1,000 1.5 1.7 88% 2,000 1.4 1.6 88% 3,000 1.2 1.5 80% unspiked 2.1 — — 500 1.9 2.1 90% 1,000 1.7 2.0 85% 2,000 1.7 1.9 89% 3,000 1.5 1.8 83% unspiked 4.3 — — 500 4.0 4.2 95% 1,000 3.6 4.1 88% 2,000 3.5 3.9 90% 3,000 3.0 3.6 83% unspiked 6.5 — — 500 6.2 6.3 98% 1,000 5.8 6.1 95% 2,000 5.6 5.8 97% 3,000 4.8 5.5 87% unspiked 8.2 — — 500 8.5 8.0 106% 1,000 7.8 7.8 100% 2,000 7.0 7.4 95% 3,000 6.4 7.0 91% Method Comparison 1 10 CAC Direct Androstenedione 1 8 6 4 2 0 0 2 4 6 8 10 12 CAC Androstenedione (extraction), ng/mL (CAC Direct) = 0.81 (CAC Extraction) + 0.39 ng/mL r = 0.952 10 Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) 2 SD, 3CV. Interassay Précision : 1Moyenne, SD, 3CV. Test de dilution : 1Dilution, 2Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 58 dans 8. Test de récupération : 1Solution, 2Observé (O), 3 Attendu (A), 4%O/A. Spécificité : 1Composé, 2 ajouté, 3Concentration apparente, 4Réaction croisée %. 5ND: non détectable. Effet de la position des tubes : 1Tubes. Effect of Bilirubine : 1Non chargés. Lipémie : 1 Triglycerides Added, 2Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 5Non chargés. Comparaison de méthodes: Androstenedione: Androstènedione. Method Comparison 2 2 6 CAC Direct Androstenedione 5 4 3 2 1 1 2 3 4 5 Kit A, ng/mL (CAC Direct) = 1.33 (Kit A) + 0.54 ng/mL r = 0.860 Deutsch. Example Run: 1Röhrchen, 2Duplikat CPM, 3Mittelwert CPM, 4Netto CPM, 5Prozent Bindung, 6Ca. Androstendion, ng/mL, 7Total, 8 %NSB, 9%MB, 10Unbekannte, 11 Qualitätskontrollparameter, 1220% Intercept. Intraassay Präzision: 1Mittelwert, 2SD (Standardabweichung), 3CV (Variationskoeffizient). Interassay Präzision: 1 Mittelwert, 2SD (Standardabweichung), 3CV (Variationskoeffizient). Linearität: 1Verdünnung, 2 Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 58 in 8. Wiederfindung: 1Lösung, 2Beobachtet (B), 3 Erwartet (E), 4% B/E. Spezifität: 1Verbindung, 2 zugesetzte Menge, 3Gemessene Konzentration, 4 % Kreuzreaktivität, 5NN: Nicht nachweisbar. "End of Run" Effekt: 1Röhrchen. Effect of Bilirubin: 1Ohne Zugabe von. Lipämie: 1 Triglyceride zugesetzt, 2Beobachtet (B), 3 Erwartet (E), 4% B/E, 5Ohne Zugabe von. Methodenvergleich: Androstenedione: Androstendion. Español. Example Run: 1Tubo, 2Duplicado CPM, 3Media CPM, 4CPM Netas, 5Porcentaje de unión, 6Androstenodiona, aprox., ng/mL, 7Total, 8 %NSB, 9%MB, 10Desconocido, 11Parámetros del control de calidad, 12Corte al 20%. Intraassay Precisión: 1Media, 2DS, 3CV. Interassay Precisión: 1Media, 2DS, 3CV. Linealidad: 1 Dilución, 2Observado (O), 3 Esperado (E), 4%O/E, 58 en 8. Recuperación: 1 Solución, 2Observado (O), 3Esperado (E), 4 %O/E. Especificidad: 1Compuesto, 2Cantidad añadida, 3Concentración aparente, 4% Reacción cruzada, 5ND: no detectable. Efecto deriva: 1 Tubos. Effect of Bilirrubina: 1Sin añadir. Lipemia: 1Triglicéridos añadida, 2Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E, 5Sin añadir. Comparación de los métodos: Androstenedione: Androstenodiona. Italiano. Example Run: 1Provetta, 2CPM in duplicato, 3CPM Medio, 4CPM Netti, 5 Percentuale di Legato, 6Appross. Androstenedione, ng/mL, 7Totale, 8%NSB, 9 %MB, 10Campioni Non Noti, 11Parametri per il Controllo di Qualità, 12Intercetta al 20%. Intraassay Precisione: 1Media, 2SD (Deviazione Standard), 3CV (Coefficiente di Variazione). Interassay Precisione: 1Media, 2 SD (Deviazione Standard), 3CV (Coefficiente di Variazione). Linearità: 1Diluizione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A, 58 in 8. Ricupero: 1 Soluzione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A. Specificità: 1Composto, 2quantità aggiunta, 3 Concentrazione apparente, 4Percentuale di Crossreattività, 5ND: non determinabile. Effetto Fine-Seduta: 1Provette. Effect of Bilirubina: 1 Semplice. Lipemia: 1Trigliceridi aggiunta, 2 Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A, 5Semplice. Paragone dei metodi: Androstenedione: Androstenedione. Português. Example Run: 1Tubo, 2Duplicado CPM, 3Média de CPM, 4Net CPM, 5Percentagem de Ligação, 6Aprox. Androstenediona, ng/mL, 7 Total, 8%NSB, 9%MB, 10Desconhecidas, 11 Parâmetros do controlo de qualidade, 1220% Intercepção. Intraassay Precisão: 1Média, 2 Desvio padrão, 3Coeficiente de variação. Interassay Precisão: 1Média, 2Desvio padrão, 3 Coeficiente de variação. Linearidade: 1 Diluição, 2Observado (O), 3Esperado (E), 4 %O/E, 58 em 8. Recuperação: 1Solução, 2 Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E. Especificidade: 1Composto, 2Quantidade adicionada, 3Apparent Concentration, 4 Percentagem de reacção cruzada, 5ND: não detectável. Efeito fim-de-série: 1Tubos. Effect of Bilirrubina: 1Não adicionada. Lipémia: 1 Triglicéridos Adicionados, 2Observado (O), 3 Esperado (E), 4%O/E, 5Não adicionada. Comparação de Métodos: Androstenedione: Androstenediona. Français. Example Run: 1Tube, 2Duplicate CPM, 3CPM moyen, 4CPM corrigé, 5 Pourcentage lié, 6Approx. Androstènedione, ng/mL, 7Total, , 8%NSB, 9%MB, 10Patients, 11 Paramètres Contrôle de Qualité, 1220% Intercept. Intraassay Précision : 1Moyenne, Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) 11 Deutsch Coat-A-Count Direktes Androstendion Anwendung: Festphasen Radioimmunoassay (beschichtete Röhrchen) zur direkten quantitativen 4 Bestimmung des Δ -Androstendion im Serum und EDTA- oder Heparin-Plasma. Der Test ist ausschließlich zur In-vitroDiagnostik einzusetzen freien durch Dekantieren getrennt. Die Röhrchen werden dann in einem GammaCounter gemessen. Die Counts sind der Konzentration des Androstendion in der Patientenprobe umgekehrt proportional. Die Menge des Androstendions in der Probe wird durch Vergleichen der Counts mit einer Standardkurve ermittelt. Keine Extraktion: Androstendion Bestimmungen durch die Coat-A-Count Direkt Androstendion Methode benötigen weder eine Extraktion noch eine chromatographische Vorbehandlung der Proben. Artikelnummern: TKAN1 (100 Tests). Zu pipettierende Reagenzien: 1 Die Packung mit 100 Röhrchen enthält weniger als 6,5 Microcurie (241 Kilobequerel) an 125 radioaktivem I-markiertem Androstendion. Testdauer: 2 Stunden. Klinische Relevanz Totalaktivität zum Zeitpunkt der Markierung: ca. 90 000 cpm, Hinweise und Vorsichtsmaßnahmen Δ -Androstendion ist ein Steroid, das die hauptsächliche Vorstufe für Testosteron und Östron darstellt. Es ist klinisch interessant auf Grund der Tatsache, dass es in Fällen von abnormalem Haarwachstum (Hirsutismus) und Virilisierung erhöht gefunden wird. Zur In-vitro-Diagnostik. Anders als die NebennierenrindenAndrogene Dehydroepiandrosteron (DHEA) und seine sulfatierte Form (DHEA-S) stammt das Androstendion aus der Nebennierenrinde und dem Ovar. Die Plasmaspiegel steigen ab dem 17. Lebensjahr kontinuierlich an und beginnen nach der dritten Dekade wieder allmählich abzufallen. Androstendion unterliegt einer tageszeitlichen Schwankung mit höchsten Werten am Morgen und einer zyklischen Schwankung mit höchsten Werten nahe der Zyklusmitte. Während der Schwangerschaft werden erhöhte Plasmaspiegel beobachtet. Die Reagenzien dürfen nur bis zum Verfallsdatum verwendet werden. 4 Methodik Der Coat-A-Count Direkt Androstendion RIA ist ein kompetitiver Radioimmunoassay, basierend auf Antikörper-beschichteten Röhrchen, in 125 denen I-markiertes Androstendion mit dem Androstendion in der Patientenprobe um eine limitierte Zahl von Antikörpern konkurriert. Nach der Inkubation werden die gebundenen Komponenten von den 12 Reagenzien: Die Packung mit den Reagenzien sollte bei 2–8°C in einem Kühlschrank gelagert werden, der für radioaktives Material ausgewiesen ist. Die Entsorgung muss nach den jeweils gültigen Gesetzen erfolgen. Einige Komponenten des Kits können Material humanen Ursprungs und/oder in anderer Weise gefährliche Inhaltsstoffe enthalten, die es unbedingt notwendig machen die folgenden Vorsichtsmaßnahmen einzuhalten. Die generell geltenden Vorsichtsmaßnahmen sind einzuhalten und alle Komponenten als potenziell infektiös zu behandeln. Alle aus menschlichem Blut gewonnenen Materialien wurden auf Syphilis, Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2, Hepatitis-B-Oberflächenantigen und Hepatitis-C-Antikörper untersucht und negativ befundet. Bestimmten Komponenten wurde Natriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Um die Bildung von explosiven Metallaziden in Blei- und Kupferrohren zu vermeiden, sollten die Reagenzien nur zusammen mit großen Wassermengen in die Kanalisation gespült werden. Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Wasser: Destilliertes bzw. deionisiertes Wasser benutzen. Radioaktivität Der Umgang mit radioaktivem Material ist in Deutschland genehmigungspflichtig. Deshalb muss der Siemens Healthcare Diagnostics eine Kopie der aktuellen gültigen Umgangsgenehmigung des Kunden vorliegen, bevor radioaktive Reagenzien versendet werden dürfen. Die Strahlenschutzverordnung ist zu beachten. Das radioaktive Material ist gemäß der jeweiligen Umgangsgenehmigung zu handhaben. Die Strahlenexposition ist zu minimieren. Spritzer sind sofort aufzuwischen und die betroffene Oberfläche zu dekontaminieren. Aerosolbildung ist zu vermeiden. Flüssiger und fester radioaktiver Abfall sind unter Beachtung der gültigen Richtlinien zu entsorgen. Bestandteile der Testpackung: Vorbereitung Direkt Androstendion Antikörperbeschichtete Röhrchen (TAN1) Polypropylen-Röhrchen beschichtet mit polyklonalen Antikörpern vom Kaninchen gegen Androstendion, verpackt in wiederverschließbaren Plastikbeuteln. Kühl lagern, vor Feuchtigkeit schützen und nach dem Öffnen wieder sorgfältig verschließen. Lagerung bei 2–8°C bis zum Verfallsdatum. Farbe: Fluoreszierendes Orange. TKAN1: 100 Röhrchen. 125 I Direkt Androstendion (TAN2) 105 ml jodiertes Androstendion mit Konservierungsmitteln. Lagerung bei 2– 8°C. Haltbar bis 30 Tage nach dem Öffnen oder bis zum Verfallsdatum auf der Flasche. TKAN1: 1 Flasche. Direkt Androstendion Standards (TAN3–8) 6 Flaschen, A – F, enthalten verschiedene Konzentrationen von Androstendion in einer Humanserum-Matrix mit Konservierungsmitteln. Der 0-Standard A enthält 5 ml und die anderen Standards B – F je 2 ml. 30 Tage nach dem Öffnen bei 2–8°C haltbar oder 6 Monate bei Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) –20°C (aliquotiert). TKAN1: 1 Set. Die Standards B – F enthalten 0,15; 0,4; 1,5; 4,0 und 10 ng/ml; bzw. 0,52; 1,4; 5,2; 14 und 35 nmol/l. Weitere Standardkurvenpunkte können durch Mischen der Standards hergestellt werden. Direkt Androstendion Kontrollen (TANC1–2) 2 Flaschen (je 2 mL) mit Direkt Androstendion Kontrollen 1 und 2, mit verschiedenen AndrostendionKonzentrationen in behandeltem Humanserum, mit Konservierungsmitteln. 30 Tage nach dem Öffnen bei 2–8°C haltbar oder 6 Monate bei –20°C (portioniert). Die jeweiligen Zielwerte können dem Direkt Androstendion Kontrolldatenblatt entnommen werden. TKAN1: 1 Set. Erforderliche Laborgeräte und Hilfsmittel Gammacounter – kompatibel mit 12x75 mm Röhrchen Wirbelmischer Radioimmunoassay Unbeschichtete 12x75 mm PolyprophylenRöhrchen – für T und NSB Röhrchen, erhältlich bei Siemens Healthcare Diagnostics (Artikelnummer: PPO) Mikropipetten: 100 µl und 1,0 ml. Dekantierständer – erhältlich bei Siemens Healthcare Diagnostics (Artikelnummer: FDR). Logit-Log-Papier Probengewinnung Es ist keine besondere Vorbereitung der Patienten nötig. Blutentnahme durch 16 Venenpunktion in unbeschichtete Röhrchen, Trennung des Serums von den Blutzellen. Abnahmezeitpunkt notieren. Heparin- und EDTA-Plasma kann auch verwendet werden. Ikterische oder stark kontaminierte Proben können zu fehlerhaften Ergebnissen führen. Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zur Klärung von lipämischen Proben empfohlen. 13 Bei hämolysierten Proben besteht die Möglichkeit einer unsachgemäßen Handhabung vor Eintreffen im Labor, daher sind die Ergebnisse mit Vorsicht zu interpretieren. Kalibratoren ng/ml A (MB) 0 0 B 0,15 0,52 C 0,4 1,4 Blutentnahmeröhrchen von verschiedenen Herstellern können differierende Werte verursachen. Dies hängt von den verwendeten Materialien und Additiven (Gel oder physische Trennbarrieren, Gerinnungsaktivatoren und /oder Antikoagulantien) ab. Coat-A-Count Direkt Androstendion sind nicht mit allen möglichen Röhrchenvariationen ausgetestet worden. Details der getesteten Röhrchenarten sind dem Kapitel "Alternative Probenarten" zu entnehmen. D 1,5 5,2 E 4,0 14 F 10 35 2 Erforderliche Menge: 100 µl Serum oder Plasma pro Röhrchen Die Proben vor Testbeginn auf Raumtemperatur (15–28°C) bringen und vorsichtig durchmischen. Um wiederholtes Einfrieren und Auftauen zu vermeiden bei Bedarf portionieren. Gefrorene Proben dürfen nicht durch Erhitzen im Wasserbad aufgetaut werden. Alle Testkomponenten vor Testbeginn auf Raumtemperatur (15–28°C) bringen. 1 Unbeschichtete Röhrchen: Jeweils 2 unbeschichtete 12x75 mm Polypropylen-Röhrchen mit T (Total Counts) und NSB (unspezifische Bindung) beschriften. Da die unspezifische Bindung im Coat-A-Count RIA normalerweise niedrig ist hat sie keinen signifikanten Einfluss auf die Messwerte. Es kann deshalb auch auf das Mitführen der NSB-Röhrchen verzichtet werden. Patientenproben, in denen Konzentrationen oberhalb des höchsten Standards (10 ng/ml) erwartet werden, sind mit 0-Standard vor dem Einsatz in den Test zu verdünnen. 3 125 1,0 ml of I Direkt Androstendion in jedes Röhrchen hinzufügen. Mischen. Das Verteilen des Tracers sollte nicht länger als 10 Minuten dauern. Die TRöhrchen bis zur Messung (siehe Schritt 6) beiseite stellen; sie bedürfen keiner weiteren Behandlung. 4 2 Stunden bei Raumtemperatur inkubieren (15–28°C). 5 Vollständig dekantieren. Vollständiges Entfernen der Flüssigkeit verbessert die Präzision deutlich. Mit Hilfe eines Dekantierständers alle Röhrchen (außer die TRöhrchen) dekantieren oder absaugen und 2–3 Minuten umgedreht stehen lassen. Anschließend werden die Röhrchen kräftig auf Fließpapier ausgeklopft, um alle restlichen Tröpfchen zu entfernen. Beschichtete Röhrchen: Jeweils 2 Antikörper-beschichtete Direkt Androstendion Röhrchen mit A (maximale Bindung) und von B bis F beschriften. Jeweils 2 weitere Antikörper-beschichtete Röhrchen für Kontrollen und Patientenproben beschriften. 6 14 Jeweils 100 µl des 0-Standards A in die NSB und A Röhrchen, und jeweils 100 µl der restlichen Standards in die entsprechend beschrifteten Röhrchen pipettieren. Jeweils 100 µl von jeder Patientenprobe und Kontrolle in die vorbereiteten Röhrchen pipettieren. Direkt auf den Boden des Röhrchens pipettieren. Es ist gute Laborpraxis Pipetten mit Einmalspitzen zu verwenden und die Spitze von Probe zu Probe zu wechseln um Verschleppung zu vermeiden. Lagerung: Bei 2–8°C für 2 Tage, oder für 2 Monate bei –20°C. Testansatz und Durchführung nmol/l Alle Röhrchen 1 Minute im GammaCounter messen. Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Berechnung der Ergebnisse Um die Konzentrationen aus der Logit-Log Darstellung der Standardkurve abzulesen werden zunächst der Mittelwert der zwei Röhrchen bereinigt um den Mittelwert der NSB Counts pro Minute (cpm) berechnet: Netto Counts = (Mittelwert CPM) minus (Mittelwert NSB CPM) Anschließend wird die Bindung jedes Röhrchenpaars als Prozent der Maximalbindung (MB, B0) bestimmt. Hierzu werden die mittleren CPM des AStandards korrigiert um die mittlere NSB als 100% gesetzt: Prozentbindung = (Netto Counts / Netto MB Counts) × 100 (Die Berechnung kann durch weglassen der Korrektur um die NSB vereinfacht werden. Für Proben innerhalb des Standardbereichs werden nahezu identische Konzentrationen berechnet, wenn B/B0 direkt aus den CPM ermittelt wird.) Die so ermittelten B/B0 aller Standards außer des 0-Standards werden auf der yAchse auf Logit-Log Papier gegen die Konzentration auf der x-Achse (logarithmisch) aufgetragen. Die Punkte werden mit bestmöglicher Annäherung durch eine gerade Linie verbunden. Die Ergebnisse der unbekannten Proben können dann durch Interpolation an der Kurve abgelesen werden. Es ist gute Laborpraxis die Ergebnisse der Doppelbestimmung auf Übereinstimmung zu prüfen und eine Grafik der Standardkurve darzustellen (auch wenn die eigentliche Berechnung durch ein Computerprogramm erfolgt) um visuell zu überprüfen, ob für die Standardkurve die geeignete Transformation verwendet wurde und um eventuell abweichende Standardkurvenpunkte zu entdecken. Es wird weiterhin empfohlen, folgende Parameter der Berechnung zu protokollieren: T = Totalaktivität (als Counts pro Minute) %NSB = 100 × (Mittelwert NSB Counts / Total Counts) %MB = 100 × (Netto Counts / Total Counts) und die 20, 50 und 80 Prozent "intercepts," wobei Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) 20% = Konzentration bei 20 Prozent Bindung, etc. Bitte beachten Sie, dass auch andere Auswertungen z. B. nach der 4-Parameter-Logistik akzeptabel sind. Siehe: Dudley RA, et al. Guidelines for immunoassay data reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71. Auswertebeispiel: Dieses Beispiel dient nur zur Veranschaulichung und ist nicht dazu geeignet Werte aus einem anderen Testansatz damit zu ermitteln. (siehe Tabelle "Example Run"). Qualitätskontrolle Es wird empfohlen Kontrollen mit mindestens 2 Konzentrationen (niedrig und hoch) an Androstendion routinemäßig als unbekannte Proben einzusetzen. Die im Kit enthaltenen Direkt Androstendion Kontrollen sollten als Qualitätskontrollmaterial zur Überprüfung der Leistungsfähigkeit des Assays eingesetzt werden. Patientenergebnisse dürfen nur dann freigegeben werden, wenn die laborspezifischen Akzeptanzkriterien erfüllt sind. Hierzu sind die jeweils gültigen Richtlinien zu berücksichtigen. Es ist gute Laborpraxis die Chargennummern, sowie das Datum der ersten Öffnung bzw. Rekonstitution der verwendeten Komponenten zu protokollieren. Die wiederholte Messung von Proben kann bei der Beurteilung der Interassay Präzision hilfreich sein. Der Einsatz von Kontrollprobenpaaren an unterschiedlichen Positionen des Testansatzes ist hilfreich, um einen eventuellen Drift zu erkennen. Referenzwerte Männer: Eine Refenrenzwertstudie wurde an Serumproben mit dem Coat-A-Count Direkt Androstendion Verfahren durchgeführt. Die Studie beinhaltete 124 Männer. Die Ergebnisse zeigten einen zentralen 95% Bereich von ca. 0,8 bis 3,0 ng/ml, mit einem Mittelwert von 1,8 ng/ml. Frauen: In einer Studie mit 122 Frauen, zeigten die Ergebnisse einen zentralen 95% Bereich von ca. 0,5 – 3,7 ng/ml, mit einem Mittelwert von 1,7 ng/ml. 15 Im Labor sollten diese Ergebnisse lediglich als Richtwerte betrachtet werden. Jedes Labor sollte seine eigenen Referenzbereiche etablieren. Grenzen der Methode Der wachsende Graafsche-Follikel sezerniert Androstendion mit einem bis zu zweifachen Anstieg der Produktion in der Nähe der Zyklusmitte. Proben, die in diesem Zeitraum entnommen wurden, können deshalb Werte über der Obergrenze des zentralen 95%-Bereichs 1,2 aufweisen. Eine tageszeitliche Schwankung wurde beobachtet. Zum Beispiel wurde bei 11 gesunden Männern im Alter zwischen 18 und 30 Jahren die mittlere AndrostendionKonzentration in 24 Stunden mit 0,93 ng/ml gefunden, mit einer zirkadianen Amplitude von 42% des Mittelwertes. Der Hauptanstieg erfolgte am Morgen um 7:10 Uhr; das Maximum wurde am Abend um 23:00 Uhr erreicht und es gab einen zweiten Anstieg um 16:35 Uhr. Der 95% VertraueNSBereich 13 für Anstieg/Maximum war 68 Minuten. Dementsprechend sollte der Zeitpunkt der Blutentnahme notiert werden. Es wird daran erinnert, dass körperliches Training einen signifikanten Einfluss auf die zirkulierenden Androstendion Spiegel hat. In einer Studie mit 18 professionellen Fußballspielern stieg die mittlere Androstendion Konzentration von den Basalwerten auf 0,9 bis 1,8 ng/ml zum Spielende an und fiel nach 90 Minuten 14 wieder auf 0,7 ng/ml ab. In einer weiteren Studie stieg der Androstendion Spiegel bei 20 moderat trainierten Männern signifikant vom Basalmittelwert von 1,11 ng/ml auf 1,41 ng/ml nach 1 15 Stunde Schwimmen an. Leistungsdaten Siehe Tabellen und Grafiken mit repräsentativen Daten für den Assay. Wenn nicht anders angegeben, wurden, alle Ergebnisse in den nachfolgenden Abschnitten in Serumproben ermittelt. Ergebnisse sind in ng/ml angegeben. Umrechnungsfaktor: ng/ml × 3,4916 → nmol/l Standardbereich: 0,15 – 10 ng/ml (0,52 – 35 nmol/l), 16 Analytische Sensitivität: 0,04 ng/ml (0,14 nmol/l), Intraassay-Präzision Statistische Berechnung der Ergebnisse von 8 Proben, die in 20 Röhrchenpaaren in einem Ansatz gemessen wurden. (Siehe Tabelle „Intraassay-Precision“.) Interassay-Präzision Statistische Berechnung der Ergebnisse von 8 Proben, die in 20 Röhrchenpaaren in mehreren Ansätzen gemessen wurden. (Siehe Tabelle „Interassay-Precision“.) Spezifität: Das in diesem Testbesteck verwendete Antiserum ist hochspezifisch mit extrem niedrigen Kreuzreaktivitäten zu anderen natürlich vorkommenden Steroiden oder Medikamenten. Bei Untersuchungen im Labor des Herstellers wurden folgende Kreuzreaktivitäten gemessen: (siehe Tabelle „Spezifität“.) Linearität: Proben wurden in verschiedenen Verdünnungen getestet. (Repräsentative Daten entnehmen Sie bitte der Tabelle „Linearität“.) "End of Run" Effekt: Tritt bis ca. 400 Röhrchen nicht auf. (siehe Tabelle "End-of-Run Effect"). Wiederfindung: Proben wurden 1:19 mit Androstendion Lösungen (4, 10, 20, 40 und 100 ng/ml) versetzt und gemessen. (Repräsentative Daten entnehmen Sie bitte der Tabelle „Recovery“.) Bilirubin: Kann zu niedrigeren Werten führen. (Siehe Tabelle “Bilirubin”.) Hämolyse: Erythrozytenkonzentrate haben in Konzentrationen bis zu 30 µl/ml keinen Einfluss auf die Messung, der größer als die Impräzision des Assays selbst ist. Lipämie: Kann den Assay beeinflussen. (Siehe Tabelle “Lipemia”.) Alternativer Probentyp: Um die Auswirkungen von verschiedenen Probenarten zu untersuchen, wurde Blut von 40 Freiwilligen in Röhrchen ohne Additiva, in Heparin-, EDTA- und Becton ® Dickinson SST Vacutainer-Rörchen gesammelt. Alle Proben wurden mit dem Coat-A-Count Direkt Androstendion RIA bestimmt. Durch lineare Regression: (Heparin) = 0,95 (Serum) + 0,02 ng/ml r = 0,997 Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) (EDTA) = 1,02 (Serum) – 0,01 ng/ml r = 0,997 (SST) = 1,00 (einfachen Röhrchen) – 0,15 ng/ml r = 0,996 Mittelwerte: 4,1 ng/ml (Serum) 3,9 ng/ml (Heparin) 4,2 ng/ml (EDTA) 3,9 ng/ml (SST) Die Ergebnisse zeigen, dass Serum, EDTA- und Heparin-Plasma vergleichbare Ergebnisse liefern. Methodenvergleich 1: Es wurden 60 Patientenproben parallel im Coat-A-Count Direct Androstendion RIA und im Coat-ACount Androstendion RIA (Extraktionsverfahren) gemessen. Die Androstendion Konzentrationen reichten von 0,25 ng/ml bis ca. 11 ng/ml. Durch lineare Regression: (Siehe “Method Comparison 1” Grafik.) Español Coat-A-Count Androstenodiona directa Utilidad del análisis: El kit Coat-A-Count Androstenediona Directa es un 125 radioinmunoanálisis ( I) en fase sólida, diseñado para la determinación 4 cuantitativa de Δ -androstenediona en suero y en plasma con EDTA o heparinizado. Su uso es estrictamente para diagnóstico in vitro. (CAC Direct) = 0,81 (CAC Extraction) + 0,39 ng/ml r = 0,952 Mittelwerte: 2,5 ng/ml (Coat-A-Count Direct) 2,6 ng/ml (Coat-A-Count Extraction) Methodenvergleich 2: In einer weiteren Untersuchung wurden 38 Patientenproben im Coat-A-Count Direct Androstendion RIA und in einem kommerziell erhältlichen RIA mit beschichteten Röhrchen (Kit A) gemessen. Die Androstendion Konzentrationen reichten von 0,74 ng/ml bis ca. 3,48 ng/ml. Durch lineare Regression: (Siehe “Method Comparison 2” Grafik.) (CAC Direct) = 1,33 (Kit A) + 0,054 ng/mL r = 0,860 Mittelwerte: 2,2 ng/ml (Coat-A-Count Direct) 1,6 ng/ml (Kit A) Anwendungsberatung Bei Rückfragen wenden Sie sich bitte an Ihre Niederlassung. www.siemens.com/diagnostics Das Qualitätsmanagement-System der Siemens Healthcare Diagnostics Inc. ist zertifiziert nach DIN EN ISO 13485:2003. Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) 17 Referencia: TKAN1 (100 tubos). El kit de 100 tubos contiene menos de 6,5 microcurios (241 kilobequerelios) de 125 Androstenodiona marcado con I radioactivo. Resumen y Explicación del Test 4 La Δ -Androstenediona es un esteroide que actúa como el precursor principal de la testosterona y la estrona. Su interés clínico deriva del hecho de que frecuentemente sus niveles están elevados en los casos de crecimiento anormal del vello (hirsutismo) y en la virilización. A diferencia de los andrógenos adrenales, dehidroepiandrosterona y su sulfato, la androstenediona circulante se origina de las glándulas adrenales y los ovarios. Los niveles plasmáticos aumentan en forma constante desde aproximadamente el séptimo año de vida, y luego declinan gradualmente después de los treinta años. La androstenediona exhibe una variación diurna, siendo mayor en la mañana, y también una variación cíclica durante el ciclo menstrual que es mayor cerca de la mitad del ciclo. Durante el embarazo hay un aumento en el nivel plasmático. Principio del análisis El procedimiento Coat-A-Count Androstenediona Directa es un imnunoensayo competitivo basado en tubos recubiertos con anticuerpos. La 125 androstenediona marcada con I compite con la androstenediona de la muestra del paciente por los sitios de unión en los anticuerpos. Después de la incubación, la androstenediona unida se separa de la androstenediona libre por decantación Luego el tubo se lee en un contador gama. La cantidad de cuentas está inversamente relacionada con la cantidad de androstenediona presente en la muestra del paciente. La cantidad de androstenediona en la muestra se determina comparando las cuentas con una curva de calibración. Sin extracción: Las determinaciones de androstenediona realizadas por el método 18 Coat-A-Count Androstenediona Directa no requieren extracción ni cromatografía. Reactivos a pipetear: 1 Tiempo total de incubación: 2 horas. Cuentas totales en la iodización: aproximadamente 90 000 cpm. Advertencias y precauciones Para uso diagnóstico in vitro. Reactivos: Almacenar a 2–8°C en una cámara preparada para almacenar material radioactivo. Desechar de acuerdo a la legislación en vigor. No usar los reactivos después de su fecha de caducidad. Algunos componentes suministrados en el kit pueden contener material de origen humano y/o otros componentes potencialmente peligrosos que necesiten ciertas precauciones. Siga las precauciones universales y manipule todos los componentes como si fueran capaces de transmitir agentes infecciosos. Los materiales derivados de sangre humana han sido analizados y son negativos para sífilis; para anticuerpos frente al HIV 1 y 2; para el antígeno de superficie de hepatitis B y para los anticuerpos de hepatitis C. Se ha usado azida sódica, en concentraciones menores de 0,1 g/dl, como conservante. Para su eliminación, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la constitución de residuos de azidas metálicas, potencialmente explosivas, en las cañerías de cobre y plomo. Agua: Usar agua destilada o desionizada. Radioactividad Una copia de cualquier certificado de licencia de radioisótopos (específico o general) emitido a la aduana de los EE.UU. se registrará en los ficheros de Siemens Healthcare Diagnostics antes de que se puedan enviar kits o componentes conteniendo material radioactivo. Estos materiales radioactivos pueden adquirirse por cualquier cliente con la licencia específica apropiada. Con una licencia general, estos materiales radioactivos pueden adquirirse solo por médicos, veterinarios en la práctica de la medicina veterinaria, laboratorios clínicos y Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) hospitales — y estrictamente para la clínica in vitro o tests de laboratorio que no conlleven la administración interna o externa de material radioactivo o su radiación a humanos u otros animales. Su adquisición, recepción, almacenaje, uso, trasferencia y desecho están regulados y se expenderá una licencia (general o específica) de la Comisión Nuclear de EE.UU. o de un Estado con el NRC para su consiguiente control. Manejar los materiales radioactivos de acuerdo a los requerimientos de su licencia general o específica. Para minimizar la exposición a la radiación, el usuario debe adherirse al cuarto conjunto de guías publicadas por el National Bureau of Standards con el nombre Safe Handling of Radioactive Materials (Handbook No. 92, issued March 9, 1964) y en las consiguientes publicaciones de las autoridades Federales o Estatales. Limpiar y decontaminar rápidamente las superficies afectadas. Evitar la generación de aerosoles. Eliminar los residuos sólidos radioactivos de acuerdo con los requerimientos de su licencia. Licencias generales (NRC Form 483) pueden eliminar sus residuos sólidos radioactivos como residuos no radioactivos, después de retirar las etiquetas. Licencias específicas (NRC Form 313) se deben referir al Título 10, Código de Regulaciones Federales, Parte 20. Las licencias en Estados Asociados deben referirse a las normativas de su correspondiente Estado. Licencias generales pueden eliminar sus residuos líquidos radioactivos contenidos en este tipo de productos como cualquier otro material líquido, quitando las etiquetas de los contenedores y procesándolos como residuos sólidos. Licencias específicas pueden eliminar pequeñas cantidades de residuos líquidos radioactivos contenidos en este tipo de productos como cualquier otro material líquido. Refiérase a la normativa aplicable a su laboratorio. Materiales Suministrados: Preparación Inicial Tubos recubiertos con anticuerpo antiandrostenediona directa (TAN1) Tubos de polipropileno recubiertos con anticuerpo policlonal anti-androstenediona y embalados en bolsas de cierre Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) hermético. Almacenar refrigerados y protegidos de la condensación, cerrando cuidadosamente las bolsas después de su uso. Estable a 2–8°C hasta la fecha de caducidad impresa en la bolsa. Color: naranja fluorescente. TKAN1: 100 tubos. 125 I Androstenediona Directa (TAN2) 105 ml de androstenediona iodizada, con conservante. Estable a 2–8°C durante 30 días después de su apertura, o hasta la fecha de caducidad impresa en el vial. TKAN1: 1 vial. Calibradores de androstenediona directa (TAN3–8) Seis viales, marcados A a F, con distintas concentraciones de androstenediona en una matriz de suero humano, con conservante. El calibrador cero A contiene 5 ml, y los calibradores restantes, B a F, contienen cada uno 2 ml. Estable a 2–8°C durante 30 días después de abrise, o hasta 6 meses (alicuotados) a –20°C. TKAN1: 1 juego. Los calibradores no cero representan respectivamente 0,15, 0,4, 1,5, 4,0 y 10 nanogramos de androstenediona por mililitro (ng/ml); equivalentemente: 0,52, 1,4, 5,2, 14 y 35 nanomoles por litro (nmol/l). Los puntos de calibración intermedios se pueden obtener mezclando los calibradores en las proporciones adecuadas. Controles de androstenediona directa (TANC1–2) 2 viales (cada uno de 2 ml) de Control de Androstenediona Directa 1 y 2, con distintas concentraciones de androstenediona en suero humano procesado, con conservantes. Estable a 2–8°C durante 30 días después de su apertura, o hasta 6 meses (alicuotados) a –20°C. Para conocer las concentraciones respectivas, consulte el prospecto del control de androstenediona directa. TKAN1: 1 juego. Materiales Requeridos pero no suministrados Contador Gamma compatible con los tubos de 12 x 75 mm. Vortex 19 Radioinmunoanálisis Tubos de ensayo de polipropileno de 12 x 75 mm para su uso como tubos T y NSB, disponibles en Siemens Healthcare Diagnostics (Referencia: PPO) Micropipetas con puntas desechables: 100 µl y 1,0 ml. Rack de decantación – disponible en Siemens Healthcare Diagnostics (Referencia: FDR) descongelación de muestras congeladas calentándolas en un baño de agua. Procedimiento del Radioinmunoanálisis Todos los componentes deben llevarse a temperatura ambiente (15–28°C) antes de su uso. 1 Papel para gráficas Logit-Log Recogida de la muestra El paciente no necesita estar en ayunas así como tampoco cualquier otro tipo de preparación. Recoger la sangre por 16 venipunción en tubos no tratados, y separar el suero de las células registrando la hora en que se tomó la muestra. También puede usarse plasma heparinizado y con EDTA. Las muestras ictericas o ampliamente contaminadas pueden dar resultados erróneos. Se recomienda el uso de una ultracentrífuga para aclarar las muestras lipémicas. Tubos de ensayo: Marcar cuatro tubos de ensayo de polipropileno (sin recubrir) 12 x 75 mm. Tubos T (cuentas totales) y NSB (unión no específica) por duplicado. Al ser característicamente baja la unión no específica en el ensayo Coat-A-Count, los tubos NSB pueden ser omitidos sin comprometer la precisión y control de calidad del ensayo. Tubos recubiertos: Marcar doce tubos recubiertos de anticuerpo frente a la Androstenediona directa: A (máxima unión) y B hasta F por duplicado. Marcar tubos recubiertos de anticuerpo adicionales, también por duplicado, para controles y muestras de pacientes. Calibrador ng/ml nmol/l Las muestras hemolizadas podrían indicar una mala manipulación de la muestra antes de ser recibida por el laboratorio; en este caso, los resultados deben interpretarse con precaución. A (MB) 0 0 B 0,15 0,52 C 0,4 1,4 D 1,5 5,2 Los tubos para recoger sangre de distintos fabricantes pueden producir valores diferentes, dependiendo del material del tubo y de los aditivos, incluyendo barreras de gel o barreras físicas, activadores de la coagulación y/o anticoagulantes. El Androstenediona Directa Coat-A-Count no ha sido analizado con todos los distintos tipos de tubos. Para obtener detalles sobre los tipos tubos que se han analizado, consulte la sección de Tipos de Muestras Alternativos. E 4,0 14 F 10 35 Volumen requerido: 100 µl de suero o plasma por tubo. Almacenamiento: 2–8°C durante 2 días, o hasta 2 meses congelado a –20°C. Antes del ensayo, llevar todas las muestras a temperatura ambiente (15– 28°C) y mezclar por inversión. Alicuotar, si es necesario, para evitar la congelación y descongelación repetida. No intentar la 20 2 Pipetear 100 µl del calibrador cero A en los tubos NSB y A, y 100 µl de cada calibrador no cero en los tubos marcados B a F. Pipetear 100 µl de cada control y muestra de los pacientes en los tubos preparados. Pipetear directamente en el fondo del tubo. Es una buena práctica el uso de micropipetas con punta desechables, cambiando las puntas entre las muestras, para evitar la contaminación por arrastre. Las muestras de los pacientes que se espera que contengan concentraciones de androstenediona mayores que la del calibrador más Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) alto (10 ng/ml) se deberán diluir con el calibrador cero antes del ensayo. 3 125 Añadir 1,0 ml de I Androstenediona Directa a cada tubo. Mezclar en el Vortex. No se debe tardar más de 10 minutos durante la dispensación del trazador. Dejar los tubos T a un lado para su contaje (paso 6); no requieren más procesamiento posterior. 4 Incubar durante 2 horas a temperatura ambiente 5 Decantar. Eliminar toda la humedad visible para mejorar la precisión. Usando un rack de decantación de espuma, decantar los contenidos de todos lo tubos (excepto los tubos T), y permitir que drenen durante 2 o 3 minutos. Luego, golpear los tubos sobre papel absorbente para eliminar todas las gotas residuales. 6 Contar durante 1 minuto en un contador gamma. Cálculo de resultados Para obtener resultados en términos de concentración a partir de una representación logit-log de la curva de calibración, primero hay que calcular para cada pareja de tubos las cuentas medias por minuto corregidas con el NSB: Cuentas netas = (Media CPM) menos (Media NSB CPM) Entonces, determinar la unión de cada pareja de tubos como un porcentaje de la unión máxima (MB), tomando las cuentas corregidas con el NSB de los tubos A como 100%: Porcentaje de Unión = (Cuentas netas / Cuentas MB netas) × 100 El cálculo puede simplificarse omitiendo la corrección de las uniones no específicas; las muestras dentro del rango de calibración van a dar prácticamente el mismo resultado cuando el porcentaje de unión se calcula directamente a partir de la media de las CPM). Usando papel gráfico logit-log, representar el porcentaje de unión en el eje vertical frente a la concentración en el eje horizontal (logarítmico) para cada Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) calibrador no cero y dibujar la línea que pase por esos puntos aproximadamente. Los resultados de las muestras pueden ser leídos en la curva por interpolación. Es una buena práctica inspeccionar los resultados para comprobar la concordancia entre los replicados, y realizar una gráfica de la curva de calibración (aunque los cálculos se realicen por ordenador) para ver la transformación más apropiada a usar y las posibles desviaciones en los puntos de calibración. También, recomendamos mantener un registro de los siguientes parámetros de la reducción de datos: T = Cuentas totales (como cuentas por minuto) %NSB = 100 × (Media cuentas NSB / cuentas totales) %MB = 100 × (Cuentas netas / Cuentas totales) Y los cortes 20, 50 y 80 por ciento, donde 20% = Concentración al 20 por ciento de unión, etc. Otras aproximaciones, por ejemplo, logística 4-parámetros, también son aceptables. Ver Dudley RA, et al. “Guidelines for immunoassay data reduction”. Clin Chem 1985;31:1264-71. Ejemplo: Sólo como ilustración, no se puede utilizar para calcular resultados. (Ver la tabla "Example Run"). Control de Calidad Se deberán analizar rutinariamente controles (o pools de suero) de por lo menos dos niveles distintos de concentración de androstenediona –bajo y alto– como si fuesen concentraciones desconocidas. Los Controles de Androstenediona Directa que se suministran con el kit deberán usarse como material de control de calidad para monitorear el rendimiento del ensayo. Informar los resultados de los pacientes sólo si los resultados de los controles para este ensayo están dentro de los criterios de aceptabilidad establecidos por su laboratorio. Es una buena práctica de laboratorio registrar para cada ensayo los números de lote de los componentes usados, así como las fechas en las que fueron abiertos por primera vez y reconstituidos. También recomendamos el uso de 21 gráficos diarios de los controles — como se describe, por ejemplo, en Westgard JO, et al. A multi-rule chart for quality control. Clin Chem 1981;27:493-501. Las muestras repetidas pueden servircomo una herramienta de valor adicional para monitorizar la precision interensayo, y las parejas de los tubos del control pueden espaciarse a lo largo de la tanda del ensayo para verificar la ausencia de deriva significativa. Valores esperados Hombres: Se realizó un estudio del intervalo de referencia en muestras de suero usando el procedimiento Coat-ACount Androstenediona Directa. El estudio incluyó a 124 hombres, los resultados indicaron un rango 95% central de aproximadamente 0,8 a 3,0 ng/ml, con una mediana de 1,8 ng/ml. Mujeres: En un estudio de 122 mujeres, los resultados indicaron un rango 95% central de aproximadamente 0,5 a 3,7 ng/ml, con una mediana de 1,7 ng/ml. Los laboratorios deben considerar estos resultados sólo como una guía. Cada laboratorio deberá establecer sus propios intervalos de referencia. Limitaciones El folículo de De Graaf en crecimiento secreta androstenediona, y su producción aumenta al doble cerca de la mitad del ciclo. Por lo tanto, las muestras que se recojan durante este momento pueden producir resultados de androstenediona por arriba del límite superior 95% 1,2 central. Se ha observado variación diurna. Por ejemplo, en 11 hombres sanos de 18 a 30 años de edad, la concentración de androstenediona media de 24 horas fue 0,93 ng/ml, con una amplitud circadiana equivalente al 42% de la media. El punto más alto ocurrió en la mañana a las 07:10 horas y el punto más bajo ocurrió a la noche a las 23:00 horas; también hubo una fase alta secundaria a las 16:35 horas. El intervalo de confianza del 95% para el punto más alto y el punto más bajo 13 fue de 68 minutos. Por consiguiente, se deberá registrar la hora en que se recoja la muestra. 22 Es importante recordar que el ejercicio puede tener un efecto significativo sobre los niveles de androstenediona circulante. Por ello, en un estudio de 18 jugadores profesionales de fútbol, la concentración media de androstenediona aumentó de un valor basal de aproximadamente 0,9 ng/ml a 1,8 ng/ml al final del juego, declinando a 14 0,7 ng/ml noventa minutos más tarde. En otro estudio, el nivel medio de androstenediona para 20 hombres en un entrenamiento moderado aumentó significativamente de un valor basal medio de 1,11 ng/ml a 1,41 ng/ml cinco minutos 15 después de hacer una hora de natación. Características analíticas Para obtener datos representativos del rendimiento del kit Coat-A-Count Androstenediona Directa, ver la sección Tablas y Gráficos. Excepto cuando se indica, todos los resultados en las secciones siguientes se obtuvieron en muestras de suero. Los resultados se expresan en ng/ml. Factor de Conversión: ng/ml × 3,4916 → nmol/l Intervalo de calibración: 0,15 a 10 ng/ml (0,52 a 35 nmol/l), Sensibilidad analítica: 0,04 ng/ml (0,14 nmol/l), Precisión intraensayo (dentro de una tanda) Las estadísticas se calcularon para las muestras a partir de los resultados de 20 pares de tubos en una sola tanda de análisis. (Ver la tabla "Intraassay Precision"). Precisión interensayo (de una tanda a otra) Las estadísticas se calcularon para las muestras a partir de los resultados de pares de tubos de 20 ensayos distintos. (Ver la tabla "Interassay Precision".) Especificidad: El antisuero Coat-A-Count Androstenediona Directa es altamente específico para la androstenediona, con una reactividad cruzada extremadamente baja para otros esteroides naturales o fármacos terapéuticos que pueden estar presentes en las muestras de los pacientes. (Ver la tabla "Specificity".) Linealidad: Las muestras fueron analizadas con varias diluciones. (Ver la tabla "Linearity" para resultados representativos.) Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Efecto deriva: Ninguno hasta aproximadamente 400 tubos. (Ver tabla "End-of-Run Effect"). Medias: 2,5 ng/ml (Coat-A-Count Directo) 2,6 ng/ml (Coat-A-Count Extracción) Recuperación: Se analizaron muestras cargadas 1 en 19 con cinco soluciones de androstenediona (4, 10, 20, 40 y 100 ng/ml). (Ver la tabla "Recovery" para resultados representativos). 2° comparación del método: En otro experimento, se analizaron muestras de treinta y ocho pacientes mediante el procedimiento Coat-A-Count Androstenediona Directa y un radioinmunoanálisis directo comercialmente disponible de tubos recubiertos para androstenediona (Kit A), con concentraciones de androstenediona de aproximadamente 0,74 a 3,48 ng/ml. Por regresión lineal. (Ver el gráfico “Method Comparison 2”). Bilirrubina: Puede causar una depresión en los valores. (Ver la tabla “Bilirubin”.) Hemólisis: La presencia de eritrocitos hasta concentraciones de 30 µl/ml no tiene efecto en los resultados, en lo concerniente a la precisión del ensayo. Lipemia: La lipemia puede interferir con el ensayo. (Ver la tabla “Lipemia”.) Tipo de Muestra Alternativa: para evaluar el efecto de los diferentes tipos de muestras alternativos, se recogió sangre de 40 voluntarios en tubos normales, tubos con Heparina, tubos con EDTA y ® tubos vacutainer SST de Becton Dickinson. Todas las muestras fueron analizadas mediante el procedimiento Coat-A-Count Androstenediona Directa. (Heparina) = 0,95 (Suero) + 0,02 ng/ml r = 0,997 (EDTA) = 1,02 (Suero) – 0,01 ng/ml r = 0,997 (CAC Directo) = 1,33 (Kit A) + 0,054 ng/mL r = 0,860 Medias: 2,2 ng/ml (Coat-A-Count Directo) 1,6 ng/ml (Kit A) Asistencia técnica Póngase en contacto con el distribuidor nacional. www.siemens.com/diagnostics El Sistema de Calidad de Siemens Healthcare Diagnostics Inc. está certificado por la ISO 13485:2003. (SST) = 1,00 (tubos simples) – 0,15 ng/ml r = 0,996 Français Medias: 4,1 ng/ml (Suero) 3,9 ng/ml (Heparina) 4,2 ng/ml (EDTA) 3,9 ng/ml (SST) Coat-A-Count Androstènedione directe Los resultados muestran que el suero y el plasma con EDTA y heparinizado producen resultados esencialmente equivalentes. 1° comparación del método: Se analizaron simultáneamente 60 muestras de pacientes mediante el procedimiento Coat-A-Count Androstenediona Directa y el kit Coat-A-Count Androstenediona (método con extracción), con concentraciones de androstenediona de 0,25 a aproximadamente 11 ng/ml. Por regresión lineal. Ver el gráfico “Method Comparison 1”). (CAC Directo) = 0,81 (CAC Extracción) + 0,39 ng/ml r = 0,952 Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Domaine d'utilisation: Coat-A-Count Androstènedione directe est un dosage radioimmunologique en phase solide pour la mesure quantitative directe (sans 4 extraction) de l'Δ -androstènedione dans le sérum ou plasma EDTA ou hépariné. Réservé à un usage diagnostique in vitro. Référence catalogue : TKAN1 (100 tubes) Le coffret de 100-tubes contient moins de 6.5 micro-curies (241 kilobecquerels) d' androstènedione marquée à l'iode 125. Introduction La Δ4-Androstènedione est un stéroïde qui sert de précurseur majeur à la testostérone et l'estrone. L'intérêt clinique 23 vient du fait qu'il est souvent élevé dans les cas d'hirsutisme et de virilisation. A la différence des androgènes surrénaliens déhydroépiandrostérone (DHEA) et sa forme sulfatée (DHEA-S), l'androstènedione circulant provient pour une part des glandes surrénales et pour l'autre des ovaires. Le taux plasmatique augmente régulièrement au cours des 7 premières années de la vie, ensuite graduellement décline après 30 ans. La Δ4-Androstènedione présente des variations diurnes, étant élevée le matin avec des variations cycliques au cours du cycle menstruel, pic au milieu du cycle. Durant la grossesse, le taux plasmatique est augmenté. Principe du test La technique Coat-A-Count Androstènedione directe est un dosage radioimmunologique en phase solide. Au cours de l'incubation, il y a compétition entre l'androstènedione marquée à l'iode 125 et l'androstènedione de l'échantillon, vis-à-vis des sites de l'anticorps. L'anticorps étant fixé sur la paroi des tubes en polypropylène, après incubation, il suffit d'éliminer le surnageant par décantation pour isoler facilement la fraction radioactive lié à l'anticorps. Le tube est ensuite compté sur un compteur gamma, les cpm étant inversement proportionnels à la concentration de l'androstènedione présente dans l'échantillon qui sera déterminée à l'aide d'une courbe standard. Aucune Extraction: le dosage de la l'androstènedione avec la technique Coat-A-Count ne nécessite pas une extraction ou chromatographie préalable. Réactifs à distribuer: 1 Temps d'incubation totale : 2 heures. Activité totale en début de marquage : environ 90 000 cpm. Précautions d'emploi Réservé à un usage diagnostique in vitro. Réactifs : Conserver à +2/+8°C dans un réfrigérateur autorisé à recevoir du matériel radioactif. Éliminer les déchets conformément aux lois en vigueur. Ne pas utiliser les réactifs au delà de leur date d'expiration. 24 Certains composants fournis avec ce coffret peuvent contenir des agents humains et/ou d'autres éléments potentiellement infectieux qui nécessitent certaines précautions. Respecter les précautions d'emploi et manipuler tous les composants du coffret comme des produits potentiellement infectieux. Les réactifs dérivés de produits humains et utilisés dans ce coffret ont subi un test sérologique pour la Syphilis et des tests de dépistage pour les anticorps antiVIH1 et 2, anti-HCV et pour l'antigène de surface de l'hépatite B, qui se sont tous avérés négatifs. De l'azide de sodium à des concentrations inférieures à 0,1 g/dl a été ajouté comme conservateur ; lors de l'élimination, l'évacuer avec de grandes quantités d'eau pour éviter une accumulation d'azides métalliques explosifs dans les canalisations. Eau : utiliser de l'eau distillée ou désionisée. Radioactivité Ce coffret de réactif est reservé à l'usage in vitro (Autorisation DGSNR). Règles de base de protection contre les rayonnements ionisants et précautions d'emploi. Ce produit radioactif ne peut être reçu, acheté, détenu ou utilisé que par des personnes autorisées à cette fin et dans des laboratoires dotés de cette autorisation. Cette solution ne peut en aucun cas être administrée à l'homme ou aux animaux. Respecter impérativement les dates de péremption indiquées sur l'emballage extérieur et sur les étiquettes des différents réactifs du coffret. Tous les réactifs, dont les tubes revêtus d'anticorps, doivent être conservés à + 4/+ 8° C dans leur conditionnement d'origine avant d'être utilisés. L'achat, la possession, l'utilisation et l'échange de matières radioactives sont soumis aux réglementations en vigueur dans le pays de l'utilisateur. Les règles de base de protection contre les rayonnements ionisants doivent être respectées selon des procédures en vigueur. Ne pas pipeter des solutions radioactives avec la bouche. Eviter le contact direct avec la peau ou les muqueuses de tout produit radioactif en utilisant des blouses et gants Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) de protection. Toute manipulation de matières radioactives se fera dans un local ad hoc éloigné de tout passage. Les produits radioactifs seront stockés dans leur conditionnement d'origine dans un local approprié. Un cahier de réception et de stockage de produits radioactifs sera tenu à jour. Le matériel de laboratoire et la verrerie qui ont été contaminés doivent être éliminés au fur et à mesure afin d'éviter une contamination croisée de plusieurs isotopes. Chaque contamination ou perte de substance radioactive devra être réglée selon les procédures établies. Toute mise aux déchets de matière radioactive se fera en accord avec les réglementations en vigueur. Ne pas manger, ni boire, ni fumer, ni appliquer des cosmétiques dans les laboratoires où des produits radioactifs sont utilisés. Les réactifs radioactifs ne peuvent être vendus qu'à des personnes habilitées à manipuler des substances radioactives. Materiel Fourni : Préparation Initiale Tubes revêtus d'anticorps antiAndrostènedione (TAN1) Tubes en polypropylène revêtus d'anticorps polyclonaux de lapin, antiandrostènedione dans des sachets à glissière. Les conserver réfrigérés et protégés de l'humidité, bien refermer les sachets après utilisation. Stable à +2/+8°C jusqu'à la date d'expiration notée sur le sachet. Couleur: orange fluo. TKAN1: 100 tubes. Androstènedione marquée à l'iode 125 (TAN2) Chaque flacon contient 105 ml d' androstènedione marquée à l'iode 125, avec conservateurs Stable à +2/+8°C pendant 30 jours après ouverture, ou jusqu'à la date d'expiration notée sur le flacon. TKAN1: 1 flacon. Standards Androstènedione (TAN3–8) Six flacons de standards de A à F d' androstènedione prêts à l'emploi, en matrice sérique humaine, avec conservateurs, le standard A contient 5,0 ml, et les standards B à F contiennent 2,0 ml chacun. Stable à +2/ +8 °C pendant 30 jours après ouverture, ou 6 mois Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) (aliquoté) à –20 °C. TKAN1: 1 jeu. Les standards contiennent respectivement, 0, 0,15, 0,4, 1,5, 4,0 ; et 10 nanogrammes d'androstènedione par millilitre (ng/ml) en matrice sérique humaine traitée équivalents à : 0, 0,52, 1,4, 5,2, 14 ; et 35 nanomoles par litre (nmol/l). Des points intermédiaires peuvent être obtenus en mélangeant des standards dans des proportions compatibles. Contrôles Androstènedione (TANC1–2) 2 flacons (2 mL chacun) d'androstènedione (Contrôle 1 et 2), contenant différentes concentrations d' androstènedione en matrice sérique humaine, avec conservateurs. Stable à +2/ +8 °C pendant 30 jours après ouverture, ou 6 mois (aliquoté) à –20 °C. Se reporter à la notice incluse pour les valeurs exactes des contrôles. TKAN1: 1 jeu. Matériel requis mais non fourni Compteur Gamma – permettant l'utilisation de tubes standards 12x75 mm Agitateur de type Vortex Dosage radioimmunologique Tubes secs en polypropylène 12x75 mm – à utiliser pour les tubes LNS, disponibles chez Siemens Healthcare Diagnostics (Référence catalogue : PPO) Micropipettes: 100 µl et 1,0 ml. Un portoir de décantation – disponible chez Siemens Healthcare Diagnostics (Référence catalogue : FDR) Papier graphe Logit-log Recueil des échantillons Le patient n'a pas besoin d'être à jeun et aucune préparation spéciale n'est requise. 16 Prélever le sang par ponction veineuse et le recueillir sur tubes secs (sans anticoagulant) EDTA ou héparinés, en notant l'heure de prélèvement. Séparer le sérum ou le plasma des cellules, par centrifugation. Des échantillons ictériques ou fortement contaminés peuvent donner des résultats érronés. 25 Il est recommandé de clarifier les échantillons hyperlipémiques par ultracentrifugation. également en duplicate, pour les contrôles et les échantillons patients. Standards Des échantillons hémolysés peuvent être révélateurs d'une préparation inadéquate du prélèvement avant son envoi au laboratoire ; il faudra donc interpréter les résultats avec prudence. Des tubes pour prélèvements sanguins provenant de fabricants différents peuvent donner des résultats différents, selon les matériaux et additifs utilisés, y compris gels ou barrières physiques, activateurs de la coagulation et/ou anticoagulants. Le coffret Androstènedione Coat-A-Count n'a pas été testé sur tous les types de tubes possibles. Veuillez consulter le chapitre intitulé Autres Types d'Échantillons pour plus de renseignements sur les tubes qui ont été évalués. 2 Volume nécessaire : 100 µl de sérum ou plasma par tube 3 26 0 0,15 0,52 C 0,4 1,4 D 1,5 5,2 E 4,0 14 F 10 35 Pipeter 100 µl du standard zéro A dans les tubes de LNS et les tubes A (B0). Pipeter 100 µl de chacun des autres standards, contrôles et échantillons de patients dans les tubes correspondants préparés. Pipeter directement au fond du tube. Ajouter 1,0 ml d' Androstènedione marquée à l'iode 125 dans chaque tube. Vortexer. 4 Incuber 2 heures à température ambiante. (15–28°C) 5 Décanter complétement. La valeur du LNS dans la technique Coat-A-Count étant très faible, elle peut être négligée sans que la précision ou le contrôle de qualité ne soient modifiés. Tubes revêtus d'anticorps: Etiqueter 12 tubes revêtus d'anticorps antiAndrostènedione, A (liaison maximale B0) et de B à F en duplicate. Etiqueter les tubes revêtus d'anticorps antiAndrostènedione supplémentaires, 0 B Le temps d'addition du traceur ne doit pas dépasser 10 minutes. Les tubes T peuvent être mis de côté jusqu'au comptage (étape 6); ils n'ont pas d'autre traitement. Tous les composants doivent être à température ambiante avant leur utilisation (15–28°C). Tubes secs : Etiqueter deux séries de tubes (non revêtus) en polypropylène 12x75 mm tubes T et LNS (Liaison Non Spécifique) en duplicate. A (B0) Les échantillons de patients suspectés de contenir des concentrations d' androstènedione supérieures au standard le plus élevé (10 ng/ml) doivent être dilués avec le standard zéro avant le dosage. Protocole de dosage 1 nmol/l Il est bon d'utiliser des embouts de micropipettes jetables, de changer d'embout entre les échantillons de manière à éviter toute contamination. Conservation: 2 jours à +2/+8° C ou 2 mois à –20°C. Avant le dosage, laisser les échantillons revenir à température ambiante (15– 28°C), mélanger doucement par rotations ou retournement. Aliquoter, si nécessaire, afin d'éviter de répéter les cycles congélation / décongélation. Ne pas tenter de décongeler les spécimens congelés à l'aide d'un bain marie. ng/ml Eliminer toute trace d'humidité pour améliorer la précision du dosage. A l'aide d'un portoir de décantation, décanter ou aspirer le contenu de tous les tubes (excepté les tubes T) et laisser les tubes retournés pendant 2 ou 3 minutes. Puis appliquer les fortement sur du papier absorbant afin d'éliminer les gouttelettes résiduelles. 6 Compter 1 minute dans un compteur gamma. Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Calcul des Résultats Afin d'obtenir des résultats en concentrations à partir d'une représentation logit-log de la courbe de calibration, calculer pour chaque doublet de tubes les coups corrigés: moyenne cpm-moyenne des cpm du LNS: CPM corrigés = (Moyenne cpm) moins (Moyenne cpm LNS) Puis déterminer pour chaque doublet la capacité de liaison en pourcentage de liaison maximale (LM), corrigée des cpm dus au LNS des tubes A tubes considérés à 100%: % liaison = (cpm corrigés / cpm corrigés LM) × 100 Les échantillons dans la gamme de calibration donnent des résultats pratiquement identiques quand la capacité de liaison est calculée directement à partir de la moyenne des CPM. : sans correction de LNS. En utilisant un papier logit-log, on porte en ordonnée les pourcentages de liaison en fonction des concentrations des calibrateurs qui ne sont pas à zéro, en abscisse. On trace une ligne droite passant approximativement par ces points. Les concentrations des échantillons inconnus sont déterminées par interpolation sur la courbe standard. Il est bon de vérifier les doublets et de construire une représentation graphique de la courbe de calibration (même si celleci est faite par ordinateur) avec les différentes valeurs de façon à visualiser le meilleur tracé et c'est une façon de détecter les points deviants. Nous recommandons aussi de suivre les paramètres suivants : T = Activité totale (cpm) %LNS = 100 × (Moyenne des cpm du LNS / cpm Totaux) %LM = 100 × (cpm corrigés / cpm totaux) Et les intercepts à 20, 50 et 80 % avec 20% = Concentration à 20% de liaison, etc. Note: d'autres approches sont possibles comme l'intégration de paramètres 4-p logistique. Se rapporter à Dudley RA, et al. Guidelines for immunoassay data reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71. Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Exemple de série : A titre d'exemple uniquement, et non pour calculer des résultats provenant d'une autre série. (Voir le tableau « Example Run ».) Contrôle de Qualité Des contrôles (ou pools de sérums) avec au moins deux taux de concentration de androstènedione haut et bas doivent être dosés en routine comme des échantillons inconnus. Les contrôles fournis avec ce coffret peuvent être utilisés pour cet usage. Les résultats de patient ne doivent être validés que si les résultats des contrôles correspondent aux critères d'acceptation établis par votre laboratoire. Il est bon d'enregistrer pour chaque dosage les numéros de lots des composants utilisés ainsi que la date à laquelle ils ont été reconstitués ou ouverts. Nous recommandons également de noter jour après jour les résultats des contrôles – comme décrit par exemple dans Westgard JO, et al. A multi-rule chart for quality control. Clin Chem 1981;27:493501. Noter qu'un redosage d'échantillon peut être précieux pour suivre la précision inter essai, et que les doublets de tubes contrôle peuvent être espacés de façon à vérifier l'absence de dérive significative. Valeurs de référence Hommes: Une étude comportant 124 hommes donne avec la technique Coat-A-Count Direct Androstenedione des valeurs physiologiques comprises entre 0,8 à 3,0 ng/ml à 95 % d'intervalle de confiance, avec une médiane à 1,8 ng/ml. Femmes: Une étude comportant 122 femmes montrent des valeurs physiologiques de 0,5 à 3,7 ng/ml à 95 % d'intervalle de confiance, avec une médiane à 1,7 ng/ml. Ces valeurs sont données à titre indicatif uniquement. Chaque laboratoire devra établir ses propres valeurs de référence. Limites Le follicule de Graaf en croissance sécrète de l'androstènedione, doublant son taux basal en milieu de cycle. Les échantillons prélevés durant cette période ont des résultats en androstènedione se situant 27 dans la partie supérieure des valeurs 1,2 physiologiques définies à 95 %. Des variations diurnes ont été observées. Par exemple, chez 11 hommes de 18 à 30 ans, la concentration moyenne en androstènedione de 24 heures est de 0,93 ng/ml, avec une amplitude circadienne équivalente à 42 % de la moyenne. L'acrophase majeure se rencontre le matin vers 7 h 10 ; le nadir majeur est observé vers 23 heures; et il existe aussi une seconde acrophase vers 16h35. L'intervalle de confiance pour 13 acrophase/nadir est de 68 minutes. En conséquence il est nécessaire de noter l'heure du prélèvement. Ne pas oublier que l'exercice physique a un impact significatif sur le taux d'androstènedione circulant. Ainsi, dans une étude portant sur 18 joueurs professionnels de football, la moyenne du taux d'androstènedione est augmentée par rapport au taux basal, et se situe approximativement de 0,9 ng/ml à 1,8 ng/ml à la fin du match, atteignant 14 0,7 ng/ml 90 minutes plus tard. Dans une autre étude, la moyenne du taux d'androstènedione pour 20 hommes moyennement entraînés augmente significativement par rapport au taux basal de 1,11 ng/ml à 1,41 ng/ml cinq minutes 15 après 1 heure de natation. Performances du test Consulter les tableaux et graphiques pour obtenir les données représentatives des performances de ce test. Les résultats sont exprimés en nanogrammes d' androstènedione par millilitre (ng/ml). Tous les résultats ont été obtenus à partir d'échantillons sériques. Facteur de conversion : ng/ml × 3,4916 → nmol/l Intervalle de linéarité : 0,15 – 10 ng/ml (0,52 – 35 nmol/l), Sensibilité analytique : 0,04 ng/ml (0,14 nmol/l), Précision intra-dosage (au sein d'une même série) Les résultats ont été calculés pour chacun des 8 échantillons à partir des résultats de 20 tubes en une même série. (Voir le tableau « Intraassay Precision ».) Précision inter-dosage (entre plusieurs séries) Les résultats ont été calculés pour 28 chacun des 8 échantillons à partir des résultats de 20 séries en duplicate. (Voir le tableau « Interassay Precision ».) Spécificité : L'antisérum utilisé dans le coffret Coat-A-Count Direct Androstenedione est très spécifique pour l' androstènedione, avec des réactions croisées particulièrement faibles pour les autres stéroïdes présents naturellement dans le sérum ou provenant de médications. (Voir le tableau "Specificity") Test de dilution : Des échantillons ont été dosés à différentes concentrations. (Voir le tableau « Linearity » pour des données représentatives.) Effet de la position des tubes : Aucun jusqu'à 400 tubes. (Voir le tableau « Endof-Run Effect ».) Test de récupération : 5 échantillons sont mélangés dans la proportion 19/1 avec 5 solutions d' androstènedione de concentrations (4, 10, 20, 40 et 100 ng/ml) puis dosés avec le coffret Coat-A-Count. Direct Androstenedione. (Voir le tableau « Recovery » pour des données représentatives.) Bilirubine : La présence de bilirubine peut amener une diminution des résultats. (Se reporter au tableau “Bilirubin”.) Hémolyse : La présence d'agrégat d'hématies jusqu'à une concentration de 30 µl/ml, n'a aucun effet sur les résultats quant à la précision du dosage. Lipémie : Des échantillons trés lipèmiques peuvent amener une diminution des résultats. (Se reporter au tableau “Lipemia”.) Autres types d'échantillons: pour estimer l'effet de l'utilisation de différents type d'échantillons, 40 volontaires ont été prélevés sur tubes secs, héparinés, EDTA ® et sur tubes vacutainer SST Becton Dickinson. Tous les échantillons ont été dosés avec le coffret Coat-A-Count Direct Androstenedione. Les résultats analysés par régression linéaire donnent : (Héparine) = 0,95 (Sérum) + 0,02 ng/ml r = 0,997 (EDTA) = 1,02 (Sérum) – 0,01 ng/ml r = 0,997 (SST) = 1,00 (tubes ordinaires) – 0,15 ng/ml r = 0,996 Moyennes : 4,1 ng/ml (Sérum) Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) 3,9 ng/ml (Héparine) 4,2 ng/ml (EDTA) 3,9 ng/ml (SST) Codice: TKAN1 (100 provette) Ce dosage donne les mêmes résultats sur sérum, plasma hépariné et plasma EDTA Comparaison de méthodes N°1: La technique Coat-A-Count Direct Androstenedione a été comparée avec le dosage Coat-A-Count Androstenedione kit (méthode avec extraction), pour des concentrations allant de 0,25 à 11 ng/ml. Par régression linéaire. (Voir le graphique « Method Comparison 1 ».) (CAC Direct) = 0,81 (CAC Extraction) + 0,39 ng/ml r = 0,952 Moyennes : 2,5 ng/ml (Coat-A-Count Direct) 2,6 ng/ml (Coat-A-Count Extraction) Comparaison de méthodes N°2: La technique Coat-A-Count Direct Androstènedione a été comparée sur 38 échantillons avec un autre coffret Androstenedione (méthode directe avec tubes coatés) kit A, pour des concentrations allant de 0,74 à 3,48 ng/ml. Par régression linéaire. (Voir le graphique « Method Comparison 2 ».) (CAC Direct) = 1,33 (Kit A) + 0,054 ng/mL r = 0,860 Moyennes : 2,2 ng/ml (Coat-A-Count Direct) 1,6 ng/ml (Kit A) Assistance technique Contacter votre distributeur national. www.siemens.com/diagnostics Le Système Qualité de Siemens Healthcare Diagnostics Inc. est certifié ISO 13485:2003. Italiano Coat-A-Count Androstenedione Diretto Uso: Il dosaggio Coat-A-Count Androstenedione Diretto è un dosaggio radioimmunologico in fase solida marcato 125 con I per la misurazione quantitativa del 4 Δ -androstenedione nel siero e nel plasma eparinizzato ed EDTA. E' a solo uso diagnostico in vitro. Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) I 125 Il kit da 100 determinazioni contiene meno di 6,5 microcurie (241 kilobecquerel) di androstenedione marcato con . Riassunto e spiegazione del Test 4 Il Δ -Androstenedione è uno steroide che serve quale principale precursore del testosterone e dell'estrone. L'interesse clinico deriva dal fatto che è spesso elevato nei casi di crescita anomala dei peli (irsutismo) e virilizzazione. A differenza degli androgeni surrenali, il deidroepiandrosterone ed il suo solfato, l'androstenedione in circolo ha origine sia dal surrene che dalle ovaie. I livelli plasmatici aumento in maniera decisa a partire dal settimo anno di età, quindi declinano gradualmente dopo i trenta anni. L'androstenedione presenta una variazione diurna, che si presenta più elevata al mattino, ed anche una variazione ciclica durante il ciclo mestruale, con un picco intorno a metà ciclo. Durante la gravidanza, si verifica un aumento dei livelli plasmatici. Procedura del Dosaggio Il Coat-A-Count Androstenedione Diretto è un immunodosaggio competitivo, basato su provette coattate con anticorpo. 125 L'androstenedione marcato con I compete con l'androstenedione presente nel campione del paziente per i siti anticorpali. Dopo incubazione, la provetta viene decantata per separare il materiale legato da quello libero e contata in un gamma counter. Le conte sono inversamente proporzionali al quantitativo di androstenedione presente nel campione. La quantità di androstenedione presente nel campione del paziente viene determinata paragonando le conte alla curva di calibrazione. Nessuna Estrazione: Le determinazioni di Androstenedione effettuate con il metodo Coat-A-Count Androstenedione Diretto non richiedono né estrazione né cromatografia. Reagenti da Dispensare: 1 Tempo Totale di Incubazione: 2 ore. 29 Conte Totali alla iodinazione: circa 90 000 cpm. Avvertenze e precauzioni Per uso diagnostico in vitro. Reagenti: Conservare a 2–8°C in un frigorifero appositamente destinato al materiale radioattivo. Eliminare secondo le normative di legge vigenti. Non utilizzare reagenti oltre la data di scadenza. Alcuni componenti forniti in questo kit possono contenere materiale di origine umana e/o altri ingredienti potenzialmente pericolosi che necessitano di precauzioni di utilizzo. Seguire le precauzioni universali, e manipolare tutti i componenti come se potessero trasmettere agenti infettivi. Sono stati analizzati i materiali di origine umana e sono stati trovati non reattivi per la Sifilide; per gli Anticorpi anti-HIV 1 e 2; per l'Antigene di Superficie dell'Epatite B; e per gli Anticorpi Anti-Epatite C. E' stata aggiunta Sodio Azide a concentrazioni inferiori a 0,1 g/dL come conservante. Al momento dell'eliminazione, irrorare con molta acqua per evitare la formazione di azidi metalliche potenzialmente esplosive nelle tubature di piombo e di rame. Acqua: Utilizzare solo acqua distillata o deionizzata. Radioattività Una copia di tutti i certificati di Autorizzazione per radioisotopi (Specifica o Generica) rilasciata ad un cliente americano deve essere conservata in file presso la Siemens Healthcare Diagnostics prima che i kit o i componenti contenenti materiale radioattivo possano essere spediti. Questi materiali radioattivi possono essere acquisiti da qualsivoglia cliente in possesso dell'Autorizzazione Specifica. Con l'Autorizzazione Generica questi materiali radioattivi possono essere acquistati solo da medici, veterinari che esercitino la professione, laboratori clinici ed ospedalieri – e solo per l'esecuzione di test clinici o di laboratorio in vitro che non implichino somministrazione interna o esterna del materiale radioattivo o delle sue radiazioni alle persone o animali. La sua acquisizione, ricevimento, 30 conservazione, utilizzo, trasferimento ed eliminazione sono soggette a regolamentazioni e ad Autorizzazione (Generica o Specifica) della Commissione Statunitense per il Nucleare o dello Stato con il quale l'NRC abbia stipulato un accordo per l'esercizio del controllo regolatorio. Manipolare i materiali radioattivi secondo quanto previsto dall'Autorizzazione Generica o Specifica. Per minimizzare l'esposizione alle radiazioni, l'utilizzatore deve attenersi alle linee guida stabilite dal National Bureau of Standards publication su “Safe Handling of Radioactive Materials” “Norme per una corretta manipolazione dei Materiali Radioattivi”.(Guida N° 92, pubblicata il 9 Marzo 1964) e successive edizioni pubblicate dallo Stato e dalle Autorità Federali. Assorbire immediatamente le fuoriuscite e decontaminare le superfici contaminate. Evitare la formazione di aerosol. Eliminare i rifiuti solidi radioattivi secondo quanto previsto dall'Autorizzazione. Le licenze generiche (possessori di NRC Form 483) possono eliminare i rifiuti radioattivi solidi come non radioattivi, dopo aver rimosso l'etichetta. I detentori di autorizzazioni specifiche (NRC Form 313) devono fare riferimento al Titolo 10, Codice delle Regolamentazioni Federali Parte 20. I detentori di Autorizzazioni negli Stati che hanno stipulato un accordo con l'NRC dovrebbero far riferimento alle regolamentazioni idonee dei loro stati. I detentori di Autorizzazioni Generali possono eliminare i rifiuti radioattivi liquidi del tipo contenuto in questo prodotto attraverso il lavello del laboratorio. I detentori di autorizzazione devono eliminare o rendere illeggibili le etichette dei contenitori vuoti di materiali radioattivi prima di eliminare i rifiuti solidi. I detentori di autorizzazioni specifiche possono eliminare piccoli quantitativi di rifiuti radioattivi liquidi del tipo utilizzato in questo prodotto attraverso il lavello del laboratorio. Fare riferimento alle regolamentazioni appropriate applicabili al Vostro laboratorio. Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Materiali Forniti: Preparazione Iniziale Provette Coattate con Anticorpo antiAndrostenedione Diretto (TAN1) Provette di polipropilene coattate con anticorpi policlonali di coniglio antiandrostenedione e confezionate in buste a cerniera. Conservare refrigerate al riparo dall'umidità, richiudendole dopo l'utilizzo. Stabili a 2–8°C fino alla data di scadenza indicata sulla confezione. Colore: Arancio fluorescente TKAN1: 100 provette. Androstenedione Diretto marcato con 125 (TAN2) I 105 mL di androstenedione iodinato, con conservanti. Stabile a 2–8°C per 30 giorni dopo l'apertura, o fino alla data di scadenza indicata sulla provetta. TKAN1: 1 flacone. Calibratori Androstenedione Diretto (TAN3–8) Sei flaconi, etichettati dalla A alla F, contenenti concentrazioni diverse di androstenedione in una matrice a base di siero umano, con conservanti. Il calibratore zero A contiene 5 mL, ed i restanti calibratori dalla B alla F contengono 2 mL ciascuno. Stabile a 2– 8°C per 30 giorni dopo l'apertura, o per 6 mesi (aliquotato) a –20°C. TKAN1: 1 set. I calibratori non zero rapresentano, respettivamente, 0,15, 0,4, 1,5, 4,0 e 10 nanogrammi di androstenedione per millilitro (ng/mL); equivalenti a, 0,52, 1,4, 5,2, 14 e 35 nanomoli per litro (nmol/L). I punti intermedi della calibrazione possono essere ottenuti mescolando i calibratori in proporzioni idonee. Controlli Androstenedione Diretto (TANC1–2) 2 flaconi (2 mL ciascuno) di Androstenedione Diretto, Controllo 1 e 2, contengono concentrazioni diverse di androstenedione in siero umano processato, con conservanti. Stabile a 2– 8°C per 30 giorni dopo l'apertura, o per 6 mesi (aliquotato) a –20°C. Fare riferimento alla metodica dei controlli dell'Androstenedione Diretto per le rispettive concentrazioni. TKAN1: 1 set. Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Materiali Richiesti Ma Non Forniti Gamma counter — compatibile con provette standard da 12x75 mm Vortex mixer Radioimmunodosaggio Provette semplici di polipropilene da 12x75 mm — da utilizzarsi come provette per le Conte Totali e per le NSB, disponibili presso Siemens Healthcare Diagnostics (Codice: PPO). Micropipette con puntali monouso: 100 µL e 1,0 mL. Foam per la decantazione — disponibili presso Siemens Healthcare Diagnostics (Codice: FDR) Carta per grafici Logit-log Prelievo dei campioni Non è necessario che il paziente sia a digiuno, non sono necessarie preparazioni 16 particolari. Prelevare il sangue in provette semplici, annotando l'ora del prelievo, e separare il siero dalle cellule. Possono essere utilizzati campioni di plasma eparinizzato ed EDTA. I campioni itterici o grossolamente contaminati possono produrre risultati errati. Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifuga per schiarire i campioni lipemici. I campioni emolizzati posson indicare il trattamento non idoneo del campione prima dell'arrivo al laboratorio; per questo motivo, i risultati devono essere interpretati con prudenza. Provette per il prelievo di sangue di produttori diversi possono dare valori differenti, a seconda dei materiali e degli additivi usati, incluso gel o barriere fisiche, attivatori di coaguli e/o anticoagulanti. L'Coat-A-Count Androstenedione Diretto non é stato verificato con tutte le possibili variazioni di tipi di provette. Consultare la sezione riguardante Campioni Alternativi per dettagli sulle provette testate. Volume Richiesto: 100 µL di siero o di plasma per provetta Conservazione: 2–8°C per 2 giorni, o fino a 2 mesi congelato a –20°C. Prima del dosaggio, consentire ai campioni di raggiungere temperatura 31 ambiente (15–28°C) e mescolare scuotendo leggermente o capovolgendo la provetta. Aliquotare, se necessario per evitare cicli ripetuti di congelamento e scongelamento. Non tentare di scongelare i campioni congelati riscaldandoli in un bagnetto termostatato. calibratore più elevato (10 ng/mL) devono essere diluiti nel calibratore zero prima del dosaggio. 3 Non devono passare più di 10 minuti nella dispensazione del tracciante. Mettere da parte le provette T per la conta (al punto 6); non sono necessari ulteriori passaggi. Dosaggio Radioimmunologico Tutti i componenti devono essere a temperatura ambiente (15–28°C) prima dell'utilizzo. 1 Provette Semplici: Etichettare quattro provette 12x75 mm di polipropilene semplici (non coattate) T (conte totali) ed NSB (legame non specifico) in duplicato. 4 Incubare per 2 ore a temperatura ambiente (15–28°C). 5 Decantare completamente. Rimuovere tutta l'umidità visibile aumentando così la precisione. Utilizzando un foam, decantare il contenuto di tutte le provette (ad eccezione delle provette T) e fare in modo che si asciughino per 2 o 3 minuti. Quindi blottarle energicamente su carta assorbente per eliminare le gocce residue. Poiché il legame non specifico nel dosaggio Coat-A-Count è caratteristicamente basso, le provette NSB possono essere anche omesse senza compromettere l'accuratezza o il controllo di qualità. Provette Coattate: Etichettare con A dodici provette in duplicato coattate con anticorpo Androstenedione Diretto (legame massimo) e dalla B alla F. Etichettare altre provette coattate con anticorpo, anch'esse in duplicato, per i controlli ed i campioni. 2 Calibratori ng/mL A (MB) 0 nmol/L 0 B 0,15 0,52 C 0,4 1,4 D 1,5 5,2 E 4,0 14 F 10 35 Dispensare 100 µL del calibratore zero A nelle provette NSB ed A, e 100 µL di ciascuno dei calibratori non zero nelle provette contrassegnate dalla B alla F. Dispensare 100 µL di ciascun controllo e campione nelle provette preparate. Pipettare direttamente al fondo. Si consiglia di utilizzare un puntale monouso, cambiando il puntale tra un campione e l'altro, per evitare la contaminazione da carryover. I campioni con concentrazioni attese di androstenedione superiori al 32 Aggiungere 1,0 mL di Androstenedione Diretto marcato con 125 I ad ogni provetta. Vortexare. 6 Contare per 1 minuto in un gamma counter. Calcolo dei Risultati Per ottenere i risultati in termini di concentrazione da una rappresentazione logit-log della curva di calibrazione, calcolare inizialmente per ogni coppia di provette le conte medie al minuto corrette con NSB: Conte Nette = (Media dei CPM) Meno (Media CPM NSB) Quindi determinare il legame di ogni coppia di provette come percentuale del legame massimo (MB), con le conte corrette-NSB delle provette A prese al 100%: Percentuale di Legato = (Conte Nette / Conte Nette MB) × 100 Il calcolo può essere semplificato omettendo la correzione per il legame non specifico; i campioni entro il range dei calibratori danno virtualmente gli stessi risultati quando la Percentuale di Legato viene calcolata direttamente dai CPM Medi). Utilizzando la carta logit-log, tracciare la Percentuale di Legato sull'asse verticale (probabilità) verso la Concentrazione Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) sull'asse orizzontale (logaritmica) per ciascuno dei calibratori non zero e tracciare una linea retta approssimativamente lungo il tracciato di questi punti. I risultati per i campioni sconosciuti possono essere letti dalla retta attraverso interpolazione. Si consiglia di visionare i risultati per stabilire la correlazione entro i replicati e tracciare un grafico della curva di calibrazione (anche se i calcoli vengono effettuati dal computer) per visualizzare l'appropriatezza della trasformazione utilizzata e per individuare i punti devianti all'interno della calibrazione. Consigliamo anche di mantenere una rintracciabilità dei parametri utilizzati per il calcolo dei dati: T = Conte Totali (conte al minuto) %NSB = 100 × (Conte NSB Medie / Conte Totali) %MB = 100 × (Conte Nette / Conte Totali) E le “intercette” al 20, 50 ed 80%, dove 20% = Concentrazione al 20% di Legato ecc. Nota: sono accettabili anche altri tipi di approccio, quali: l'implementazione della logistica a 4 parametri. Vedi Dudley Ra et al. Guidelines for immunoassay data Reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71. Seduta Esemplificativa: a solo scopo illustrativo e non per calcolare i risultati di un'altra seduta. (vedi tabella "Example Run"). control. Clin Chem 1981;27:493-501. Campioni ripetuti possono servire come ulteriore strumento per monitorare la precisione inter-dosaggio; coppie di campioni intervallate lungo tutto il dosaggio possono essere d'aiuto nel verificare l'assenza di deviazioni significative. Valori Attesi Maschi: E' stato effettuato uno studio sui range di riferimento utilizzando campioni di siero con il dosaggio Coat-A-Count Androstenedione Diretto. Lo studio aveva incluso 124 maschi. I risultati presentano un range centrale al 95% da circa 0,8 a 3,0 ng/mL, con una mediana di 1,8 ng/mL. Femmine: In uno studio effettuato su 122 donne, i risultati hanno presentato un range da circa 0,5 a 3,7 ng/mL, con una mediana di 1,7 ng/mL. I laboratori devono considerare questi risultati soltanto come linee guida. Ogni laboratorio dovrebbe stabilire i propri range di riferimento. Limiti Il follico graafiano in crescita secerne androstenedione, ed un aumento ddoppio nella sua produzione si verifica a metà del ciclo. Campioni prelevati durante questo periodo possono, quindi, produrre risultati di androstenedione al di sopra del limite 1,2 superiore centrale al 95% Riportare i risultati dei pazienti solo se i risultati dei controlli sono conformi ai criteri di accettabilità del Vostro laboratorio. E' stata osservata una variazione diurna. Ad esempio, in 11 uomini sani di età compresa tra 18 e 30 anni, la concentrazione media di androstenedione nelle 24 ore era di 0,93 ng/mL, con un'ampiezza circadiana uguale al 42% della media. L'acrofase superiore si verificava la mattina alle 7.10; il nadir superiore la sera alle 23.00; vi era anche una seconda acrofase alle 16.35. L'intervallo di confidenza al 95% per 13 l'acrofase/nadir era di 68 minuti. In maniera analoga occorre annotare l'ora del prelievo. Si consiglia per ogni dosaggio di annotare i numeri di lotto dei componenti utilizzati, quali le date di ricostituzione o di apertura. Si consiglia anche di tracciare i grafici dei risultati dei controlli giorno dopo giorno – come descritto, ad esempio, in Westgard JO, et al. A multi-rule chart for quality Occorre ricordare che l'esercizio può avere un impatto significativo sui livelli di androstenedione in circolo. Quindi, in uno studio effettuato su 18 giocatori di calcio professionisti, la media della concentrazione di androstenedione aumentava da un valore base di circa Controllo di Qualità Controlli (o pool di sieri) con alMeno due livelli di concentrazione di androstenedione — bassa ed alta — devono essere dosati nella routine come campioni sconosciuti. I Controlli di Androstenedione Diretto forniti con il kit devono essere utilizzati come materiale per il controllo di qualità per monitorare le prestazioni del dosaggio. Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) 33 0,9 ng/mL a 1,8 ng/mL alla fine del gioco, per declinare nuovamente a 0,7 ng/mL 14 novanta minuti dopo. In un altro studio, il livello medio di androstenedione per 20 uomini moderatamente allenati aumentava in maniera significativa da una media di valori di base di 1,11 ng/mL a 1,41 ng/mL 15 cinque minuti dopo un'ora di nuoto. Bilirubina: Può provocare un decremento dei valori. (Vedi tabella “Bilirubin”.) Prestazioni del Dosaggio Tipo di Campione Alternativo: Per determinare l'effetto di campioni alternativi, è stato prelevato del sangue da 40 volontari in provette semplici, eparinizzate, EDTA e Becton Dickinson ® vacutainer SST . Tutti i campioni sono stati dosati con il dosaggio Coat-A-Count Androstenedione Diretto. Vedi Tabelle e Grafici per dati reppresentativi delle prestazioni del dosaggio Coat-A-Count Androstenedione Diretto. Ad eccezione di quanto specificato, tutti i risultati nelle sezioni di cui di seguito sono stati ottenuti su campioni di siero. I risultati sono espressi in ng/mL. Fattore di Conversione: ng/mL × 3,4916 → nmol/L Range di calibrazione: 0,15 – 10 ng/mL (0,52 – 35 nmol/L), Sensibilità analitica: 0,04 ng/mL (0,14 nmol/L), Precisione Intra-Dosaggio (All'interno della stessa seduta) Sono state calcolate statistiche per i campioni dai risultati di 20 coppie di provette in un unico dosaggio. (Vedi tabella “Intraassay Precision”.) Precisione Inter-Dosaggio (Da una seduta all'altra) Sono state calcolate statistiche per campioni dai risultati di coppie di provette in 20 dosaggi differenti. (Vedi tabella “Interassay Precision”.) Specificità: L'antisiero Coat-A-Count Androstenedione Diretto è altamente specifico per l'androstenedione, con una crossreattività estremamente bassa verso altri steroidi naturali o farmaci che possano essere presenti nei campioni. (Vedi tabella "Specificity".) Linearità: I campioni sono stati dosati a varie diluizioni. (Vedi tabella “Linearity” per dati rappresentativi.) Effetto Fine-Seduta: Nessuno fino a circa 400 provette. (vedi tabella "End-of-Run Effect"). Recupero: sono stati dosati campioni a cui sono state aggiunte soluzioni 1:19 di androstenedione (4, 10, 20, 40 e 100 ng/mL). (Vedi tabella “Recovery” per dati rappresentativi). 34 Emolisi: La presenza di globuli rossi impaccati in concentrazioni fino a 30 µL/mL non ha effetto sui risultati entro il range di precisione del dosaggio. Lipemia: Può interferire con il dosaggio. (Vedi tabella “Lipemia”.) (Eparina) = 0,95 (Siero) + 0,02 ng/mL r = 0,997 (EDTA) = 1,02 (Siero) – 0,01 ng/mL r = 0,997 (SST) = 1,00 (tubi semplici) – 0,15 ng/mL r = 0,996 Valore medio: 4,1 ng/mL (Siero) 3,9 ng/mL (Eparina) 4,2 ng/mL (EDTA) 3,9 ng/mL (SST) I risultati mostrano che sia il siero che il plasma EDTA ed eparinizzato producono essenzialmente risultati equivalenti. Comparazione di Metodi 1: Sessanta pazienti sono stati dosati simultaneamente con il dosaggio Coat-A-Count Androstenedione Diretto e Coat-A-Count Androstenedione (con estrazione), con concentrazioni di androstenedione da 0,25 a circa 11 ng/mL. Con regressione lineare. (Vedi grafico “Method Comparison 1”). (CAC Diretto) = 0,81 (CAC con Estrazione) + 0,39 ng/mL r = 0,952 Valore medio: 2,5 ng/mL (Coat-A-Count Diretto) 2,6 ng/mL (Coat-A-Count con EStrazione) Comparazione di Metodi 2: In un altro esperimento, 38 campioni di pazienti sono stati dosati con il metodo Coat-A-Count Androstenedione Diretto ed un radioimmunodosaggio Coated tube Diretto disponibile in commercio per l'androstenedione (Kit A), con concentrazioni di androstenedione da circa 0,74 a 3,48 ng/mL. Con regressione lineare. (Vedi grafico “Method Comparison 2”.) Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) (CAC Diretto) = 1,33 (Kit A) + 0,054 ng/mL r = 0,860 Valore medio: 2,2 ng/mL (Coat-A-Count Diretto) 1,6 ng/mL (Kit A) Assistenza Tecnica All'estero: Si prega di contattare il proprio Distributore Nazionale. www.siemens.com/diagnostics Il Sistema Qualità della Siemens Healthcare Diagnostics Inc. è certificato ISO 13485:2003. Português Coat-A-Count Androstenediona directa Utilização: O Coat-A-Count Androstenediona Directa é um 125 radioimunoensaio I de fase sólida concebido para a medição quantitativa de 4 Δ -androstenediona no soro ou plasma de EDTA ou heparinizado. Destina-se unicamente a uso de diagnóstico in vitro. elevado perto do meio do período. Durante a gravidez, verifica-se um aumento dos níveis no plasma. Princípio do Procedimento O procedimento Coat-A-Count Androstenediona Directa é um imunoensaio competitivo baseado em tubos revestidos com anticorpos. A 125 androstenediona marcada com I compete com a androstenediona na amostra de paciente por locais de fixação de anticorpos. Após a incubação, a separação da androstenediona ligada da livre é efectuada por decantação. O tubo é então contado num contador gama e as contagens estão inversamente relacionadas com a quantidade de androstenediona presente na amostra de paciente. A quantidade de androstenediona na amostra é determinada por comparação das contagens com uma curva de calibração. Sem Preparação: As determinações de androstenediona através do método Coat-A-Count Androstenediona Directa não requerem preparação nem cromatografia. Números de catálogo: TKAN1 (100 tubos) Reagentes para Pipetar: 1 O kit de 100 tubos contém Menos de 6,5 microcuries (241 quilobecquerels) de 125 androstenediona radioactiva I. Tempo de Incubação: 2 horas. Sumário e explicação do teste 4 A Δ -androstenediona é um esteróide que funciona como dos mais importantes precursores da testosterona e da estrona. O seu interesse clínico resulta do facto de ser frequentemente elevada em casos de crescimento anormal do cabelo (hirsutismo) e de virilização. Ao contrário dos androgenes supra-renais dehidroepiandrosterona e respectivo sulfato, a androstenediona em circulação tem origem tanto nas glândulas suprarenais como nos ovários. Os níveis no plasma aumentam constantemente a partir aproximadamente do sétimo ano de vida, começando a diminuir gradualmente após os trinta anos. A androstenediona apresenta uma variação diurna, tendo o nível mais elevado de manhã, bem como uma variação cíclica durante o período menstrual, apresentando o nível mais Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Contagens Totais na Marcação com o Iodo: aproximadamente 90 000 cpm, Precauções Para uso de diagnóstico in vitro. Reagentes: Conservar a 2–8°C num frigorífico destinado para materiais radioactivos. Eliminar de acordo com as leis aplicáveis. Não utilize reagentes com prazo de validade expirado. Alguns componentes fornecidos com este dispositivo podem conter matéria de origem humana e/ou outros ingredientes potencialmente perigosos que necessitem de algumas precauções. Manipule com as devidas precauções todos os materiais capazes de transmitir doenças infecciosas. As matérias primas, obtidas de soro humano, foram testadas, revelando resultados negativos para a sífilis, para os anticorpos do vírus da imunodeficiência humana (HIV) 1 e 2; para o antigénio de superfície da hepatite 35 B (HBsAg) e para os anticorpos do vírus da hepatite C. Azida de sódio foi adicionada como conservante; para evitar acumulações de azidas metálicas explosivas em canalizações de cobre e alumínio, os reagentes devem ser rejeitados no esgoto apenas se estiverem diluídos e forem lavados com grandes volumes de água. Água: Utilize água destilada ou desionizada. Radioactividade Uma cópia da licença de uso de produtos radioactivos (especifico ou geral) enviada pelo cliente, deve estar em poder da Siemens Healthcare Diagnostics antes do envio dos kits ou componentes contendo material radioactivo. Estes materiais radioactivos podem ser adquiridos por qualquer cliente que possua a necessária licença especifica. Com uma licença generalista estes produtos radioactivos só podem ser adquiridos por médicos, veterinários na prática de medicina veterinária, laboratórios clinicos e hospitais. E somente para uso clinico in vitro ou testes laboratoriais não envolvendo administração externa ou interna do material radioactivo ou da sua radiação para o ser humano ou outros animais. A sua aquisição, receita, armazenamento uso, transporte e eliminação estão sujeitas aos regulamentos e à licenciada Comissão de Regulação Nuclear ou do Estado respectivo de acordo com a lei em vigor. Tratar os materiais radioactivos de acordo com a regulamentação da sua licença, específica ou generalista. De modo a minimizar a exposição à radiação deve o utilizador seguir as instruções da publicação do Departamento Nacional de Padrões (Utilização segura de materiais radioactivos-Livro No. 92, publicado em Março de 1964) e publicações seguintes do Estado e Autoridades Federais. Limpar os derrames prontamente e descontamine as superficies afectadas. Evitar os aerossois. Elimine os lixos radioactivos de acordo com a regulamentação da licença. As licenças generalistas (portadores da licença NRC 483) podem eliminar os lixos sólidos radioactivos como lixo não radioactivo depois de remover os rótulos. Licenças 36 Especificas (Licença NRC 313) devem ter em conta o Capitulo 10 do artigo 20, do Código de Regulamentações Federais. Cada Estado deve referir a legislação em vigor aprovada para o seu território. As licenças generalistas podem eliminar os lixos radioactivos liquidos do tipo deste produto para um esgoto de laboratório. Os licenciados devem remover os rótulos dos frascos vazios de materiais radioactivos antes de os colocar no esgoto sólido. As licenças especificas podem eliminar pequenas quantidades de lixo radioactivo deste tipo de produto para o esgoto normal do laboratório. Ter em atenção as regulamentações em vigor para o seu laboratório. Materiais fornecidos: Preparação inicial Tubos Revestidos com Anticorpos de Androstenediona Directa (TAN1) Tubos de polipropileno revestidos com anticorpos policlonais de coelho para androstenediona e embalados em saquetas de fecho hermético. Conservar refrigerado e protegido da humidade, selar os sacos cuidadosamente após cada abertura. Estável a 2–8°C até à data de validade inscrita na embalagem. Cor: laranja fluorescente. TKAN1: 100 tubos. 125 Androstenediona Directa I (TAN2) 105 mL de androstenediona iodada, com conservante. Estável a 2–8°C durante 30 dias depois de aberto, ou até à data de validade inscrita no frasco. TKAN1: 1 frasco. Calibradores de Androstenediona Directa (TAN3–8) Seis frascos, rotulados de A a F, contendo concentrações diferentes de androstenediona numa matriz baseada em soro humano, com conservante. O calibrador zero A contém 5 mL, e os restantes calibradores de B a F contêm 2 mL cada. Estável, após a abertura, durante 30 dias a 2–8°C, ou por 6 meses (aliquotado) a –20°C. TKAN1: 1 conjunto. Os calibradores diferentes de zero representam, respectivamente, 0,15, 0,4, 1,5, 4,0 e 10 nanogramas de androstenediona por mililitro (ng/mL); o Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) que equivale a 0,52, 1,4, 5,2, 14 e 35 nanomoles por litro (nmol/L). Os pontos de calibração intermédios podem ser obtidos misturando os calibradores nas proporções adequadas. Controlos de Androstenediona Directa (TANC1–2) 2 frascos (2 mL cada) de Controlo de Androstenediona Directa 1 e 2, contendo concentrações diferentes de androstenediona em soro humano processado, com conservantes. Estável, após a abertura, durante 30 dias a 2–8°C, ou por 6 meses (aliquotado) a –20°C. Consultar a bula do Controlo de Androstenediona Directa para obter as respectivas concentrações. TKAN1: 1 conjunto. Amostras hemolisadas podem indicar tratamento incorrecto de uma amostra antes do envio para o laboratório; portanto os resultados devem ser interpretados com cuidado. Os tubos para colheita sanguínea de diferentes fabricantes, podem originar diferentes valores, dependendo dos materiais e aditivos, incluíndo gel ou barreiras fisicas, activadores do coágulo e/ou anti coagulantes. Coat-A-Count Androstenediona Directa não foram ainda testados com todas as possiveis variações originadas pelos tipos de tubos. Consultar a secção Tipos de Amostras Alternativas para obter detalhes sobre os tubos que foram testados. Volume de Amostra: 100 µL de soro ou plasma por tubo. Materiais necessários mas não fornecidos Armazenamento: 2–8°C durante 2 dias, ou até 2 meses congelado a –20°C. Contador gama — compatível com tubos standard 12x75 mm Deixar as amostras atingir a temperatura ambiente (15–28°C) e agitar suavemente ou por inversão. Aliquotar se necessário para evitar repetidos congelamentos/descongelamentos. Não descongelar as amostras por aquecimento em banho-maria. Agitador Vortex Radioimunoensaio Tubos lisos de polipropileno de 12x75 mm — para utilização como tubos de Contagens Totais e NSB, disponíveis na Siemens Healthcare Diagnostics (Números de catálogo: PPO) Micropipetas com pontas descartáveis: 100 µL e 1,0 mL Dispositivo de decantação de espuma — disponível na Siemens Healthcare Diagnostics (Números de catálogo: FDR) Papel milimétrico logit-log Colheita O paciente não necessita dieta. Não são necessárias preparações especiais. 16 Colher sangue por punção venosa para tubos lisos, registando a hora e data da colheita, e separar o soro das células. Também são adequados plasma heparinizado e de EDTA. Amostras ictéricas ou totalmente contaminadas podem causar resultados errados. Recomenda-se o uso de uma ultra centrífuga para clarear amostras lipémicas. Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Técnica de Radioimunoensaio Todos os componentes devem estar à temperatura ambiente(15–28°C) antes de usar. 1 Tubos lisos: Rotular quatro tubos de polipropileno (não revestidos) de 12x75 mm – T (contagens totais) e NSB (ligações não especificas) em duplicado. Devido ao facto das ligações não especificas no método de Coat-A-Count serem geralmente baixas os valores de NSB podem ser omitidos sem comprometer a precisão ou controle de qualidade. Tubos revestidos: Rotular em duplicado doze tubos revestidos com Anticorpos de Androstenediona Directa com A (ligação máxima) e com B a G, em duplicado. Rotular tubos adicionais revestidos com anticorpos, também em duplicado, para controlos e amostras de paciente. 37 Calibradores 2 ng/mL nmol/L A (MB) 0 0 B 0,15 0,52 C 0,4 1,4 D 1,5 5,2 E 4,0 14 F 10 35 Pipetar 100 µL do calibrador zero A para os tubos NSB e A, e 100 µL de cada um dos restantes calibradores diferentes de zero para os tubos identificados como B a F. Pipetar 100 µL de cada controlo e amostra de paciente para os tubos preparados. Pipetar directamente para a base dos tubos. É boa prática usar uma pipeta de pontas descartáveis, mudando a ponta entre as amostras de modo a evitar contaminação. As amostras de paciente que se preveja que contenham concentrações de androstenediona superiores à do calibrador mais elevado (10 ng/mL) deverão ser diluídas com o calibrador zero antes do ensaio. 3 Adicionar 1,0 mL de Androstenediona 125 Directa I a cada tubo. Agitar no misturador. Adicionar o marcador I 125 no espaço de 10 minutos após pipetar os calibradores, controlos e amostras. Deixar os tubos T para as contagens (nº 6); não necessitam mais processamento. 4 Incubar durante 2 horas à temperatura ambiente (15–28°C). 5 Decantar vigorosamente. Removendo todo o líquido remanescente melhora-se bastante a precisão. Decantar o conteúdo de todos os tubos (à excepção dos tubos T) usando um dispositivo de decantação de espuma, e deixá-los drenar durante 2 ou 3 minutos. Em seguida, sacudir os tubos vigorosamente contra papel absorvente para eliminar todas as gotas residuais. 38 6 Contar 1 minuto em contador gama. Cálculo dos Resultados Para obter resultados de concentrações duma representação logit-log da curva de calibração, deve em primeiro lugar calcular-se para cada par de tubos a média de NSB-contagens por minuto corrigidas: Contagens reais = (Média CPM) minutos (Média NSB CPM) Determine a ligação de cada par de tubos como percentagem do máximo de ligação (MB), com o NSB-contagens por minuto corrigidas dos tubos A tidas como 100%: Percentagem de Ligação = (Contagens reais / Contagens MB reais) × 100 O cálculo pode ser simplificado, omitindo a correcção para ligação não específica; amostras dentro da gama de calibração originam virtualmente os mesmos resultados quando a Percentagem de Ligação é calculada directamente da Média de CPM.) Usando um papel milimétrico logit-log, represente a Percentagem de Ligação no eixo vertical (probabilidade) contra a Concentração no eixo horizontal (logaritmico) para cada um dos calibradores diferentes de zero, e representar uma linha recta em função da trajectória destes pontos. Resultados de amostras desconhecidas podem então ser lidas nessa recta por interpolação. È boa prática verificar os resultados pela concordância entre as réplicas, e construir um gráfico da curva de calibração (mesmo que os cálculos sejam efectuados por computador) para verificação visual da aplicabilidade da transformação usada e como forma para detectar pontos de calibração que se afastem. Também se recomenda guardar estas curvas: T = Contagens Totais (como contagens por minuto) %NSB = 100 × (Média Contagens NSB / Contagens Totais) %MB = 100 × (Contagens reais / Contagens Totais) E os 20, 50 e 80 porcento "intercepa," onde 20% = Concentração a 20 por cento de Ligação, etc. Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Note que para outras perspectivas, como a implementação de uma logística de 4 parâmetros, também é aceitável. Ver Dudley RA, et al. Guidelines for immunoassay data reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71. Laboratórios devem considerar estes resultados como directrizes apenas. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios valores de referência. Exemplo de Ensaio: Apenas para ilustração, não para calcular resultados de outro ensaio. (Ver tabela "Example Run".) O folículo de Graaf em crescimento segrega androstenediona e ocorre uma duplicação da sua produção perto de meio do ciclo. Os espécimens colhidos durante este período podem por isso produzir resultados de androstenediona inferiores ao limite superior central de 1,2 95%. Controlo de Qualidade Controlos (ou pools de soro) com pelo Menos dois níveis de concentração de androstenediona — baixo e alto — devem ser submetidos por rotina a ensaio como amostras desconhecidas. Os Controlos de Androstenediona Directa incluídos no kit deverão ser utilizados como material de controlo de qualidade para monitorização do desempenho do ensaio. Os resultados dos pacientes devem apenas ser reportados se os resultados dos controlos para este ensaio estiverem dentro dos critérios de aceitação estabelecidos pelo laboratório. È boa prática laboratorial registar para cada ensaio o número do lote dos componentes usados, bem como as datas de quando foram primeiro reconstituidas ou abertas. Recomenda-se registar os valores diários em gráfico – como descrito, por exemplo, in Westgard JO, et al. A multi-rule chart for quality control. Clin Chem 1981;27:493-501. Note que amostras repetidas podem servir como ferramenta adicional para monitorizar a precisão inter-ensaio, e que pares de controlos podem ser colocados ao longo do ensaio para ajudar a verificar a ausência de variação significativa. Valores de Referência Homens: Foi efectuado um estudo de variação de referência com amostras de soro utilizando o procedimento Coat-A-Count Androstenediona Directa. O estudo incluiu 124 homens. Os resultados demonstraram um intervalo central de 95% de aproximadamente 0,8 a 3,0 ng/mL, com uma média de 1,8 ng/mL. Mulheres: Num estudo com 122 mulheres, os resultados demonstraram um intervalo central de 95% de aproximadamente 0,5 a 3,7 ng/mL, com uma média de 1,7 ng/mL. Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Limitações Observou-se uma variação diurna. Por exemplo, em 11 homens saudáveis com 18 a 30 anos de idade, a concentração média de 24 horas de androstenediona foi de 0,93 ng/mL, com uma amplitude circadiana igual a 42% da média. A principal acrofase ocorreu de manhã, às 07h10m; a principal batifase ocorreu à noite, às 23h00m; além disso, verificou-se uma acrofase secundária às 16h35m. O intervalo de confiança de 95% para a 13 acrofase/batifase foi de 68 minutos. Deverá ser registada a hora da colheita de acordo com estes dados. Deve notar-se que a prática de exercício pode ter um impacto significativo sobre os níveis de androstenediona em circulação. Deste modo, num estudo em 18 jogadores de futebol profissional, a concentração média de androstenediona aumentou de uma linha basal de aproximadamente 0,9 ng/mL para 1,8 ng/mL no final do jogo, diminuindo para 0,7 ng/mL noventa 14 minutos depois. Noutro estudo, o nível médio de androstenediona em 20 homens com treino físico moderado aumentou significativamente, de uma média basal de 1,11 ng/mL para 1,41 ng/mL cinco 15 minutos após uma hora de natação. Características do Ensaio Ver Tabelas e Gráficos para dados representativos do desempenho do kit Coat-A-Coat Androstenediona Directa. Excepto nos casos indicados em contrário, todos os resultados apresentados nas secções abaixo foram obtidos com base em amostras de soro. Os resultados encontram-se expressos em ng/mL. Factor de conversão: ng/mL × 3,4916 → nmol/L 39 Calibração: 0,15 – 10 ng/mL (0,52–35 nmol/L), Sensibilidade Analítica: 0,04 ng/mL (0,14 nmol/L). Precisão Intra-Ensaio (entre ensaios) Foram calculadas estatísticas para amostras a partir dos resultados de 20 pares de tubos num único ensaio. (Consulte a tabela “Precisão Intraensaio".) Precisão Inter-ensaio (ensaio a ensaio) Foram calculadas estatísticas para amostras a partir dos resultados de pares de tubos em 20 ensaios diferentes. (Consulte a tabela “Precisão Interensaio".) Especificidade: O anti-soro Coat-A-Count Androstenediona Directa é muito específico da androstenediona, com uma reacção cruzada extremamente reduzida relativamente a esteróides naturais ou fármacos terapêuticos que possam estar presentes em amostras de paciente. (Ver tabela de "Specificity".) Linearidade: As amostras foram doseadas sob várias diluições. (Consulte a tabela "Linearidade" para dados representativos.) Efeito fim-de-série: Nenhum até aproximadamente 400 tubos. (Ver tabela "Efeito fim-de-série".) Recuperação: Foram submetidas a ensaio amostras de 1 a 19 a que foram adicionadas cinco soluções de androstenediona (4, 10, 20, 40 e 100 ng/mL). (Ver tabela de "Recovery" para dados representativos.) Bilirrubina: Pode dar origem a valores inferiores. (Ver a tabela “Bilirrubina”.) Hemólise: A Presença de eritrocitos em concentrações até 30 µL/mL não tem efeito no resultado, dentro da precisão do ensaio. Lipémia: Pode interferir no ensaio. (Ver a tabela “Lipémia”.) Tipo de amostra alternativa: Para determinar o efeito de amostras alternatives, foi colhido sangue de 40 voluntários em tubos secos, com EDTA, ® heparinizados e tubos de vacum SST da Becton Dickinson. Todas as amostras foram testadas através do procedimento Coat-A-Count Androstenediona Directa. (Heparina) = 0,95 (Soro) + 0,02 ng/mL r = 0,997 (EDTA) = 1,02 (Soro) – 0,01 ng/mL r = 0,997 (SST) = 1,00 (tubos simples) – 0,15 ng/mL r = 0,996 Médias: 4,1 ng/mL (Soro) 3,9 ng/mL (Heparina) 4,2 ng/mL (EDTA) 3,9 ng/mL (SST) Os resultados demonstraram que o soro, e tanto o plasma de EDTA como o heparinizado, produzem essencialmente resultados equivalentes. Comparação de métodos 1: Sessenta amostras de paciente foram ensaiadas em simultâneo com o procedimento Coat-ACount Androstenediona Directa e com o kit Coat-A-Count Androstenediona (método de preparação), com concentrações de androstenediona entre 0,25 e aproximadamente 11 ng/mL. Por regressão linear. (Ver o gráfico “Comparação de Métodos 1”.) (CAC Direct) = 0,81 (CAC Extraction) + 0,39 ng/mL r = 0,952 Médias: 2,5 ng/mL (Coat-A-Count Direct) 2,6 ng/mL (Coat-A-Count Extraction) Comparação de métodos 2: Noutro estudo, 38 amostras de paciente foram ensaiadas com o procedimento Coat-ACount Androstenediona Directa e com um radioimunoensaio directo com tubos revestidos para a androstenediona disponível no mercado (kit A), com concentrações de androstenediona entre 0,74 e 3,48 ng/mL. Por regressão linear. (Ver o gráfico “Comparação de Métodos 2”.) (CAC Direct) = 1,33 (Kit A) + 0,054 ng/mL r = 0,860 Médias: 2,2 ng/mL (Coat-A-Count Direct) 1,6 ng/mL (Kit A) 40 Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Assistência Técnica Por favor contacte o seu Distribuidor Nacional. www.siemens.com/diagnostics O Sistema da Qualidade da Siemens Healthcare Diagnostics Inc. está registado sob a norma ISO 13485:2003. Coat-A-Count® is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics. ©2010 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. All rights reserved. Origin: US Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Los Angeles, CA 90045 USA Siemens Healthcare Diagnostics Ltd. Sir William Siemens Sq. Frimley, Camberley, UK GU16 8QD 2010-10-22 PITKAN – 11 Changes in this Edition: cc#19759: Removed TKAN2 kit size and all associated component sizes and radioactivity information. In Materials Required But Not Provided section, added FDR catalog number for foam decanting rack and PPO catalog number for polypropylene tubes; removed “available from Siemens” claim for graph paper ZP797. Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English Erklärung der Symbole De Deutsch Descripción de los símbolos Es Español Explication des symboles Fr Français Comprensione dei simboli It Descrição dos símbolos Pt Português Italiano The following symbols may appear on the product labeling: / Die folgenden Symbole können auf dem Produktetikett verwendet werden: / Los siguientes símbolos pueden aparecer en la etiqueta del producto: / Les symboles suivants peuvent apparaître sur les étiquettes des produits : / Sull'etichetta del prodotto possono essere presenti i seguenti simboli: / Os seguintes símbolos podem aparecer no rótulo dos produtos: Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Symbol Definition En: In vitro diagnostic medical device De: Medizinisches Gerät zur In-vitro Diagnose Es: Dispositivo médico para diagnóstico in vitro Fr: Dispositif médical de diagnostic in vitro It: Dispositivo medico per diagnostica in vitro Pt: Dispositivo médico para diagnóstico in vitro En: Catalog Number De: Katalog-Nummer Es: Número de referencia Fr: Numéro de référence catalogue It: Numero catalogo Pt: Número de catálogo En: Manufacturer De: Hersteller Es: Fabricante Fr: Fabricant It: Produttore Pt: Fabricante En: Authorized Representative in the European Community De: Autorisierte Vertretung in der Europäischen Union Es: Representante autorizado en la Unión Europea Fr: Représentant agréé pour l’Union européenne It: Rappresentante autorizzato nella Comunità europea Pt: Representante Autorizado na Comunidade Europeia En: CE Mark De: CE-Kennzeichen Es: Símbolo de la CE Fr: Marque CE It: Marchio CE Pt: Marca CE En: CE Mark with identification number of notified body De: CE-Kennzeichen Identifikationsnummer der benannten Stelle Es: Marca de la CE con número de identificación del organismo notificado Fr: Marque CE avec numéro d’identification du corps notifié It: Marchio CE con numero identificativo dell'ente notificato Pt: Marca CE, com número de identificação do órgão notificado 41 Symbol Definition En: Consult instructions for use De: Bedienungshinweise beachten Es: Consulte las instrucciones de uso Fr: Consulter le mode d’emploi It: Consultare le istruzioni per l'uso Pt: Consulte as instruções de utilização Symbol Definition En: Lower limit of temperature (≥2°C) De: Mindesttemperatur (≥2°C) Es: Temperatura maxima (≥2°C) Fr: Limite inférieure de température (≥2°C) It: Limite inferiore di temperature (≥2°C) Pt: Limite inferior de temperatura (≥2°C) En: Caution! Potential Biohazard De: Vorsicht! Biologisches Risikomaterial Es: ¡Precaución! Peligro Biológico Potencial Fr: Avertissement ! Risque biologique potentiel It: Attenzione! Potenziale Pericolo Biologico Pt: Precaução! Potenciais Riscos Biológicos En: Do not freeze (> 0°C) De: Nicht einfrieren (> 0°C) Es: No congelar (> 0°C) Fr: Ne pas congeler (> 0°C) It: Non congelare (> 0°C) Pt: Não congele (> 0°C) En: Keep away from sunlight De: Vor Sonneneinstrahlung schützen Es: Mantener protegido de la luz solar Fr: Maintenir hors de portée de la lumière du soleil It: Non esporre alla luce del sole Pt: Manter protegido da luz solar En: Radioactive Materials De: Radioaktives Material Es: Materiales radiactivos Fr: Matériaux radioactifs It: Materiali radioattivi Pt: Materiais Radioactivos En: Caution De: Vorsicht Es: Precaución Fr: Avertissement It: Attenzione Pt: Precaução En: Temperature limitation (2–8°C) De: Temperaturgrenze (2–8°C) Es: Limitación de la temperatura (2–8°C) Fr: Limites de température (2–8°C) It: Limiti di temperatura (2–8°C) Pt: Limites de temperatura (2–8°C) En: Upper limit of temperature (≤ -20°C) De: Obere Temperaturgrenze (≤ -20°C) Es: Limitación superior de la temperatura (≤ -20°C) Fr: Limite supérieure de température (≤ -20°C) It: Limite superiore di temperatura (≤ -20°C) Pt: Limite máximo de temperatura (≤ -20°C) 42 LOT En: Batch code De: Chargenbezeichnung Es: Código de lote Fr: Numéro de code du lot It: Codice lotto Pt: Código de lote En: Contains sufficient for (n) tests De: Es reicht für (n) tests Es: Contiene material para (n) pruebas Fr: Suffisant pour (n) tests It: Contiene materiale sufficiente per (n) test Pt: Contém o suficiente para (n) testes 2008-01 En: Date format (year-month) De: Datumsformat (Jahr-Monat) Es: Formato de fecha (año-mes) Fr: Format de la date (année-mois) It: Formato data (anno-mese) Pt: Formato de data (ano-mês) En: Use by De: Verwendbar bis Es: Fecha de caducidad Fr: A utiliser avant It: Usare entro Pt: Use até Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) Symbol Definition En: Harmful De: Gesundheitsschädlich Es: Nocivo Fr: Nocif It: Nocivo Pt: Nocivo En: Corrosive De: Ätzend Es: Corrosivo Fr: Corrosif It: Corrosivo Pt: Corrosivo En: Toxic De: Giftig Es: Tóxico Fr: Toxique It: Tossico Pt: Tóxico En: Dangerous for the environment De: Umweltgefährlich Es: Peligroso para el medio ambiente Fr: Dangereux pour l'environnement It: Pericoloso per l'ambiente Pt: Perigoso para o ambiente Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22) 43
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