Apresentação do PowerPoint - Encontro de Jovens Pesquisadores
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VALIDAÇÃO DE METODOLOGIA ESPECTROFOTOMÉTRICA PARA A DETERMINAÇÃO DE FRUTOSE ROMANA MIGLIAVACA GRANDO, MELISSA DEMOLINER, ALANA PERES DE OLIVEIRA, SABRINA CARRA, MAURICIO MOURA DA SILVEIRA, ELOANE MALVESSI Laboratório de Bioprocessos – Instituto de Biotecnologia Sigla do Projeto: GFOR2. E-mail: [email protected] INTRODUÇÃO A validação tem como objetivo demonstrar que o método é apropriado para a finalidade pretendida, considerando os parâmetros: especificidade, linearidade, precisão, exatidão, limite de detecção e quantificação. Entre os métodos qualitativos utilizados para identificação de cetoses, destaca-se o reagente de Seliwanoff Frutose HCl Resorcinol Composto furfural Khan et al. (2006) Brasil (2003) Composto de cor OBJETIVO Desenvolver e validar uma metodologia de determinação de frutose. Reagente Seliwanoff: resorcinol 0,05% (m/v) em HCl 4,0 mol/L. Análise: 0,2 mL de amostra + 1,8 mL de reagente de Seliwanoff 100°C por 15 minutos 3mL de água destilada Espectrofotômetro, a 486nm. VALIDAÇÃO METODOLOGIA Resolução ANVISA RE n° 899, de 29 de maio de 2003. • Linearidade → Amostras de 0,1 a 1 g/L • Exatidão → Nove repetições (teórico/0,5 g/L) • Precisão intra dia → Nove análises (0,5g/L) • Precisão inter dia → três dias diferentes (0,5; 0,8 e 1 g/L) • Limite de Quantificação (LQ) • Limite de Detecção (LD) RESULTADOS Resultados gerais da validação do método espectrofotométrico para a determinação de frutose. Parâmetros Coeficiente de correlação (R2) Exatidão (%) Precisão intra dia (DPR%) Limite de detecção (g/L) Limite de quantificação (g/L) Especificidade (%) Resultados 0,99 97 3,64 0,04 0,14 96 Valores de absorbância obtidos em função da concentração de frutose. Média e desvio padrão de três curvas, em diferentes dias. Resultados do teste de precisão inter-dia para amostras com diferentes concentrações de frutose. Concentração de frutose (g/L) 0,5 Média Desvio padrão Desvio padrão (absorbância) (absorbância) relativo (%) 0,25933 0,01002 3,86 0,8 0,407 0,007 1,72 1,0 0,53833 0,01274 2,37 Curva de calibração representativa dos compostos de cor derivados de furfural após reação de condensação com resorcinol contido no reagente de Seliwanoff. CONCLUSÃO O método espectrofotométrico de determinação de frutose utilizando o reagente de Seliwanoff demonstrou ser uma metodologia precisa, seletiva, exata, linear e adequada para análises, assegurando a confiabilidade dos resultados. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS Brasil (2003). Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Resolução nº 899, de 29 de maio de 2003. Khan, M.A. et al. (2006) J. Anal. Chem., 61:32-36. APOIO
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