análise de diferentes mutações no gene da distrofia muscular de

ANÁLISE DE DIFERENTES MUTAÇÕES NO GENE DA DISTROFIA MUSCULAR
DE DUCHENNE E BECKER ATRAVÉS DA TÉCNICA DE MLPA
Aluno: Jan Carlos Carlos Santana dos Santos
Colaboradores: PEDRO HERNÁN CABELLO E ALEXANDRA PRUFER ARAÚJO
Orientador: VIVIANNE GALANTE RAMOS
Curso / Instituição de Ensino Superior: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS / UNIGRANRIO
Introdução
Nos últimos anos houve a necessidade de mudar o
foco de pesquisa para doenças condicionadas por
fatores genéticos, já que essas contribuem de forma
relevante como causa da mortalidade. Dentre estas
enfermidades, se destacam as neuromusculares tanto
pela sua complexidade como pela sua frequência na
população. A doença mais prevalente é a Distrofia
Muscular de Duchenne (DMD) ligada ao X. Afeta
aproximadamente 1 em cada 3.500 indivíduos do
sexo masculino. A distrofia muscular semelhante à
DMD é denominada Distrofia Muscular de Becker
(DMB), se inicia mais tardiamente. As duas doenças
são de fato causadas por mutações diferentes no
mesmo locus e representam um exemplo de
heterogeneidade. Ambas as doenças resultam de
deleções (65% dos casos de DMD e 85% dos casos
de DMB), porém existem outras alterações
caracterizadas
por
mutações
pontuais
ou
duplicações, que dificultam o diagnóstico molecular
através das técnicas tradicionais.
Objetivos
O objetivo geral é a padronização da técnica MLPA
e possível conclusão de diagnóstico de pacientes
com distrofia, onde a alteração da doença não é
detectada pela metodologia tradicional. A inserção
desta técnica ao diagnóstico molecular tradicional
possivelmente reduzirá o número de casos
inconclusivos, motivo que contribui para o atraso na
inserção do tratamento adequado, antecipando
complicações no curso da doença.
Material e Métodos
A análise do gene da distrofina foi inicialmente feita
pelo método tradicional de PCR Multiplex, após
extração de DNA de 219 pacientes e para os casos
que não se conseguiu fechar o diagnóstico pelo
método tradicional, será realizada a técnica de
MLPA (Multiplex Ligation-Dependent Probe
Amplification) um método que detecta números de
cópias de mais de 45 sequências específicas em uma
única reação.
nos quais 53 apresentam deleções em um ou mais
éxons estudados e todos os indivíduos são do sexo
masculinos. Na segunda etapa do projeto, todos os
casos que foram inconclusivos pelo método
tradicional (PCR Multiplex), serão analisados pela
técnica de MLPA.
Conclusões
A multiplicidade de tipos de distúrbios e a
variabilidade individual nas manifestações clínicas
fazem com que o diagnóstico clínico seja difícil e
nem sempre feito corretamente devido à
similaridade
sintomática
entre
doenças
neuromusculares de origem genética diferente.
Portanto, a caracterização molecular de cada doença
específica no menor tempo possível pode gerar
grandes benefícios, na escolha do tratamento mais
adequado, acarretando uma melhora na qualidade de
vida dos pacientes. Uma das principais dificuldades
no diagnóstico da DMD/DMB é diferenciá-las de
outras doenças neuromusculares que cursam um
quadro clínico bastante semelhante, com hipotonia e
prejuízo no desenvolvimento motor. Já que a
hipotonia muscular no período neonatal pode ser
uma manifestação clínica consequente a vários
processos patogênicos. O diagnóstico molecular
representa mais um exame de escolha para DMD
devido à simplicidade da coleta de sangue. No futuro
é possível que este tipo de teste venha evitar que
outras crianças com problemas semelhantes sejam
submetidas a outros exames que causam
desconforto.
Referências Bibliográficas
BECKER PE and KIENER F. Eine neue Xchromosomale muskeldystrophie. Archiv fuer
Psychiatrie und Nervenkrankheiten. 1955. 193: 427428.
Bolsa de Iniciação Científica (IC):
Resultados
Foram coletados 219 pacientes, essas amostras
foram processadas pelos alunos no Labgen para
obtenção de DNA. Foram analisados 141 pacientes,
O resumo deverá conter obrigatoriamente apenas
1(uma) página.
PROPEP 2013