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CK MB UV FINALIDADE Kit para determinação da atividade da fração MB da Creatina Quinase (CPK) no soro ou plasma pelo método de imunoinibição. SIGNIFICADO CLÍNICO A Creatina Quinase (CPK ou CK) é uma enzima composta de duas subunidades diferentes: M (muscular) e B (cerebral). A combinação destas subunidades origina as isoenzimas CK-MM, CK-BB e CK-MB. A atividade da CPK no músculo esquelético é representada por 96% pela CPK-MM e 4%, pela CPK-MB. Mas no miocárdio a atividade de CPK-MB é maior de 25%, sendo o restante de CPKMM. No cérebro, a atividade de CPK-BB é maior de 90% da CPK total. Sob condições normais, a atividade de CPK total no soro corresponde principalmente à fração MM derivada da atividade fisiológica normal. Diferentes doenças podem elevar a atividade da CPK total. O infarto agudo do miocárdio (IAM) também produz um aumento da CPK-MB, que em aproximadamente 50% dos casos precede a elevação dos níveis de CPK-MB, sendo um marcador muito precoce para o diagnóstico de IAM. PRINCÍPIO DO ENSAIO O método é baseado na inibição imunológica da subunidade M da CPK. O uso de anticorpos monoclonais anti CK-M inibe a atividade restante correspondente à fração B, que dispara a seguinte cadeia de reações: CPK Creatina fosfato + ADP ------------- > creatina + ATP HK ATP + glicose ------------- > ADP+glicose-6-fosfato G6F-DH Glisose-6-fosfato + NADP ------------------ > 6-fosfogliconato + NADPH + H+ Desde que o NADPH tenha a absorbância máxima em 340 nm, a reação pode ser monitorada em espectrofotômetro, com as leituras aumentando proporcionalmente à atividade enzimática. REAGENTES FORNECIDOS (pronto para uso) Código 159050 (50 ml) 1x40ml R1 + 1x10ml R2 R 1: 1 frasco com 40 ml de reagente. R 2: 1 frasco com 10 ml de reagente. Composição dos reagentes fornecidos: Reagente 1: Imidazol ..........125 mmol/l, pH = 6.7 Glicose..............25 mmol/l NADP................. 2.5mmol/l HK............................>2500 U/l EDTA.......................... 2.5 mmol/l Acetato de magnésio............ 12.5 mmol/l N-acetilcisteína--------------- 25 mmol/l Anticorpo monoclonal anti CPK-M humana suficiente para inibir até 2000 U/l de CK-MM R2: Creatina fosfato..........250 mmol/l ADP....................... 15.2 mmol/l AMP....................... 25 mmol/l Di-(adenosina -5’) pentafosfato 103 umol/l G-6-PDH..................> 8800 U/l Conservação e estabilidade dos reagentes Conservar em refrigerador de 2-8 ºC. Todos os reagentes são estáveis até a data de vencimento marcada no rótulo. Sinais de instabilidade ou deterioração dos reagentes Turbidez ou sedimento nos reagentes indicam deterioração. Neste caso, o kit deverá ser descartado Cuidados e precauções Este kit é destinado somente para uso diagnóstico in vitro. A caixa e os frascos deste produto não podem ser reutilizados. Eles devem ser descartados como resíduos perigosos de acordo com a legislação vigente. O pessoal que manipulá-los deverá ser devidamente treinado para a manipulação e eliminação pela instituição ou pelo laboratório que utilizá-los. REAGENTE DE TRABALHO Preparação Código 153050: agregue o conteúdo de um frasco de R2 em um frasco de R1 e homogenize. Alternativamente, misture 4 volumes de R1 com 1 volume de R2 num balão limpo e seco. Anote a data de preparação no rótulo. Composição do Reagente R1 de Trabalho Imidazol.........................100 mmol/l; pH 6,7 Glicose ..........................20 mmol/l EDTA .............................2 mmol/l NADP ............................2 mmol/l ADP .............................3 mmol/l HK................................ >2000 U/l Di (adenosina-5’) pentafosfato....20 µmol/l N-acetil-L-cisteina...............20 mmol/l G-6-PDH...........................>1650 U/l AMP................................ 20 mmol/l Anticorpo monoclonam anti CPK-M humana suficiente para inibir até 2000 U/l DE CK-MM Conservação e estabilidade do Reagente de Trabalho Refrigerador (2-8oC): estável por 3 dias. Temperatura ambiente (15-25 ºC): estável por 24 horas. Sinais de instabilidade ou deterioração Leituras do branco de reagente contra água destilada superiores a 0.800 D.O. (340 nm) indicam deterioração do reagente, que deverá ser descartado. MATERIAIS NECESSÁRIOS, MAS NÃO FORNECIDOS 1. Espectrofotômetro termostatizado para 25, 30 ou 37ºC. 2. Cubetas de leitura. 3. Pipetas e micropipetas para os volumes citados em PROCEDIMENTO DO TESTE. 4. Cronômetro. COLETA E OBTENÇÃO DA AMOSTRA Amostra: Soro ou plasma obtido com heparina separados das hemácias antes dos 30 minutos de obtenção do espécime. Condição de conservação da amostra Refrigerador (2-8 ºC): 48 horas. Não congelar. Temperatura ambiente: (20-25ºC): 8 horas. Substâncias interferentes: Nenhuma interferência foi observada até 7 g/l de glicose, hemoglobina até 6 g/l e triglicérides até 7,5 g/l. A significativa presença de hemólise e CPK-BB produz superestimação da CPK-MB. Leia a descrição de interferência de várias drogas publicada por D.S. Young (Bibliografia 3). Eliminaçao Todos os espécimes devem ser considerados como potencialmente infecciosos, assim como o material em contato com eles. As boas práticas laboratoriais e regulamentos locais deverão ser observados para prosseguir com sua eliminação. Um método sugerido é a autoclave a 121ºC durante 1 hora. Os líquidos devem ser eliminados em hipoclorito de sódio 5%, deixando a inativação proceder por 1 hora. PROCEDIMENTO DO TESTE - Traga o reagente para a temperatura ambiente. - Coloque o espectrofotômetro nas condições de reação: Temperatura: 25º, 30º ou 37ºC. Comprimento de onda: 340 nm. Procedimento: Em uma cubeta equilibrada à temperatura de reação, agregue: R1 de Trabalho 1.0 ml Pré-incube por alguns minutos à temperatura de reação Amostra 40 µl Misture e incube por 10 minutos Leia a absorbância inicial (A1) da amostra e dispare simultaneamente o cronômetro. Leia a absorbância novamente após 5 minutos (A2). CÁLCULOS Calcule a diferença entre as leituras: ∆A=A2-A1 Cálculo da atividade: Atividade de CK-B U/l=∆Ax825 Atividade de CK-B U/l=∆Ax1651 CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO A) Sensibilidade Em espectrofotômetro em 340 nm, lido em cubetas de faces retas com um passo de luz de 1 cm, é aproximadamente 2U/l. B) Faixa dinâmica: Até 800U/l. Se a atividade for maior, repita a determinação utilizando uma diluição da amostra em solução salina; o resultado deverá ser multiplicado pela diluição realizada. C) Precisão (n=10) Intraensayo (n:10) MEDIA U/l 30.0 71.4 161.1 SD U/l ± 3.1 3.9 6.5 C.V. % ± 10.3 5.4 4.0 MEDIA U/l 29.8 71.6 160.7 SD U/l ± 2.3 4.6 6.7 C.V. % ± 7.6 6.4 4.2 Interensayo (n:10) CONTROLE DE QUALIDADE As boas práticas laboratoriais recomendam processar diariamente, amostras normais e patológicas. Recomenda-se o uso de Soro Controle Qualiset GT Lab Nível 1 e 2 (código 602105 e 602205). Cada laboratório deverá desenvolver o seu próprio controle interno de qualidade e ações corretivas se exceder os limites de tolerância aceitáveis. VALORES DE REFERÊNCIA Para a correta interpretação dos resultados obtidos para CPKMB, é necessário saber o valor de CPK total. Atividade da CPK-MB % CPK-MB=------------------------------- X 100 Atividade da CPK Total Em casos de infarto do miocárdio, a atividade de CK-MB deve ser superior a 6% da atividade da CPK total. Em casos de atividade física vigorosa, tanto a atividade da CPKMM como de CK-MB podem subir acima dos valores normais, mas a porcentagem de CK-MB não deve ultrapassar 6%. Quando a CPK-MB supera 20% da atividade de CPK total pode suspeitar-se da presença de CPK atípica (não inibida por anti CK-M). Para diferenciar entre CPK atípica e CPK-MB deve considerar-se o seguinte: a- Os níveis elevados de CPK-MB voltam ao normal em cerca de 30-36 horas. NOTAS: 1- Os volumes de amostra e reagente podem ser modificados desde que se mantenham as proporções indicadas em PROCEDIMENTO DO TESTE. 1. Aplicações para analisadores automáticos estão disponíveis a pedido do cliente e no site: www.gtlab.com.ar APRESENTAÇÃO Código 159050 (50 ml): 1x40 ml R1 + 1x10 ml R2 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Wurzburg, U. Henrich, M. Klin. Wochesnschr, 54,357 (1976). 2. Young, D. Clin. Chem. 21-5:246 (1975). INFORMAÇÃO AOS CLIENTES Garantia GT Laboratório S.R.L. fabrica e comercializa reagentes para diagnóstico in vitro sob Boas Práticas de Fabricação (Good Manufacturing Practices) certificadas de acordo com O.M.S./W.H.O. Technical Report Series 908/2003, C.E.E. Res. 91/536 e A.N.M.A.T. Disp. Nº 3623/1997, ISO 9001:2008 e ISO 13485:2003. Os termos e as condições da qualidade são absolutos dentro das responsabilidades que correspondem a GT Laboratório S.R.L. Fabricado pela GT Laboratorio S.R.L. Necochea 3274 – Rosário - Argentina Uso profissional exclusivo. Autorizado pela A.N.M.A.T. PM 121-42. Diretor técnico: Daniel Gazzola, Bioquímico INFORMAÇÕES DE CONTATO E-mail: [email protected] Site: www.gtlab.com.ar Código de revisão: 15890000/14
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