Discos MASTDISCS™ ID para detecção da beta

Discos MASTDISCS™ ID para detecção da
beta-lactamase AmpC e beta-lactamase de
largo espectro (ESL)
D68C. Para detecção da produção enzimática de betalactamase AmpC e/ou beta-lactamase de largo espectro.
EXCLUSIVAMENTE PARA DIAGNÓSTICO IN VITRO
Conteúdo e formulação*: 4 cartuchos (D68C), cada um
com 50 discos.
Cartucho A
Discos de 10 g de cefpodoxima
Cartucho B
Discos de 10 g de cefpodoxima + inibidor da
ESL
Cartucho C
Discos de 10 g de cefpodoxima + inibidor de
AmpC
Cartucho D
Discos de 10 g de cefpodoxima + inibidor da
ESL + inibidor de AmpC
Conservação e tempo de armazenamento
Conservar a 2 a 8°C nos recipientes fornecidos até ao prazo de
validade mostrado no rótulo da embalagem. Deixar que atinja a
temperatura ambiente antes de abrir.
Precauções
Exclusivamente para diagnóstico in vitro. Cumpra as
precauções aprovadas relativas a perigos biológicos e as
técnicas assépticas. Só deve ser utilizado por técnicos
laboratoriais devidamente treinados e qualificados. Esterilize
todo os resíduos com risco biológico antes da eliminação.
Consulte a folha de dados da segurança do produto.
Materiais necessários mas não fornecidos
Acessórios e equipamento microbiológico padrão, como ansas,
meios de cultura MAST, zaragatoas, varetas aplicadoras,
incineradores e incubadoras, etc., assim como reagentes
serológicos e bioquímicos e aditivos como, por exemplo,
sangue.
Procedimento
1. Utilizando uma cultura pura, fresca do organismo de
ensaio, preparar uma suspensão equivalente em densidade
de um padrão 0,5 McFarland opacidade ou em água
desionizada ou solução salina fisiológica, dependendo do
método seguido.
2. Com uma zaragatoa estéril, espalhe a suspensão
uniformemente em toda a superfície de uma placa de ágar
de teste de susceptibilidade (ex., Mueller Hinton Agar
acordo com Standards Institute clínicos e laboratoriais
(CLSI). Em alternativa, pode usar uma diluição de 1:100 da
suspensão McFarland 0,5 no ágar isotónico para teste de
sensibilidade, que corresponde às recomendações da
British Society for Antimicrobial Chemotherapy (BSAC Sociedade Britânica para Quimioterapia Antimicrobiana).
3. Com uma agulha, pinça ou distribuidor MAST DiscMaster
(MDD62) estéreis, ponha um disco de cada tipo do conjunto
de detecção MAST ID AmpC e ESL no meio inoculado,
garantindo um espaço suficiente entre os discos para
permitir a formação de zonas de inibição claramente
definidas.
4. Incube a 35 a 37°C durante 18 a 24 horas.
5. Meça e registe o diâmetro em mm de quaisquer zonas de
inibição que sejam observadas. Os discos que não
mostrem nenhuma zona de inibição devem ser registados
como 6mm.
Interpretação dos resultados
Interprete os resultados por comparação do diâmetro das
zonas de inibição na sequencia descrita seguidamente :
Passo 1 - Compare a zona de inibição dos discos de
cefpodoxima (A) com a zona de inibição de cada disco de
Cefpodoxime plus inhibitor (B, C e D). Se todas as zonas
estão entre 2 mm de cada um, registe o organismo como
apresentando ausência de actividade ESBL e Amp C.
Passo 2 – Subtraia A de B e C de D. Se cada um dos B – A e
D – C  5mm E se quando comparadas as diferenças nos
diâmetros das zonas entre os discos B e D e discos A e C são
de 4mm ou menos então o organismo esta a demonstrar
actividade ESBL.
Passo 3 - Subtraia B de D e A de C. Se cada um dos D – B e
C – A  5mm E se quando comparadas as diferenças nos
diâmetros das zonas entre os discos A e B e discos C e D são
de 4mm ou menos então o organismo esta a demonstrar
actividade AmpC
Passo 4 - Subtraia C de D. Se D –C  5mm E se quando
comparadas as diferenças nos diâmetros das zonas entre os
discos A e B é de 4mm ou menos então o organismo esta a
demonstrar actividade combinada ESBL e AmpC.
Alternativamente pode ser utilizado um programa de cálculo
que está disponible em www.mastgrp.com
Controlo de qualidade
Verifique se existem sinais de deterioração. O controlo de
qualidade tem de ser feito com pelo menos um organismo para
demonstrar uma reacção positiva e pelo menos um organismo
para demonstrar uma reacção negativa. As zonas de inibição
obtidas com um disco combinado com qualquer um dos
inibidores e o disco correspondente só de cefalosporina contra
controlo negativo de E. coli (ex., ATCC 25922) deve ser igual
ou demonstrar uma diferença inferior a  2 mm. Qualquer
diferença maior indica uma falha ou deterioração. Não utilize o
produto se as reacções com o controlo negativo forem
incorrectas. A lista seguinte apresenta um conjunto de estirpes
de controlo do desempenho, que podem ser facilmente
adquiridas pelo utilizador final.
Organismo de teste
Escherichia coli
NCTC 13351
Escherichia coli
NCTC 13352
Escherichia coli
NCTC 13353
Enterobacter cloacae
NCTC 13406
Escherichia coli
ATCC 25922
Resultado
ESL positivo
ESL positivo
ESL positivo
AmpC positivo
Negativo
Limitações
Para evitar resultados potencialmente erróneos, utilize apenas
um disco combinado com um inibidor com o disco
correspondente só de cefalosporina proveniente da mesma
embalagem/lote. Não teste cartuchos de diferentes lotes - os
lotes nunca devem ser misturados.
Referências
Bibliografia disponível mediante pedido.
IFU179 PT 12/14 V7
MAST é uma marca registada
ATCC é uma marca comercial de American
Type Culture Collection, Manassas, Virgínia, EUA
*A formulação pode ser alterada para cumprir os critérios de desempenho