T4 DNA Ligase

Rev. 01 – Ago/2013
T4 DNA Ligase
Instruções de Uso
DESCRIÇÃO
A T4 DNA Ligase catalisa a formação de uma ligação fosfodiéster entre terminais
justapostos 5’-fosfato e 3’-hidroxil em terminais duplex de DNA ou RNA. A enzima
irá ligar extremidades coesivas e não coesivas, bem como reparar nicks de fitas
simples em duplex DNA, RNA ou híbridos DNA-RNA.
ESPECIFICAÇÃO TÉCNICA
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Aspecto: Líquido
Quantidade: Embalagem com 4000u
Concentração: 200 unidades/µl
Inativação Térmica: a 65°C, por 10 minutos
Tampão de Armazenamento: 10mM Tris-HCl (pH7.5), 50mM NaCl, 0.1mM
EDTA, 10mM 2-mercaptoetanol e glicerol 50%
Fornecido com: 0.2ml de Tampão 10x T4 DNA Ligase
DEFINIÇÃO DA UNIDADE
1uL (*Unidade de ligação de final coesivo) é definida como a quantidade necessária
de enzima para fornecer 50% de ligação de fragmentos de Hind III em DNA lambda
(terminal DNA 5’ com concentração de 0.12µM [300µg/ml]) em 20µl de Tampão 1x
T4 DNA Ligase a 16°C por 30 minutos.
UTILIZAÇÃO*
Protocolo para ligação do inserto no vetor DNA utilizando T4 Ligase
1) Preparar a mistura de reação de acordo com a tabela a seguir:
Componente
Tampão 10X
50% PEG 4000 (apenas para
finais não coesivos)
Volume para reação de
10µl
Concentração Final
1 µl
1X
1 µl
5%
T4 DNA Ligase
Variável
Vetor DNA
Variável
Água livre de nuclease
Completar até obter 10 µl
2) Incubar a mistura a 22°C por 60 minutos.
100-200 unidades (finais
coesivos)
500 unidades (finais não
coesivos)
25-100ng
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Rev. 01 – Ago/2013
3) Inativar a reação aquecendo a 65°C por 10 minutos. A mistura está pronta
para transformação.
Protocolo para ligação do linker utilizando T4 Ligase
1) Preparar a mistura de reação de acordo com a tabela a seguir:
Componente
Volume para reação de 20µl Concentração Final
Tampão 10X
2 µl
1X
50% PEG 4000
1 µl
5%
T4 DNA Ligase
2 µl
400 unidades
Linker fosforilado
Variável
1-2 µg
DNA desfosforilado em tampão TE
Variável
100-500 ng
Água livre de nuclease
Completar até obter 20 µl
-
2) Incubar a reação a 22°C por 60 minutos.
3) Inativar a reação aquecendo a 65°C por 10 minutos. A mistura da reação
está pronta para digestão.
Protocolo autocirculação de DNAlinear utilizando T4 Ligase
1) Preparar a mistura de reação de acordo com a tabela a seguir:
Componente
Volume para reação de
50µl
Concentração Final
Tampão 10X
5 µl
1X
50% PEG 4000 (apenas para
finais não coesivos)
5 µl
5%
T4 DNA Ligase
5 µl
1000 unidades
Água livre de nuclease
Completar até obter 50 µl
-
2) Incubar a reação 22°C por 60 minutos.
3) Inativar a reação aquecendo a 65°C por 10 minutos. A mistura da reação
está pronta para transformação.
* Este protocolo é destinado apenas a uso geral. A utilização do produto pode variar
de acordo com a pesquisa em ação.
CONTROLE DE QUALIDADE
Todos os componentes foram verificados e são livres de contaminação por
endonucleases, exonucleases e atividade DNase não específica.
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Rev. 01 – Ago/2013
ARMAZENAGEM E TRANSPORTE
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Informações de Transporte: Transportar em gelo seco.
Informações de Armazenagem: Armazenar a -20°C por período curto (1
mês).
Para períodos longos, armazenar a -70°C.
Validade: Variável, de acordo com o lote.
INFORMAÇÕES SOBRE DESCARTE
O produto não é classificado como perigoso e não requer métodos especiais de
descarte. Descarte de acordo com as normas ambientais locais em vigência.
INFORMAÇÕES DO PRODUTO
Código
Descrição
Embalagem
ME4303
T4 DNA Ligase
4000u
ME4304
T4 DNA Ligase
20000u
INFORMAÇÕES E CONTATOS DO DISTRIBUIDOR
Biometrix
Rua Estrada da Graciosa, 1081 - Curitiba - PR - CEP: 82840-360
Tel.: (41) 2108-5250
Fax: (41) 2108-5252
DDG: 0800 726 0504
E-mail: [email protected] e [email protected]
Site: www.biometrix.com.br
INFORMAÇÕES DO FABRICANTE
Vivantis Technologies Sdn Bhd 587389-D
Revongen Corporation Center
Nº 12A, Jalan TP5, Taman Perindustrian UEP
47600 Subang Jaya, Selangor Darul Ehsan, Malaysia
E-mail: [email protected]
Site: www.vivantechnologies.com
Tel.: +6 03 8025 1603
Fax: +6 03 8025 1637/1354
RESPONSÁVEL TÉCNICA
Edna Cristina Kurokawa Guimarães Ferreira
CRQ/PR: 09302336
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