T4 DNA Ligase

Rev. 02 – Set/2013
T4 DNA Ligase
Instruções de Uso
DESCRIÇÃO
A T4 DNA Ligase catalisa a formação de uma ligação fosfodiéster entre terminais justapostos
5’-fosfato e 3’-hidroxil em terminais duplex de DNA ou RNA. A enzima irá ligar extremidades
coesivas e não coesivas, bem como reparar nicks de fitas simples em duplex DNA, RNA ou
híbridos DNA-RNA.
ESPECIFICAÇÃO TÉCNICA
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Aspecto: Líquido
Quantidade: Embalagem com 4000u
Concentração: 200 unidades/µl
Inativação Térmica: a 65°C por 10 minutos
Tampão de Armazenamento: 10mM Tris-HCl (pH7.5), 50mM NaCl, 0.1mM EDTA, 10mM
2-mercaptoetanol e glicerol 50%
Fornecido com: 0.2ml de Tampão 10x T4 DNA Ligase
DEFINIÇÃO DA UNIDADE
1u (*Unidade de ligação de final coesivo) é definida como a quantidade necessária de enzima
para fornecer 50% de ligação de fragmentos de Hind III em DNA lambda (terminal DNA 5’ com
concentração de 0.12µM [300µg/ml]) em 20µl de Tampão 1x T4 DNA Ligase a 16°C por 30
minutos.
UTILIZAÇÃO*
Protocolo para ligação do inserto no vetor DNA utilizando T4 Ligase
1) Preparar a mistura de reação de acordo com a tabela a seguir:
Componente
Volume para reação de 10µl
Concentração Final
Tampão 10X
50% PEG 4000 (apenas para
finais não coesivos)
1µl
1X
1µl
5%
T4 DNA Ligase
Variável
Vetor DNA
Variável
100-200 unidades (finais
coesivos)
500 unidades (finais não
coesivos)
25-100ng
Água livre de nuclease
Completar até obter 10µl
2) Incubar a mistura a 22°C por 60 minutos.
3) Inativar a reação aquecendo a 65°C por 10 minutos. A mistura está pronta para
transformação.
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Rev. 02 – Set/2013
Protocolo para ligação do linker utilizando T4 Ligase
1) Preparar a mistura de reação de acordo com a tabela a seguir:
Componente
Volume para reação de 20µl
Concentração Final
Tampão 10X
2µl
1X
50% PEG 4000
1µl
5%
T4 DNA Ligase
2µl
400 unidades
Linker fosforilado
Variável
1-2µg
DNA desfosforilado em tampão TE
Variável
100-500ng
Água livre de nuclease
Completar até obter 20µl
-
2) Incubar a reação a 22°C por 60 minutos.
3) Inativar a reação aquecendo a 65°C por 10 minutos. A mistura da reação está pronta
para digestão.
Protocolo para autocirculação de DNA linear utilizando T4 Ligase
1) Preparar a mistura de reação de acordo com a tabela a seguir:
Componente
Volume para reação de 50µl
Concentração Final
Tampão 10X
5µl
1X
50% PEG 4000 (apenas para finais
não coesivos)
5µl
5%
T4 DNA Ligase
5µl
1000 unidades
Água livre de nuclease
Completar até obter 50µl
-
2) Incubar a reação 22°C por 60 minutos.
3) Inativar a reação aquecendo a 65°C por 10 minutos. A mistura da reação está pronta
para transformação.
* Este protocolo é destinado apenas a uso geral. A utilização do produto pode variar de
acordo com a pesquisa em ação.
CONTROLE DE QUALIDADE
Todos os componentes foram verificados e são livres de contaminação por endonucleases,
exonucleases e atividade DNase não específica.
ARMAZENAGEM E TRANSPORTE
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Informações de Transporte: Transportar em gelo reciclável.
Informações de Armazenagem: Armazenar a -20°C por período curto (1 mês).
Para períodos longos, armazenar a -70°C.
Validade: Variável, de acordo com o lote.
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Rev. 02 – Set/2013
INFORMAÇÕES SOBRE DESCARTE
O produto não é classificado como perigoso e não requer métodos especiais de descarte.
Descartar de acordo com as normas ambientais locais em vigência.
INFORMAÇÕES DO PRODUTO
Código
Descrição
Embalagem
ME4303
T4 DNA Ligase
4000u
ME4304
T4 DNA Ligase
20000u
INFORMAÇÕES E CONTATOS DO DISTRIBUIDOR
Biometrix
Rua Estrada da Graciosa, 1081 - Curitiba - PR - CEP: 82840-360
Tel.: (41) 2108-5250
Fax: (41) 2108-5252
DDG: 0800 726 0504
E-mail: [email protected] e [email protected]
Site: www.biometrix.com.br
INFORMAÇÕES DO FABRICANTE
Vivantis Technologies Sdn Bhd 587389-D
Revongen Corporation Center
Nº 12A, Jalan TP5, Taman Perindustrian UEP
47600 Subang Jaya, Selangor Darul Ehsan, Malaysia
E-mail: [email protected]
Site: www.vivantechnologies.com
Tel.: +6 03 8025 1603
Fax: +6 03 8025 1637/1354
RESPONSÁVEL TÉCNICA
Edna Cristina Kurokawa Guimarães Ferreira
CRQ/PR: 09302336
Aprovação:
23/09/2013
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Renata Morishita
Laboratório
Assinado por: Renata Morishita
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