49 Exame andrológico do cão Breeding soundness evaluation of

JBCA – Jornal Brasileiro de Ciência Animal 2008 v. 1, n. 1, p. 49-65
Exame andrológico do cão
Breeding soundness evaluation of male dog
Isabel Candia Nunes da Cunha1
Resumo
O aumento do interesse na reprodução canina parece oferecer um futuro
brilhante à medicina veterinária, sendo assim, se faz necessário o
conhecimento das técnicas e dos parâmetros mínimos de avaliação da
fertilidade do cão. Desta forma, os proprietários de cães e os grandes
criatórios poderão desfrutar brevemente, e em larga escala, das novas
biotecnologias propostas pelos pesquisadores da área de reprodução em
pequenos animais. O objetivo desta revisão é atualizar os conceitos,
principais tópicos e a metodologia a ser empregada para a realização do
exame andrológico de cães.
Palavras chave: exame andrológico, avaliação do sêmen, cão.
Abstract
The increasing interest in canine reproduction offers a great future in
veterinary medicine. To achieve this goal, the understanding of new
technologies available for the male dog reproduction evaluation is
mandatory. With these advances, new technologies will be offered in the
small animal reproduction field and they will be available to dog owners and
kennels, in the coming future. The aim of this paper is review the concepts,
main topics and methodology to perform male reproductive examination.
Key words: Breeding soundness evaluation, semen evaluation, dog.
1
Médica veterinária. Professora da Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro. Núcleo
de Apoio a Reprodução de Carnívoros – Laboratório de Reprodução e Melhoramento Genético
Animal/CCTA. Email: [email protected]
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JBCA – Jornal Brasileiro de Ciência Animal 2008 v. 1, n. 1, p. 49-65
Introdução
A
determinação
características
seminais
das
é
um
recurso importante para se predizer
o
potencial
fertilizante
de
I - Exame andrológico
1 - Anamnese
um
Deve
ser
realizada
uma
macho. Deve ser comumente posta
anamnese cuidadosa do animal
em
da
para que o clínico obtenha uma
capacidade reprodutiva dos animais
história completa, partindo de todos
domésticos1.
os órgãos antes de investigar o trato
prática
para
avaliação
reprodutivo.
A
realização
do
exame
órgãos
Doenças
ou
de
sistemas
outros
podem,
andrológico em cães, prévio à sua
secundariamente,
seleção e/ou utilização em um
reprodutivo por extensão direta,
esquema de reprodução artificial, é
devido a infecções ou neoplasias,
de grande importância, sendo ainda
ou
indicada em outras circunstâncias
padrões
como:
de
hormonal (testosterona, FSH, LH ou
reprodutores, seleção de doadores
GnRH). Devemos ainda considerar
para
de
a adição exógena de drogas (ex:
inseminação artificial ou diagnóstico
corticóides), condições de estresse,
de patologias do sistema genital
traumas
masculino2,3,4,5.
prévias5 .
compra
uso
em
ou
venda
programas
Primeiramente, é necessário
indireta,
por
afetar
trato
alteração
normais
ou
o
de
doenças
dos
secreção
sistêmicas
2 - Exame Físico
realizar uma boa anamnese e um
Um exame físico completo é
exame físico completo do animal,
tão importante quanto uma história
observando-se a possibilidade da
completa. O reconhecimento de
existência de doenças sistêmicas
problemas
crônicos
que podem interferir na esfera
sistemas,
assim
reprodutiva.
reconhecimento
Após
isso,
o trato
de
outros
como
de
o
defeitos
reprodutivo do macho deve ser
genéticos, são importantes para um
completamente avaliado.
bom direcionamento e avaliação de
50
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qualquer
reprodutiva6.
desordem
3.2 - Testículos
Deverá ser solicitado o exame de
brucelose
(figura
1)
além
verificação de outros
patológicos
que
Nos cães, a ”descida” dos
da
testículos geralmente se completa
processos
aos 10 dias de vida, e ambos os
podem
ser
testículos podem ser palpados após
transmitidos sexualmente ou por
seis semanas de vida. Somente
contato direto (no caso de animais
após seis meses de vida do animal
que realizarão a monta natural).
é que a ausência dos testículos no
saco
escrotal
pode
sugerir
3 - Exame específico do trato
criptorquidismo. Em cães jovens,
reprodutivo do cão
contudo, a retração temporária do
O trato reprodutivo do cão
testículo no canal inguinal ou lateral
deve ser completamente avaliado,
ao pênis pode ocorrer devido a
partindo-se
agitação ou excitação do animal8.
da
bolsa
escrotal,
testículos, epidídimo, prosseguindo
para
o
pênis
e,
finalmente,
a
glândula
palpados e avaliados quanto ao
prostática. Durante o exame deve-
tamanho, forma e consistência. O
se
testículo esquerdo é geralmente
examinando-se
observar
principalmente
os
seguintes aspectos2,3,4,5,7:
Os
caudal
ao
testículos
direito.
devem
Apesar
ser
do
testículo dos cães ter um tamanho
médio de 2 a 4cm de comprimento
3.1 - Bolsa escrotal
Deve
recoberta
ser
de
espessura
esparsamente
pêlos,
apresentar
uniforme,
e de 1,2 a 2,5cm de diâmetro, as
diferenças de tamanho entre as
ser
diversas raças excluem um padrão
relativamente fina e macia ao toque
rígido com referência a todos os
e apresentar-se móvel em relação
tamanhos de cães. Entretanto, o
ao testículo. O animal não deve
profissional deve atentar para uma
apresentar
grande diferença de tamanho entre
dor
à
palpação.
A
inspeção visual do escroto tem
os dois testículos.
como objetivo verificar sinais de
inflamação, trauma, alterações de
volume ou cicatrizes (figura 2).
O par de testículos deve ser
oval, com contorno fino e regular, e
estar posicionado dorsoventralmente. A
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palpação de irregularidades, como
cordão
nódulos ou aderências, pode sugerir
palpados para observar prováveis
inflamação crônica,
áreas
infecção
ou
neoplasias.
espermático
de
devem
espessamento
ser
ou
aumento de volume.
A palpação do testículo não
3.4 - Pênis e prepúcio
deve ser dolorosa quando realizada
gentilmente.
A
dor
à
palpação
Sem a ereção, o prepúcio
cobre
completamente
pênis
sugere orquite aguda ou torção,
canino
especialmente se o testículo estiver
preocupar
aumentado de volume. Além disso,
purulentas, sangue ou urina. O
deve
pênis deve ser facilmente removido
ter
consistência
firme
normal.
o
(semelhante à de bíceps semi-
do
flexionado)
exposto.
e
não
ser
duro
à
Devemos
com
prepúcio
O
e
nos
descargas
completamente
prepúcio
deve
ser
palpação. Uma consistência macia
tracionado caudalmente e o bulbo
ou pastosa sugere degeneração
da glande exposto. Quando há falha
testicular,
uma
na exposição do pênis, devemos
sugere
suspeitar de estreitamento do óstio
enquanto
consistência
endurecida
neoplasia ou orquite.
prepúcial
(fimose)
ou
aderência
entre o pênis e prepúcio.
3.3
-
Epidídimo
e
cordão
Depois de exposto, o pênis
espermático
O
epidídimo
é
fixado
deve ser totalmente avaliado para a
dorsolateralmente à superfície do
presença
testículo, com a cabeça e a cauda
hematomas,
localizadas nos pólos cranial e
corpos
caudal
respectivamente.
tumorais (figuras 3 e 4).
epidídimo
continua
deferente,
localizado
como
O
de
inflamações,
trauma,
estranhos
ou
fraturas,
massas
ducto
dentro
do
A mucosa peniana deve ser
cordão espermático, que contém:
rósea clara, fina e indolor ao toque.
ducto
artéria
Uma balanopostite normal é vista
plexo
como uma descarga mucopurulenta
pampiniforme, linfáticos, nervos e
média cobrindo a mucosa peniana.
músculo cremaster. O epidídimo e o
O pênis deve ser palpado para
deferente,
espermática,
veias
do
52
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tamanho
e
conformação.
Uma
A presença de tamanho e
deformação congênita ou fratura
consistência anormais, assimetria
pode
e
entre lobos ou dor à palpação
pênis
suporta a presença de disfunção
a
bainha
prostática e indica a necessidade de
Igualmente,
uma
um diagnóstico complementar para
osso
a avaliação da glândula.
resultar
inabilidade
em
completamente
prepucial.
diminuição
peniano
em
desvio
retrair
para
o
congênita
pode
do
causar
uma
excessiva flacidez da ponta do
pênis e uma habilidade de cópula
prejudicada.
4 - Avaliação do sêmen
A análise do sêmen deve ser
incluída na avaliação andrológica
para detectar possíveis problemas
de infertilidade ou sub-fertilidade,
3.5 - Glândula prostática
A glândula prostática é a
única glândula acessória em cães.
Normalmente
além de fazer parte da rotina précobertura ou inseminação em cães.
localiza-se
cranialmente à pélvis, porém, a
4.1 - Técnicas para a obtenção do
disposição
sêmen
cranial
pode
estar
alterada no abdômen devido à
A coleta do sêmen pode ser
distenção da bexiga por urina. A
realizada excitando-se o macho na
glândula prostática rodeia o colo da
presença ou ausência de uma
bexiga, a porção cranial da uretra e
fêmea no cio,
a
ducto
manual do pênis (figura 5) ou,
deferente. Um septo médio divide a
ainda, em casos excepcionais, por
glândula em dois lobos iguais, finos
meio de eletroejaculação3.
porção
terminal
do
por
estimulação
e firmes, que podem casualmente
ser palpados pelo reto. Em cães
grandes,
a
porção
caudal
Todo o material que será
da
utilizado para a coleta e exame do
próstata é palpável. O tamanho e o
sêmen deverá ser de vidro ou
peso da glândula prostática são
plástico aquecido a 37ºC, sendo
dependentes da idade, raça e peso
que o material plástico minimiza os
corpóreo do cão.
riscos de acidentes envolvendo o
animal e o coletador durante a
coleta7.
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O
ejaculado
canino
reflui retrogradamente para a bexiga
apresenta três frações distintas e,
ou é eliminado pelo orifício externo
segundo
9
Heidrich
foi
da uretra em quantidades variando
Freiberg, em 1935, o primeiro a
de pequenas gotas até muitos
identificar
mililitros, dependendo do tamanho
o
(1977) ,
fracionamento
no
ejaculado do cão, chamando a
prostático7.
primeira fração de uretral ou préespermática, a segunda, de fração
De acordo com Feldman e
a
Nelson (1996)5, as freqüências de
terceira, de fração prostática ou
coletas de sêmen para o cão podem
pós-espermática.
ser: 1) uma coleta a cada 48 horas;
rica
em
espermatozóides,
e
2) uma coleta ao dia durante 3 dias
A primeira fração (ou pré-
consecutivos e um repouso de 2
espermática) apresenta um aspecto
dias ou 3) duas coletas ao dia e
aquoso, cujo pH varia de 6,2 a 6,5
repouso de 2 dias, podendo ocorrer
com um volume médio de 2,4 ±
um aumento na concentração total
1,8ml.
de espermatozóides após alguns
A
segunda
fração
(ou
espermática) apresenta um aspecto
de
cremoso
a
aquoso,
dias de repouso sexual.
sua
coloração fisiológica varia de branco
4.2 - Avaliação macroscópica do
opalescente ao marfim, o pH situa-
sêmen
se entre 6,3 a 6,6 e o volume médio
varia de 0,5 a 3,5ml. A última fração
a) Volume:
do ejaculado é de origem prostática,
O volume mensurado através
apresenta um aspecto aquoso e seu
da graduação do tubo coletor e a
7,10,11,12
pH oscila entre 6,5 e 7,0
. O
quantidade
de
ejaculado
obtida
volume desta fração é diretamente
podem variar de acordo com a
proporcional à atividade secretória
idade,
da glândula prostática, sendo seu
coletas, método e duração das
volume médio 6,48 ± 4,32 ml13,4.
coletas. O volume normal vai de 1 a
tamanho,
freqüência
de
40ml por ejaculado2,3,5. Aguiar et al.
O
produzido
fluido
prostático
continuamente
é
(1994)4, citaram valor de 5,98 ±
nos
2,3ml para ejaculado total de cães
machos caninos não castrados e
de até 20 kg.
54
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geralmente
é
originária
de
O volume de um ejaculado
ferimentos ocorridos no pênis ereto
canino está diretamente ligado à
ou de processos patológicos da
quantidade de líquido prostático
glândula prostática2,3,5.
eliminado durante a ejaculação e,
como
descrito
anteriormente,
a
próstata canina tende a aumentar
4.3 - Avaliações microscópicas
do sêmen
com o avanço da idade como
resultado
de
uma
hiperplasia
a) Motilidade e Vigor:
prostática benigna. A maioria dos
A motilidade e o vigor são
animais não castrados e com mais
avaliados
de cinco anos apresenta a próstata
uma gota de sêmen sobre lâmina
aumentada
e
aquecida (35-37 ºC), sendo esta
região
recoberta por lamínula. O exame é
de
posicionada
volume
na
abdominal7,14.
subjetivamente
realizado
sob
colocando-se
microscopia
de
contraste de fase. O resultado
b) Cor e aspecto:
obtido
A cor e o aspecto devem ser
deve
ser
porcentagem
expresso
(0-100)
para
em
a
mensurados por meio de análise
motilidade e um escore de zero a
subjetiva. A cor do ejaculado canino
cinco (0-5) para o vigor6.
pode variar de branco opalescente
ao turvo. Esta variação é decorrente
de
alterações
na
concentração
A avaliação da motilidade
espermática é definida como o
espermática e o aspecto vai do
percentual
leitoso ao aquoso, dependendo da
móveis de um ejaculado e o vigor
quantidade
representa a intensidade com a qual
de
fração
prostática
coletada.
as
de
células
espermatozóides
espermáticas
se
locomovem. O conjunto destas duas
A
cor amarelada de um
avaliações
é
ejaculado canino sugere a presença
parâmetro
da
de urina; a cor verde com ou sem
um
importante
qualidade
e
6
viabilidade do sêmen .
grumos, é sugestiva de pus e de
infecção do trato reprodutivo; a cor
vermelha sugere hemorragia, que
O
movimento
retilíneo
progressivo é considerado normal
55
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em cães e reflete habilidade e
viabilidade
para
fertilizar
2,3,5,15
óvulo
valores
médios
o
sistema
o
computadorizado podemos avaliar a
4
qualidade do movimento. Dentre as
. Aguiar et al. (1994)
observaram
Utilizando-se
de
possíveis
avaliações
ressalta-se:
68,91 ± 12,38% para motilidade
motilidade espermática total (MT),
espermática e de 3,19 ± 0,76 para o
motilidade total progressiva (MP),
vigor espermático em cães com
padrão
peso corpóreo de, no máximo,
espermática (VAP), velocidade de
20kg.
deslocamento em linha reta (VSL),
médio
velocidade
A
avaliação
subjetiva
do
de
de
velocidade
deslocamento
curvilíneo (VCL), sobreposição do
movimento espermático é muito
deslocamento
importante e deve ser realizada
deslocamento curvilíneo VSL/VCL
rotineiramente. No entanto, por ser
(STR) e, ainda, a linearidade do
realizada por um técnico, pode estar
movimento, ou seja a proximidade
sujeita a um grande número de
da linha de deslocamento com uma
variações, principalmente no que
linha
diz respeito ao grau de habilidade e
retilíneo
linear
e
(LIN)
do
dos
16
espermatozóides .
experiência do avaliador.
Ellington
Para que estas variações
et
al.
(1993)17
apresentaram resultados médios de
sejam minimizadas, uma avaliação
73
computadorizada
espermática de cães através de
do
movimento
espermático pode ser realizada.
16
±
9%
avaliação
para
a
motilidade
computadorizada.
Iguer-Ouada e Verstegen (2001)
concluíram
propuseram a padronização de um
progressiva
método
de
consideravelmente entre indivíduos,
movimento
e que a associação da motilidade
apresentou
progressiva
computadorizado
avaliação
do
espermático∗,
que
que
a
Eles
motilidade
pode
e
da
variar
concentração
ótimos resultados na avaliação de
espermática caracteriza, na prática,
espermatozóides
de modo satisfatório, o potencial
da
espécie
canina.
fertilizante de uma amostra de
sêmen.
∗ ∗
(HTR-IVOS10 analyzer, Hamilton Thorn
Research, Beverly, Mass, USA)
56
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b) Concentração espermática:
A
esfregaço. Os resultados devem ser
concentração
é
determinada através da contagem
das
células
espermáticas
expressos
em
em
Feldman e Nelson (1996)5 e
de 1:20 em água, e o número de
Johnston
espermatozóides é expresso em
classificaram
Aguiar
et
(1994)4
al.
e
registrados individualmente.
Câmara de Neubauer, após diluição
mm3.
porcentagem
et
(2001)20
al.
as
alterações
da
morfologia espermáticas de cães
confirmaram ser normal para cães
como:
1)
primárias
de até 20 kg de peso corpóreo, a
advindas
concentração espermática de 47,73
espermatogênese) e 2) secundárias
± 12,20 x 106 / ml de ejaculado.
(aquelas surgidas durante o trajeto
de
(aquelas
defeitos
na
entre o testículo e o epidídimo, no
c)
Avaliação
da
morfologia
espermática:
interior do epidídimo ou devido a
manipulação do sêmen). Segundo
Uma das metodologias que
estes autores, reprodutores normais
pode ser utilizada para a avaliação
devem apresentar 70% de células
da morfologia espermática é a
espermáticas
coloração dos esfregaços de sêmen
normal.
pelo método Karras modificado18,
espermáticas
incluindo-se a etapa de fixação dos
alteradas
esfregaços de sêmen canino por
máximo,
imersão em solução salina aquecida
morfológicas primárias e 20% de
a
19
37ºC .
A
coloração
com
com
Dentre
as
células
consideradas
poderão
10%
morfologia
haver,
de
no
alterações
alterações morfológicas secundárias.
6
Vermelho Gongo e Cristal Violeta
também possibilita a coloração de
De acordo com o Manual
esfregaços de sêmen de cão. Após
para
a coloração, os esfregaços devem
CBRA6, as alterações morfológicas
ser avaliados em microscopia de
dos
campo
reprodutores caninos devem ser
claro
com
aumento
de
Avaliação
Andrológica
espermatozóides
classificadas
da cabeça, colo, peça intermediária
maiores (aqueles de maior impacto
e cauda. Devem ser avaliadas 200
sobre a fertilidade) e 2) defeitos
células
menores (aqueles que traduzem
em
cada
1)
dos
1000x, observando-se as estruturas
espermáticas
como:
do
defeitos
57
JBCA – Jornal Brasileiro de Ciência Animal 2008 v. 1, n. 1, p. 49-65
menor impacto para a fertilidade da
21
célula
espermática) .
segundo
este
intracelular) seja alcançado. Para
Ainda
que o equilíbrio seja alcançado
os
ocorre um aumento de volume
manual,
reprodutores podem apresentar, no
intracelular,
já
que
a
célula
máximo, 20% de defeitos menores
espermática deverá “diluir” o seu
e 10% de defeitos maiores em seus
meio intracelular até que a condição
ejaculados.
hiposmótica do meio externo seja
atingida. Este processo fisiológico
22
Oettlé (1993)
avaliação
afirmou que a
da
espermática
morfologia
é
o
teste
que
induz ao edema da cauda dos
espermatozóides,
que
pode
ser
facilmente verificado através de
apresenta maior correlação com a
microscopia
fertilidade, após verificação de que
enrolamento
cães
espermatozóides. Este mecanismo
com
mais
de
60%
espermatozóides
de
normais
simples
óptica
das
de
pelo
caudas
defesa
dos
da
célula
apresentaram taxa de fertilidade de
espermática gerou um método de
61%, enquanto outros, com menos
avaliação
de
espermatozóides
membranas celulares denominado
normais, uma taxa de fertilidade de
teste hiposmótico (HOS), que logo
apenas 13%.
foi incluído na rotina de vários
60%
de
da
integridade
das
laboratórios de andrologia23,24.
d) Avaliação da integridade das
membranas espermáticas:
O teste hiposmótico pode ser
A manutenção da integridade
considerado mais do que uma
das membranas espermática é de
avaliação
fundamental importância para que
integridade da célula espermática.
uma célula espermática finalize sua
Ele também é um indicativo da
função
a
capacidade funcional da membrana
fertilização. A membrana de uma
em realizar trocas com o meio
célula espermática intacta realiza
extracelular,
que
transporte seletivo de fluidos e em
principais
necessidades
condições
hiposmolaridade.
momento da capacitação e posterior
Estas trocas continuam até que um
fecundação, principal objetivo de
ponto de equilíbrio osmótico (extra e
uma célula espermática23,24.
primordial
de
que
é
da
morfologia
é
uma
e
da
das
no
58
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classificados como reativos ao HOS
Para
realização
do
teste
quando
apresentarem
cauda
hiposmótico, os espermatozóides
enrolada e o resultado deve ser
são incubados em uma solução
expresso em porcentagem (%).
hiposmótica
(150mOSM)
e
posteriormente avaliados quanto à
Um outro método que pode
sua morfologia sob contraste de
ser utilizado para a verificação da
fase.
integridade
As
células
espermáticas
das
membranas
íntegras apresentam enrolamento
espermáticas de cães é a uma
de caudas, evento que pode ser
associação
visualizado através de microscopia
fluorescentes – Iodeto de Propídio e
de
Carboxifluoresceína –, descrita por
contraste
de
fase.
A
das
(1990)26
porcentagem de espermatozóides
Harrison
com enrolamento de cauda, ou seja,
modificada
íntegros,
(1996)27. Para a execução do teste,
pode
então
ser
computada24.
e
sondas
Vickers
por
Cunha
et
e
al.
10µl de sêmen são acrescidos de
40µl
da
solução
de
trabalho,
Um novo teste hiposmótico
composta por: 960 µl de solução de
para o sêmen do cão utilizando a
citrato de sódio a 3 %; 10 µl solução
água como solução hiposmótica foi
de iodeto de propídio (10 mg de
desenvolvido25,
iodeto de propídio + 20 ml solução
verificando
correlação
entre
e
a
fisiológica);
motilidade
espermática.
Para
a
carboxifluoresceina
realização deste teste, uma parte de
carboxifluoresceina
sêmen deve ser misturada a quatro
DMSO); 10µ l solução 1:80 de
partes de água, obtida diretamente
formalina a 40%. As amostras
da torneira, e incubada em banho-
deverão
maria a 37°C por 5 minutos. O
iluminação
resultado
ser
(400x) e deverão ser contadas
verificado sob microscopia óptica
200 células que serão classificadas
comum utilizando-se câmara de
como: íntegras (as células emitindo
Neubauer,
200
fluorescência verde) ou lesadas (as
ser
células com o núcleo emitindo fluorescência
ser
vermelha).
do
o
HOS
deve
onde
espermatozóides
avaliados.
HOS
alta
Estes
devem
devem
20ml
ser
solução
de
(9,2m g
+
avaliadas
20ml
sob
epifluorescente
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Figura 1: Cão. Bolsa escrotal. Orquite. 1- Acúmulo de
líquido que levou ao aumento de volume da bolsa
escrotal causado por brucelose canina.
Figura 2: Cão. Bolsa escrotal. Orquite. 1- Ulcerações e
aumento de volume da bolsa escrotal.
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Figura 3: Cão. Pênis. 1- Hematoma peniano.
Figura 4: Cão. Pênis. 1- Base do pênis; 2- Tumor
venéreo transmissível.
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Figura 5: Cão. Coleta de sêmen por meio
de estimulo manual do pênis.
Figura 6: Cão. Espermatozóides. 1 – Espermatozóide
íntegro; 2- Espermatozóide parcialmente lesado; 3Espermatozóide lesado. 1000x. Carboxifluoresceína e
Iodeto de propídio.
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Recebido em: Novembro de 2007
Aceito em: Junho de 2008
Publicado em: Abril / Maio / Junho de 2008
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