GONADOTROPINA CORIÓNICA HUMANA (hCG)
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GONADOTROPINA CORIÓNICA HUMANA (hCG)
hCG EIA - VISUAL COD 55010 48 Determinações COD 55000 96 Determinações GONADOTROPINA CORIÓNICA HUMANA (hCG) CONSERVAR A 2-8ºC Reagentes para a determinação de hCG Só para uso in vitro nos laboratórios clínicos Enzimoimunoensaio rápido qualitativo PROVA EM MICROPLACA FUNDAMENTO DO MÉTODO MATERIAL ADICIONAL A gonadotropina coriónica humana (hCG) da amostra une-se aos anticorpos que revestem a superfície dos poços (cadeia α) e ao anticorpo conjugado com peroxidase (cadeia β). Seguidamente junta-se ao substrato da peroxidase e a cor gerada é proporcional á concentração de hCG na amostra1. AMOSTRAS Soro ou urina recolhido mediante procedimentos standard. Não é preciso filtrar nem centrifugar as amostras. CONTEÚDO A. Conjugado B1. Substrato B2. Cromógenio CO. Controle Valor Discriminante C –. ControleNegativo C +. Controle Positivo D. Gotas de amostra M. Microplaca – Cronómetro – Toalhas de papel absorvente COD 55010 COD 55000 1 x 2,5 mL 1 x 6 mL 1 x 6 mL 1 x 2 mL 1 x 2 mL 1 x 2 mL 50 6 x 8 poços 1 x 4,4 mL 1 x 6 mL 1 x 6 mL 1 x 2 mL 1 x 2 mL 1 x 2 mL 100 12 x 8 poços COMPOSIÇÃO A. Conjugado. Anticorpos monoclonáis anti-βhCG conjugados com peroxidase e estabilizados, bloqueante de anticorpos heterofílicos. Tampa e reagente verdes. B1. Substrato. Peróxido de hidrógenio 5 mmol/L estabilizado, tampão citrato-fosfato 100 mmol/L. Tampa branca. B2. Cromógenio. Tetrametilbencidina 1,5 mmol/L estabilizada. Tampa amareia. CO. Controle de Valor Discriminante. Material de controle que contem 25 mUI/mL de hCG. Tampa negra. C -. Controle Negativo. Material de controle que não contem hCG. Tampa azul. C +.Controle Positivo. Material de controle que contem 100 mUI/mL de hCG. Tampa vermelha. D. Gotas de amostra. M. Microplaca. Tiras de 8 poços separadas individualmente, revestidos de anti-αhCG. CONSERVAÇÃO Conservar a 2-8ºC. Os reagentes são estáveis até à data de caducidade indicada na etiqueta, desde que se conservem bem fechados e se evite a contaminação durante o seu uso. Indicações de deterioração: – Componentes líquidos: Presença de partículas, turvação. Para obter resultados óptimos, recomenda-se utilizar a primeira urina da manhã, ainda que se possa utilizar urina recolhida a qualquer hora do dia. A gonadotropina coriónica humana é estável no soro e urina durante 2 dias a 2-8ºC ou até um mês caso se congele a amostra. PROCEDIMENTO 1. Deixar amoderar as amostras e os reagentes á temperatura ambiente. 2. Abrir a bolsa da Microplaca (M) e tirar o suporte com a quantidade necessária de poços a utilizar (Nota 1). 3. Depositar em poços distintos e adequadamente identificados: 1 gota de amostra do paciente, Controle de Valor Discriminante (CO), Control Negativo (C -) e Control Positivo (C +). 4. Juntar 1 gota de Conjugado (A) a cada poço e sacudir cuidadosamente a microplaca para misturar. 5. Deixar uns 3 minutos á temperatura ambiente. 6. Inverter a microplaca para esvaziar o conteúdo dos poços. 7. Lavar os poços 5 vezes. Para isso: encher os poços com água corrente, inverter para esvaziar o conteúdo e bater sobre uma toalha de papel absorvente (Notas 2 e 3). 8. Juntar 1 gota de Substrato (B1) e 1 gota de Cromógenio (B2) a cada poço e sacudir ligeiramente a microplaca para misturar os reagentes. 9. Deixar á temperatura ambiente até que o poço do Controle de Valor Discriminante (CO) tenha cor azul (aproximadamente 5 minutos). LEITURA Examinar os poços sobre uma superfície branca e comparar a cor desenvolvida no poço da amostra com a cor desenvolvida no poço do Controle de Valor Discriminante (CO) (Nota 4). Resultado positivo. O poço da amostra tem uma cor azul igual ou mais intensa que o poço do Controle de Valor Discriminante (CO). Resultado negativo. O poço da amostra não tem cor azul ou têm-a muito mais ténue que o poço do Controle de Valor Discriminante (CO) (Nota 5). Resultado duvidoso. O poço da amostra tem uma cor azul ligeiramente mais ténue que o poço do Controle de Valor Discriminante (CO). Repetir o teste com uma amostra obtida 48-72 horas mais tarde. – Microplaca (M): Fracturas no recipiente do envelope. PREPARAÇÃO DOS REAGENTES Tanto os reagentes como os controles estão prontos para seu uso. CONTROLE DE QUALIDADE Os Controles de Valor Discriminante (CO), Negativo (C -) e Positivo (C +) fornecidos com o kit devem testar-se junto com as amostras dos pacientes, para verificar o funcionamento do teste. O poço do Controle de Valor Discriminante (CO) deve ter cor azul. O poço do Controle Positivo (C +) deve ter uma cor azul mais intensa que o do Controle de Valor Discriminante (CO). O poço do Controle Negativo (C -) não deve ter cor azul ou uma cor azul pálida claramente menos intensa que o do Controle de Valor Discriminante (CO). CARACTERÍSTICAS DO TESTE Não é possível distinguir uma gravidez normal de uma gravidez ectópica unicamente com base dos resultados do teste. Um aborto espontâneo tambem pode provocar confusões na interpretação dos resultados do teste. Uma urina diluída pode originar resultados negativos. Se apesar do resultado negativo, se suspeita de uma gravidez, é conveniente repetir o teste 48 h após, utilizando a primeira urina da manhã. O diagnóstico clínico não deve basear-se exclusivamente no resultado deste teste, mas deve integrar-se nos dados clínicos e de laboratório. – Detectabilidade: 25 mUI/mL de hCG. – Efeito de alta concentração (zona): Ausente pelo menos até concentrações de 1000 000 mUI/mL de hCG. NOTAS – Resultados falsos: Os resultados falsos positivos são inferiores a 1% e os resultados falsos negativos inferiores a 1% comparados com sistemas de referência. Os detalhes da comparação estão abaixo disponíveis. 1. Guardar os poços que não forem utilizados no pacote bem fechado juntamente com o saquinhos dessecantes no seu interior. – Especificidade: A LH (2000 mUI/mL), TSH (2000 µUI/mL), FSH (1000 mUI/mL), factor reumatóide (600 UI/mL) e os anticorpos heterofílicos não interferem. Outras substâncias e medicamentos podem interferir2. 3. É importante que não fiquem restos de água nos poços. CARACTERÍSTICAS DIAGNÓSTICAS A Gonodotropina Coriónica humana é uma hormona glicoproteíca produzida pela placenta durante a gravidez. Habitualmente está presente no soro e urina a partir do sétimo dia após a concepção e a maioria das mulheres grávidas têm níveis de hCG no soro e urina iguais ou superiores a 100 mUI/mL no dia da primeira falta da menstruação3. Até na gravidez, podem encontrar-se concentrações elevadas de hCG em doenças trofoblásticas de origem gestacional e não gestacional3. Este tipo de situações devem identificar-se antes de diagnosticar uma gravidez. 2. Evitar a contaminação entre poços devida a derrames durante a primeira lavagem. 4. É possível ler os resultados a 450 nm com um leitor de microplacas, depois de adicionar 100 µL de ácido sulfúrico 1 mol/L por poço. 5. A água corrente de algumas áreas pode aumentar a cor das amostras negativas. Nesses casos, lavar com solução salina diluída 1/2 em água destilada e prolongar ligeiramente a etapa 9 (aproximadamente 10 minutos). BIBLIOGRAFIA 1. Bidart JM and Bellet D. Human Chorionic Gonadotropin. Molecular forms, detection, and clinical implications. Trends Endocrinol Metab 1993; 4: 285-291. 2. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 3rd ed. AACC Press, 1997. 3. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd edition. Burtis CA, Ashwood ER. WB Saunders Co., 1999. M55000p-0306
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