Epstein-Barr Virus VCA IgG ELISA

Instructions for Use
Epstein-Barr Virus
VCA IgG ELISA
Enzyme immunoassay for the semi-quantitative or quantitative
determination of IgG antibodies against the viral capsid antigen (VCA)
of Epstein-Barr Virus in human serum and plasma
RE57351
96
2-8°C
IBL GESELLSCHAFT FÜR IMMUNCHEMIE UND IMMUNBIOLOGIE MBH
FLUGHAFENSTRASSE 52a D-22335 HAMBURG GERMANY
Phone: +49 (0)40-53 28 91-10
Fax:
+49 (0)40-53 28 91-11
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EBV VCA IgG ELISA (RE57351)
1.
ENGLISH
INTENDED USE
Enzyme immunoassay for the semi-quantitative or quantitative determination of IgG antibodies against the
viral capsid antigen (VCA) of Epstein-Barr Virus (EBV) in human serum and plasma.
2.
SUMMARY AND EXPLANATION
Infectious mononucleosis is an acute lymphoproliferative disease that is common in children and young
adults and is caused by the Epstein-Barr Virus (EBV). The EBV is one of the herpes viruses 4 (gamma).
Characteristic clinical features include:
1.
2.
3.
4.
fever, sore throat, and lymhadenopathy
an associated absolute lymphocytosis greater than 50%, containing at least 10% of atypical
lymphocytes in the peripheral blood
development of transient heterophil and persistent antibody responses against EBV
abnormal liver function tests
4% of infected young adults show an icteric manifestation and 50% have splenomegaly. In addition, EBV is
implicated in nasopharyngeal carcinoma, Burkitt lymphoma and Hodgkin´s disease.
An infectious mononucleosis similar syndrome can be caused by cytomegalovirus, toxoplasmosis and other
viral infection; differential diagnosis depends on laboratory results, with only EBV stimulating the production
of heterophil antibodies.
EBV is present in saliva of patients with acute infectious mononucleosis, and excretion of the virus from the
oropharynx, which persists for several months after the outbreak of the disease, is one of the major ways of
virus transmission. Infected persons keep the Epstein-Barr Virus for lifetime, but are mostly asymptomatic.
In developing countries practically the whole population is infected; in western countries prevalence is about
80 – 90 %. Transmission, possibly from the mother, already takes place at child’s age and mainly via saliva.
Of great importance for diagnosis is the detection of an increase in relative and absolute number of
lymphocytes and atypical lymphocytes. During the disease 50 – 60 % of leukocytes in the peripheral blood
can be lymphatic cells, of which normally 10 % are atypical lymphocytes. In addition, abnormal liver function
tests and high titers of heterophil antibodies are seen.
Serological tests like ELISA are very useful for the detection of anti-EBV antibodies, especially if heterophil
antibodies are absent. The different stages of an EBV infection (acute, reactivated, past) are characterized
by the appearance of different antibodies (IgA, IgG, IgM) against different viral antigens (virus capsid
antigen = VCA, early antigen = EA and Epstein-Barr Virus nuclear antigen = EBNA).
The six parameters produced by IBL (VCA IgA / IgG / IgM, EA IgA / IgG und EBNA IgG) enable to detect
and differentiate all stages of an EBV infection. A well directed selection of antigens for IBL EBV ELISAs
results in an extraordinary sensitivity and specificity for the diagnosis of acute diseases and for the detection
of past infections.
The assays for the detections of antibodies against EA and EBNA use highly specific recombinant antigens
– EA p54 antigen expressed in E. coli and EBNA-1 p72 antigen expressed in Sf9 cells; affinity purified VCA
gp125 from P3HR1 cells is responsible for the high sensitivity of the VCA ELISAs.
This selection of antigens together with a purposeful regulation of assay characteristics results in a clear
distinction between positive and negative samples, i.e. a small grey zone.
The very high sensitivity of the VCA IgA assay and the 100 % specificity of the EA IgA ELISA are of
particular importance; the combination of these two assays allows the correct detection of reactivated
infections with extremely high reliability.
The µ-capture principle applied for the VCA IgM assay results in a higher specificity compared to IgM
ELISAs following the sandwich principle, i.e. false positive results are minimized.
Information about antibody combinations that are typical for the different stages of an infection is given in
chapter 16, PERFORMANCE.
Version 2007-05-30
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EBV VCA IgG ELISA (RE57351)
3.
ENGLISH
TEST PRINCIPLE
Solid phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based on the sandwich principle.
EBV viral capsid antigen (VCA gp 125 affinity purified from P3HR1-cells) is bound on the surface of the
microtiter strips. Diluted patient serum or ready to use calibrators and controls are pipetted into the wells of
the microtiter plate. A binding between the IgG antibodies of the samples and immobilized antigen takes
place during the first incubation.
In the second incubation ready to use anti human IgG peroxidase conjugate is added and binds to IgG
antibodies captured on the microtiter wells.
Subsequently, substrate (TMB) is pipetted, inducing the development of a blue dye in the wells. The colour
development is terminated by the addition of a stop solution, which courses the colour change from blue to
yellow. The resulting dye is measured spectrophotometrically at the wavelength of 450 nm. The
concentration of the specific IgG antibodies is directly proportional to the intensity of the colour.
4.
WARNINGS AND PRECAUTIONS
1. For in-vitro diagnostic use only. For professional use only.
2. Before starting the assay, read the instructions completely and carefully. Use the valid version of the
package insert provided with the kit. Be sure that everything is understood.
3. In case of severe damage of the kit package please contact IBL or your supplier in written form, latest
one week after receiving the kit. Do not use damaged components in test runs, but keep safe for
complaint related issues.
4. Obey lot number and expiry date. Do not mix reagents of different lots. Do not use expired reagents.
5. Follow good laboratory practice and safety guidelines. Wear lab coats, disposable latex gloves and
protective glasses where necessary.
6. Reagents of this kit containing hazardous material may cause eye and skin irritations. See MATERIALS
SUPPLIED and labels for details. Material Safety Data Sheets for this product are available on the IBLHomepage or upon request directly from IBL.
7. Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to national
biohazard and safety guidelines or regulations.
8. Avoid contact with Stop solution. It may cause skin irritations and burns.
9. All reagents of this kit containing human serum or plasma have been tested and were found negative for
HIVI/II, HBsAg and HCV. However, a presence of these or other infectious agents cannot be excluded
absolutely and therefore reagents should be treated as potential biohazards in use and for disposal.
5.
STORAGE AND STABILITY
The kit is shipped at ambient temperature and should be stored at 2-8°C. Keep away from heat or direct sun
light. The storage and stability of specimen and prepared reagents is stated in the corresponding chapters.
The microtiter strips are stable up to 3 mon in the broken, but tightly closed bag when stored at 2–8°C.
6.
SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE
Serum, Plasma (EDTA, Citrate)
The usual precautions for venipuncture should be observed. It is important to preserve the chemical
integrity of a blood specimen from the moment it is collected until it is assayed. Do not use grossly
hemolytic, icteric or grossly lipemic specimens. Samples appearing turbid should be centrifuged before
testing to remove any particulate material.
Storage:
2-8°C
-20°C
Stability:
7d
>7d
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Keep away from heat or direct sun light.
Avoid repeated freeze-thaw cycles.
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EBV VCA IgG ELISA (RE57351)
7.
ENGLISH
MATERIALS SUPPLIED
Microtiter Plate
1 x 12 x 8
MTP
1 x 12 mL
IgG CONJ
4 x 1.5 mL
CAL A-D
1 x 1.5 mL
CONTROL +
1 x 1.5 mL
CONTROL -
1 x 100 mL
DILBUF
1 x 100 mL
WASHBUF
CONC
Wash Buffer, Concentrate (10x)
1 x 12 mL
TMB SUBS
TMB Substrate Solution
1 x 12 mL
TMB STOP
TMB Stop Solution
8.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
9.
Break apart strips. Coated with specific antigen.
IgG Enzyme Conjugate
Green colored. Ready to use. Contains: anti-human IgG, conjugated to peroxidase,
stabilizers.
Standard A–D
2; 20; 50; 200 U/mL
Standard B = Cut-off Standard
Ready to use. Contains: IgG antibodies against EBV VCA (human serum), stabilizers.
Positive Control
Red colored. Ready to use. Contains: IgG antibodies against EBV VCA (human serum),
stabilizers.
Negative Control
Green colored. Ready to use. Contains: IgG antibodies against EBV VCA (human
serum), stabilizers.
Diluent Buffer
Blue colored. Ready to use. Contains: PBS Buffer, detergents, BSA, stabilizers.
Contains: PBS Buffer, detergents, stabilizers.
Ready to use. Contains: TMB, Buffer, stabilizers.
Ready to use. 0.5 M H2SO4.
MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED
Micropipettes (Multipette Eppendorf or similar devices, < 3% CV). Volumes: 5; 100; 500 µL
Vortex mixer
Tubes (≥ 1 mL) for sample dilution
Incubator, 37°C
8-Channel Micropipettor with reagent reservoirs
Wash bottle, automated or semi-automated microtiter plate washing system
Microtiter plate reader capable of reading absorbance at 450 nm (reference wavelength 600-650 nm)
Bidistilled or deionised water
Paper towels, pipette tips and timer
PROCEDURE NOTES
1. Any improper handling of samples or modification of the test procedure may influence the results. The
indicated pipetting volumes, incubation times, temperatures and pretreatment steps have to be
performed strictly according to the instructions. Use calibrated pipettes and devices only.
2. Once the test has been started, all steps should be completed without interruption. Make sure that
required reagents, materials and devices are prepared ready at the appropriate time. Allow all reagents
and specimens to reach room temperature (18-25 °C) and gently swirl each vial of liquid reagent and
sample before use. Mix reagents without foaming.
3. Avoid contamination of reagents, pipettes and wells/tubes. Use new disposable plastic pipette tips for
each component and specimen. Do not interchange caps. Always cap not used vials. Do not reuse
wells/tubes or reagents.
4. Use a pipetting scheme to verify an appropriate plate layout.
5. Incubation time affects results. All wells should be handled in the same order and time sequences. It is
recommended to use an 8-channel Micropipettor for pipetting of solutions in all wells.
6. Microplate washing is important. Improperly washed wells will give erroneous results. It is recommended
to use a multichannel pipette or an automatic microplate washing system. Do not allow the wells to dry
between incubations. Do not scratch coated wells during rinsing and aspiration. Rinse and fill all
reagents with care. While rinsing, check that all wells are filled precisely with Wash Buffer, and that there
are no residues in the wells.
7. Humidity affects the coated wells/tubes. Do not open the pouch until it reaches room temperature.
Unused wells/tubes should be returned immediately to the resealed pouch including the desiccant.
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EBV VCA IgG ELISA (RE57351)
10.
ENGLISH
PRE-TEST SETUP INSTRUCTIONS
10.1. Preparation of Components
Dilute/
dissolve
100 mL
Component
Wash Buffer
Diluent
ad
1000 mL
bidist. water
Relation
Remarks
Storage
Stability
1:10
Warm up at 37°C to
dissolve crystals, if
necessary.
Mix vigorously.
2-8°C
2-3 mon
10.2. Dilution of Samples
Sample
Serum / Plasma
to be diluted
with
generally
Diluent Buffer
Relation
1:101
Remarks
e.g. 5 µL Sample + 500 µL DILBUF
Samples containing concentrations higher than the highest standard have to be diluted further.
11.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
TEST PROCEDURE
Pipette 100 µL of each Standard, Control and diluted sample into the respective wells of the
Microtiter Plate. In the semi-quantitative test only Standard B (Cut-off Standard) is used. The
reliability of the analysis can be improved by duplicate determinations.
Cover plate with adhesive foil. Incubate 60 min at 37°C.
Remove adhesive foil. Discard incubation solution. Wash plate 3 x with 300 µL/well of diluted Wash
Buffer. Remove excess solution by tapping the inverted plate on a paper towel.
Pipette 100 µL of Enzyme Conjugate into each well.
Cover plate with new adhesive foil. Incubate 60 min 37°C.
Remove adhesive foil. Discard incubation solution. Wash plate 3 x with 300 µL/well of diluted Wash
Buffer. Remove excess solution by tapping the inverted plate on a paper towel.
For adding of Substrate and Stop Solution use, if available, an 8-channel Micropipettor. Pipetting
should be carried out in the same time intervals for Substrate and Stop Solution. Use positive
displacement and avoid formation of air bubbles.
Pipette 100 µL of TMB Substrate Solution into each well.
Incubate 30 min at 18-25°C in the dark (without adhesive foil).
Stop the substrate reaction by adding 100 µL of TMB Stop Solution into each well. Briefly mix
contents by gently shaking the plate.
Measure optical density with a photometer at 450 nm (Reference-wavelength: 600-650 nm) within
60 min after pipetting of the Stop Solution.
QUALITY CONTROL
The test results are only valid if the test has been performed following the instructions. Moreover the user
must strictly adhere to the rules of GLP (Good Laboratory Practice) or other applicable standards/laws. All
kit controls must be found within the acceptable ranges as stated on the vial labels. If the criteria are not
met, the run is not valid and should be repeated. Each laboratory should use known samples as further
controls.
In case of any deviation the following technical issues should be proven: Expiration dates of (prepared)
reagents, storage conditions, pipettes, devices, incubation conditions and washing methods.
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EBV VCA IgG ELISA (RE57351)
13.
ENGLISH
CALCULATION OF RESULTS
The evaluation of the test can be performed either semi-quantitatively or quantitatively.
13.1. Semi-Quantitative Evaluation
The Cut-off value is given by the optical density (OD) of the Standard B (Cut-off standard). The Cut-off index
(COI) is calculated from the mean optical densities of the sample and Cut-off value. If the optical density of
the sample is within a range of 10 % around the Cut-off value (grey zone), the sample has to be considered
as borderline. Samples with higher ODs are positive, samples with lower ODs are negative.
Typical Example:
Cut-off = OD (Standard B, Cut-off standard) = 0.44
Sample OD = 0.70
Cut-off index (COI): 0.70 / 0.44 = 1.59. The sample has to be considered positive.
13.2. Quantitative Evaluation
The obtained OD of the standards (y-axis, linear) are plotted against their concentration (x-axis, logarithmic)
either on semi-logarithmic graph paper or using an automated method. A good fit is provided with cubic
spline, 4 Parameter Logisitcs or Logit-Log.
For the calculation of the standard curve, apply each signal of the standards (one obvious outlier of
duplicates might be omitted and the more plausible single value might be used).
The concentration of the samples can be read from the standard curve.
The initial dilution has been taken into consideration when reading the results from the graph. Results of
samples of higher predilution have to be multiplied with the dilution factor.
Samples showing concentrations above the highest standard can be diluted as described in PRE-TEST
SETUP INSTRUCTIONS and reassayed.
Typical Calibration Curve
(Example. Do not use for calculation!)
Standard
U/mL
Mean
OD
A
2
0.011
B
20
0.437
C
50
0.915
D
200
2.106
14.
2,00
1,50
1,00
0,50
0,00
1
10
100
1000
EBV VCA IgG (U/mL)
INTERPRETATION OF RESULTS
Method
Quantitative
(Standard curve):
Semi-Quantitative
(Cut-off Index, COI):
15.
OD 450 nm
2,50
Range
Interpretation
>22 U/mL
18 – 22 U/mL
<18 U/mL
>1.1
0.9 – 1.1
<0.9
positive
borderline
negative
positive
borderline
negative
The results themselves should
not be the only reason for any
therapeutical consequences.
They have to be correlated to
other clinical observations and
diagnostic tests.
LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
Specimen collection has a significant effect on the test results. See SPECIMEN COLLECTION AND
STORAGE for details.
Azide and thimerosal at concentrations > 0.1 % interfere in this assay and may lead to false results.
The following blood components do not have a significant
effect (+/- 20 % of expected) on the test results up to the
concentrations stated below:
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Hemoglobin
Bilirubin
Triglyceride
2.0 mg/mL
0.3 mg/mL
2.5 mg/mL
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EBV VCA IgG ELISA (RE57351)
16.
ENGLISH
PERFORMANCE
Analytical Specificity
(Cross Reactivity)
No cross-reactivities were found to Antibodies against Parvovirus B19, VZV, HSV 1,
(n=3-12):
CMV, Measles, Mumps, Toxoplasmosis, Rubella
Range ± 1xSD
Range ± 1xSD
Range ± 1xSD
CV
CV
CV
Precision
(U/mL)
(U/mL)
(U/mL)
Intra-Assay (n=20)
68 ± 5
7%
23 ± 1
6%
9±1
9%
Inter-Assay (n=20)
459 ± 89
19 %
26 ± 2
8%
9±2
18 %
Inter- Lot (n=20)
83 ± 17
20 %
22 ± 3
12 %
8±2
19 %
Range (U/mL)
Dilution Range (sample
Rec. Range (%)
specific)
Linearity
9-712
1:2-1:64
85% - 111%
This test has been validated with: BEPIII (Dade Behring), TRITURUS (Grifols)
Automation
To determine the clinical sensitivity and specificity of all 6 IBL EBV parameter ELISAs, a sample panel of
242 samples have been tested in all assays. This panel is made up of samples from differerent phases of an
EBV infection:
Seronegative (including samples from children)
Acute phase of an infection
Reactivated infection
Past infection
n = 64
n = 48
n = 55
n = 75
The classification of the samples has been approved by immunofluorescence (IFA), especially the samples
for reactivated infection.
For method comparison, the entire panel has been measured with FDA-approved reference ELISAs for
EBNA IgG, VCA IgG, VCA IgM and EA IgG. For EA IgA and VCA IgA no FDA-approved reference ELISA
exists.
Samples determined as positive (including border-line) with IBL-ELISAs
n=242
VCA
IgM
VCA
IgG
VCA
IgA
EA
IgA
EA
IgG
EBNA
IgG
acute infection
n=48
96%
90%
75%
65%
90%
0%
reactivated infection
n=55
0%
100%
96%
76%
93%
100%
past infection
n=75
1%
89%
47%
0%
10%
100%
seronegative
n=22
5% *
14% *
18% *
0%
0%
0%
children 0-12 month
n=42
2%
36% **
2%
0%
2%
14% **
almost 100 % positive
almost 100 % negative
varyingly positive
maternal Ab
* the EBV seronegative group may include very early asymptomatic EBV infections, that lead to positive
results for VCA IgM, IgA and IgG
** maternal antibodies are only present for VCA IgG and EBNA IgG in very low concentrations
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EBV VCA IgG ELISA (RE57351)
ENGLISH
16.1. Sensitivity and specificity of IBL EBV-ELISAs regarding different phases of an EBV infection
Acute EBV infection: As shown in the table above, an acute EBV infection can be clearly identified by three
parameters that are expected to be positive (VCA IgM, VCA IgG and EA IgG) and by EBNA IgG, which was
found clearly negative, as expected.
Reactivated EBV infection: In contrast to an acute infection, a reactivated EBV infection with or without
tumor development is expected to be 100 % negative for VCA IgM, but clearly positive for VCA IgG, VCA
IgA, EA IgG and EBNA IgG, as shown in the table above.
Past infection: Past EBV infections show only two clearly positive parameters, VCA IgG and EBNA IgG. All
other parameters are expected to be almost negative, with the exception of VCA IgA, which can persist up
to one year in past infections.
Seronegative patients Seronegative patients should have negative results for all six parameters. Single
positive results for VCA IgG, VCA IgA or VCA IgM may indicate a very early, still asymptomatic EBV
infection. Alternatively, such isolated positive results are a sign of a slight non-specificity of the assays,
which may recognize antibodies from polyclonal stimulations due to their very high sensitivity. For
clarification it is suggested to repeat the test after 7-10 days.
Maternal antibodies: Maternal antibodies are detectable in very low concentrations only during the first 6-9
months of life and can only be expected to be positive for the two parameters of past infections, VCA IgG
and EBNA IgG. All other antibodies should be negative, as shown in the table above. The fact that maternal
antibodies can be detected demonstrates the very high sensitivity of the IBL ELISAs for those two
parameters.
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EBV VCA IgG ELISA (RE57351)
1.
DEUTSCH
ZWECKBESTIMMUNG
Enzymimmunoassay zur semi-quantitativen oder quantitativen Bestimmung von IgG Antikörpern gegen das
„viral capsid antigen“ (VCA) des Epstein-Barr Virus (EBV) in humanem Serum und Plasma.
2.
KLINISCHE BEDEUTUNG
Die infektiöse Mononukleose ist eine akute lymphoproliferative Erkrankung, die häufig bei Kindern und
Jugendlichen vorkommt und durch das Epstein-Barr Virus (EBV) verursacht wird. EBV gehört zu der Gruppe
der Herpes-Viren 4 (Gamma).
Zu den charakteristischen klinischen Symptomen zählen:
1.
2.
3.
4.
Fieber, Rachenentzündung sowie Lymphadenopathie
hiermit verknüpfte absolute Lymphozytose über 50 %; davon mindestens 10 % atypische Lymphozyten
im peripheren Blut
Entwicklung von vorübergehenden heterophilen und persistierenden, gegen EBV gerichteten,
Antikörpern
pathologisch veränderte Leberfunktionstests
Bei 4 % der infizierten Jugendlichen tritt ein Ikterus und bei 50 % eine Milzvergrößerung auf. Des weiteren
spielt EBV eine Rolle bei der Entstehung des Nasopharynx-Karzinoms, beim Burkitt Lymphom und bei der
Hodgkin’schen Krankheit.
Ähnliche Symptome wie für die infektiöse Mononukleose können durch das Zytomegalievirus,
Toxoplasmose sowie andere Virusinfektionen verursacht werden; die Differentialdiagnose hängt von den
Laborergebnissen ab, wobei nur EBV die Produktion von heterophilen Antikörpern stimuliert.
EBV tritt im Speichel von Patienten mit akuter infektiöser Mononukleose auf, und die Ausscheidung des
Virus aus dem Oropharynx, die nach dem Ausbruch der Erkrankung viele Monate anhält, stellt einen der
hauptsächlichen Übertragungswege des Virus dar. Infizierte Personen behalten das Epstein-Barr Virus
lebenslang in ihrem Körper, sind aber meist nicht krank. In den Entwicklungsländern sind praktisch alle
Menschen infiziert, in den westlichen Staaten liegt die Durchseuchung bei 80 – 90 %. Die Übertragung
findet bereits im Kindesalter, evtl. durch Übertragung durch die Mutter, hauptsächlich über den Speichel
statt.
Von großer Bedeutung für die Diagnose ist die Feststellung einer Zunahme der relativen und absoluten
Anzahl von Lymphozyten und atypischen Lymphozyten. Während der Erkrankung können Zellen aus der
lymphatischen Reihe 50 % bis 60 % der Leukozyten im peripheren Blut ausmachen, wobei die atypischen
Lymphozyten davon üblicherweise mindestens 10 % ausmachen. Es werden auch Veränderungen einiger
Leberfunktionstests sowie ein hoher Titer von heterophilen Antikörpern beobachtet.
Serologische Tests wie der ELISA sind für den Nachweis von Anti-EBV Antikörpern hilfreich, besonders
wenn heterophile Antikörper fehlen. Die einzelnen Stadien einer EBV-Infektion (akut, reaktiviert, latent) sind
durch das Vorkommen unterschiedlicher Antikörperklassen (IgA, IgG, IgM) gegen verschiedene
Virusantigene (virus capsid antigen = VCA, early antigen = EA und Epstein-Barr virus nuclear antigen =
EBNA) gekennzeichnet.
Mit Hilfe der sechs von IBL angebotenen Parameter (VCA IgA / IgG / IgM, EA IgA / IgG und EBNA IgG)
lassen sich sämtliche Krankheitsstadien sehr gut erfassen und differenzieren. Eine gezielte Auswahl der
Antigene für die IBL EBV ELISAs führt zu einer außerordentlich hohen Sensitivität und Spezifität sowohl bei
der Diagnose von frischen Infekten als auch beim Nachweis latenter Infektionen. Für die Teste zur
Bestimmung von Antikörpern gegen EA und EBNA werden hochspezifische rekombinante Antigene – in E.
coli exprimiertes EA p54-Antigen bzw. in Sf9-Zellen exprimiertes EBNA-1 p 72-Antigen – verwendet;
Affinitäts-gereinigtes VCA gp125 aus P3HR1-Zellen ist verantwortlich für die hohe Sensitivität der VCA
ELISAs.
Ebenfalls durch die Auswahl der Antigene sowie durch gezielte Steuerung der Testcharakteristik wird eine
deutliche Trennung von positiven und negativen Proben, d.h. ein geringer Graubereich, erreicht.
Besonders hervorzuheben sind die sehr hohe Sensitivität des VCA IgA Testes sowie die 100 %-ige
Spezifität des EA IgA ELISA; durch Kombination dieser beiden Teste können reaktivierte Infektionen mit
außerordentlich hoher Wahrscheinlichkeit richtig erkannt werden.
Durch das im VCA IgM Test angewandte µ-capture Prinzip wird hier eine höhere Spezifität im Vergleich zu
IgM ELISAs nach dem Sandwich-Prinzip erreicht, d.h. falsch positive Ergebnisse werden stark reduziert.
Hinweise zu den Stadien-typischen Antikörper-Kombinationen finden Sie im Abschnitt 16,
TESTCHARAKTERISTIKA.
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EBV VCA IgG ELISA (RE57351)
3.
DEUTSCH
TESTPRINZIP
Enzymimmunoassay (ELISA) nach dem Sandwich-Prinzip.
EBV Viruskapsid-Antigen (VCA) (Affinitäts-gereinigtes VCA gp 125 aus P3HR1-Zellen) ist an der Oberfläche
der Mikrotiterstreifen gebunden. Verdünntes Patientenserum oder fertig einsetzbare Kalibratoren und
Kontrollen werden in die Vertiefungen der Mikrotiterplatte pipettiert. Während der ersten Inkubation binden
IgG Antikörper aus den Proben an das immobilisierte Antigen.
In der zweiten Inkubation wird fertig einsetzbares IgG – Peroxidase Konjugat zugegeben und bindet an die
IgG Antikörper, die in den Vertiefungen der Mikrotiterplatte haften.
Anschließend wird das Substrat (TMB) pipettiert, wodurch die Entwicklung eines blauen Farbstoffes
induziert wird. Die Farbentwicklung wird durch die Zugabe einer Stopp-Lösung beendet, wodurch ein
Farbumschlag von blau nach gelb ausgelöst wird. Die Farbintensität wird spektrophotometrisch bei einer
Wellenlänge von 450 nm gemessen. Die Konzentration der IgG Antikörper ist direkt proportional zur
Farbintensität.
4.
WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN
1. Nur zum In-vitro-Gebrauch. Nur für den Gebrauch durch Fachpersonal.
2. Vor der Testdurchführung sollte die Arbeitsanleitung vollständig und sorgfältig gelesen werden und
verstanden worden sein. Die gültige Version aus dem Kit verwenden.
3. Im Falle einer erheblichen Beschädigung der Testpackung ist IBL bzw. der jeweilige Lieferant innerhalb
einer Woche nach Empfang der Ware schriftlich zu benachrichtigen. Beschädigte Komponenten dürfen
nicht zur Testdurchführung verwendet werden, sondern sollten solange aufbewahrt werden, bis der
Transportschaden endgültig geregelt ist.
4. Chargen-Nummer und Verfallsdatum beachten. Es dürfen keine Reagenzien aus unterschiedlichen
Chargen in einem Test verwendet werden. Verfallene Reagenzien dürfen nicht verwendet werden.
5. Gute Laborpraxis und Sicherheitsrichtlinien beachten. Je nach Bedarf sollten Laborkittel, EinmalLatexhandschuhe und Schutzbrillen getragen werden.
6. Reagenzien dieses Kits, die Gefahrstoffe enthalten, können Reizungen der Augen und der Haut
hervorrufen. Siehe Angaben in KOMPONENTEN DES KITS und auf den Etiketten.
Sicherheitsdatenblätter für dieses Produkt sind auf der IBL-Homepage zum Download verfügbar oder
auf Anfrage direkt von IBL erhältlich.
7. Chemikalien und vorbereitete oder gebrauchte Reagenzien sind unter Beachtung der jeweiligen
nationalen Bestimmungen als Gefahrstoffabfall zu entsorgen.
8. Kontakt mit Stopplösung vermeiden. Kann Hautreizungen und Verätzungen hervorrufen.
9. Alle Reagenzien dieses Kits, die humanes Serum oder Plasma enthalten, ergaben bei der Prüfung auf
HCV, HBsAg bzw. Antikörper gegen HIVI/II-Virus ein negatives Ergebnis. Trotzdem kann das
Vorhandensein solcher infektiöser Erreger nicht mit absoluter Sicherheit ausgeschlossen werden. Die
Reagenzien sollten deshalb wie potentiell infektiöses Material behandelt werden.
5.
LAGERUNG UND HALTBARKEIT
Der Kit wird bei Umgebungstemperatur angeliefert und sollte bei 2-8°C gelagert werden. Vor Hitze und
direkter Sonneneinstrahlung schützen. Hinweise zur Lagerung und Haltbarkeit der Proben und vorbereiteten
Reagenzien sind den entsprechenden Kapiteln zu entnehmen.
Die Mikrotiterplatte ist auch nach dem Öffnen der Verpackung bis zu 3 mon haltbar, wenn der Beutel
sorgfältig wieder verschlossen und bei 2-8°C gelagert wird.
6.
PROBENGEWINNUNG UND -AUFBEWAHRUNG
Serum, Plasma (EDTA, Citrat)
Die üblichen Vorsichtsmaßnahmen bei der Blutabnahme sind einzuhalten. Die chemische Integrität der
Blutproben muss vom Zeitpunkt der Blutabnahme bis zur Testdurchführung erhalten bleiben. Keine
hämolytischen, ikterischen oder lipämischen Proben verwenden. Getrübte Proben sollten vor der
Testdurchführung zentrifugiert werden, um Partikel zu entfernen.
Lagerung:
Haltbarkeit:
Version 2007-05-30
2-8°C
7d
-20°C
>7d
Vor Hitze und Sonneneinstrahlung schützen.
Wiederholtes Auftauen und Einfrieren vermeiden.
2/7
EBV VCA IgG ELISA (RE57351)
7.
DEUTSCH
KOMPONENTEN DES KITS
Mikrotiterplatte
1 x 12 x 8
MTP
1 x 12 mL
IgG CONJ
4 x 1.5 mL
CAL A-D
1 x 1.5 mL
CONTROL +
1 x 1.5 mL
CONTROL -
1 x 100 mL
DILBUF
1 x 100 mL
WASHBUF
CONC
Waschpuffer, Konzentrat (10x)
1 x 12 mL
TMB SUBS
TMB Substratlösung
1 x 12 mL
TMB STOP
TMB Stopplösung
8.
Wells einzeln abbrechbar. Beschichtet mit spezifischem Antigen.
IgG Enzymkonjugat
Grün gefärbt. Gebrauchsfertig. Enthält: anti-humanes IgG, konjugiert mit Peroxidase,
Stabilisatoren.
Standard A–D
2; 20; 50; 200 U/mL
Standard B = Cut-off Standard
Gebrauchsfertig. Enthält: IgG Antikörper gegen EBV VCA (Humanserum), Stabilisatoren.
Positivkontrolle
Rot gefärbt. Gebrauchsfertig. Enthält: IgG Antikörper gegen EBV VCA (Humanserum),
Stabilisatoren.
Negativkontrolle
Grün gefärbt. Gebrauchsfertig. Enthält: IgG Antikörper gegen EBV VCA (Humanserum),
Stabilisatoren.
Verdünnungspuffer
Blau gefärbt. Gebrauchsfertig. Enthält: PBS Puffer, Detergenzien, BSA, Stabilisatoren.
Enthält: PBS Puffer, Detergenzien, Stabilisatoren.
Gebrauchsfertig. Enthält: TMB, Puffer, Stabilisatoren.
Gebrauchsfertig. 0.5 M H2SO4.
ZUSÄTZLICHES MATERIAL (NICHT IM KIT ENTHALTEN)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Pipetten (Multipette Eppendorf oder vergleichbare Produkte, < 3% VK). Volumina: 5; 100; 500 µL
Vortex-Mischer
Röhrchen (≥ 1 mL) zur Probenverdünnung
Inkubator, 37°C
8-Kanal Mikropipette mit Reagenziengefäßen
Waschflasche, automatisches oder halbautomatisches Waschsystem für Mikrotiterplatten
Messgerät für Mikrotiterplatten zur Messung der Absorption bei 450 nm (Referenzwellenlänge 600-650
nm)
8. Bidest. oder deionisiertes Wasser
9. Papiertücher, Pipettenspitzen, Stoppuhr
9.
HINWEISE ZUR TESTDURCHFÜHRUNG
1. Fehler bei der Handhabung der Proben oder Abweichungen von der beschriebenen Testdurchführung
können die Ergebnisse verfälschen. Die angegebenen Pipettiervolumina, Inkubationszeiten,
Temperaturen und Vorbereitungsschritte sind unbedingt gemäß Arbeitsanleitung einzuhalten. Nur
kalibrierte Pipetten und Geräte verwenden.
2. Sobald mit der Testdurchführung begonnen wird, sollten alle Arbeitsschritte ohne Unterbrechung
durchgeführt werden. Es ist sicherzustellen, dass alle benötigten Reagenzien, Geräte und Hilfsmittel zur
rechten Zeit zur Verfügung stehen. Alle Reagenzien und Proben müssen auf Raumtemperatur (18-25°C)
gebracht und vor Gebrauch vorsichtig ohne Schaumbildung gemischt werden.
3. Kontaminationen der Reagenzien, Pipetten und Wells/Röhrchen sind zu vermeiden. Neue EinmalPipettenspitzen für jede zu pipettierende Komponente und jede Probe verwenden. Die Deckel der
Fläschchen nicht vertauschen. Nicht benötigte Fläschchen immer verschlossen halten. Wells/Röhrchen
oder Reagenzien dürfen nicht wiederverwendet werden.
4. Es sollte ein Pipettierschema verwendet werden um die Identifikation der Standards und Proben auf der
Platte sicherzustellen.
5. Die Inkubationszeiten beeinflussen die Ergebnisse. Bei jedem Pipettierschritt sollten alle Wells in der
gleichen Reihenfolge und im gleichen Zeittakt behandelt werden. Die Verwendung einer 8-KanalMikropipette zum Pipettieren in alle Wells wird empfohlen.
Version 2007-05-30
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EBV VCA IgG ELISA (RE57351)
DEUTSCH
6. Die korrekte Durchführung der Waschschritte ist entscheidend. Ungenügend gewaschene Wells
ergeben falsche Ergebnisse. Die Verwendung einer Multikanalpipette oder eines automatischen
Waschsystems für Mikrotiterplatten wird empfohlen. Zwischen den Inkubationen die Wells nicht
austrocknen lassen. Beim Waschen und Ausschütteln dürfen die beschichteten Wells nicht beschädigt
werden. Alle Reagenzien müssen daher mit Vorsicht pipettiert werden. Beim Waschvorgang ist es
wichtig, dass alle Wells vollständig und gleichmäßig mit Waschpuffer gefüllt werden und nach dem
Ausschütteln kein Rückstand an Flüssigkeit zurückbleibt.
7. Feuchtigkeit beeinflusst die beschichteten Wells/Röhrchen. Verpackung nicht öffnen bevor
Raumtemperatur erreicht ist. Nicht benötigte Wells/Röhrchen sofort in den wiederverschließbaren Beutel
mit Trockenmittel zurückgeben.
10.
TESTVORBEREITUNGEN
10.1. Vorbereitung der Komponenten
Verd./
rekonst.
100 mL
Komponente
Diluent
ad
1000 mL
Waschpuffer
bidest.
Wasser
Verhältnis
Bemerkungen
Lagerung
Haltbarkeit
1:10
Ggf. auf 37°C
erwärmen, um
Kristalle aufzulösen.
Gründlich mischen.
2-8°C
2-3 mon
10.2. Probenverdünnung
Probe
Serum / Plasma
zu
verdünnen
mit
immer
Verdünnungspuffer
Verhältnis
1:101
Bemerkungen
z.B. 5 µL Probe + 500 µL DILBUF
Proben mit Konzentrationen über dem höchsten Standard müssen weiter verdünnt werden.
11.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
TESTDURCHFÜHRUNG
Je 100 µL von jedem Standard, jeder Kontrolle und jeder verdünnten Probe in die
entsprechenden Wells der Mikrotiterplatte pipettieren. Für den semi-quantitativen Test wird nur
Standard B (Cut-off Standard) verwendet. Die Zuverlässigkeit der Analyse kann durch
Doppelbestimmungen gesteigert werden.
Platte mit Haftklebefolie abdecken. 60 min bei 37°C inkubieren.
Folie entfernen. Inkubationslösung verwerfen. Platte 3 x mit je 300 µL/Well verdünntem
Waschpuffer waschen. Restliche Flüssigkeit auf Papiertüchern ausklopfen.
100 µL Enzymkonjugat in jedes Well pipettieren.
Platte mit neuer Folie abdecken. 60 min bei 37°C inkubieren.
Folie entfernen. Inkubationslösung verwerfen. Platte 3 x mit je 300 µL/Well verdünntem
Waschpuffer waschen. Restliche Flüssigkeit auf Papiertüchern ausklopfen.
Substrat- und Stopplösung möglichst mit einer 8-Kanal-Pipette pipettieren und Substrat- und
Stopplösung in denselben Zeitintervallen zugeben. Mit positivem Vorhub pipettieren, um die Bildung
von Luftbläschen zu vermeiden.
100 µL TMB Substratlösung in jedes Well pipettieren.
30 min bei RT (18-25°C) im Dunkeln inkubieren (ohne Haftklebefolie).
Die Substratreaktion durch Zugabe von 100 µL TMB Stopplösung in jedes Well stoppen. Platte
kurz schütteln.
Die optische Dichte mit einem Photometer innerhalb von 60 min nach Zugabe der Stopplösung bei
450 nm messen (Referenzwellenlänge: 600-650 nm).
Version 2007-05-30
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EBV VCA IgG ELISA (RE57351)
12.
DEUTSCH
QUALITÄTSKONTROLLE
Die Testergebnisse sind nur gültig, wenn der Test gemäß der vorliegenden Arbeitsanleitung abgearbeitet
wurde. Ferner muss der Anwender die GLP- Regeln (Good Laboratory Practice) und andere einschlägige
Normen und Gesetze beachten. Alle Kit-Kontrollen müssen innerhalb der Akzeptanzbereiche, die auf den
Etiketten angegeben sind, gefunden werden. Wenn die Kriterien nicht erfüllt sind, sind die Ergebnisse
ungültig und der Test sollte wiederholt werden. Jedes Labor sollte darüber hinaus laborinterne Kontrollen
mitführen.
Bei Abweichungen sind die folgenden Fehlermöglichkeiten zu überprüfen: Haltbarkeit der (vorbereiteten)
Reagenzien, Lagerungsbedingungen, Pipetten, Geräte und Hilfsmittel, Inkubationsbedingungen und
Waschmethoden.
13.
TESTAUSWERTUNG
Die Testauswertung kann wahlweise semi-quantitativ oder quantitativ erfolgen.
13.1. Semi-Quantitative Auswertung
Der Cut-off Wert ergibt sich aus der optischen Dichte (OD) des Standards B (Cut-off Standard). Der Cut-off
Index (COI) wird aus der mittleren optischen Dichte der Probe und der des Cut-offs berechnet. Proben,
deren optische Dichte sich nicht mehr als 10 % (Graubereich) von der des Cut-off Wertes unterscheidet,
sind als grenzwertig zu beurteilen. Darüberliegende Proben sind positiv, darunterliegende negativ zu
bewerten.
Typisches Beispiel:
Cut-off = OD (Standard B, Cut-off Standard) = 0.44
OD (Probe) = 0.70
Cut-off Index (COI): 0.70 / 0.44 = 1.59. Die Probe ist als positiv zu bewerten.
13.2. Quantitative Auswertung
Die erhaltenen OD der Standards (y-Achse, linear) gegen deren Konzentration (x-Achse, logarithmisch)
auftragen, entweder auf semi-logarithmischem Papier oder durch ein entsprechendes Computerprogramm.
Bei Verwendung eines Computerprogramms werden die Cubic-Spline-Methode, 4-Parameter-Analyse (linlog) oder Logit-Log-Berechnung empfohlen.
Zur Berechnung der Standardkurve sollten alle Werte der Standards verwendet werden (bei Doppelwerten
kann ein offensichtlicher Ausreißerwert eliminiert und stattdessen der plausiblere Einzelwert verwendet
werden).
Die Konzentrationen der Proben können von der Standardkurve abgelesen werden.
Die standardmäßig durchzuführende Verdünnung ist in dem oben beschriebenen Auswerteverfahren bereits
berücksichtigt. Wenn Proben anders oder weiter verdünnt wurden, müssen die Ergebnisse mit dem
entsprechenden Verdünnungsfaktor multipliziert werden.
Proben, die oberhalb des höchsten Standards gemessen werden, können wie in TESTVORBEREITUNGEN
beschrieben verdünnt und erneut analysiert werden.
Typische Standardkurve
(Beispiel. Nicht zur Testauswertung verwenden!)
Standard
U/mL
Mittelwert
OD
A
2
0.011
B
20
0.437
C
50
0.915
D
200
2.106
Version 2007-05-30
OD 450 nm
2,50
2,00
1,50
1,00
0,50
0,00
1
10
100
1000
EBV VCA IgG (U/mL)
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EBV VCA IgG ELISA (RE57351)
14.
INTERPRETATION DER ERGEBNISSE
Methode
Quantitativ
(Standardkurve):
Semi-Quantitativ
(Cut-off Index, COI):
15.
DEUTSCH
Bereich
Interpretation
>22 U/mL
18 – 22 U/mL
<18 U/mL
>1.1
0.9 – 1.1
<0.9
positiv
grenzwertig
negativ
positiv
grenzwertig
negativ
Therapeutische Konsequenzen
sollten nicht allein aufgrund der
mit diesem Test ermittelten
Werte
getroffen
werden,
sondern nur unter Berücksichtigung
aller
klinischen
Beobachtungen und weiterer
diagnostischer Mittel.
GRENZEN DES VERFAHRENS
Die korrekte Durchführung der Probengewinnung ist entscheidend für die Testergebnisse. Näheres siehe
PROBENGEWINNUNG UND -LAGERUNG.
Azid und Thimerosal in Konzentrationen > 0.1 % stören im Assay und führen evtl. zu falschen Ergebnissen.
Die folgenden Blutbestandteile haben bis zu der
angegebenen Konzentration keinen signifikanten Einfluss
auf die Testergebnisse (+/- 20 %):
16.
Hämoglobin
Bilirubin
Triglyceride
2.0 mg/mL
0.3 mg/mL
2.5 mg/mL
TESTCHARAKTERISTIKA
Analytische Spezifität
(Kreuzreaktivität)
Es wurden keine Kreuzreaktionen Antikörper gegen Parvovirus B19, VZV, HSV 1,
gefunden gegen: (n=3-12)
CMV, Masern, Mumps, Toxoplasmose, Rubella
Bereich ± 1xSD
Bereich ± 1xSD
Bereich ± 1xSD
VK
VK
VK
Präzision
(U/mL)
(U/mL)
(U/mL)
Intra-Assay (n=20)
68 ± 5
7%
23 ± 1
6%
9±1
9%
Inter-Assay (n=20)
459 ± 89
19 %
26 ± 2
8%
9±2
18 %
Inter- Lot (n=20)
83 ± 17
20 %
22 ± 3
12 %
8±2
19 %
Bereich (U/mL)
Verdünnungsbereich
Wfdg. Bereich (%)
(probenspezifisch)
Linearität
9-712
1:2-1:64
85% - 111%
Dieser Test wurde validiert mit: BEPIII (Dade Behring), TRITURUS (Grifols)
Automatisierung
Um die klinische Sensitivität und Spezifität der IBL ELISAs aller 6 EBV-Parameter zu bestimmen, wurde ein
Panel von insgesamt 242 Proben in allen Testen gemessen. Dieses Panel setzte sich aus Proben aus
verschiedenen Phasen einer EBV-Infektion wie folgt zusammen:
Seronegativ (einschließlich Proben von Kindern)
Akute Phase der Infektion
Reaktivierte Infektion
Überstandene Infektion
n = 64
n = 48
n = 55
n = 75
Die Einteilung der Proben wurde mit Hilfe der Immunfluoreszenz (IFA) bestätigt, speziell für die Proben von
reaktivierten Infektionen.
Für den Methodenvergleich wurde das gesamte Panel mit einem von der FDA zugelassenen ReferenzELISA für EBNA IgG, VCA IgG, VCA IgM und EA IgG getestet. Für EA IgA und VCA IgA gibt es derzeit
keine von der FDA zugelassenen ELISA Teste.
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EBV VCA IgG ELISA (RE57351)
DEUTSCH
Mit IBL-ELISAs positiv gemessene Proben (einschließlich grenzwertige)
n=242
VCA
IgM
VCA
IgG
VCA
IgA
EA
IgA
EA
IgG
EBNA
IgG
akute Infektion
n=48
96%
90%
75%
65%
90%
0%
reaktivierte Infektion
n=55
0%
100%
96%
76%
93%
100%
latente Infektion
n=75
1%
89%
47%
0%
10%
100%
seronegative
n=22
5% *
14% *
18% *
0%
0%
0%
Kinder 0-12 Monate
n=42
2%
36% **
2%
0%
2%
14% **
nahezu 100 % positiv
nahezu 100 % negativ
variierend positiv
mütterliche AK
* in der für EBV seronegativen Gruppe sind sehr frühe nicht-symptomatische EBV- Infekte möglich, die zu
positiven VCA IgM-, IgA- und IgG-Werten führen
** mütterliche AK sind nur in sehr geringen Konzentrationen und nur für VCA IgG und EBNA IgG vorhanden
16.1. Sensitivität und Spezifität der IBL EBV-ELISAs bzgl. der verschiedenen Krankheitsphasen
Akute EBV-Infektion: Wie die Tabelle zeigt, lassen sich akute EBV-Infektionen mit den drei eindeutig positiv
erwarteten Parametern VCA IgM, VCA IgG und EA IgG sowie dem eindeutig negativ erwarteten EBNA IgG
klar erkennen.
Reaktivierte EBV-Infektion: Bei reaktivierten EBV-Infektionen mit oder ohne eine Tumorgenese sind
dagegen zu 100 % negative VCA IgM-Werte zu erwarten, aber eindeutig positive Ergebnisse für VCA IgG,
VCA IgA, EA IgG und EBNA IgG, wie auch in der Tabelle zu erkennen ist.
Latente Infektionen: Latente Infektionen zeigen nur zwei eindeutig positive Parameter, VCA IgG und EBNA
IgG. Alle übrigen Parameter sind nahezu negativ zu erwarten, mit Ausnahme von VCA IgA, das auch bei
latenten Infektionen bis zu einem Jahr persistieren kann.
Seronegative Patienten: Seronegative Patienten sollten für alle sechs Parameter negative Ergebnisse
zeigen. Sind lediglich bei VCA IgG, VCA IgA und VCA IgM einzelne positive Ergebnisse vorhanden, kann
dies ein Hinweis auf eine frühe, noch asymptomatische EBV-Infektion sein oder ein Hinweis auf eine
geringgradige Unspezifität der Teste, die aufgrund ihrer hohen Sensitivität auch Antikörper nach
polyklonaler Stimulierung erkennen. Zur Abklärung wird eine Verlaufskontrolle nach 7-10 Tagen empfohlen.
Mütterliche Antikörper: Mütterliche Antikörper sind nur in sehr geringen Konzentrationen innerhalb der
ersten 6-9 Lebensmonate nachweisbar und sind nur positiv zu erwarten für die beiden Parameter der
latenten Infektion, VCA IgG und EBNA IgG. Alle übrigen Parameter sollten negativ sein, wie dies auch in der
Tabelle zu erkennen ist. Die Tatsache, dass diese mütterlichen Antikörper detektiert werden können, zeigt,
dass die IBL Teste für die beiden genannten Parameter eine sehr hohe Sensitivität besitzen.
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7/7
Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύµβολα
REF
Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N.–Cat.: / Αριθµός-Κατ.:
LOT
Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθµός -Παραγωγή:
Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: /
Χρησιµοποιείται από:
No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: /
Αριθµός εξετάσεων:
CONC
LYO
IVD
Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συµπύκνωµα
Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασµένο
In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In
Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In
Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ∆ιάγνωση.
Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos
para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης.
Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. /
Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni
prima dell’uso. / ∆ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση.
Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. /
Garder à l’abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la
luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να
φυλάσσεται µακριά από θερµότητα και άµεση επαφή µε το φως του ηλίου.
Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση
στους:
Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός:
Caution! / Vorsicht! / Attention! / ¡Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή!
Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED.
Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben.
Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit.
Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS.
Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS.
Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT.
Για τα σύµβολα των συστατικών του κιτ συµβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ.
IBL AFFILIATES WORLDWIDE
IBL - Hamburg GmbH
Flughafenstr. 52A, D-22335 Hamburg, Germany
IBL - Transatlantic LLC
th
375 280 Street, Osceola, WI 54020, USA
Tel.:
E-MAIL:
WEB:
Tel.:
E-MAIL:
WEB:
+ 49 (0) 40 532891 -0 Fax: -11
[email protected]
http://www.ibl-hamburg.com
+1 (715) 294 -1752 Fax: -3035
[email protected]
http://www.ibl-transatlantic.com
LIABILITY: Complaints will only be accepted in written and if all details of the test performance and results are included (complaint form available
from IBL or supplier). Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results.
These cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer’s liability is not to exceed the value of the
test kit. Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer.
Symbols Version 3.1 / 2007-07-12