Total T4 - Meditecno

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Total T4
®
Coat-A-Count Total T4
English
Intended Use: Coat-A-Count Total T4 is a
125
solid-phase I radioimmunoassay
designed for the quantitative
measurement of total circulating thyroxine
(T4) in serum and plasma. It is intended
strictly for in vitro diagnostic use as an aid
in the clinical assessment of thyroid
status.
Catalog Numbers: TKT41 (100 tubes),
TKT45 (500 tubes)
The 100-tube kit contains less
than 5 microcuries
(185 kilobecquerels) of
125
radioactive I T4; and the 500-tube kit
contains less than 25 microcuries
(925 kilobecquerels).
Summary and Explanation
Thyroxine (T4), the principal thyroid
hormone, normally circulates at a level of
approximately 4.5 to 12.5 µg/dL
(58 to 161 nmol/L), largely bound to
transport proteins, especially TBG. Given
normal levels of thyroid hormone-binding
proteins, hyperthyroidism is characterized
by increased levels of circulating T4,
hypothyroidism by decreased levels.
Exceptions to this parallelism between
thyroid status and total T4 concentration
are found, however, in patients with
abnormal levels of thyroid-binding
proteins. Levels of TBG are known to be
altered under various physiological,
pharmacological and genetic conditions.
Thus, elevated T4 levels may be obtained
when TBG levels are high, as in
pregnancy, acute intermittent porphyria,
hyperproteinemia, hereditary TBG
elevation and in patients undergoing
estrogen therapy or taking oral
contraceptives. Total T4 levels may be
depressed when TBG levels are low, as in
nephrotic, hepatic, gastrointestinal and
neoplastic disorders; in acromegaly,
hypoproteinemia and hereditary TBG
deficiency; and in patients undergoing
androgen, testosterone or anabolic steroid
therapy. Diphenylhydantoin and large
doses of salicylates and liothyronine may
2
also cause low T4 values (not reflective of
thyroid status) due to their competition for
binding sites on TBG.
Because the total T4 level is often
abnormal in euthyroid subjects and
because it may be normal in subjects with
abnormal thyroid function, an estimate of
the level of circulating TBG is desirable, as
given for example by a T3 Uptake assay.
In disorders of thyroid function, the total
T4 and the T3 Uptake values will deviate
from normal in the same direction,
whereas in euthyroid patients with the
TBG alterations they will deviate in
opposite directions. The product of the T4
and the T3 Uptake values, divided by 100,
is known as the Free Thyroxine Index
(FT4I), a widely used indicator of thyroid
status.
Principle of the Procedure
Coat-A-Count Total T4 procedure is a
solid phase radioimmunoassay based on
antibody-coated tubes and human serum
125
calibrators. I-labeled T4 competes for a
fixed time with T4 in the patient sample for
antibody sites, in the presence of blocking
agents for thyroid hormone-binding
proteins. After the tubes are decanted and
counted, the T4 concentration is read from
a calibration curve.
Reagents to Pipet: 1
Total Incubation Time: 1 Hour at 37°C
Total Counts at Iodination:
approximately 70,000 cpm
Warnings and Precautions
For in vitro diagnostic use.
Reagents: Store at 2–8°C in a refrigerator
designated for incoming radioactive
materials. Dispose of in accordance with
applicable laws.
Do not use reagents beyond their
expiration dates.
Some components supplied in this kit may
contain human source material and/or
other potentially hazardous ingredients
which necessitate certain precautions.
Follow universal precautions, and handle
all components as if capable of
Coat-A-Count Total T4 (PITKT4-8, 2010-10-25)
transmitting infectious agents. Source
materials derived from human blood were
tested and found nonreactive for syphilis;
for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis
B surface antigen; and for antibodies to
hepatitis C.
Sodium azide, at concentrations less than
0.1 g/dL, has been added as a
preservative. On disposal, flush with large
volumes of water to prevent the buildup of
potentially explosive metal azides in lead
and copper plumbing.
Water: Use distilled or deionized water.
Radioactivity
A copy of any radioisotope license
certificate (Specific or General) issued to a
US customer must be on file with Siemens
Healthcare Diagnostics before kits or
components containing radioactive
material can be shipped. These
radioactive materials may be acquired by
any customer with the appropriate Specific
license. Under a General license these
radioactive materials may be acquired
only by physicians, veterinarians in the
practice of veterinary medicine, clinical
laboratories and hospitals — and strictly
for in vitro clinical or laboratory tests not
involving external or internal
administration of the radioactive material
or its radiation to human beings or other
animals. Its acquisition, receipt, storage,
use, transfer and disposal are all subject
to the regulations and a (General or
Specific) license of the U.S. Nuclear
Regulatory Commission or a State with
which the NRC has entered into an
agreement for the exercise of regulatory
control.
Handle radioactive materials according to
the requirements of your General or
Specific license. To minimize exposure to
radiation, the user should adhere to
guidelines set forth in the National Bureau
of Standards publication on the Safe
Handling of Radioactive Materials
(Handbook No. 92, issued March 9, 1964)
and in subsequent publications issued by
State and Federal authorities.
Wipe up spills promptly and
decontaminate affected surfaces. Avoid
generation of aerosols. Dispose of solid
radioactive waste according to license
requirements. General licensees (holders
of NRC Form 483) may dispose of solid
radioactive waste as nonradioactive
waste, after removing labeling. Specific
licensees (NRC Form 313) should refer to
Title 10, Code of Federal Regulations,
Part 20. Licensees in Agreement States
should refer to the appropriate regulations
of their own state. General licensees may
dispose of liquid radioactive waste of the
type contained in this product through a
laboratory sink drain. Licensees must
remove or deface labels from empty
containers of radioactive materials before
disposal of solid waste. Specific licensees
may dispose of small quantities of liquid
radioactive waste of the type used in this
product through a laboratory sink drain.
Refer to the appropriate regulations
applicable to your laboratory.
Materials Supplied:
Initial Preparation
Total T4 Ab-Coated Tubes (TT41)
Polypropylene tubes coated with
antibodies to T4 and packaged in zip-lock
bags. Store refrigerated and protected
from moisture, carefully resealing the bags
after opening. Stable at 2–8°C until the
expiration date marked on the bag.
Color: light green.
TKT41: 100 tubes. TKT45: 500 tubes.
125
I Total T4 (TT42)
Iodinated T4, ready-to-use, with blocking
agents to thyroid hormone-binding
proteins. Each vial contains 105 mL.
Stable at 2–8°C for 30 days after opening,
or until the expiration date marked on the
vial. Color: red.
TKT41: 1 vial. TKT45: 5 vials.
Total T4 Calibrators (T4C3–8)
Six vials, labeled A through F, of T4
calibrators in processed human serum.
The calibrators are supplied in liquid form,
ready to use. The zero calibrator vial A
contains 2.0 mL, and each of the
remaining calibrator vials B through F
contain 1.0 mL. Store refrigerated: stable
at 2–8°C for 30 days after opening. For
longer storage, aliquot and freeze: stable
at –20°C for 6 months.
TKT41: 1 set. TKT45: 2 sets.
The calibrators contain, respectively, 0, 1,
4, 10, 16 and 24 micrograms of T4 per
deciliter (µg/dL) in processed human
serum; equivalently: 0, 12.9, 51.5, 129,
3
206 and 309 nanomoles per liter (nmol/L).
Intermediate calibration points can be
obtained by mixing calibrators in suitable
proportions.
Materials Required But Not
Provided
Gamma counter — compatible with
standard 12x75 mm tubes
Vortex mixer
Radioimmunoassay
Plain 12x75 mm polypropylene tubes —
for use as Total Counts and NSB tubes,
available from Siemens Healthcare
Diagnostics (catalog number: PPO).
Micropipets: 25 µL and 1,000 µL
Waterbath — capable of maintaining
37°C. Neither an oven nor a heat block is
suitable.
Types for details on tubes that have been
tested.
Volume Required: 25 µL per tube.
Storage: 2–8°C for 7 days, or for up to 1
14
month frozen at –20°C.
Before assay, allow the samples to come
to room temperature (15–28°C) and mix
by gentle swirling or inversion. Aliquot, if
necessary, to avoid repeated thawing and
freezing. Do not attempt to thaw frozen
specimens by heating them in a
waterbath.
Radioimmunoassay Procedure
All components must be at room
temperature (15–28°C) before use.
1
Foam decanting rack — available from
Siemens Healthcare Diagnostics (catalog
number: FDR).
Because nonspecific binding in the
Coat-A-Count procedure is
characteristically low, the NSB tubes
may be safely omitted without
compromising accuracy or quality
control.
Logit-log graph paper
A tri-level, human serum-based
immunoassay control, containing T4 as
one of over 25 assayed constituents, is
available from Siemens Healthcare
Diagnostics (catalog number: CON6).
Specimen Collection
Coated Tubes: Label twelve Total T4 AbCoated Tubes A (maximum binding) and B
through F in duplicate. Label additional
antibody-coated tubes, also in duplicate,
for controls and patient samples.
The patient need not be fasting, and no
special preparations are necessary.
13
Collect blood by venipuncture into plain,
heparinized or EDTA tubes, noting the
time of collection, and separate the serum
or plasma from the cells.
Calibrators
The use of an ultracentrifuge is
recommended to clear lipemic samples.
Samples contaminated from
administration of radioactivity to the
patient are unsuitable for use.
Both bilirubin and gross hemolysis have
an effect on the Coat-A-Count Total T4
procedure.
Blood collection tubes from different
manufacturers may yield differing values,
depending on materials and additives,
including gel or physical barriers, clot
activators and/or anticoagulants. Coat-ACount Total T4 has not been tested with
all possible variations of tube types.
Consult the section on Alternate Sample
4
Plain Tubes: Label four plain
(uncoated) 12x75 mm polypropylene
tubes T (total counts) and NSB
(nonspecific binding) in duplicate.
2
µg/dL
nmol/L
A (MB)
0
0
B
1
12.9
C
4
51.5
D
10
129
E
16
206
F
24
309
Pipet 25 µL of the zero calibrator A
into the NSB and A tubes, and 25 µL
of each remaining calibrator, control
and patient sample into the tubes
prepared. Pipet directly to the
bottom.
Patient samples expected to contain
T4 concentrations greater than the
highest calibrator (24 µg/dL) should be
diluted in the zero calibrator before
assay.
It is good practice to use a disposabletip micropipet, changing the tip
between samples, in order to avoid
carryover contamination.
3
Add 1.0 mL of
tube. Vortex.
125
I Total T4 to every
Laboratories equipped with a reliable
pipettor-diluter may handle steps 2
and 3 simultaneously. No more than
10 minutes should elapse during the
dispensing of the tracer. Set the T
tubes aside for counting (at step 6);
they require no further processing.
4
5
6
Incubate for 60 minutes at 37°C.
calibrators, and draw a straight line
approximating the path of these points.
Results for the unknowns may then be
read from the line by interpolation.
It is good practice to inspect results for
agreement within replicates, and to
construct a graph of the calibration curve
(even if the calculations are handled by
computer) as a visual check on the
appropriateness of the transformation
used and as a way to detect deviant
calibration points. We also recommend
keeping track of these data reduction
parameters:
T = Total Counts (as counts per minute)
Use a waterbath; neither an oven nor
a heat block is suitable.
%NSB = 100 × (Average NSB Counts / Total
Counts)
Decant thoroughly.
%MB = 100 × (Net Counts / Total Counts)
Removing all visible moisture will
greatly enhance precision. Using a
foam decanting rack, decant the
contents of all tubes (except the T
tubes) and allow them to drain for 2 or
3 minutes. Then strike the tubes
sharply on absorbant paper to shake
off all residual droplets.
And the 20, 50 and 80 percent
"intercepts," where
Count for 1 minute in a gamma
counter.
Calculation of Results
To obtain results in terms of concentration
from a logit-log representation of the
calibration curve, first calculate for each
pair of tubes the average NSB-corrected
counts per minute:
Net Counts = (Average CPM) minus (Average
NSB CPM)
Then determine the binding of each pair of
tubes as a percent of maximum binding
(MB), with the NSB-corrected counts of
the A tubes taken as 100%:
Percent Bound = (Net Counts / Net MB Counts)
× 100
(The calculation can be simplified by
omitting the correction for nonspecific
binding; samples within range of the
calibrators yield virtually the same results
when Percent Bound is calculated directly
from Average CPM.)
Using logit-log graph paper, plot Percent
Bound on the vertical (probability) axis
against Concentration on the horizontal
(logarithmic) axis for each of the nonzero
20% = Concentration at 20 Percent Bound, etc.
Note that other approaches, e.g. a sound
implementation of the 4-parameter logistic,
are also acceptable. See Dudley RA, et al.
Guidelines for immunoassay data
reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71.
Example Run: For illustration only, not for
calculating results from another run. (See
"Example Run" table.)
Quality Control
Controls or serum pools with at least two
T4 concentration levels — low and high —
should routinely be assayed as unknowns.
Report patient results only if the control
results for that assay meet your
laboratory's established criteria for
acceptability.
It is good laboratory practice to record for
each assay the lot numbers of the
components used, as well as the dates
when they were first reconstituted or
opened. We also recommend charting
control results from day to day — as
described, for example, in Westgard JO,
et al. A multi-rule chart for quality control.
Clin Chem 1981;27:493-501. Note that
repeat samples can serve as a valuable
additional tool for monitoring interassay
precision, and that pairs of control tubes
can be spaced throughout the assay to
help verify the absence of significant drift.
5
Expected Values
On the basis of its close agreement with
IMMULITE Total T4 and (previously
available) Double Antibody Total T4
assays, the Coat-A-Count Total T4
procedure can be expected to yield a
reference range for adults of
4.5 – 12.5 µg/dL (58 – 161 nmol/L).
Laboratories should consider these results
as guidelines only. Each laboratory should
establish its own reference ranges.
Limitations
Many physiological, pharmacological,
pathological, and genetic factors affect the
interpretation of total T4 results. (Refer to
the Summary and Explanation section.)
More than 20% of patients with nonthyroidal disease who are critically ill have
low serum T4 levels.
Performance Data
therapeutic drugs that may be present in
patient samples. Although some
compounds do crossreact, they are not
normally present in concentrations that
would significantly interfere with the
Coat-A-Count Total T4 assay. (See
"Specificity" table.)
Bilirubin: May interfere with the assay,
causing slight elevations. (See "Bilirubin"
table.)
Hemolysis: May cause a depression of
values. (See "Hemolysis" table.)
Lipemia: Presence of triglycerides in
concentrations up to 3,000 mg/dL has no
effect on results, within the precision of the
assay.
Alternate Sample Type: To determine
whether anticoagulants interfere with the
assay, blood was collected from 20
volunteers into plain, heparinized, EDTA
®
and Becton Dickinson SST vacutainer
tubes. All samples were assayed by the
Coat-A-Count Total T4 procedure, with the
following results.
See Tables and Graphs for data
representative of the Coat-A-Count Total
T4 kit's performance. Except as noted, all
results were obtained on serum samples.
Results are expressed as µg/dL.
(Heparin) = 0.89 (Serum) + 0.72 µg/dL
r = 0.868
Conversion Factor:
µg/dL × 12.87 → nmol/L
(SST) = 1.05 (Plain Tubes) + 0.05 µg/dL
r = 0.923
Calibration Range: 1 – 24 µg/dL
(12.9 – 309 nmol/L)
Means:
8.0 µg/dL (Serum)
7.8 µg/dL (Heparin)
7.5 µg/dL (EDTA)
8.4 µg/dL (SST)
Analytical Sensitivity: 0.25 µg/dL
Intraassay Precision (Within-Run):
Statistics were calculated for each of four
samples from the results of 20 pairs of
tubes in a single assay. (See "Intraassay
Precision" table.)
Interassay Precision (Run-to-Run):
Statistics were calculated for each of four
samples from the results of pairs of tubes
in 28 different assays. (See "Interassay
Precision" table.)
End-of-Run Effect: None up to
approximately 300 tubes. (See "End-ofRun Effect" table.)
Linearity: Samples were assayed under
various dilutions. (See "Linearity" table for
representative data.)
Specificity: The Coat-A-Count Total T4
antiserum is highly specific for L-thyroxine,
with a particularly low crossreactivity to
other naturally occurring compounds and
6
(EDTA) = 0.86 (Serum) + 0.67 µg/dL
r = 0.858
Method Comparison: The Coat-A-Count
Total T4 procedure was compared to
IMMULITE Total T4 assay on 69 patient
serum samples, with T4 concentrations
ranging from 1.1 to 22 µg/dL. (See graph)
By linear regression
(CAC) = 0.86 (IML) + 1.04 µg/dL
r = 0.958
Means:
8.6 µg/dL (Coat-A-Count)
8.8 µg/dL (IMMULITE)
Curve Displacement: Two samples were
each assayed by the Coat-A-Count Total
T4 procedure in assays which included
one-to-one dilutions of the sample with
each of the calibrators A through F. (See
"Curve Displacement" table.)
Protein Effect: To simulate various
protein concentrations, experiments were
performed in which 2.0 mL aliquots of a
human serum pool were freeze-dried and
then reconstituted with various volumes of
water. Each reconstituted aliquot was then
assayed by the Coat-A-Count Total T4
procedure. Note that aliquots reconstituted
with half the original volume represent an
extremely high protein concentration, on
the order of 14 g/dL. (The factor to correct
for reconstitution volume is tabulated
below.) These results indicate that even
wide variations in protein have virtually no
effect on the Coat-A-Count Total T4
assay. (See "Protein Effect" table.)
To place an order: Tel: 800.255.3232.
Outside the United States, contact your
National Distributor.
www.siemens.com/diagnostics
The Quality System of Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. is certified to ISO 13485:2003.
Tables and Graphs
Example Run
References
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Tube1
T7
NSB8
Duplicate Average
Percent
T4
CPM2
CPM3 Net CPM4 Bound5 µg/dL6
69,584
68,865
68,145
368
268
318
0
28,329
A
28,156 27,838
(MB)9 27,982
100%
0
B
24,732
25,042 24,724
25,351
89%
1
C
18,181
18,245 17,927
18,309
64%
4
D
12,236
12,125 11,807
12,014
42%
10
E
9,703
9,884
9,794
9,476
34%
16
F
6,984
7,224
7,104
6,786
24%
24
Unknowns
10
X1
19,442
19,291 18,973
19,139
68%
3.5
X2
13,910
13,590 13,272
13,270
48%
8.3
X3
9,484
9,515
33%
15.7
9,500
9,182
Quality Control Parameters:11
T7 = 68,865 cpm
%NSB8 = 0.5%
%MB9 = 40%
20% Intercept12 = 31.6 µg/dL
50% Intercept = 7.6 µg/dL
80% Intercept = 1.8 µg/dL
Technical Assistance
In the United States, contact Siemens
Healthcare Diagnostics Technical
Services department. Tel: 877.229.3711.
7
Intraassay Precision (µg/dL)
1
Specificity
2
3
Mean
SD
CV
1
2.4
0.09
3.8%
2
4.5
0.15
3.3%
3
7.4
0.20
2.7%
4
13.8
0.38
2.8%
µg/dL
Added2
Compound1
L-Thyroxine
(T4)
CV3
2.3
0.33
14.5%
2
7.2
0.58
8.1%
3
11.4
4.8
4.2%
4
13.2
0.78
5.9%
1
End-of-Run Effect (µg/dL)
1
Tubes
28-48
Tubes Tubes Tubes Tubes Tubes
89-102 143-156 197-210 251-264 305-318
1
2.6
2.4
2.5
2.3
2.3
2.3
2
4.3
4.2
4.5
4.3
4.6
4.4
3
8.1
8.1
8.4
8.0
8.0
8.0
4
11.4
11.5
12.4
12.2
12.3
11.1
5
14.3
13.9
13.9
14.1
13.9
13.4
100%
100%
10
64%
Tetraiodothyroacetic acid
10
104%
Triiodo-L-thyronine
100
2%
25
ND
1
ND
Triiodo-D-thyronine
SD2
25
10
D-Thyroxine
Interassay Precision (µg/dL)
Mean1
% Cross
reactivity3
Triiodothyroacetic acid
Monoiodotyrosine
1,000
2%
10
ND
1,000
ND
10
ND
Diiodo-L-tyrosine
1,000
ND
Methimazole
1,000
ND
5,5′-Diphenylhydantoin
1,000
ND
Phenylbutazone
1,000
ND
1,000
ND
6-n-Propyl-2-thiouracil
4
ND: not detectable
Effect of Bilirubin
Bilirubin1
2
Unspiked
100 mg/L
1
8.0
8.3
7.9
2
8.4
9.2
9.2
Linearity (µg/dL)
3
7.1
8.9
8.2
Dilution1
4
8.6
9.2
9.1
1
2
8
Observed2 Expected3 %O/E4
4 in 45
11.3
—
—
2 in 4
5.4
5.7
95%
1 in 4
2.6
2.8
93%
4 in 4
11.7
—
—
2 in 4
5.9
5.9
100%
1 in 4
3.0
2.9
103%
200 mg/L
Effect of Hemolysis
Packed Red Blood Cells1
2
Unspiked 10 µL/mL 20 µL/mL 40 µL/mL
1
8.0
7.9
7.2
7.3
2
8.4
5.9
6.4
6.8
3
7.1
5.5
5.5
5.6
4
8.6
5.7
5.8
6.3
Curve Displacement (µg/dL)
Solution
1
2
unspiked
Observed
5
2
Method Comparison
Expected
3
4
7.8
—
—
1+A
3.5
3.9
90%
1+B
4.3
4.4
98%
1+C
6.3
5.9
107%
110%
1+D
9.8
8.9
1+E
12.3
11.9
103%
1+F
16.9
15.9
106%
Unspiked
11.9
—
—
2+A
5.8
6.0
97%
2+B
6.8
6.5
105%
2+C
7.5
8.0
94%
100%
2+D
11.0
11.0
2+E
14.6
14.0
104%
2+F
19.1
18.0
106%
Protein Effect
Approx.
Exp1 Factor2 g/dL3 Observed4 Expected5
1
2
3
4
20
%O/E
O/E6
2.00× 14.0
5.1
5.7
1.33×
9.3
3.7
3.8
89%
97%
1.00×
7.0
2.9
—
(100%)
0.8×
5.6
2.5
2.3
109%
0.67×
4.7
1.8
1.9
95%
2.00× 14.0
14.2
13.8
103%
1.33×
9.3
10.3
9.2
112%
1.00×
7.0
6.9
—
(100%)
0.8×
5.6
7.1
5.5
129%
0.67×
4.7
5.6
4.6
122%
82%
2.00× 14.0
20.1
24.4
1.33×
9.3
15.4
16.3
94%
1.00×
7.0
12.2
—
(100%)
0.8×
5.6
9.9
9.8
101%
0.67×
4.7
8.5
8.1
105%
87%
2.00× 14.0
12.3
14.2
1.33×
9.3
9.1
9.4
97%
1.00×
7.0
7.1
—
(100%)
0.8×
5.6
6.0
5.7
105%
0.67×
4.7
5.0
4.7
106%
1
15
10
5
0
0
5
10
15
20
IMMULITE Total T4, µg/dL
(CAC) = 0.86 (IML) + 1.04 µg/dL
r = 0.958
Deutsch. Example Run: 1Röhrchen, 2Duplikat
CPM, 3Mittelwert CPM, 4Netto CPM, 5Prozent
Bindung, 6Ca. Gesamt T4, µg/dL, 7Total,
8
%NSB, 9%MB, 10Unbekannte,
11
Qualitätskontrollparameter, 1220% Intercept.
Intraassay Precision: 1Mittelwert, 2SD
(Standardabweichung), 3CV
(Variationskoeffizient). Interassay Precision:
1
Mittelwert, 2SD (Standardabweichung), 3CV
(Variationskoeffizient). Linearity: 1Verdünnung,
2
Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 54 in 4.
Curve Displacement: 1Lösung, 2Beobachtet
(B), 3Erwartet (E), 4% B/E. Specificity:
1
Verbindung, 2zugesetzte Menge, 3%
Kreuzreaktivität, 4NN: Nicht nachweisbar. Endof-Run Effect: 1Röhrchen. Effect of Bilirubin:
1
Bilirubin, 2Ohne Zugabe von. Effect of
Hemolysis: 1Erythrozytenkonzentrat, 2Ohne
Zugabe von. Protein Effect: 1Experiment,
2
Faktor, 3Gemessene Konzentration,
4
Beobachtet (B), 5Erwartet (E), 6% B/E. Method
Comparison: Total T4: Gesamt T4.
Español. Example Run: 1Tubo, 2Duplicado
CPM, 3Media CPM, 4 CPM Netas, 5Porcentaje
de unión, 6Total T4, aprox., µg/dL, 7Total,
8
%NSB, 9%MB, 10Desconocido, 11Parámetros
del control de calidad, 12Corte al 20%.
Intraassay Precision: 1Media, 2DS, 3CV.
Interassay Precision: 1Media, 2DS, 3CV.
Linearity: 1 Dilución, 2Observado (O),
3
Esperado (E), 4%O/E, 54 en 4. Curve
Displacement: 1Solución, 2Observado (O),
3
Esperado (E), 4%O/E. Specificity:
1
Compuesto, 2 Cantidad añadida, 3% Reacción
cruzada, 4ND: no detectable. End-of-Run
Effect: 1Tubos. Effect of Bilirubin: 1Bilirubina,
2
Sin añadir. Effect of Hemolysis: 1Packed Red
Blood Cells, 2Sin añadir. Protein Effect:
1
Experiment, 2Factor, 3Concentración aparente,
4
Observado (O), 5Esperado (E), 6%O/E. Method
Comparison: Total T4: Total T4.
Français. Exemple Série: 1Tube, 2Duplicate
CPM, 3 CPM moyen, CPM corrigé,
5
Pourcentage lié, 6Approx. Total T4, µg/dL,
9
7
Total, , 8%NSB, 9%MB, 10Patients, 11Paramètres
Contrôle de Qualité, 1220% Intercept. Intraassay
Precision: 1Moyenne, 2SD, 3CV. Interassay
Precision: 1Moyenne, 2SD, 3CV. Linearity:
1
Dilution, 2Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 54
dans 4. Curve Displacement: 1Solution,
2
Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A. Specificity:
1
Composé, 2ajouté, 3Réaction croisée%. 4ND:
non détectable. End-of-Run Effect: 1Tubes.
Effect of Bilirubin: 1Bilirubine, 2Non chargés.
Effect of Hemolysis: 1Packed Red Blood Cells,
2
Non chargés. Protein Effect: 1Experiment,
2
Factor, 3Concentration apparente, 4Observé
(O), 5Attendu (A), 6%O/A. Method Comparison:
Total T4: Total T4.
Italiano. Seduta Esemplificativa: 1Provetta,
2
CPM in duplicato, 3CPM Medio, 4CPM Netti,
5
Percentuale di Legato, 6Appross. T4 Totale,
µg/dL, 7Totale, 8%NSB, 9%MB, 10 Campioni Non
Noti, 11Parametri per il Controllo di Qualità,
12
Intercetta al 20%. Intraassay Precision:
1
Media, 2SD (Deviazione Standard), 3CV
(Coefficiente di Variazione). Interassay
Precision: 1Media, 2SD (Deviazione Standard),
3
CV (Coefficiente di Variazione). Linearity:
1
Diluizione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A,
5
4 in 4. Curve Displacement: 1Soluzione,
2
Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A. Specificity:
1
Composto, 2quantità aggiunta, 3Percentuale di
Crossreattività, 4ND: non determinabile. End-ofRun Effect: 1Provette. Effect of Bilirubin:
1
Bilirubina, 2Semplice. Effect of Hemolysis:
1
Globuli rossi impaccati, 2Semplice. Protein
Effect: 1Esperimento, 2Fattore, 3Concentrazione
apparente, 4Osservato (O), 5Atteso (A), 6%O/A.
Method Comparison: Total T4: T4 Totale.
Português. Example Run: 1Tubo, 2Duplicado
CPM, 3Média de CPM, 4Net CPM, 5Percentagem
de Ligação, 6Aprox. T4 Total, µg/dL, 7Total,
8
%NSB, 9%MB, 10Desconhecidas, 11Parâmetros
do controlo de qualidade, 1220% Intercepção.
Intraassay Precision: 1Média, 2Desvio padrão,
3
Coeficiente de variação. Interassay Precision:
1
Média, 2Desvio padrão, 3Coeficiente de
variação. Linearity: 1Diluição, 2Observado (O),
3
Esperado (E), 4%O/E, 54 em 4. Curve
Displacement: 1Solução, 2Observado (O),
3
Esperado (E), 4%O/E. Specificity: 1Composto,
2
Quantidade adicionada, 3Percentagem de
reacção cruzada, 4ND: não detectável. End-ofRun Effect: 1Tubos. Effect of Bilirubin:
1
Bilirubina, 2Não adicionada. Effect of
Hemolysis: 1Hemáceas, 2Não adicionada.
Protein Effect: 1Experiência, 2Factor, 3Apparent
Concentration, 4Observado (O), 5Esperado (E),
6
%O/E. Method Comparison: Total T4: T4
Total.
10
Deutsch
Coat-A-Count Gesamt T4
Anwendung: Festphasen
Radioimmunoassay (beschichtete
Röhrchen) zur direkten quantitativen
Bestimmung des Gesamt Thyroxin (T4) im
Serum oder Plasma. Der Test ist
ausschließlich in der in-Vitro-Diagnostik
zur klinischen Abschätzung des
Schilddrüsenzustandes einzusetzen.
Artikelnummern: TKT41 (100 Tests),
TKT45 (500 Tests)
Die Packung mit 100 Röhrchen
enthält weniger als 5 Microcurie
125
(185 Kilobequerel) an Iradioaktivem T4 und die Packung mit 500
Röhrchen enthält weniger als 25
Microcurie (925 Kilobecquerel).
Klinische Relevanz
Thyroxin (T4), das von der Schilddrüse
hauptsächlich gebildete Hormon, zirkuliert
im Blut, im wesentlichen gebunden an
Trägerproteine (hauptsächlich TBG) in
einem Konzentrationsbereich von 4,5 bis
12,5 µg/dl (58 bis 161 nmol/l). Normale
TBG-Spiegel vorausgesetzt, ist eine
Hyperthyreose durch erhöhte, eine
Hypothyreose durch erniedrigte T4Spiegel charakterisiert.
Ausnahmen von dieser Regel liegen bei
Patienten mit nichtnormalem TBG vor. Es
ist bekannt, dass die TBG-Spiegel unter
verschiedenen physiologischen,
pharmakologischen und genetischen
Bedingungen schwanken können. Auf
diese Weise treten erhöhte T4- Werte bei
gleichzeitig erhöhten TBG-Werten bei
Schwangeren, Patienten mit akuter
intermittierender Porphyrie,
Hyperproteinämie, hereditärer TBGErhöhung, sowie unter Östrogentherapie
und Einnahme oraler Kontrazeptiva auf.
Im Gegensatz dazu können erniedrigte
T4-Werte und gleichzeitig niedrige TBGWerte bei Patienten mit Nieren-, Leber-,
Magen- Darm- und neoplastischen
Erkrankungen, Akromegalie,
Hypoproteinämie, hereditärem TBGMangel, sowie Patienten unter Androgen-,
Testosteron- oder Steroidtherapie
auftreten. Diphenylhydantoin (Phenytoin)
und hohe Dosen von Salizylaten und
Liothyronin können durch ihre Bindung an
das TBG ebenfalls zu erniedrigten T4Werten führen, die jedoch den
tatsächlichen Schilddrüsenstatus nicht
widerspiegeln.
Einige Komponenten des Kits können
Material humanen Ursprungs und/oder in
anderer Weise gefährliche Inhaltsstoffe
enthalten, die es unbedingt notwendig
machen die folgenden
Vorsichtsmaßnahmen einzuhalten.
Da der Gesamt T4- Spiegel bei
euthyreoten Patienten abnormal verändert
sein kann und im Gegensatz dazu bei
Patienten mit pathologischem
Schilddrüsenstatus normale T4-Spiegel
auftreten können, ist die zusätzliche
Bestimmung des zirkulierenden TBG, z. B.
mittels eines T3 Uptake - Assays
wünschenswert. Bei Schilddrüsenerkrankungen weichen der Gesamt T3Spiegel und der ermittelte T3-Uptake
gleichsinnig ab, während sich bei
euthyreoten Patienten mit TBG-Alteration
der Gesamt T4 - Wert und der T3-Uptake
gegenläufig verhalten. Das Produkt aus
beiden Werten geteilt durch 100 ist
definiert als Freier Thyroxin Index (FT4I).
Dieser Index wird als Indikator zur
Beurteilung des Schilddrüsenstatus
verwendet.
Die generell geltenden
Vorsichtsmaßnahmen sind einzuhalten
und alle Komponenten als potenziell
infektiös zu behandeln. Alle aus
menschlichem Blut gewonnenen
Materialien wurden auf Syphilis,
Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2,
Hepatitis-B-Oberflächenantigen und
Hepatitis-C-Antikörper untersucht und
negativ befundet.
Methodik
Radioaktivität
Der Umgang mit radioaktivem Material ist
in Deutschland genehmigungspflichtig.
Deshalb muss der Siemens Healthcare
Diagnostics eine Kopie der aktuellen
gültigen Umgangsgenehmigung des
Kunden vorliegen, bevor radioaktive
Reagenzien versendet werden dürfen. Die
Strahlenschutzverordnung ist zu
beachten.
Der Coat-A-Count Gesamt T4 RIA ist ein
Festphasen Radioimmunoassay mit
Antikörper beschichteten Röhrchen und
125
Humanserum-Standards. I-markiertes
T4 konkurriert eine vorgegebene Zeit mit
dem T4 im Patientenserum um die
Bindung an spezifische Antikörper. Nach
dem Dekantieren und Messen der
Röhrchen können die T4 Konzentrationen
von der Standardkurve abgelesen werden.
Zu pipettierende Reagenzien: 1
Testdauer: 1 Stunde at 37°C
Totalaktivität zum Zeitpunkt der
Markierung: ca. 70 000 cpm
Hinweise und
Vorsichtsmaßnahmen
Zur In-vitro-Diagnostik.
Reagenzien: Die Packung mit den
Reagenzien sollte bei 2–8°C in einem
Kühlschrank gelagert werden, der für
radioaktives Material ausgewiesen ist. Die
Entsorgung muss nach den jeweils
gültigen Gesetzen erfolgen.
Die Reagenzien dürfen nur bis zum
Verfallsdatum verwendet werden.
Bestimmten Komponenten wurde
Natriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Um
die Bildung von explosiven Metallaziden in
Blei- und Kupferrohren zu vermeiden,
sollten die Reagenzien nur zusammen mit
großen Wassermengen in die Kanalisation
gespült werden.
Wasser: Destilliertes bzw. deionisiertes
Wasser benutzen.
Das radioaktive Material ist gemäß der
jeweiligen Umgangsgenehmigung zu
handhaben.
Die Strahlenexposition ist zu minimieren.
Spritzer sind sofort aufzuwischen und die
betroffene Oberfläche zu dekontaminieren. Aerosolbildung ist zu vermeiden.
Flüssiger und fester radioaktiver Abfall
sind unter Beachtung der gültigen
Richtlinien zu entsorgen.
Bestandteile der Testpackung:
Vorbereitung
Gesamt T4 Antikörper-beschichtete
Röhrchen (TT41)
Polypropylen-Röhrchen beschichtet mit
Antikörpern gegen das T4, verpackt in
wiederverschließbaren Plastikbeuteln.
11
Kühl lagern, vor Feuchtigkeit schützen und
nach dem Öffnen wieder sorgfältig
verschließen. Lagerung bei 2–8°C bis zum
Verfallsdatum. Farbe: hellgrün.
TKT41: 100 Röhrchen.
TKT45: 500 Röhrchen.
125
I Gesamt T4 (TT42)
Jodiertes T4, gebrauchsfertig, mit
Blockierungsreagenzien gegen das
Schilddrüsenhormon bindende Protein.
Jede Flasche enthält 105 ml. Lagerung
bei 2–8°C. Haltbar bis 30 Tage nach dem
Öffnen oder bis zum Verfallsdatum auf der
Flasche. Farbe: rot.
TKT41: 1 Flasche. TKT45: 5 Flaschen.
Gesamt T4 Standards (T4C3–8)
6 Flaschen, A – F, mit T4 in behandeltem
Humanserum. Die Standards werden in
flüssiger Form gebrauchsfertig geliefert.
Der 0-Standard A enthält 2,0 ml und die
restlichen Standards B – F je 1,0 ml.
Gekühlt lagern: Bei 2–8°C bis 30 Tage
nach dem Öffnen haltbar. Für eine längere
Lagerung portionieren und einfrieren: Bei
–20°C für 6 Monate haltbar.
TKT41: 1 Set. TKT45: 2 Sets.
Die Standards enthalten 0, 1, 4, 10, 16
und 24 µg/dl T4 in behandeltem
Humanserum; bzw.: 0; 12,9; 51,5; 129;
206 und 309 nmol/l. Weitere
Standardkurvenpunkte können durch
Mischen der Standards hergestellt
werden.
Erforderliche Laborgeräte und
Hilfsmittel
Gammacounter – kompatibel mit
12x75 mm Röhrchen
Wirbelmischer
Radioimmunoassay
Unbeschichtete 12x75 mm PolyprophylenRöhrchen – für T und NSB Röhrchen,
erhältlich bei Siemens Healthcare
Diagnostics (Artikelnummer: PPO).
Immunoassay-Kontrolle (> 25 Parameter,
3 Konzentrationen) (Artikelnummer:
CON6).
Probengewinnung
Es ist keine besondere Vorbereitung der
Patienten nötig. Blutentnahme durch
13
Venenpunktion in Röhrchen ohne
Zusatz, heparinisierte oder EDTARöhrchen, Zeitpunkt der Blutentnahme
notieren, Trennung des Serums oder
Plasma von den Blutzellen.
Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zur
Klärung von lipämischen Proben
empfohlen.
Seren von Patienten unter therapeutischer
Anwendung von Radioaktivität sind
unbrauchbar.
Bilirubin und starke Hämolyse haben
einen Einfluss auf den Coat-A-Count
Gesamt T4.
Blutentnahmeröhrchen von verschiedenen
Herstellern können differierende Werte
verursachen. Dies hängt von den
verwendeten Materialien und Additiven
(Gel oder physische Trennbarrieren,
Gerinnungsaktivatoren und /oder
Antikoagulantien) ab. Coat-A-Count
Gesamt T4 sind nicht mit allen möglichen
Röhrchenvariationen ausgetestet worden.
Details der getesteten Röhrchenarten sind
dem Kapitel "Alternative Probenarten" zu
entnehmen.
Erforderliche Menge: 25 µl pro
Röhrchen.
Lagerung: Bei 2–8°C für 7 Tage, oder für
14
1 Monat gekühlt bei –20°C.
Die Proben vor Testbeginn auf
Raumtemperatur (15–28°C) bringen und
vorsichtig durchmischen. Um wiederholtes
Einfrieren und Auftauen zu vermeiden bei
Bedarf portionieren. Gefrorene Proben
dürfen nicht durch Erhitzen im Wasserbad
aufgetaut werden.
Mikropipetten: 25 µl und 1 000 µl
Testansatz und Durchführung
Wasserbad — für Inkubation bei 37°C.
Heizblock oder Ofen dürfen nicht
verwendet werden.
Alle Testkomponenten vor Testbeginn auf
Raumtemperatur (15–28°C) bringen.
Dekantierständer – erhältlich bei Siemens
Healthcare Diagnostics (Artikelnummer:
FDR).
Logit-Log-Papier
12
1
Unbeschichtete Röhrchen: Jeweils
2 unbeschichtete 12x75 mm
Polypropylen-Röhrchen mit T (Totalaktivität) und NSB (unspezifische
Bindung) beschriften.
Da die unspezifische Bindung im
Coat-A-Count RIA normalerweise
niedrig ist hat sie keinen signifikanten
Einfluss auf die Messwerte. Es kann
deshalb auch auf das Mitführen der
NSB-Röhrchen verzichtet werden.
Beschichtete Röhrchen: Jeweils 2
Antikörper-beschichtete Gesamt T4
Röhrchen mit A (maximale Bindung, 0Standard) und von B bis F beschriften.
Jeweils 2 weitere Antikörper-beschichtete
Röhrchen für Kontrollen und
Patientenproben beschriften.
2
Standards
µg/dl
nmol/l
A (MB)
0
0
B
1
12,9
C
4
51,5
D
10
129
E
16
206
F
24
309
Jeweils 25 µl des 0-Standards A in die
NSB und A Röhrchen und jeweils
25 µl der restlichen Standards,
Kontrollen und Patientenproben in die
vorbereiteten Röhrchen pipettieren.
Direkt auf den Boden des
Röhrchens pipettieren.
Patientenproben mit Konzentrationen
oberhalb des Messbereichs bis
24 µg/dl müssen vor der Messung mit
0-Standard verdünnt werden.
Es ist gute Laborpraxis Pipetten mit
Einmalspitzen zu verwenden und die
Spitze von Probe zu Probe zu
wechseln um Verschleppung zu
vermeiden.
3
125
1,0 ml I Gesamt T4 in jedes
Röhrchen hinzufügen. Mischen.
Mit Hilfe eines Pipettor-Dilutors
können die Schritte 2 und 3 auch
simultan durchgeführt werden. Das
Verteilen des Tracers sollte nicht
länger als 10 Minuten dauern. Die TRöhrchen bis zur Messung (siehe
Schritt 6) beiseite stellen; Sie
bedürfen keiner weiteren Behandlung.
4
Für 60 Minuten bei 37°C im
Wasserbad inkubieren.
Heizblock oder Ofen dürfen nicht
verwendet werden.
5
Vollständig dekantieren.
Vollständiges Entfernen der
Flüssigkeit verbessert die Präzision
deutlich. Mit Hilfe eines Dekantierständers alle Röhrchen (außer die TRöhrchen) dekantieren oder absaugen und 2–3 Minuten umgedreht
stehen lassen. Anschließend werden
die Röhrchen kräftig auf Fließpapier
ausgeklopft, um alle restlichen
Tröpfchen zu entfernen.
6
Für 1 Minute im Gammacounter
messen.
Berechnung der Ergebnisse
Um die Konzentrationen aus der Logit-Log
Darstellung der Standardkurve abzulesen
werden zunächst der Mittelwert der zwei
Röhrchen bereinigt um den Mittelwert der
NSB Counts pro Minute (cpm) berechnet:
Netto Counts = (Mittelwert CPM) minus
(Mittelwert NSB CPM)
Anschließend wird die Bindung jedes
Röhrchenpaars als Prozent der
Maximalbindung (MB, B0) bestimmt.
Hierzu werden die mittleren CPM des AStandards korrigiert um die mittlere NSB
als 100% gesetzt:
Prozentbindung = (Netto Counts / Netto MB
Counts) × 100
(Die Berechnung kann durch weglassen
der Korrektur um die NSB vereinfacht
werden. Für Proben innerhalb des
Standardbereichs werden nahezu
identische Konzentrationen berechnet,
wenn B/B0 direkt aus den CPM ermittelt
wird.)
Die so ermittelten B/B0 aller Standards
außer des 0-Standards werden auf der yAchse auf Logit-Log Papier gegen die
Konzentration auf der x-Achse
(logarithmisch) aufgetragen. Die Punkte
werden mit bestmöglicher Annäherung
durch eine gerade Linie verbunden. Die
Ergebnisse der unbekannten Proben
können dann durch Interpolation an der
Kurve abgelesen werden.
Es ist gute Laborpraxis die Ergebnisse der
Doppelbestimmung auf Übereinstimmung
zu prüfen und eine Grafik der
Standardkurve darzustellen (auch wenn
die eigentliche Berechnung durch ein
Computerprogramm erfolgt) um visuell zu
13
überprüfen, ob für die Standardkurve die
geeignete Transformation verwendet
wurde und um eventuell abweichende
Standardkurvenpunkte zu entdecken. Es
wird weiterhin empfohlen, folgende
Parameter der Berechnung zu
protokollieren:
T = Totalaktivität (als Counts pro Minute)
%NSB = 100 × (Mittelwert NSB Counts / Total
Counts)
%MB = 100 × (Netto Counts / Total Counts)
und die 20, 50 und 80 Prozent
"intercepts," wobei
20% = Konzentration bei 20 Prozent Bindung,
etc.
Bitte beachten Sie, dass auch andere
Auswertungen z. B. nach der 4-Parameter-Logistik akzeptabel sind. Siehe:
Dudley RA, et al. Guidelines for
immunoassay data reduction. Clin Chem
1985;31:1264-71.
Auswertebeispiel: Dieses Beispiel dient
nur zur Veranschaulichung und ist nicht
dazu geeignet Werte aus einem anderen
Testansatz damit zu ermitteln. (siehe
Tabelle "Example Run").
Qualitätskontrolle
Es wird empfohlen Kontrollen mit
mindestens 2 Konzentrationen (niedrig
und hoch) an T4 routinemäßig als
unbekannte Proben einzusetzen.
Patientenergebnisse dürfen nur dann
freigegeben werden, wenn die
laborspezifischen Akzeptanzkriterien
erfüllt sind. Hierzu sind die jeweils gültigen
Richtlinien zu berücksichtigen.
Es ist gute Laborpraxis die
Chargennummern, sowie das Datum der
ersten Öffnung bzw. Rekonstitution der
verwendeten Komponenten zu
protokollieren. Die wiederholte Messung
von Proben kann bei der Beurteilung der
Interassay Präzision hilfreich sein. Der
Einsatz von Kontrollprobenpaaren an
unterschiedlichen Positionen des
Testansatzes ist hilfreich, um einen
eventuellen Drift zu erkennen.
Referenzwerte
Aufgrund der guten Übereinstimmung
zwischen IMMULITE Gesamt T4 und dem
früher verfügbaren Doppelantikörper-RIA
14
für Gesamt T4, ist für den Coat-A-Count
Gesamt T4 bei Erwachsenen ein
Referenzbereich von
4,5 – 12,5 µg/dl (58 – 161 nmol/l)
zu erwarten.
Diese Ergebnisse sind lediglich als
Richtwerte zu betrachten. Jedes Labor
sollte seine eigenen Referenzbereiche
etablieren.
Grenzen der Methode
Zahlreiche physiologische,
pharmakologische, pathologische und
genetische Faktoren beeinflussen die
Interpretation der Gesamt-T4-Ergebnisse.
(Details finden Sie im Abschnitt „Klinische
Relevanz“).
Mehr als 20% kritisch kranke Patienten mit
nicht-thyreoidaler Erkrankung haben
niedrige Serum-Gesamt-T4-Spiegel.
Leistungsdaten
Im folgenden Abschnitt sind Daten
gezeigt, die für die Leistung des Coat-ACount Gesamt T4 repräsentativ sind.
Wenn nicht anders angegeben, wurden
die Ergebnisse anhand von Serumproben
ermittelt. Die Ergebnisse sind in µg/dl
angegeben.
Umrechnungsfaktor:
µg/dl × 12,87 → nmol/l
Messbereich: 1 – 24 µg/dl
(12,9 – 309 nmol/l)
Analytische Sensitivität: 0,25 µg/dl
Intraassay-Präzision: Statistische
Berechnung der Ergebnisse von 4
Proben, die in 20 Röhrchenpaaren in
einem Ansatz gemessen wurden. (Siehe
Tabelle „Intraassay-Precision“.)
Interassay-Präzision: Statistische
Berechnung der Ergebnisse von 4
Proben, die in 28 Röhrchenpaaren in
mehreren Ansätzen gemessen wurden.
(Siehe Tabelle „Interassay-Precision“.)
"End of Run" Effekt: Tritt bis ca.
300 Röhrchen nicht auf. (siehe Tabelle
"End-of-Run Effect".)
Linearität: Proben wurden in
verschiedenen Verdünnungen getestet.
(Repräsentative Daten entnehmen Sie
bitte der Tabelle „Linearität“.)
Spezifität: Das in diesem Testbesteck
verwendete Antiserum ist hochspezifisch
für L-Thyroxin mit besonders niedrigen
Kreuzreaktivitäten zu anderen natürlich
vorkommenden Substanzen oder
Medikamenten, die in Patientenproben
vorkommen können. Trotzdem zeigen
einige Substanzen Kreuzreaktivitäten, die
aber aufgrund ihrer normalerweise
geringen Konzentrationen keine
signifikanten Störungen im Assay
hervorrufen. (siehe Tabelle „Spezifität“.)
Bilirubin: Kann mit dem Assay
interferieren und zu leichten Erhöhungen
führen. (Siehe Tabelle "Bilirubin".)
Hämolyse: Kann die Werte senken.
(Siehe Tabelle "Hemolysis".)
Lipämie: Triglyzeride haben in
Konzentrationen bis zu 3 000 mg/dl
keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der
größer als die Unpräzision des Assays
selbst ist.
Alternativer Probentyp: Um die
Auswirkungen von verschiedenen
Probenarten zu untersuchen, wurde Blut
von 20 Freiwilligen in Röhrchen ohne
Additiva, in Heparin-, EDTA- und Becton
®
Dickinson SST Vacutainer-Rörchen
gesammelt. Alle Proben wurden mit dem
Coat-A-Count Gesamt T4 mit folgenden
Ergebnissen gemessen:
(Heparin) = 0,89 (Serum) + 0,72 µg/dl
r = 0,868
(EDTA) = 0,86 (Serum) + 0,67 µg/dl
r = 0,858
(SST) = 1,05 (einfachen Röhrchen) + 0,05 µg/dl
r = 0,923
Mittelwerte:
8,0 µg/dl (Serum)
7,8 µg/dl (Heparin)
7,5 µg/dl (EDTA)
8,4 µg/dl (SST)
Methodenvergleich: Der Coat-A-Count
Gesamt T4 Assay wurden mit dem
IMMULITE Gesamt T4 an 69 PatientenSerumproben mit Konzentrationen von
1,1 – 22 µg/dl verglichen. (Siehe Grafik.)
Durch lineare Regression:
(CAC) = 0,86 (IML) + 1,04 µg/dl
r = 0,958
Mittelwerte:
8,6 µg/dl (Coat-A-Count)
8,8 µg/dl (IMMULITE)
untersucht, dabei erfolgte jeweils eine 1:1
Verdünnung der Probe mit einem der
Standards A–F. (Siehe Tabelle "Curve
Displacement".)
Protein Einfluss: Um unterschiedliche
Proteinkonzentrationen zu simulieren,
wurden 2,0 ml Portionen eines
Humanserum-Pools gefriergetrocknet und
anschließend in unterschiedlichen
Volumina an Wasser aufgelöst. Jede
aufgelöste Portion wurde im Gesamt T4
Coat-A-Count RIA gemessen. In den mit
der Hälfte des Originalvolumens
aufgelösten Proben liegt eine extrem hohe
Proteinkonzentration von 14 g/dl vor. (Der
jeweilige Faktor, um das Auflösevolumen
zu korrigieren, ist in der Tabelle
aufgelistet.) Die Ergebnisse zeigen, dass
selbst große Unterschiede in den
Proteinkonzentration keinen Einfluss auf
den Gesamt T4 Coat-A-Count RIA haben.
(Siehe Tabelle "Protein Effect".)
Anwendungsberatung
Bei Rückfragen wenden Sie sich bitte an
Ihre Niederlassung.
Das Qualitätsmanagement-System der Siemens
Healthcare Diagnostics Inc. ist zertifiziert nach
DIN EN ISO 13485:2003.
Español
T4 Total Coat-A-Count
Utilidad del análisis: T4 Total Coat-ACount es un radioinmunoensayo de fase
125
sólida con I , diseñado para la medición
cuantitativa de la tiroxina circulante total
(T4) en suero y plasma. Su uso es
exclusivamente para diagnóstico in vitro
como ayuda en la evaluación clínica del
estado en que se encuentra el tiroides.
Referencia: TKT41 (100 tubos),
TKT45 (500 tubos)
El kit de 100 tubos contiene
menos de 5 microcurios (185
kilobecquerelios) de T4 marcada
125
con I ; el de 500 tubos contiene menos
de 25 microcurios (925 kilobecquerelios).
Kurvenverschiebung: Zwei Proben
wurden einzeln in Gesamt T4 Assays
15
Resumen y Explicación del
Test
La tiroxina (T4), principal hormona
tiroidea, por lo general, circula a un nivel
de aproximadamente 4,5 a 12,5 µg/dl (58
a 161 nmol/l) que en gran medida se une
a proteínas transportadoras, en especial a
la TBG. Con niveles normales de
proteínas de unión a hormonas tiroideas,
el hipertiroidismo se caracteriza por
niveles altos de T4 circulante y el
hipotiroidismo, por niveles bajos.
No obstante, hay excepciones a este
paralelismo entre el estado del tiroides y
la concentración total de T4 en pacientes
con niveles anormales de proteínas de
unión a hormonas tiroideas. Se sabe que
los niveles de TBG se alteran debido a
diferentes condiciones fisiológicas,
farmacológicas y genéticas. Así, se
pueden obtenerse niveles de T4 altos
cuando los niveles de TBG están altos,
como en el embarazo, porfiria aguda
intermitente, hiperproteínemia, elevación
de TBG hereditaria y en pacientes bajo
tratamiento con estrógenos o que toman
anticonceptivos orales. Los niveles de T4
totales pueden bajar cuando los niveles
de TBG están bajos, como en
padecimientos nefróticos, hepáticos,
gastrointestinales y neoplásticos; en
acromegalia, hipoproteínemia y
deficiencia de TBG hereditaria y en
pacientes bajo tratamiento con
andrógenos, testosterona o esteróides
anabólicos. La difenilhidantonina y
grandes dosis de salicatos y lodotironina
también pueden causar niveles bajos de
T4 (que no reflejan el estado del tiroides)
debido a su competición por sitios de
unión en TBG.
Debido a que el nivel de T4 por lo general
es anormal en personas eutiroideas y
porque puede ser normal en personas con
función tiroidea anormal, sería
conveniente la medición del nivel de TBG
circulante, por ejemplo, mediante el
ensayo de captación de T3. En los
desordenes de la función tiroidea, los
valores totales de T4 y captación de T3 se
desviarán en la misma dirección, mientras
que en los pacientes eutiroideos con
alteraciones de TBG se desviarán en
direcciones opuestas. EL producto de los
valores de T4 y captación de T3 divididos
entre 100 se conoce como el Índice de
16
Tiroxina libre (FT4I), que es muy utilizado
como indicador del estado del tiroides.
Principio del análisis
El Procedimiento T4 Total Coat-A-Count 4
es un radioinmunoensayo de fase sólida
basado en tubos recubiertos de
anticuerpos y calibradores de suero
125
humano. La T4 marcada con I compite
durante un periodo determinado con la T4
de la muestra del paciente por obtener
sitios de unión al anticuerpo, en presencia
de agentes bloqueadores de proteínas de
unión a la hormona tiroidea. Después de
que los tubos se decantan y se hace el
contaje, se lee la concentración de T4 a
partir de una curva de calibración.
Reactivos a pipetear: 1
Tiempo total de incubación: 1 hora a
37°C
Cuentas totales en la iodización:
aproximadamente 70 000 cpm
Advertencias y precauciones
Para uso diagnóstico in vitro.
Reactivos: Almacenar de 2–8°C en una
cámara preparada para almacenar
material radioactivo. Desechar de acuerdo
a la legislación en vigor.
No usar los reactivos después de su fecha
de caducidad.
Algunos componentes suministrados en el
kit pueden contener material de origen
humano y/o otros componentes
potencialmente peligrosos que necesiten
ciertas precauciones.
Siga las precauciones universales y
manipule todos los componentes como si
fueran capaces de transmitir agentes
infecciosos. Los materiales derivados de
sangre humana han sido analizados y son
negativos para sífilis; para anticuerpos
frente al HIV 1 y 2; para el antígeno de
superficie de hepatitis B y para los
anticuerpos de hepatitis C.
Se ha usado Azida sódica, en
concentraciones menores de 0,1 g/dl,
como conservante. Para su eliminación,
lavar con grandes cantidades de agua
para evitar la constitución de residuos de
azidas metálicas, potencialmente
explosivas, en las cañerías de cobre y
plomo.
Agua: Usar agua destilada o desionizada.
Radioactividad
Una copia de cualquier certificado de
licencia de radioisótopos (específico o
general) emitido a la aduana de los EEUU
se registrará en los ficheros de Siemens
Healthcare Diagnostics antes de que se
puedan enviar kits o componentes
conteniendo material radioactivo. Estos
materiales radioactivos pueden adquirirse
por cualquier cliente con la licencia
específica apropiada. Con una licencia
general, estos materiales radioactivos
pueden adquirirse solo por médicos,
veterinarios en la práctica de la medicina
veterinaria, laboratorios clínicos y
hospitales — y estrictamente para la
clínica in vitro o test de laboratorio que no
conlleven la administración interna o
externa de material radioactivo o su
radiación a humanos u otros animales. Su
adquisición, recepción, almacenaje, uso,
transferencia y desecho están regulados y
se expenderá una licencia (general o
específica) de la Comisión Nuclear de
EEUU o de un Estado con el NRC para su
consiguiente control.
Manejar los materiales radioactivos de
acuerdo a los requerimientos de su
licencia general o específica. Para
minimizar la exposición a la radiación, el
usuario debe adherirse al cuarto conjunto
de guías publicadas por el National
Bureau of Standards con el nombre Safe
Handling of Radioactive Materials
(Handbook No. 92, issued March 9, 1964)
y en las consiguientes publicaciones de
las autoridades Federales o Estatales.
Limpiar y decontaminar rápidamente las
superficies afectadas. Evitar la generación
de aerosoles. Eliminar los residuos sólidos
radioactivos de acuerdo con los
requerimientos de su licencia. Licencias
generales (NRC Form 483) pueden
eliminar sus residuos sólidos radioactivos
como residuos no radioactivos, después
de retirar las etiquetas. Licencias
específicas (NRC Form 313) se deben
referir al Título 10, Código de
Regulaciones Federales, Parte 20. Las
licencias en Estados Asociados deben
referirse a las normativas de su
correspondiente Estado. Licencias
generales pueden eliminar sus residuos
líquidos radioactivos contenidos en este
tipo de productos como cualquier otro
material líquido, quitando las etiquetas de
los contenedores y procesándolos como
residuos sólidos. Licencias específicas
pueden eliminar pequeñas cantidades de
residuos líquidos radioactivos contenidos
en este tipo de productos como cualquier
otro material líquido. Refiérase a la
normativa aplicable a su laboratorio.
Materiales Suministrados:
Preparación Inicial
Tubos recubiertos de Anticuerpo antiT4 Total (TT41)
De poliestireno recubiertos de anticuerpos
anti-T4 empaquetados en bolsas con
cierre. Almacenar refrigerados y
protegidos de la condensación, cerrando
cuidadosamente las bolsas después de su
uso. Estable a 2–8°C hasta la fecha de
caducidad impresa en la bolsa.
Color: Verde claro.
TKT41: 100 tubos. TKT45: 500 tubos.
125
Anticuerpos anti-T4 Total I (TT42)
Viales con T4 iodada, listos para usar, con
agentes bloqueantes de proteínas de
unión a hormonas tiroideas. Cada vial
contiene 105 ml. Estable a 2–8°C durante
30 días después de la apertura ó hasta la
fecha de caducidad marcada en el vial.
Color: Rojo.
TKT41: 1 vial. TKT45: 5 viales.
Calibradores de T4 Total (T4C3–8)
Un juego de seis viales, marcados de la A
a la F, de calibradores de T4 en matriz de
suero humano. Los calibradores se
suministran en forma líquida, listos para
usar. El calibrador cero, correspondiente
al vial A, contiene 2,0 ml, y el resto de los
viales de calibradores desde el B al F,
contienen 1,0 ml cada uno. Almacene en
refrigeración: estable a 2–8°C durante 30
días después de su apertura. Para
periodos más largos almacene en
alícuotas y congele: estable a –20°C
durante 6 meses.
TKT41: 1 juego. TKT45: 2 juegos.
Los calibradores contienen,
respectivamente 0, 1, 4, 10, 16 y 24
microgramos de T4 por decilitro (µg/dL)
en matriz de suero humano, equivalente:
a 0, 12,9, 51,5, 129, 206 y 309 nanomoles
por litro (nmol/l). Los puntos de calibración
intermedios se pueden obtener
17
mezclando los calibradores en
proporciones adecuadas.
Materiales Requeridos pero no
suministrados
Un contador Gamma, compatible con
tubos estándar de 12x75 mm
anticoagulantes. El T4 Total Coat-A-Count
no ha sido analizado con todos los
distintos tipos de tubos. Para obtener
detalles sobre los tipos tubos que se han
analizado, consulte la sección de Tipos de
Muestras Alternativos.
Volumen requerido: 25 µl por tubo.
Vórtex
Almacenamiento: 2–8°C durante 7 días
14
o hasta 1 mes congeladas a –20°C.
Radioimmunensayos
Tubos de polipropileno de 12x75 mm —
para uso como tubos de Cuentas Totales
y de Unión No Específica (NSB),
disponibles en Siemens Healthcare
Diagnostics (Referencia: PPO).
Antes del ensayo, llevar todas las
muestras a temperatura ambiente (15–
28°C) y mezclar por inversión. Alicuotar, si
es necesario, para evitar la repetición de
congelación y descongelación. No intentar
la descongelación de muestras
congeladas calentándolas en un baño de
agua.
Micropipetas: 25 µl y 1 000 µl
Baño maría, capaz de mantener 37°C. No
se debe utilizar ni horno ni calentador.
Gradilla de decantación de goma espuma,
disponible en Siemens Healthcare
Diagnostics (Referencia: FDR).
Papel milimetrado logarítmico
Control de inmunoensayo con tres niveles,
basado en suero humano, que contiene
T4 como uno de los más de 25
constituyentes del ensayo, disponible en
Siemens Healthcare Diagnostics
(Referencia: CON6).
Procedimiento del
Radioinmunoanálisis
Todos los componentes deben llevarse a
temperatura ambiente (15–28°C) antes de
su uso.
1
Al ser característicamente baja la
unión no específica en el ensayo
Coat-A-Count, los tubos NSB pueden
ser omitidos sin comprometer la
precisión y control de calidad del
ensayo.
Recogida de la muestra
No es necesario que el paciente esté en
ayunas ni que se hagan preparaciones
especiales. Extraiga la sangre mediante
13
venopunción en tubos secos,
heparinizados o con EDTA, tomando en
cuenta el momento de la toma, y separe el
suero o el plasma de las células.
Se recomienda el uso de una
ultracentrífuga para aclarar las muestras
lipémicas.
Tubos de ensayo: Etiquete cuatro
tubos T (cuentas totales), no
recubiertos, de polipropileno de
12x75 mm y de unión no específica
(NSB) por duplicado.
Tubos Recubiertos: Etiquete doce tubos
A (unión máxima) recubiertos de
Anticuerpos anti-T4 Total y desde el B
hasta F por duplicado. Etiquete tubos
adicionales recubiertos de anticuerpos,
también por duplicado, para los controles
y las muestras de pacientes.
Los anticoagulantes no interfieren con el
ensayo. No se deben utilizar muestras
contaminadas por la administración de
radioisótopos al paciente.
Calibradores
µg/dl
A (MB)
0
0
B
1
12,9
La bilirrubina y la hemólisis tienen efecto
sobre el ensayo Total Coat -A-Count.
C
4
51,5
D
10
129
Los tubos para recoger sangre de
distintos fabricantes pueden producir
valores diferentes, dependiendo del
material del tubo y de los aditivos,
incluyendo barreras de gel o barreras
físicas, activadores de la coagulación y/o
E
16
206
F
24
309
18
2
nmol/l
Pipetear 25 µl del calibrador cero A en
los tubos de unión no específica así
como 25 µl de cada calibrador, control
y muestra de paciente en los
restantes tubos preparados. Pipetear
con la pipeta directamente en el
fondo.
Las muestras de pacientes que se
espera que contengan
concentraciones de T4 mayores al
calibrador más alto (24 µg/dl) se
deben diluir con el calibrador cero
antes de realizar el ensayo.
Es aconsejable el uso de micropipetas
con punta desechables, cambiando
las puntas entre muestra y muestras,
para evitar la contaminación por
arrastre.
3
Agregue 1,0 ml de T4 Total I
cada tubo. Mezcle en Vórtex.
125
a
Los laboratorios equipados con
dispensadores pueden realizar los
pasos 2 y 3 de manera simultánea.
No deben transcurrir más de 10
minutos durante la dispensación del
trazador. Coloque a un lado los tubos
T para el contaje (en el paso 6) y no
requerirán un procesamiento
adicional).
4
Incube durante 60 minutos a 37°C.
Utilice baño maría. Nunca utilice un
horno ni un calentador.
5
6
Decantar. Al retirar toda la humedad
visible, aumentará la precisión.
Mediante una gradilla de decantación,
decante el contenido de todos los
tubos (excepto los tubos T) y deje que
escurran durante 2 a 3 minutos.
Después, golpear los tubos contra el
papel absorbente para retirar las
gotas residuales.
Lea durante 1 minuto en un contador
gamma.
Cálculo de resultados
Para obtener resultados en términos de
concentración a partir de una
representación logit-log de la curva de
calibración, primero hay que calcular para
cada pareja de tubos las cuentas medias
por minuto corregidas con el NSB:
Cuentas netas = (Media CPM) menos
(Media NSB CPM)
Entonces, determinar la unión de cada
pareja de tubos como un porcentaje de la
unión máxima (MB), tomando las cuentas
corregidas con el NSB de los tubos A
como 100%:
Porcentaje de Unión = (Cuentas netas / Cuentas
MB netas) × 100
(El cálculo puede simplificarse omitiendo
la corrección de las uniones no
específicas; las muestras dentro del rango
de calibración van a dar virtualmente el
mismo resultado cuando el porcentaje de
unión es calculado directamente a partir
de la media de las CPM).
Usando papel gráfico logit-log, representar
el porcentaje de unión en el eje vertical
frente a la concentración en el eje
horizontal (logarítmico) para cada
calibrador no cero y dibujar la línea que
pase por esos puntos aproximadamente.
Los resultados de las muestras pueden
ser leídos en la curva por interpolación.
Es una buena práctica inspeccionar los
resultados para comprobar la
concordancia entre los replicados, y
realizar una gráfica de la curva de
calibración (aunque los cálculos se
realicen por ordenador) para ver la
transformación más apropiada a usar y las
posibles desviaciones en los puntos de
calibración. También, recomendamos
mantener un registro de los siguientes
parámetros de la reducción de datos:
T = Cuentas totales (como cuentas por minuto)
%NSB = 100 × (Media cuentas NSB / cuentas
totales)
%MB = 100 × (Cuentas netas / Cuentas totales)
Y los cortes 20, 50 y 80 por ciento, donde
20% = Concentración al 20 por ciento de unión,
etc.
Otras aproximaciones, por ejemplo,
logística 4-parámetros, también son
aceptables. Ver Dudley RA, et al.
“Guidelines for immunoassay data
reduction”. Clin Chem 1985;31:1264-71.
Ejemplo: Sólo como ilustración, no se
puede utilizar para calcular resultados.
(Ver tabla "Example Run".)
Control de Calidad
Las cubetas con controles o suero con al
menos dos niveles de concentración de
T4, alto y bajo, se deben ensayar como
incógnitas.
19
Informar de los resultados de los
pacientes sólo si los resultados de los
controles para este ensayo están dentro
de los criterios de aceptabilidad
establecidos por su laboratorio.
Es una buena práctica de laboratorio
registrar para cada ensayo los números
de lote de los componentes usados, así
como las fechas en las que fueron
abiertos por primera vez y reconstituidos.
También recomendamos el uso de
gráficos diarios de los controles — como
se describe, por ejemplo, en Westgard
JO, et al. A multi-rule chart for quality
control. Clin Chem 1981;27:493-501. Las
muestras repetidas pueden servir como
una herramienta de valor adicional para
monitorizar la precisión interensayo, y que
las parejas de los tubos del control
pueden espaciarse a lo largo de la tanda
de ensayo para verificar la ausencia de
deriva significativa.
Valores esperados
Con base a su gran concordancia con los
ensayos IMMULITE T4 Total (disponibles
previamente) y Double Antibody T4 Total,
se puede esperar que el procedimiento
genere un rango de referencia para
adultos de:
4,5 – 12,5 µg/dl (58–161 nmol/l).
Los laboratorios deben considerar estos
resultados sólo como una guía. Cada
laboratorio deberá establecer sus propios
intervalos de referencia.
Limitaciones
Varios aspectos fisiológicos,
farmacológicos, patológicos y genéticos
pueden afectar a la interpretación de los
resultados de T4 Total (Ver la sección de
Resumen y explicación de la Prueba).
Más del 20% de los pacientes sin
afectación tiroidea y gravemente
enfermos, tienen niveles séricos bajos de
T4.
Características analíticas
Las siguientes secciones contienen datos
representativos del rendimiento del kit T4
Total Coat-A-Count. Todos los resultados
se obtuvieron con suero, a excepción de
los que se indican. Los resultados se
expresan como microgramos de T4 por
decilitro (µg/dl).
20
Factor de Conversión:
Intervalo de calibración: 1 – 24 µg/dl
(12,9 – 309 nmol/l)
Sensibilidad analítica: 0,25 µg/dl
Precisión intraensayo (dentro de un
run): Se realizaron estudios estadísticos
para cada una de las cuatro muestras a
partir de los resultados de 20 pares de
tubos en un solo ensayo. (Véase la tabla
"Precisión intraensayo".)
Precisión entre ensayos (de un run a
otro): Se realizaron estudios estadísticos
para cada una de las cuatro muestras a
partir de los resultados de pares de tubos
en 28 ensayos. (Véase la tabla "Precisión
entre ensayos".)
Efecto deriva: Ninguno hasta
aproximadamente 300 tubos. (Ver tabla
"End-of-Run Effect".)
Linealidad: Las muestras fueron
analizadas con varias diluciones. (Ver
tabla “Linearidad”.)
Especificidad: El ensayo T4 Total CoatA-Count es altamente específico para la
L-tiroxina, con una reactividad cruzada
extremadamente baja con otros
compuestos que se encuentran de
manera natural ó medicamentos que
pueden encontrarse en las muestras de
pacientes. A pesar de que algunos
compuestos efectivamente tienen una
reacción cruzada, se encuentran
presentes en concentraciones que
pudieran interferir de manera importante
con el ensayo. (Véase la tabla
"Especificidad".)
Bilirrubina: Puede interferir con el
ensayo, causando pequeñas elevaciones.
(Ver tabla “Bilirrubina.)
Hemólisis: Puede causar disminución en
los valores. (Ver tabla Hemólisis.)
Lipemia: La presencia de triglicéridos en
concentraciones de hasta 3 000 mg/dl no
tiene efecto en los resultados, dentro de la
precisión del ensayo.
Tipo de Muestra Alternativa: para
evaluar el efecto de los diferentes tipos de
muestras alternativos, se recogió sangre
de 20 voluntarios en tubos normales,
tubos con Heparina, tubos con EDTA y
®
tubos vacutainer SST de Becton
Dickinson. Las muestras se ensayaron
mediante el procedimiento T4 Total CoatA-Count y se obtuvieron los siguientes
resultados:
(Heparina) = 0,89 (Suero) + 0,72 µg/dl
r = 0,868
(EDTA) = 0,86 (Suero) + 0,67 µg/dl
r = 0,858
(SST) = 1,05 (tubos simples) + 0,05 µg/dl
r = 0,923
Medias:
8,0 µg/dl (Suero)
7,8 µg/dl (Heparina)
7,5 µg/dl (EDTA)
8,4 µg/dl (SST)
Comparación de los métodos: El
ensayo T4 Total Coat-A-Count se
comparó con el ensayo T4 TOTAL
IMMULITE en 69 muestras de suero de
pacientes con concentraciones de T4
entre 1,1 y 22 µg/dl. (Ver la gráfico). Por
regresión lineal:
(CAC) = 0,86 (IML) + 1,04 µg/dl
r = 0,958
Medias:
Desplazamiento de la curva: Se
ensayaron dos muestras mediante el
procedimiento T4 Total Coat-A-Count en
pruebas que incluyeron diluciones una a
una de la muestra con cada uno de los
calibradores de la A a la F. (Ver
“Desplazamiento de la Curva” tabla).
Efecto de Proteína: Para simular varias
concentraciones de proteínas, se
efectuaron experimentos en los que
alícuotas de 2,0 ml de un pool de suero
humano se congelaron en seco y luego
fueron reconstituidas con varios
volúmenes de agua. Cada alícuota
reconstituída fue entonces ensayada con
el procedimiento T4 Total Coat-A-Count.
Observe que las alícuotas reconstituidas
con la mitad del volumen original
representan una concentración de
proteína extremadamente alta, del orden
de 14 g/dl. Los resultados indican que aún
exisistiendo amplias variaciones de
concentraciones proteicas no tienen
efecto significativo con el ensayo de T4
Total Coat-A-Count. (Ver la tabla de
"Efecto Proteico".)
Asistencia técnica
Póngase en contacto con el distribuidor
nacional.
El Sistema de Calidad de Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. está certificado por la ISO
13485:2003.
Français
Domaine d'utilisation: La technique
Coat-A-Count Total T4 est un dosage
radioimmunologique en phase solide pour
la mesure quantitative de la totale T4
(thyroxine) dans le sérum ou plasma. Ce
test est réservé à un usage diagnostic in
vitro et constitue une aide au bilan
thyroïdien.
Référence catalogue : TKT41 (100 tubes),
TKT45 (500 tubes)
Le coffret de 100-tubes contient
moins de 5 micro-curies
(185 kilobecquerels) de T4
marquée à l'iode 125. Le coffret de 500tubes contient moins de 25 micro-curies
(925 kilobecquerels) de T4 marquée à
l'iode 125.
Introduction
La thyroxine (T4), principale hormone
thyroïdienne, se trouve dans les
conditions normales à une concentration
d'environ 4,5 à 12,5 µg/dl (58 à
161 nmol/l), principalement sous forme
liée à des protéines de transport,
essentiellement à la TBG. Sans
perturbation du taux des protéines de
transport, l'hyperthyroïdie se caractérise
par des concentrations élevées de T4
circulante, l'hypothyroïdie par des
concentrations de T4 diminuées.
En-dehors des variations dues à l'état
thyroïdien, les taux de T4 peuvent
augmenter ou diminuer, parallèlement aux
concentrations des protéines porteuses
comme la TBG. Ainsi, des taux élevés de
T4 peuvent être retrouvés quand les taux
de TBG sont augmentés : en cas de
grossesse, lors d'une porphyrie aiguë,
d'une hyperprotéinémie, d'une élévation
héréditaire du taux de TBG, de patients
sous traitement oestrogénique ou sous
contraception orale. A l'inverse, des taux
bas de T4 peuvent être observés quand
21
les taux de TBG sont abaissés : en cas
d'insuffisance rénale, lors de pathologies
hépatiques, gastro-intestinales ou
néoplasiques ; dans des cas
d'acromégalie, d'hypoprotéinémie et de
déficience héréditaire en TBG et pour des
patients sous traitement à base
d'androgène, de testostérone ou de
stéroïdes anabolisants. La
dyphénylhydantoïne, de fortes doses de
salicylates et de L-Tyroxine peuvent
également être à l'origine des valeurs
basses en T4 en raison de leur
compétition pour la fixation sur les sites de
liaison de la TBG. Cette diminution de T4
n'a aucun rapport avec le fonctionnement
thyroïdien.
Puisque le dosage de la T4 totale est
dépendant de la concentration en
protéines porteuses, il est conseillé de
pratiquer un dosage de T-Uptake pour
vérifier la capacité de liaison des
hormones thyroïdiennes. Des valeurs
anormalement basses ou élevées peuvent
être trouvées en T4, sans contexte
thyroïdien pathologique. Dans le cas d'un
dysfonctionnement thyroïdien, les valeurs
de T4 totale et de T-uptake varieront dans
le même sens par rapport à la normale,
par contre chez des patients
euthyroïdiens, les variations iront dans le
sens opposé. Un Index de Thyroxine libre
(ITL) est couramment calculé en
multipliant la concentration de T4 par la
valeur de T-Uptake et en divisant par 100.
Principe du test
Le dosage Coat-A-Count Totale T4 est un
dosage radioimmunologique en phase
solide. Au cours de l'incubation, il y a
compétition entre la T4 marquée à l'iode
125 et la T4 de l'échantillon, vis-à-vis des
sites de l'anticorps fixés sur la paroi des
tubes en polypropylène. Cette réaction a
lieu en présence d'agents bloquants
devant libérer la thyroxine de ses
protéïnes de transport. Après incubation, il
suffit d'éliminer le surnageant par
décantation pour isoler facilement la
fraction radioactive lié à l'anticorps. Le
tube est ensuite compté sur un compteur
gamma, les cpm étant inversement
proportionnels à la concentration de T4
présente dans l'échantillon qui sera
déterminée à l'aide d'une courbe standard.
Réactifs à distribuer: 1
22
Temps d'incubation totale : 1 heure à
37°C
Activité totale en début de marquage :
environ 70 000 cpm
Précautions d'emploi
Réservé à un usage diagnostique in vitro.
Réactifs : Conserver à +2/+8°C dans un
réfrigérateur autorisé à recevoir du
matériel radioactif. Éliminer les déchets
conformément aux lois en vigueur.
Ne pas utiliser les réactifs au delà de leur
date d'expiration.
Certains composants fournis avec ce
coffret peuvent contenir des agents
humains et/ou d'autres éléments
potentiellement infectieux qui nécessitent
certaines précautions.
Respecter les précautions d'emploi et
manipuler tous les composants du coffret
comme des produits potentiellement
infectieux. Les réactifs dérivés de produits
humains et utilisés dans ce coffret ont subi
un test sérologique pour la Syphilis et des
tests de dépistage pour les anticorps antiVIH1 et 2, anti-HCV et pour l'antigène de
surface de l'hépatite B, qui se sont tous
avérés négatifs.
De l'azide de sodium à des concentrations
inférieures à 0,1 g/dl a été ajouté comme
conservateur ; lors de l'élimination,
l'évacuer avec de grandes quantités d'eau
pour éviter une accumulation d'azides
métalliques explosifs dans les
canalisations.
Eau : utiliser de l'eau distillée ou
désionisée.
Radioactivité
Ce coffret de réactif est reservé à l'usage
in vitro (Autorisation DGSNR).
Règles de base de protection contre les
rayonnements ionisants et précautions
d'emploi.
Ce produit radioactif ne peut être reçu,
acheté, détenu ou utilisé que par des
personnes autorisées à cette fin et dans
des laboratoires dotés de cette
autorisation. Cette solution ne peut en
aucun cas être administrée à l'homme ou
aux animaux. Respecter impérativement
les dates de péremption indiquées sur
l'emballage extérieur et sur les étiquettes
des différents réactifs du coffret. Tous les
réactifs, dont les tubes revêtus
d'anticorps, doivent être conservés à
+ 4/+ 8° C dans leur conditionnement
d'origine avant d'être utilisés. L'achat, la
possession, l'utilisation et l'échange de
matières radioactives sont soumis aux
réglementations en vigueur dans le pays
de l'utilisateur. Les règles de base de
protection contre les rayonnements
ionisants doivent être respectées selon
des procédures en vigueur. Ne pas
pipeter des solutions radioactives avec la
bouche. Eviter le contact direct avec la
peau ou les muqueuses de tout produit
radioactif en utilisant des blouses et gants
de protection. Toute manipulation de
matières radioactives se fera dans un
local ad hoc éloigné de tout passage. Les
produits radioactifs seront stockés dans
leur conditionnement d'origine dans un
local approprié. Un cahier de réception et
de stockage de produits radioactifs sera
tenu à jour. Le matériel de laboratoire et la
verrerie qui ont été contaminés doivent
être éliminés au fur et à mesure afin
d'éviter une contamination croisée de
plusieurs isotopes. Chaque contamination
ou perte de substance radioactive devra
être réglée selon les procédures établies.
Toute mise aux déchets de matière
radioactive se fera en accord avec les
réglementations en vigueur. Ne pas
manger, ni boire, ni fumer, ni appliquer
des cosmétiques dans les laboratoires où
des produits radioactifs sont utilisés. Les
réactifs radioactifs ne peuvent être vendus
qu'à des personnes habilitées à manipuler
des substances radioactives.
Materiel Fourni :
Préparation Initiale
Tubes revêtus d'anticorps anti-T4
(TT41)
Tubes en polypropylène revêtus
d'anticorps anti- T4 dans des sachets à
glissière. Les conserver réfrigérés et
protégés de l'humidité, bien refermer les
sachets après utilisation. Stable à +2/+8°C
jusqu'à la date d'expiration notée sur le
sachet. Couleur: rose.
TKT41 : 100 tubes. TKT45 : 500 tubes.
T4 marquée à l'iode 125 (TT42)
Chaque flacon contient 105 ml de T4
marquée à l'iode 125, avec des agents
bloquants. Stable à +2/+8°C pendant 30
jours après ouverture, ou jusqu'à la date
d'expiration notée sur le flacon.
Couleur: rouge.
TKT41 : 1 flacon. TKT45 : 5 flacons.
Standards T4 Totale
(T4C3–8)
Six flacons de standards de T4 prêts à
l'emploi, le standard A contient 2,0 ml, et
les standards B à F contiennent 1,0 ml
chacun. Stable à +2/ +8 °C pendant
30 jours après ouverture. Pour une
conservation prolongée, aliquoter et
congeler: Stable à –20 °C pendant 6 mois.
TKT41 : 1 jeu. TKT45 : 2 jeux.
Les standards contiennent
respectivement, 0, 1, 4, 10, 16 et
24 microgrammes de T4 par décilitre
(µg/dl) en matrice sérum humain traité
équivalents à : 0, 12,9, 51,5, 129, 206 et
309 nanomoles par litre (nmol/l). Des
points intermédiaires peuvent être
obtenus en mélangeant des standards
dans des proportions compatibles.
Matériel requis mais non fourni
Compteur Gamma – permettant
l'utilisation de tubes standards 12x75 mm
Agitateur de type Vortex
Dosage radioimmunologique
Tubes secs en polypropylène 12x75 mm –
à utiliser pour les tubes LNS, disponibles
chez Siemens Healthcare Diagnostics
(Référence catalogue : PPO).
Micropipettes : 25 µl et 1 000 µl
Bain-marie pouvant maintenir une
température d'incubation de 37°C. Ni
étuve ni bloc chauffant ne sont adaptés à
ce dosage.
Un portoir de décantation – disponible
(Référence catalogue : FDR).
Papier graphe Logit-log
Un contrôle immunodosage, à base de
sérum humain, à trois niveaux de
concentration, contenant de la
testostérone (parmi plus de 25
constituants dosables), est disponible
(Référence catalogue : CON6).
Recueil des échantillons
Le patient n'a pas besoin d'être à jeun et
aucune préparation spéciale n'est requise.
13
Prélever le sang par ponction veineuse
23
et le recueillir sur tubes secs (sans anticoagulant), héparinés ou EDTA, en notant
l'heure de prélèvement. Séparer le sérum
ou le plasma des cellules, par
centrifugation.
Il est recommandé de clarifier les
échantillons hyperlipémiques par
ultracentrifugation.
Tubes revêtus d’anticorps : Etiqueter 12
tubes revêtus d’anticorps anti-T4, A
(liaison maximale) et de B à F en
duplicate. Etiqueter les tubes revêtus
d’anticorps anti- T4 supplémentaires,
également en duplicate, pour les contrôles
et les échantillons patients.
Les échantillons contaminés par de la
radioactivité administrée in-vivo au patient
ne peuvent être utilisés dans ce dosage.
La présence de bilirubine ou une forte
hémolyse ont une influence sur la
technique Coat-A-Count Total T4.
Des tubes pour prélèvements sanguins
provenant de fabricants différents peuvent
donner des résultats différents, selon les
matériaux et additifs utilisés, y compris
gels ou barrières physiques, activateurs
de la coagulation et/ou anticoagulants. Le
coffret T4 Totale Coat-A-Count n'a pas été
testé sur tous les types de tubes
possibles. Veuillez consulter le chapitre
intitulé Autres Types d'Échantillons pour
plus de renseignements sur les tubes qui
ont été évalués.
2
Conservation : 7 jours à +2/+8° C ou 1
14
mois à –20°C.
3
La valeur du LNS dans la technique
Coat-A-Count étant très faible, elle
peut être négligée sans que la
précision ou le contrôle de qualité ne
soient modifiés.
24
nmol/l
0
B
1
12,9
C
4
51,5
D
10
129
E
16
206
F
24
309
Pipeter 25 µl du standard zéro A dans
les tubes de LNS et les tubes A(LM),
Pipeter 25 µl de chacun des autres
standards, contrôles et échantillons de
patients dans les tubes
correspondants préparés. Pipeter
directement au fond du tube.
Ajouter 1,0 ml de T4 marquée à l’iode
125 dans chaque tube. Vortexer.
Les laboratoires équipés d’un
pipeteur-diluteur fiable peuvent
procéder aux étapes 2 et 3
simultanément. Le temps d’addition
du traceur ne doit pas dépasser 10
minutes. Les tubes T peuvent être mis
de côté jusqu’au comptage (étape 6);
ils n’ont pas d’autre traitement.
Tous les composants doivent être à
température ambiante avant leur utilisation
(15–28°C).
Tubes secs : Etiqueter deux séries
de tubes (non revêtus) en
polypropylène 12x75 mm tubes T et
LNS (Liaison Non Spécifique) en
duplicate.
0
Il est bon d’utiliser des embouts de
micropipettes jetables, de changer
d’embout entre les échantillons de
manière à éviter toute contamination.
Protocole de dosage
1
µg/dl
A (MB)
Les échantillons de patients
suspectés de contenir des
concentrations de T4 supérieures au
standard le plus élevé (24 µg/dl)
doivent être dilués avec le standard
zéro avant le dosage
Volume nécessaire : 25 µl par tube.
Avant le dosage, laisser les échantillons
revenir à température ambiante (15–
28°C), mélanger doucement par rotations
ou retournement Aliquoter, si nécessaire,
afin d'éviter de répéter les cycles
congélation / décongélation. Ne pas tenter
de décongeler les spécimens congelés à
l'aide d'un bain marie.
Standards
4
Incuber 1 heure à 37°C.
Ni étuve ni bloc chauffant ne sont
adaptés à ce dosage.
5
Décanter complétement.
Eliminer toute trace d’humidité pour
améliorer la précision du dosage. A
l’aide d’un portoir de décantation,
décanter ou aspirer le contenu de tous
les tubes (excepté les tubes T) et
laisser les tubes retournés pendant 2
ou 3 minutes. Puis appliquer les
fortement sur du papier absorbant afin
d’éliminer les gouttelettes résiduelles.
6
Compter 1 minute dans un compteur
gamma.
Calcul des Résultats
Afin d’obtenir des résultats en
concentrations à partir d’une
représentation logit-log de la courbe de
calibration, calculer pour chaque doublet
de tubes les coups corrigés: moyenne
cpm-moyenne des cpm du NSB :
20% = Concentration à 20% de liaison, etc.
Note: d’autres approches sont possibles
comme l’intégration de paramètres 4-p
logistique. Se rapporter à Dudley RA, et
al. Guidelines for immunoassay data
reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71.
Exemple de série : A titre d’exemple
uniquement, et non pour calculer des
résultats provenant d’une autre série. (Voir
le tableau « Example Run ».)
Contrôle de Qualité
CPM corrigés = (Moyenne cpm) moins
(Moyenne cpm LNS)
Les contrôles (ou pools de sérums) avec
au moins deux taux de concentration de
T4 haut et bas doivent être dosés en
routine comme des échantillons inconnus.
Puis déterminer pour chaque doublet la
capacité de liaison en pourcentage de
liaison maximale (MB), corrigée des cpm
dus au NSB des tubes A tubes considérés
à 100%:
Les résultats de patient ne doivent être
validés que si les résultats des contrôles
correspondent aux critères d'acceptation
établis par votre laboratoire.
% liaison = (cpm corrigés / cpm corrigés LM) ×
100
(Le calcul peut être simplifié en négligeant
la correction due au LNS. Les échantillons
dans la gamme de calibration donnent des
résultats pratiquement identiques quand la
capacité de liaison est calculée
directement à partir de la moyenne des
CPM.)
En utilisant un papier logit-log, on porte en
ordonnée les pourcentages de liaison en
fonction des concentrations des
calibrateurs qui ne sont pas à zéro, en
abscisse. On trace une ligne droite
passant approximativement par ces
points. Les concentrations des
échantillons inconnus sont déterminées
par interpolation sur la courbe standard.
Il est bon de vérifier les doublets et de
construire une représentation graphique
de la courbe de calibration (même si celleci est faite par ordinateur) avec les
différentes valeurs de façon à visualiser le
meilleur tracé et c’est une façon de
détecter les points deviants. Nous
recommandons aussi de suivre les
paramètres suivants :
T = Activité totale (cpm)
%LNS = 100 × (Moyenne des cpm du LNS /
cpm Totaux)
%LM = 100 × (cpm corrigés / cpm totaux)
Il est bon d'enregistrer pour chaque
dosage les numéros de lots des
composants utilisés ainsi que la date à
laquelle ils ont été reconstitués ou ouverts.
Nous recommandons également de noter
jour après jour les résultats des contrôles
– comme décrit par exemple dans
Westgard JO, et al. A multi-rule chart for
quality control. Clin Chem 1981;27:493501. Noter qu'un redosage d'échantillon
peut être précieux pour suivre la précision
inter essai, et que les doublets de tubes
contrôle peuvent être espacés de façon à
vérifier l'absence de dérive significative.
Valeurs de référence
Sur la base de son excellente corrélation
avec les coffrets IMMULITE Total T4 et
Double Antibody Total T4 la technique
utilise comme domaine de référence pour
les adultes :
4,5 – 12,5 µg/dl (58–161 nmol/l).
Ces valeurs sont données à titre indicatif
uniquement.Chaque laboratoire devra
établir ses propres valeurs de référence.
Limites
De nombreux facteurs physiologiques,
pharmacologiques, pathologiques et
génétiques peuvent affecter l'interprétation
des résultats de la T4 totale. (Voir
Introduction)
Et les intercepts à 20, 50 et 80 % avec
25
Plus de 20% des patients gravement
malades, mais ne souffrant pas d'atteinte
de la thyroïde, ont des taux de T4 totale
peu élevés dans le sérum.
Performances du test
Consulter les tableaux et graphiques pour
obtenir les données représentatives des
performances du test. En l'absence de
précision supplémentaire, tous les
résultats ont été obtenus sur des
échantillons sériques. Les résultats sont
donnés en µg/dl.
Facteur de conversion :
Hémolyse : une forte hémolyse peut
amener une diminution des résultats. (Voir
le tableau "Hemolysis".)
Lipémie : la présence de triglycérides à
concurrence de 3 000 mg/dl n'ont aucun
effet sur le dosage.
Autres types d'échantillons : pour
estimer l'effet de l'utilisation de différents
type d'échantillons, 20 volontaires ont été
prélevés sur tubes secs, héparinés, EDTA
®
et sur tubes vacutainer SST Becton
Dickinson. Tous les échantillons ont été
dosés avec le coffret Coat-A-Count Total
T4 Les résultats analysés par régression
linéaire donnent :
Intervalle de linéarité : 1 – 24 µg/dl
(12,9 – 309 nmol/l)
(Héparine) = 0,89 (Sérum) + 0,72 µg/dl
r = 0,868
Sensibilité analytique : 0,25 µg/dl
(EDTA) = 0,86 (Sérum) + 0,67 µg/dl
r = 0,858
Précision intra-dosage (au sein d'une
même série) : Les résultats ont été
calculés pour chacun des 4 échantillons à
partir des résultats de 20 séries en
duplicate. (Voir le tableau « Intraassay
Precision ».)
Précision inter-dosage (entre plusieurs
séries) : Les résultats ont été calculés
pour chacun des 4 échantillons à partir
des résultats de 28 séries en duplicate.
(Voir le tableau “Interassay.)
Effet de la position des tubes : Aucun
jusqu'à 300 tubes. (Voir le tableau « Endof-Run Effect ».)
Test de dilution : Des échantillons ont
été dosés à différentes concentrations.
(Voir le tableau « Linearity » pour des
données représentatives.)
Spécificité : L'antisérum utilisé dans le
coffret Coat-A-Count Total T4 est très
spécifique pour la L-thyroxine avec des
réactions croisées très faibles pour tous
les composants naturels du sérum et
médicaments pouvant être présents dans
l'échantillon. Bien que certaines
substances donnent des réactions
croisées, celles-ci ne sont normalement
pas en concentration suffisante pour
interférer dans ce dosage ; (Voir le tableau
« Specificity ».)
Bilirubine : la présence de bilirubine peut
causer des légères élévations des
résultats. (Voir le tableau "Bilirubin".)
26
(SST) = 1,05 (tubes ordinaires) + 0,05 µg/dl
r = 0,923
Moyennes :
8,0 µg/dl (Sérum)
7,8 µg/dl (Héparine)
7,5 µg/dl (EDTA)
8,4 µg/dl (SST)
Comparaison de méthodes : La
technique Coat-A-Count Total T4 a été
comparée sur 69 échantillons sériques
avec un autre immunodosage IMMULITE
Total T4 avec des concentrations de 1,1 à
22 µg/dl. (Voir graphique). Par régression
linéaire :
(CAC) = 0,86 (IML) + 1,04 µg/dl
r = 0,958
Moyennes :
Test de parallélisme : deux échantillons
ont été dosés avec la technique
Coat-A-Count Total T4 après dilution
volume à volume avec les standards A à F
du coffret. (Se reporter au tableau "Curve
Displacement".)
Effet des protéïnes : Pour simuler
différentes concentrations en protéines,
des expériences ont été effectuées en
reconstituant des aliquotes de 2 ml de
sérums humains lyophilisés avec
différents volumes d'eau (1 ; 2 ; et 3 ml).
Chaque aliquote reconstitué a été dosé à
l'aide de la méthode Coat-A-Count Total
T4. Une reconstitution avec la moitié du
volume original correspond à une très
forte concentration en protéïnes (de l'ordre
de 14 g/dl), les résultats démontrent que
même pour de grandes variations de taux
de protéïnes, le dosage n'est pas
influencé. (Se reporter au tableau "Protein
Effect" pour des données
représentatives.)
Assistance technique
Contacter votre distributeur national.
Le Système Qualité de Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. est certifié ISO 13485:2003.
Italiano
Coat-A-Count T4 Totale
Uso: Il dosaggio Coat-A-Count T4 Totale
è un radioimmunodosaggio in fase solida
125
marcato con I per la determinazione
quantitativa della tiroxina totale in circolo
(T4) nel siero e nel plasma. A solo uso
diagnostico in vitro quale ausilio nella
determinazione clinica dello stato tiroideo.
Codice: TKT41 (100 provette),
TKT45 (500 provette)
Il kit da 100 determinazioni
contiene meno di 5 microcurie
(185 kilobecquerel) di T4 marcata
125
con I ; il kit da 500 determinazioni
contiene meno di 25 microcuries
(925 kilobecquerel).
Riassunto e Spiegazione del
Test
La Tiroxina (T4), l'ormone tiroideo
principale, circola normalmente ad un
livello che oscilla tra circa 4,5 e 12,5 µg/dL
(da 58 a 161 nmol/L), legata alle proteine
di trasporto, specialmente alla TBG. Dati
livelli normali di proteine leganti gli ormoni
tiroidei, l'ipertiroidismo è caratterizzato da
livelli aumentati di T4 circolante,
l'ipotiroidismo da livelli diminuiti.
Eccezioni a questo parallelismo tra lo
stato tiroideo e la concentrazione di T4
totale sono riscontrate, tuttavia, in pazienti
con livelli anomali di proteine leganti gli
ormoni tiroidei. E' noto che i livelli di TBG
vengono alterati in varie condizioni
fisiologiche, farmacologiche e genetiche.
Quindi, livelli elevati di T4 possono essere
ottenuti quando i livelli di TBG sono
elevati, come durante la gravidanza, la
profiria acuta intermittente,
l'iperproteinemia, l'aumento ereditario
della TBG, ed in pazienti sottoposti a
terapia estrogenica o che assumono
contraccettivi orali. I livelli di T4 totali
possono risultare depressi quando i livelli
di TBG sono bassi, come nei disturbi
nefrotici, epatici, gastrointestinali e
neoplastici; nell'acromegalia,
nell'ipoproteinemia e nella deficienza
ereditaria della TBG; e in pazienti
sottoposti a terapia con androgeni,
testosterone o steroidi anabolici. La
Difenilidantoina e dosi massicce di
salicilati e liotironina possono anche
provocare livelli bassi di T4 (non indicativa
dello stato tiroideo) a causa della loro
competizione per i siti leganti sulla TBG.
Poiché il livello di T4 totale è spesso
anomalo in soggetti eutiroidei e poiché
può essere normale in soggetti con una
funzionalità tiroidea anomala, si consiglia
una stima dei livelli di TBG in circolo,
cosiccome fornita dal dosaggio T3 Uptake.
Nei disturbi della funzionalità tiroidea, i
valori di T4 totale e di T3 Uptake
devieranno dalla normalità nella stessa
direzione, mentre in pazienti eutiroidei con
alterazioni della TBG devieranno in
direzioni opposte. Il prodotto dei valori di
T4 e di T3 Uptake, diviso per 100, è noto
come Indice di Tiroxina Libera (DT4I) un
indicatore largamente usato dello stato
tiroideo.
Principio del Dosaggio
Il Coat-A-Count T4 Totale è un
radioimmunodosaggio in fase solida
basato su provette coattate con un
anticorpo e su calibratori di siero umano.
125
La T4 marcata con I compete per un
tempo fissato con la T4 presente nel
campione del paziente per i siti anticorpali,
in presenza di agenti bloccanti per le
proteine leganti gli ormoni tiroidei. Dopo la
decantazione e la conta delle provette, la
concentrazione di T4 viene letta da una
curva di calibrazione.
Reagenti da Dispensare: 1
Tempo Totale di Incubazione: 1 ora a
37°C
Conte Totali alla iodinazione:
circa 70 000 cpm
27
Avvertenze e Precauzioni
Ad uso diagnostico in vitro.
Reagenti: Conservare a 2–8°C in un
frigorifero appositamente destinato al
materiale radioattivo. Eliminare secondo le
normative di legge vigenti.
Non utilizzare reagenti oltre la data di
scadenza.
Alcuni componenti forniti in questo kit
possono contenere materiale di origine
umana e/o altri ingredienti potenzialmente
pericolosi che necessitano di precauzioni
di utilizzo.
Seguire le precauzioni universali, e
manipolare tutti i componenti come se
potessero trasmettere agenti infettivi.
Sono stati dosati i materiali di origine
umana e sono stati trovati non reattivi per
la Sifilide; per gli Anticorpi Anti-HIV 1 e 2;
per l'Antigene di Superficie dell'Epatite B;
e per gli Anticorpi Anti-Epatite C.
E' stata aggiunta Sodio Azide a
concentrazioni inferiori a 0,1 g/dL come
conservante. Al momento
dell'eliminazione, irrorare con molta acqua
per evitare la formazione di azidi
metalliche potenzialmente esplosive nelle
tubature di piombo e di rame.
Acqua: Utilizzare solo acqua distillata o
deionizzata.
Radioattività
Una copia di tutti i certificati di
Autorizzazione per radioisotopi (Specifica
o Generica) rilasciata ad un cliente
americano deve essere conservata in file
presso la Siemens Healthcare Diagnostics
prima che i kit o i componenti contenenti
materiale radioattivo possano essere
spediti. Questi materiali radioattivi
possono essere acquisiti da qualsivoglia
cliente in possesso dell'Autorizzazione
Specifica. Con l'Autorizzazione Generica
questi materiali radioattivi possono essere
acquistati solo da medici, veterinari che
esercitino la professione, laboratori clinici
ed ospedalieri – e solo per l'esecuzione di
test clinici o di laboratorio in vitro che non
implichino somministrazione interna o
esterna del materiale radioattivo o delle
sue radiazioni alle persone o animali. La
sua acquisizione, ricevimento,
conservazione, utilizzo, trasferimento ed
eliminazione sono soggette a
regolamentazioni e ad Autorizzazione
28
(Generica o Specifica) della Commissione
Statunitense per il Nucleare o dello Stato
con il quale l'NRC abbia stipulato un
accordo per l'esercizio del controllo
regolatorio.
Manipolare i materiali radioattivi secondo
quanto previsto dall'Autorizzazione
Generica o Specifica. Per minimizzare
l'esposizione alle radiazioni, l'utilizzatore
deve attenersi alle linee guida stabilite dal
National Bureau of Standards publication
su “Safe Handling of Radioactive
Materials” “Norme per una corretta
manipolazione dei Materiali
Radioattivi”.(Guida N° 92, pubblicata il 9
Marzo 1964) e successive edizioni
pubblicate dallo Stato e dalle Autorità
Federali.
Assorbire immediatamente le fuoriuscite e
decontaminare le superfici contaminate.
Evitare la formazione di aerosol. Eliminare
i rifiuti solidi radioattivi secondo quanto
previsto dall'Autorizzazione. Le licenze
generiche (possessori di NRC Form 483)
possono eliminare i rifiuti radioattivi solidi
come non radioattivi, dopo aver rimosso
l'etichetta. I detentori di autorizzazioni
specifiche (NRC Form 313) devono fare
riferimento al Titolo 10, Codice delle
Regolamentazioni Federali Parte 20. I
detentori di Autorizzazioni negli Stati che
hanno stipulato un accordo con l'NRC
dovrebbero far riferimento alle
regolamentazioni idonee dei loro stati. I
detentori di Autorizzazioni Generali
possono eliminare i rifiuti radioattivi liquidi
del tipo contenuto in questo prodotto
attraverso il lavello del laboratorio. I
detentori di autorizzazione devono
eliminare o rendere illeggibili le etichette
dei contenitori vuoti di materiali radioattivi
prima di eliminare i rifiuti solidi. I detentori
di autorizzazioni specifiche possono
eliminare piccoli quantitativi di rifiuti
radioattivi liquidi del tipo utilizzato in
questo prodotto attraverso il lavello del
laboratorio. Fare riferimento alle
regolamentazioni appropriate applicabili al
Vostro laboratorio.
Materiali Forniti:
Preparazione Iniziale
Provette Coattate con un Anticorpo
anti-T4 Totale (TT41)
Provette di polipropilene coattate con
anticorpi anti-T4 e confezionati in buste a
cerniera. Conservare refrigerate al riparo
dall'umidità, richiudendole dopo l'utilizzo.
Stabili a 2–8°C fino alla data di scadenza
indicata sulla confezione.
Colore: verde chiaro.
TKT41: 100 provette.
TKT45: 500 provette.
125
T4 Totale marcata con I (TT42)
T4 iodinata, pronta all'uso, con agenti
bloccanti anti proteine leganti gli ormoni
tiroidei. Ciascun flacone contiene 105 mL.
Stabile a 2–8°C per 30 giorni dopo
l'apertura, o fino alla data di scadenza
indicata sul flacone. Colore: Rosso.
TKT41: 1 flacone. TKT45: 5 flaconi.
Calibratori T4 Totale (T4C3–8)
Sei flaconi, etichettati dalla A alla F, di
calibratori T4 in siero umano processato. I
calibratori sono forniti in forma liquida,
pronti all''uso. Il calibratore zero, flacone A
contiene 2,0 mL e ciascuno dei rimanenti
calibratori, flaconi dalla B alla F, contiene
1,0 mL. Conservare refrigerati. Stabili a
2–8°C per 30 giorni dopo l'apertura. Per
periodi di conservazione più lunghi,
aliquotare e congelare: stabile a –20°C
per 6 mesi.
TKT41: 1 set. TKT45: 2 set.
I calibratori contengono, rispettivamente 0,
1, 4, 10, 16 e 24 microgrammi di T4 per
decilitro (µg/dL) in siero umano
processato; equivalenti a: 0, 12,9, 51,5,
129, 206 e 309 nanomoli per litro (nmol/L).
I punti intermedi della calibrazione
possono essere ottenuti mescolando i
calibratori in proporzioni idonee.
Materiali Richiesti Ma Non
Forniti
Gamma counter — compatibile con
provette standard da 12x75 mm
Vortex mixer
Radioimmunodosaggio
Provette semplici di polipropilene da
12x75 mm — da utilizzarsi come Conte
Totali e provette NSB, disponibili da
Siemens Healthcare Diagnostics (Codice:
PPO).
Micropipette: 25 µL e 1 000 µL
Bagnetto termostatato — in grado di
mantenere una temperatura di 37°C. Non
utilizzare né un forno né una piastra
riscaldata.
Foam per la decantazione — disponibile
da Siemens Healthcare Diagnostics
(Codice: FDR).
Carta per grafici logit-log
Un controllo a tre livelli basato su siero
umano, contenente T4 tra gli altri oltre 25
costituenti dosati, disponibile da Siemens
Healthcare Diagnostics (Codice: CON6).
Prelievo dei Campioni
Non è necessario che il paziente sia a
digiuno, non sono necessarie preparazioni
13
particolari. Prelevare il sangue in
provette semplici, eparinizzate o EDTA,
annotando l'ora del prelievo e separare il
siero o il plasma dalle cellule.
Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifuga
per schiarire i campioni lipemici.
Campioni contaminati dalla
somministrazione di materiale radioattivo
al paziente non possono essere utilizzati.
Sia la bilirubina che un'emolisi grave
hanno effetto sul dosaggio Coat-A-Count
T4 Totale.
Provette per il prelievo di sangue di
produttori diversi possono dare valori
differenti, a seconda dei materiali e degli
additivi usati, incluso gel o barriere fisiche,
attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.
L'Coat-A-Count T4 Totale non é stato
verificato con tutte le possibili variazioni di
tipi di provette. Consultare la sezione
riguardante Campioni Alternativi per
dettagli sulle provette testate.
Volume Richiesto: 25 µL per provetta.
Conservazione: 2–8°C per 7 giorni, o per
14
1 mese congelato a –20°C.
Prima del dosaggio, consentire ai
campioni di raggiungere temperatura
ambiente (15–28°C) e mescolare
scuotendo leggermente o capovolgendo la
provetta. Aliquotare, se necessario per
evitare cicli ripetuti di congelamento e
scongelamento. Non tentare di scongelare
i campioni congelati riscaldandoli in un
bagnetto termostatato.
Dosaggio Radioimmunologico
Tutti i componenti devono essere a
temperatura ambiente (15–28°C) prima
dell’utilizzo.
1
Provette Semplici: Etichettare con T
quattro provette semplici di
29
polipropilene (non coattate) da
12x75 mm (conte totali) ed NSB
(legame non specifico) in duplicato.
Poiché il legame non specifico nel
dosaggio Coat-A-Count è
caratteristicamente basso, le provette
NSB possono essere anche omesse
senza compromettere l’accuratezza o
il controllo di qualità.
Provette Coattate: Etichettare con A
dodici provette coattate di T4 Totale
(legame massimo) e dalla B alla F in
duplicato. Etichettare altre provette
coattate con anticorpo, anch’esse in
duplicato, per i controlli ed i campioni dei
pazienti.
2
Calibratori
µg/dL
nmol/L
A (MB)
0
0
B
1
12,9
C
4
51,5
D
10
129
E
16
206
F
24
309
Dispensare 25 µL del calibratore zero
A nelle provette NSB ed A, e 25 µL di
ciascuno dei calibratori, controlli e
campioni rimanenti nelle provette
preparate. Pipettare direttamente al
fondo.
Campioni con concentrazioni di T4
superiori al calibratore più alto
(24 µg/dL) devono essere diluiti nel
calibratore zero prima del dosaggio.
Si consiglia di utilizzare un puntale
monouso, cambiando il puntale tra un
campione e l’altro, per evitare la
contaminazione da carryover.
3
Aggiungere 1,0 mL di T4 Totale
125
marcato con I ad ogni provetta.
Vortexare.
Laboratori attrezzati con un
pipettatore-diluitore idoneo, possono
gestire i punti 2 e 3 simultaneamente.
Non devono passare più di 10 minuti
nella dispensazione del tracciante.
Mettere da parte le provette T per la
conta (al punto 6); Non sono
necessari ulteriori passaggi.
4
30
Incubare per 60 minuti a 37°C.
Utilizzare un bagnetto termostatato;
non utilizzare né un forno, né una
piastra termostatata.
5
Decantare completamente.
Rimuovere tutta l'umidità visibile
aumentando così la precisione.
Utilizzando un foam per la
decantazione, decantare il contenuto
di tutte le provette (eccetto le provette
T) e fare in modo che asciughino per
2 o 3 minuti. Tamponarle su carta
assorbente per eliminare
completamente i liquidi.
6
Contare per 1 minuto in un gamma
counter.
Calcolo dei Risultati
Per ottenere i risultati in termini di
concentrazione da una rappresentazione
logit-log della curva di calibrazione,
calcolare inizialmente per ogni coppia di
provette le conte medie al minuto corrette
con NSB:
Conte Nette = (Media dei CPM) Meno (Media
CPM NSB)
Quindi determinare il legame di ogni
coppia di provette come percentuale del
legame massimo (MB), con le conte
corrette-NSB delle provette A prese al
100%:
Percentuale di Legato = (Conte Nette / Conte
Nette MB) × 100
(Il calcolo può essere semplificato
omettendo la correzione per il legame non
specifico; i campioni entro il range dei
calibratori danno virtualmente gli stessi
risultati quando la Percentuale di Legato
viene calcolata direttamente dai CPM
Medi).
Utilizzando la carta logit-log, tracciare la
Percentuale di Legato sull’asse verticale
(probabilità) verso la Concentrazione
sull’asse orizzontale (logaritmica) per
ciascuno dei calibratori non zero e
tracciare una linea retta
approssimativamente lungo il tracciato di
questi punti. I risultati per i campioni non
noti possono essere letti dalla retta
attraverso interpolazione.
Si consiglia di visionare i risultati per
stabilire la correlazione entro i replicati e
tracciare un grafico della curva di
calibrazione (anche se i calcoli vengono
effettuati dal computer) per visualizzare
l’appropriatezza della trasformazione
utilizzata e per individuare i punti devianti
all’interno della calibrazione. Consigliamo
anche di mantenere una rintracciabilità dei
parametri utilizzati per il calcolo dei dati:
T = Conte Totali (conte al minuto)
%NSB = 100 × (Conte NSB Medie / Conte
Totali)
%MB = 100 × (Conte Nette / Conte Totali)
E le “intercette” al 20, 50 ed 80%, dove
20% = Concentrazione al 20% di Legato ecc.
Nota: sono accettabili anche altri tipi di
approccio, quali: l’implementazione della
logistica a 4 parametri. Vedi Dudley Ra et
al. Guidelines for immunoassay data
Reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71.
Seduta Esemplificativa: a solo scopo
illustrativo e non per calcolare i risultati di
un’altra seduta. (vedi tabella "Example
Run").
Controllo di Qualità
Controlli o pool di sieri con almeno due
livelli di concentrazione di T4 – basso ed
alto – devono essere dosati
routinariamente come campioni non noti.
Riportare i risultati dei pazienti solo se i
risultati dei controlli sono conformi ai criteri
di accettabilità del Vostro laboratorio.
Totale produca un range di riferimento per
gli adulti di:
4,5 – 12,5 µg/dL (58 – 161 nmol/L).
I laboratori devono considerare questi
risultati soltanto come linee guida. Ogni
laboratorio dovrebbe stabilire i propri
range di riferimento.
Limiti
Molti fattori fisiologici, farmacologici,
patologici e genetici interessano
l'interpretazione dei risultati della T4
Totale. (Fare riferimento alla sezione
Riassunto e Spiegazione del Test).
Più del 20% dei pazienti con patologie non
tiroidee malati in maniera critica hanno
livelli bassi di T4 sierica.
Prestazioni del Dosaggio
Vedi Tabelle e Grafici per dati
rappresentativi delle prestazioni del
dosaggio Coat-A-Count T4 Totale. Eccetto
quanto indicato, tutti i risultati sono stati
ottenuti da campioni di siero. I risultati
sono espressi in µg/dL.
Fattore di Conversione:
µg/dL × 12,87 → nmol/L
Range di calibrazione: 1 – 24 µg/dL
(12,9 – 309 nmol/L)
Sensibilità analitica: 0,25 µg/dL
Si consiglia per ogni dosaggio di annotare
i numeri di lotto dei componenti utilizzati,
le date di ricostituzione o di apertura. Si
consiglia anche di tracciare i grafici dei
risultati dei controlli giorno dopo giorno –
come descritto, ad esempio, in Westgard
JO, et al. A multi-rule chart for quality
control. Clin Chem 1981;27:493-501.
Campioni ripetuti possono servire come
ulteriore strumento per monitorare la
precisione inter-dosaggio; coppie di
campioni intervallate lungo tutto il
dosaggio possono essere d'aiuto nel
verificare l'assenza di deviazioni
significative.
Precisione Intra-Dosaggio (All'interno
della stessa seduta): Sono state
calcolate statistiche per ciascuno dei
quattro campioni dai risultati di 20 coppie
di provette in un unico dosaggio. (Vedi
tabella “Intraassay Precision”.)
Valori Attesi
Linearità: I campioni sono stati dosati a
varie diluizioni. (Vedi tabella “Linearity” per
dati rappresentativi.)
Sulla base della sua stretta correlazione
con il Dosaggio IMMULITE T4 Totale
(precedentemente disponibile) ed i
dosaggi Doppio Anticorpo T4 Totale, ci si
attende che il dosaggio Coat-A-Count T4
Precisione Inter-Dosaggio (Da una
seduta all'altra): Sono state calcolate
statistiche per ciascuno dei quattro
campioni dai risultati di coppie di provette
in 28 dosaggi diversi. (Vedi tabella
“Interassay Precision”.)
Effetto Fine-Seduta: Nessuno fino a circa
300 provette. (Vedi tabella "End-of-Run
Effect").
Specificità: L'antisiero Coat-A-Count T4
Totale è altamente specifico per la Ltiroxina con una crossreattività verso altri
composti che si ritrovano in natura e verso
31
altri farmaci che possono essere presenti
nei campioni. Benché alcuni composti
crossreagiscano, non sono normalmente
presenti in concentrazioni che possano
interferire in maniera significativa con il
dosaggio Coat-A-Count T4 Totale. (Vedi
tabella "Specificity".)
Bilirubina: Può interferire con il dosaggio,
provocando leggeri aumenti. (Vedi tabella
“Bilirubin”.)
Emolisi: Può causare una depressione
dei valori. (Vedi tabella "Hemolysis".)
Lipemia: La presenza di trigliceridi in
concentrazioni fino a 3 000 mg/dL non ha
nessun effetto sui risultati, entro il range di
precisione del dosaggio.
Tipo di Campione Alternativo: Per
determinare l'effetto di campioni
alternativi, è stato prelevato del sangue da
20 volontari in provette semplici,
eparinizzate, EDTA e Becton Dickinson
®
vacutainer SST . Tutti i campioni sono
stati dosati con il dosaggio Coat-A-Count
T4 Totale, con i seguenti risultati:
effettuati esperimenti nei quali aliquote da
2,0 mL di pool di sieri umani sono state
congelate e quindi ricostituite con vari
volumi d'acqua. Ciascuna aliquota
ricostituita è stata quindi dosata con il test
Coat-A-Count T4 Totale. Attenzione, le
aliquote ricostituite con metà del volume
originario rappresentano una
concentrazione estremamente elevata di
proteine nell'ordine di 14 g/dL. (Il fattore
per correggere il volume ricostituito è
tabulato di seguito). Questi risultati
indicano che anche ampie variazioni nel
valore delle proteine non hanno
virtualmente nessun effetto sul dosaggio
Coat-A-Count T4 Totale. (Vedi tabella
"Protein Effect".)
Assistenza Tecnica
All'estero: Si prega di contattare il proprio
Distributore Nazionale.
Il Sistema Qualità della Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. è certificato ISO 13485:2003.
(Eparina) = 0,89 (Siero) + 0,72 µg/dL
r = 0,868
(EDTA) = 0,86 (Siero) + 0,67 µg/dL
r = 0,858
(SST) = 1,05 (tubi semplici) + 0,05 µg/dL
r = 0,923
Valore medio:
8,0 µg/dL (Siero)
7,8 µg/dL (Eparina)
7,5 µg/dL (EDTA)
8,4 µg/dL (SST)
Comparazione di Metodi: Il dosaggio
Coat-A-Count T4 Totale è stato comparato
al Dosaggio IMMULITE T4 Totale su 69
campioni di siero, con concentrazioni di T4
da 1,1 a 22 µg/dL. (Vedere la grafica.)
Mediante regressione lineare:
(CAC) = 0,86 (IML) + 1,04 µg/dL
r = 0,958
Valore medio:
8,6 µg/dL (Coat-A-Count)
8,8 µg/dL (IMMULITE)
Curve di Dislocazione: Due campioni
sono stati dosati ciascuno con il test
Coat-A-Count T4 Totale in dosaggi che
includevano diluizioni uno-a-uno del
campione con ciascuno dei calibratori
dalla A alla F. (Vedi tabella "Curve
Displacement".)
Effetto delle Proteine: per simulare le
concentrazioni di varie proteine, sono stati
32
Português
T4 Total Coat-A-Count
Utilização: O T4 Total Coat-A-Count é um
radioimunoensaio de fase sólida marcado
125
com I designado para o doseamento
quantitativo da tiroxina total circulante (T4)
em soro ou plasma. Destina-se
exclusivamente ao diagnóstico in vitro
como auxiliar na avaliação clínica do
estado da tireóide.
Números de catálogo:
TKT41 (100 tubos), TKT45 (500 tubos)
O Kit com 100 tubos contém
menos que 5 microcuries
125
(185 kilobecquerels) de I
radioactivo ligado ao T4; o Kit com 500
tubos contém menos que 25 microcuries
(925 kilobecquerels).
Sumário e Explicação do Teste
A tiroxina (T4), o principal hormônio da
tireóide, circula normalmente em níveis
aproximadamente de 4,5 a 12,5 µg/dL (58
a 161 nmol/L), grandemente ligado às
proteínas transportadoras, especialmente
a TBG. Definido os níveis normais das
proteínas ligadoras dos hormônios
tireoideanos, o hipertireoidismo é
caracterizado por um aumento nos níveis
de T4 circulante, e o hipotireoidismo por
um decréscimo nos níveis.
São encontradas excepções a este
paralelismo entre o status da tireóide e a
concentração de T4 total em pacientes
com níveis anormais de proteínas
ligadoras da tireóide. Níveis de TBG estão
sabidamente alterados sob várias
condições fisiológicas, farmacológicas ou
genéticas. Assim, níveis elevados de T4
podem ser obtidos quando os níveis de
TBG são altos, como na gravidez, porfiria
intermitente aguda, hiperproteinemia,
elevação hereditária de TBG e em
pacientes sob terapia estrogênica ou
tomando contraceptivos orais. Níveis de
T4 total podem estar diminuídos quando
os níveis de TBG são baixos, como nas
desordens hepáticas, nefróticas,
gastrointestinais e neoplásticas, na
acromegalia, hipoproteinemia e
deficiência hereditária de TBG, além de
pacientes sob terapia com esteróides
anabolizantes, testosterona, ou
androgênios. Difenilhidantoína e grandes
doses de salicilatos e liotironina também
podem causar baixos valores de T4 (não
reflectindo o status da tireóide) devido sua
competição por sítios de ligação na TBG.
Como o nível de T4 total freqüentemente
é anormal em sujeitos eutireoideanos e
como pode ser normal em pessoas com
função tireoideana anormal, uma
estimativa do nível de TBG circulante é
desejável, como dado, por exemplo, pelo
ensaio T3 Uptake. Em desordens da
função da tireóide, os valores do T4 total
e T3 Uptake desviarão do normal na
mesma direcção, enquanto que em
pacientes eutireoideanos com alteração
na TBG irão desviar em direcções
opostas. O produto dos valores do T4 e
T3 Uptake, divididos por 100, é conhecido
como Índice de Tiroxina Livre (FT4I), um
indicador amplamente usado do status da
tireóide.
Princípio do Procedimento
O procedimento de T4 Coat-A-Count é um
radioimunoensaio fase sólida baseado em
tubos recobertos com anticorpo e
calibradores séricos humanos. O T4
125
marcado com I compete por um período
fixo de tempo com o T4 da amostra do
paciente para os sítios do anticorpo, em
presença de agentes bloqueadores das
tireoideanos. Após esse período os tubos
são decantados e contactos, a
concentração de T4 é lida de uma curva
de calibração.
Reagentes para Pipetar: 1
Tempo de Incubação : 1 hora a 37°C
Contagens Totais na Marcação com o
Iodo: aproximadamente 70 000 cpm
Precauções
Para uso de diagnóstico in vitro.
Reagentes: Conservar a 2–8°C num
frigorífico destinado para materiais
radioactivos. Eliminar de acordo com as
leis aplicáveis.
Não utilize reagentes com prazo de
validade expirado.
Alguns componentes fornecidos com este
kit podem conter matéria de origem
humana e/ou outros ingredientes
potencialmente perigosos que necessitem
de algumas precauções.
Manipule com as devidas precauções
todos os materiais capazes de transmitir
doenças infecciosas. As matérias primas,
obtidas de soro humano, foram testadas,
revelando resultados negativos para a
sífilis, para os anticorpos do vírus da
imunodeficiência humana (HIV) 1 e 2;
para o antígeno de superfície da hepatite
B (HBsAg) e para os anticorpos do vírus
da hepatite C.
Azida de sódio foi adicionada como
conservante; para evitar acumulações de
azidas metálicas explosivas em
canalizações de cobre e alumínio, os
reagentes devem ser rejeitados no esgoto
apenas se estiverem diluídos e forem
lavados com grandes volumes de água.
Água: Utilize água destilada ou
deionizada.
Radioactividade
Uma cópia da licença de uso de produtos
radioactivos (especifico ou geral) enviada
pelo cliente, deve estar em poder da
Siemens Healthcare Diagnostics antes do
envio dos kits ou componentes contendo
material radioactivo. Estes materiais
radioactivos podem ser adquiridos por
qualquer cliente que possua a necessária
33
licença especifica. Com uma licença
generalista estes produtos radioactivos só
podem ser adquiridos por médicos,
veterinários na prática de medicina
veterinária, laboratórios clínicos e
hospitais. E somente para uso clinico in
vitro ou testes laboratoriais não
envolvendo administração externa ou
interna do material radioactivo ou da sua
radiação para o ser humano ou outros
animais. A sua aquisição, receita,
armazenamento uso, transporte e
eliminação estão sujeitas aos
regulamentos e à licenciada Comissão de
Regulação Nuclear ou do Estado
respectivo de acordo com a lei em vigor.
Tratar os materiais radioactivos de acordo
com a regulamentação da sua licença,
específica ou generalista. De modo a
minimizar a exposição à radiação deve o
utilizador seguir as instruções da
publicação do Departamento Nacional de
Padrões (Utilização segura de materiais
radioactivos-Livro No. 92, publicado em
Março de 1964) e publicações seguintes
do Estado e Autoridades Federais.
Limpar os derrames prontamente e
descontamine as superfícies afectadas.
Evitar os aerossóis. Elimine os lixos
radioactivos de acordo com a
regulamentação da licença. As licenças
generalistas (portadores da licença NRC
483) podem eliminar os lixos sólidos
radioactivos como lixo não radioactivo
depois de remover os rótulos. Licenças
Especificas (Licença NRC 313) devem ter
em conta o Capitulo 10 do artigo 20, do
Código de Regulamentações Federais.
Cada Estado deve referir a legislação em
vigor aprovada para o seu território. As
licenças generalistas podem eliminar os
lixos radioactivos líquidos do tipo deste
produto para um esgoto de laboratório. Os
licenciados devem remover os rótulos dos
frascos vazios de materiais radioactivos
antes de os colocar no esgoto sólido. As
licenças especificas podem eliminar
pequenas quantidades de lixo radioactivo
deste tipo de produto para o esgoto
normal do laboratório. Ter em atenção as
regulamentações em vigor para o seu
laboratório.
Materiais fornecidos:
Preparação inicial
Tubos revestidos com Anticorpos de
T4 Total (TT41)
Tubos de polipropileno revestidos com
anticorpos anti-T4 embalados em sacos
com fecho de segurança. Conservar
refrigerado e protegido da humidade,
selar os sacos cuidadosamente após
cada abertura. Estável a 2–8°C até à data
de validade inscrita na embalagem.
Cor: Verde claro.
TKT41: 100 tubos. TKT45: 500 tubos.
125
I T4 Total (TT42)
125
T4 marcado com I, pronto para uso,
com agentes bloqueadores para as
tireoideano. Cada frasco contém 105 mL.
Estável a 2–8°C durante 30 dias depois
de aberto, ou até à data de validade
inscrita no frasco. Cor: Vermelho.
TKT41: 1 frasco. TKT45: 5 frascos.
Calibradores de T4 Total (T4C3–8)
Seis frascos, rotulados de A a F de
calibradores de T4 em soro humano
processado. Os calibradores são
fornecidos na forma líquida, pronto para
uso. O calibrador zero A contém 2,0 mL, e
os calibradores remanescentes de B a F
contém 1,0 mL cada. Armazenar
refrigerado: estável a 2–8°C durante 30
dias após a abertura. Para uma
armazenagem mais longa, alicotar e
congelar: estável a –20°C por 6 meses.
TKT41: 1 conjunto. TKT45: 2 conjuntos.
Os calibradores contém respectivamente,
0, 1, 4, 10, 16 e 24 microgramas de T4
por decilitro (µg/dL) em soro humano
processado; equivalente à: 0, 12,9, 51,5,
129, 206 e 309 nanomoles por litro
(nmol/L). Pontos de calibração
intermediários podem ser obtidos pela
mistura de calibradores em proporções
adequadas.
Materiais Necessários mas não
Fornecidos
Contador Gama – compatível com os
tubos normais (12x75 mm)
Agitador Vórtex
34
Radioimunoensaio
Tubos não revestidos de polipropileno
(12x75 mm) – para uso como tubos T e
NSB, disponíveis na Siemens Healthcare
Diagnostics (Números de catálogo: PPO).
Micropipetas: 25 µL e 1 000 µL
Banho-maria – capaz de manter 37°C.
Nem forno ou bloco de calor são
adequados.
Espuma de decantação – disponível na
(Números de catálogo: FDR).
Papel gráfico logit-log
Deixar as amostras atingirem a
temperatura ambiente (15–28°C) e agitar
suavemente ou por inversão. Aliquotar se
necessário para evitar repetidos
congelamentos/descongelamentos. Não
descongelar as amostras por aquecimento
em banho-maria.
Técnica de Radioimunoensaio
Todos os componentes devem estar à
temperatura ambiente (15–28°C) antes do
uso.
1
Controle de imunoensaios, com três
níveis, baseado em soro humano,
contendo T4 como um dos mais de 25
constituintes ensaiados; disponíveis na
(Números de catálogo: CON6).
Devido ao fato das ligações não
especificas no método de
Coat-A-Count serem geralmente
baixas os valores de NSB podem ser
omitidos sem comprometer a precisão
ou controle de qualidade.
Colheita
O paciente não necessita dieta. Não são
necessárias preparações especiais.
13
Colher o sangue por punção venosa em
tubos comuns, tubos heparinizados ou
com EDTA, anotando-se a hora da
colecta, e separar o soro ou plasma das
células.
Tubos revestidos: Rotular doze tubos
revestidos de T4 Total Ab em A (máxima
ligação) e de B a F em duplicado. Rotular
tubos revestidos de anticorpos adicionais
também em duplicata, para os controles e
amostras de pacientes.
Recomenda-se o uso de uma ultra
centrífuga para clarear amostras
lipémicas.
Amostras contaminadas pela
administração de radioactividade no
paciente são inadequadas para uso.
Ambas, bilirrubina e hemólise grosseira,
possuem efeito no procedimento T4 Total
Coat-A-Count.
Os tubos para colheita sanguínea de
diferentes fabricantes, podem originar
diferentes valores, dependendo dos
materiais e aditivos, incluíndo gel ou
barreiras fisicas, activadores do coágulo
e/ou anti coagulantes. Coat-A-Count T4
Total não foram ainda testados com todas
as possiveis variações originadas pelos
tipos de tubos. Consultar a secção Tipos
de Amostras Alternativas para obter
detalhes sobre os tubos que foram
testados.
Volume de amostra: 25 µL por tubo.
Armazenazem: 7 dias a 2–8°C, ou por
14
até 1 mês congelado a –20°C.
Tubos lisos: Rotular quatro tubos de
polipropileno (não revestidos) de
12x75 mm – T (contagens totais) e
NSB (ligações não especificas) em
duplicado.
2
Calibradores
µg/dl
A (MB)
0
nmol/L
0
B
1
12,9
C
4
51,5
D
10
129
E
16
206
F
24
309
Pipetar 25 µL do calibrador zero A
nos tubos NSB e A, e 25 µL de cada
calibrador remanescente, controle e
amostra de paciente nos tubos prépreparados. Pipetar directamente
para a base do tubos.
As amostras de pacientes das quais
se esperam conterem concentrações
de T4 superiores ao calibrador mais
alto (24 µg/dl) devem ser diluídas com
o calibrador zero antes do ensaio.
É uma boa prática usar uma pipeta de
ponteira descartável, trocando as
mesmas entre as amostras de modo a
evitar a contaminação.
35
3
125
Adicionar 1,0 mL de T4 Total I em
todos os tubos. Misturar em vórtex.
Laboratórios equipados com um
pipetador diluidor adequado podem
manusear os itens 2 e 3
simultaneamente. Adicionar o
125
marcador I no espaço de 10
minutos após pipetar os calibradores,
controles e amostras. Deixar os tubos
T para as contagens (n°6) pois os
mesmos não necessitam mais
processamento.
4
Incubar por 60 minutos a 37°C.
Usar banho-maria, nem estufa ou
bloco de calor são adequados.
5
Decantar vigorosamente.
Removendo todo o líquido
remanescente melhora-se bastante a
precisão. Usar uma espuma de
decantação, decante ou aspire o
conteúdo de todos os tubos (excepto
os T) e deixar invertidos durante 2 ou
3 minutos. Eliminar todas as gotas
residuais com papel absorvente.
6
È boa prática verificar os resultados pela
concordância entre as replicatas e
construir um gráfico da curva de
calibração (mesmo que os cálculos sejam
efectuados por computador) para
verificação visual da aplicabilidade da
transformação usada e como forma para
detectar pontos de calibração que se
afaste. Também recomenda-se guardar
estas curvas:
T = Contagens Totais (como contagens por
minuto)
%NSB = 100 × (Média Contagens NSB /
Contagens Totais)
%MB = 100 × (Contagens reais / Contagens
Totais)
E os 20, 50 e 80% intercepta onde
20% = Concentração a 20 por cento de Ligação,
etc.
Contar 1 minuto em contador gama.
Cálculo dos Resultados
Para obter resultados de concentrações
duma representação logit-log da curva de
calibração, deve em primeiro lugar
calcular-se para cada par de tubos a
média de NSB-contagens por minuto
corrigidas:
Contagens reais = (Média CPM) minutos (Média
NSB CPM)
Determine a ligação de cada par de tubos
como porcentagem do máximo de ligação
(MB), com o NSB-contagens por minuto
corrigidas dos tubos A tidas como 100%:
Percentagem de Ligação = (Contagens reais /
Contagens MB reais) × 100
(O cálculo pode ser simplificado omitindo
a correcção para a ligação não especifica;
amostras dentro da faixa de calibração
originam virtualmente os mesmos
resultados quando a Porcentagem de
Ligação é calculada directamente da
Média de CPM.)
Usando um papel milimétrico logit-log,
represente a Porcentagem de Ligação no
eixo vertical (probabilidade) contra a
Concentração no eixo horizontal
36
(logarítmico) para cada um dos
calibradores diferentes de zero, e
representar uma linha recta em função da
trajectória destes pontos. Resultados de
amostras desconhecidas podem então ser
lidas nessa recta por interpolação.
Note que para outras perspectivas, como
a implementação de uma logística de 4
parâmetros, também é aceitável. Ver
Dudley RA, et al. Guidelines for
immunoassays data reduction. Clin Chem
1985;31:1264-71.
Exemplo de Ensaio: Apenas para
ilustração, não para calcular resultados de
outros ensaios. (Ver tabela “Exemplo de
Ensaio”.)
Controle de Qualidade
Controles (ou “pools” de soro) com pelo
menos dois níveis de concentração de T4
– baixo e alto – devem ser rotineiramente
ensaiados como desconhecidos.
Os resultados dos pacientes devem
apenas ser reportados se os resultados
dos controles para este ensaio estiverem
dentro dos critérios de aceitação
estabelecidos pelo laboratório.
É uma boa prática laboratorial registrar
para cada ensaio o número do lote dos
componentes usados, bem como as datas
de quando foram primeiro reconstituídas
ou abertas. Recomenda-se registrar os
valores diários em gráfico – como
descrito, por exemplo, in Westgard JO, et
al. A multi rule chart for quality control.
Clin Chem 1981;27-493-501). Note que
amostras repetidas podem servir como
ferramenta adicional para monitorar a
precisão interensaio, e que pares de
controles podem ser colocados ao longo
do ensaio para ajudar a verificar a
ausência de variação significativa.
Valores de Referência
Baseado na sua concordância com o kit
T4 Total IMMULITE e (o previamente
disponível) ensaio de T4 Total Duplo
anticorpo, do procedimento de T4 Total
Coat-A-Count pode-se esperar gerar a
faixa de referência para adultos de:
4,5 – 12,5 µg/dL (58 – 161 nmol/L)
Os laboratórios devem considerar estes
resultados apenas como directrizes. Cada
laboratório deve estabelecer seus própios
valores de referência.
Limitações
em 28 ensaios diferentes. (Consulte a
tabela Precisão Inter-ensaio.)
Efeito fim-de-série: Nenhum até
aproximadamente 300 tubos. (Ver tabela
“Efeito fim-de-série”.)
Linearidade: As amostras foram
doseadas sob várias diluições. (Consulte
a tabela "Linearidade" para dados
representativos.)
Especificidade: O antisoro do T4 Total
Coat-A-Count é altamente específico para
a L-tiroxina, com uma reacção cruzada
particularmente baixa a outros compostos
que ocorrem naturalmente e drogas
terapêuticas que possam estar presentes
nas amostras de pacientes. Apesar de
alguns compostos apresentarem reacção
cruzada, eles não estão normalmente
presentes em concentrações que possam
interferir significativamente com o ensaio
T4 Total Coat-A-Count. (Ver tabela
“Especificidade”.)
Muitas condições fisiológicas,
farmacológicas, patológicas e factores
genéticos afectam a interpretação dos
resultados de T4 Total (referir-se a secção
Sumário e Explicação do Teste).
Bilirrubina: Pode interferir com o ensaio
causando ligeiras elevações (Ver tabela
“Bilirrubina”.)
Mais que 20% dos pacientes com
doenças não tireoideanas em estado
crítico possuem níveis séricos baixos de
T4.
Lipemia: A presença de triglicerídeos em
concentrações de até 3 000 mg/dL não
possui efeito nos resultados, dentro da
faixa de precisão do ensaio.
Características do Ensaio
Ver tabelas e gráficos para os dados
representativos da performance do kit de
T4 Coat-A-Count. Excepto aos
exemplificados, todos os resultados foram
obtidos em amostras de soros. Os
resultados estão expressos em µg/dL.
Factor de conversão:
µg/dL × 2,87 → nmol/L
Calibração:
1 – 24 µg/dL (12,9 – 309 nmol/L)
Hemólise: Pode causar uma depressão
nos valores (Ver tabela “Hemólise”.)
Tipo de amostra alternativa: Para
determinar o efeito de amostras
alternatives, foi colhido sangue de 20
voluntários em tubos secos, com EDTA,
®
heparinizados e tubos de vacum SST da
Becton Dickinson. Todas as amostras
foram ensaiadas pelo procedimento T4
Total Coat-A-Count, com os seguintes
resultados:
(Heparina) = 0,89 (Soro) + 0,72 µg/dL
r = 0,868
(EDTA) = 0,86 (Soro) + 0,67 µg/dL
r = 0,858
Sensibilidade Analítica:
0,25 µg/dL
(SST) = 1,05 (tubos simples) + 0,05 µg/dL
r = 0,923
Precisão Intra-ensaio (entre ensaios):
As estatísticas foram calculadas para as
amostras dos resultados de 20 pares de
tubos em um único ensaio (Consulte a
tabela precisão Intra-ensaio).
Médias:
8,0 µg/dL (Soro)
7,8 µg/dL (Heparina)
7,5 µg/dL (EDTA)
8,4 µg/dL (SST)
Precisão Inter-ensaio (ensaio a ensaio):
As estatísticas foram calculadas para os
resultados de amostras de pares de tubos
Comparação de Métodos: O
procedimento T4 Total Coat-A-Count foi
comparado ao ensaio T4 Total IMMULITE
37
em 69 amostras de soro de pacientes,
com uma faixa de concentração de T4 de
1,1 a 22 µg/dL. (Consulte o gráfico.)
Regressão linear:
Origin: US
Siemens Healthcare Diagnostics Inc.
Los Angeles, CA 90045 USA
(CAC) = 0,86 (IML) + 1,04 µg/dL
r = 0,958
Médias:
8,6 µg/dL (Coat-A-Count)
8,8 µg/dL (IMMULITE)
Deslocamento da curva: Duas amostras
foram ensaiadas pelo procedimento T4
Total Coat-A-Count em ensaios nos quais
incluíram diluições 1:1 da amostra com
cada um dos calibradores de A a F. (Ver
tabela “Deslocamento da Curva”)
Efeitos da Proteína: Para simular várias
concentrações de proteína, foram
realizados vários experimentos no qual
alicotas de 2,0 mL de um pool de soro
humano foram liofilizadas e
posteriormente reconstituídas com vários
volumes de água. Cada alicota
reconstituída foi então ensaiada com o
procedimento T4 Total Coat-A-Count.
Nota-se que as alicotas foram
reconstituídas com a metade do volume
original, representando uma concentração
de proteína extremamente alta, na ordem
de 14 g/dL. (O factor de correcção para o
volume de reconstituição está tabulado
abaixo). Estes resultados indicam que
uma larga variação de proteína,
virtualmente, não afecta o ensaio de T4
Total Coat-A-Count. (Ver tabela “Efeito de
Proteína”)
Assistência Técnica
Por favor contacte o seu Distribuidor
Nacional.
O Sistema da Qualidade da Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. está registado sob a norma ISO
13485:2003.
IMMULITE® and Coat-A-Count® are trademarks
of Siemens Healthcare Diagnostics.
©2010 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. All
rights reserved.
38
Siemens Healthcare Diagnostics Ltd.
Sir William Siemens Sq.
Frimley, Camberley, UK GU16 8QD
2010-10-25
PITKT4 – 8
Changes in this Edition:
cc#19759: Removed TKT4X kit size and all
associated component sizes and radioactivity
information. In Materials Required But Not
Provided section, added FDR catalog number
for foam decanting rack and PPO catalog
number for polypropylene tubes; removed
“available from Siemens” claim for graph paper
ZP797.
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aparecer no rótulo dos produtos:
Symbol Definition
En: In vitro diagnostic medical
device
De: Medizinisches Gerät zur
In-vitro Diagnose
Es: Dispositivo médico para
diagnóstico in vitro
Fr: Dispositif médical de
diagnostic in vitro
It: Dispositivo medico per
diagnostica in vitro
Pt: Dispositivo médico para
diagnóstico in vitro
Symbol Definition
En: Catalog Number
De: Katalog-Nummer
Es: Número de referencia
Fr: Numéro de référence
catalogue
It: Numero catalogo
Pt: Número de catálogo
En: Manufacturer
De: Hersteller
Es: Fabricante
Fr: Fabricant
It: Produttore
Pt: Fabricante
En: Authorized Representative in
the European Community
De: Autorisierte Vertretung in der
Europäischen Union
Es: Representante autorizado en
la Unión Europea
Fr: Représentant agréé pour
l’Union européenne
It: Rappresentante autorizzato
nella Comunità europea
Pt: Representante Autorizado na
Comunidade Europeia
En: CE Mark
De: CE-Kennzeichen
Es: Símbolo de la CE
Fr: Marque CE
It: Marchio CE
Pt: Marca CE
En: CE Mark with identification
number of notified body
De: CE-Kennzeichen
Identifikationsnummer der
benannten Stelle
Es: Marca de la CE con número
de identificación del organismo
notificado
Fr: Marque CE avec numéro
d’identification du corps notifié
It: Marchio CE con numero
identificativo dell'ente notificato
Pt: Marca CE, com número de
identificação do órgão notificado
En: Consult instructions for use
De: Bedienungshinweise
beachten
Es: Consulte las instrucciones de
uso
Fr: Consulter le mode d’emploi
It: Consultare le istruzioni per
l'uso
Pt: Consulte as instruções de
utilização
Symbol Definition
En: Caution! Potential Biohazard
De: Vorsicht! Biologisches
Risikomaterial
Es: ¡Precaución! Peligro Biológico
Potencial
Fr: Avertissement ! Risque
biologique potentiel
It: Attenzione! Potenziale Pericolo
Biologico
Pt: Precaução! Potenciais Riscos
Biológicos
En: Radioactive Materials
De: Radioaktives Material
Es: Materiales radiactivos
Fr: Matériaux radioactifs
It: Materiali radioattivi
Pt: Materiais Radioactivos
En: Caution
De: Vorsicht
Es: Precaución
Fr: Avertissement
It: Attenzione
Pt: Precaução
En: Temperature limitation
(2–8°C)
De: Temperaturgrenze (2–8°C)
Es: Limitación de la temperatura
(2–8°C)
Fr: Limites de température
(2–8°C)
It: Limiti di temperatura (2–8°C)
Pt: Limites de temperatura
(2–8°C)
En: Upper limit of temperature
(≤ -20°C)
De: Obere Temperaturgrenze
(≤ -20°C)
Es: Limitación superior de la
temperatura (≤ -20°C)
Fr: Limite supérieure de
température (≤ -20°C)
It: Limite superiore di temperatura
(≤ -20°C)
Pt: Limite máximo de temperatura
(≤ -20°C)
En: Lower limit of temperature
(≥2°C)
De: Mindesttemperatur (≥2°C)
Es: Temperatura maxima (≥2°C)
Fr: Limite inférieure de
température (≥2°C)
It: Limite inferiore di temperature
(≥2°C)
Pt: Limite inferior de temperatura
(≥2°C)
39
LOT
Symbol Definition
En: Do not freeze (> 0°C)
De: Nicht einfrieren (> 0°C)
Es: No congelar (> 0°C)
Fr: Ne pas congeler (> 0°C)
It: Non congelare (> 0°C)
Pt: Não congele (> 0°C)
Symbol Definition
En: Toxic
De: Giftig
Es: Tóxico
Fr: Toxique
It: Tossico
Pt: Tóxico
En: Keep away from sunlight
De: Vor Sonneneinstrahlung
schützen
Es: Mantener protegido de la luz
solar
Fr: Maintenir hors de portée de la
lumière du soleil
It: Non esporre alla luce del sole
Pt: Manter protegido da luz solar
En: Dangerous for the
environment
De: Umweltgefährlich
Es: Peligroso para el medio
ambiente
Fr: Dangereux pour
l'environnement
It: Pericoloso per l'ambiente
Pt: Perigoso para o ambiente
En: Batch code
De: Chargenbezeichnung
Es: Código de lote
Fr: Numéro de code du lot
It: Codice lotto
Pt: Código de lote
En: Contains sufficient for (n)
tests
De: Es reicht für (n) tests
Es: Contiene material para (n)
pruebas
Fr: Suffisant pour (n) tests
It: Contiene materiale sufficiente
per (n) test
Pt: Contém o suficiente para (n)
testes
2008-01
En: Date format (year-month)
De: Datumsformat (Jahr-Monat)
Es: Formato de fecha (año-mes)
Fr: Format de la date
(année-mois)
It: Formato data (anno-mese)
Pt: Formato de data (ano-mês)
En: Use by
De: Verwendbar bis
Es: Fecha de caducidad
Fr: A utiliser avant
It: Usare entro
Pt: Use até
En: Harmful
De: Gesundheitsschädlich
Es: Nocivo
Fr: Nocif
It: Nocivo
Pt: Nocivo
En: Corrosive
De: Ätzend
Es: Corrosivo
Fr: Corrosif
It: Corrosivo
Pt: Corrosivo
40

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