análise metagenômica funcional de ciclos biogeoquímicos em solos
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análise metagenômica funcional de ciclos biogeoquímicos em solos
I CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA AGROPECUÁRIA, AGRÍCOLA E AMBIENTAL (CBMAAA) 09 a 12 de maio de 2016 - Centro de Convenções da UNESP, Câmpus de Jaboticabal, SP ANÁLISE METAGENÔMICA FUNCIONAL DE CICLOS BIOGEOQUÍMICOS EM SOLOS DE MATA NATIVA E DE PLANTIO DIRETO FUNCTIONAL METAGENOMICS ANALYSIS OF BIOGEOCHEMICAL CYCLES IN NO-TILL MANAGEMENT SYSTEM AND NATIVE FOREST SOIL Suzana Eiko Sato Guima (1) Ramir Bavaresco Junior (2) Elaine Costa Souza (3) Maricy Raquel Lindenbah Bonfá (4) Rodrigo Matheus Pereira (5) Resumo Os microrganismos, especialmente os presentes no solo, desempenham funções importantes para a manutenção dos ecossistemas. A produção de enzimas microbianas auxilia a mineralização para melhor assimilação de nutrientes pelas plantas. Desta forma, a busca por novas enzimas é necessária. O presente trabalho comparou as enzimas dos ciclos do nitrogênio, fósforo e enxofre de dois diferentes solos, um de mata nativa (MN) e outro sob manejo de sistema de plantio direto (PD). Para tanto, utilizou-se análises de metagenômica com o sequenciamento total do DNA das amostras. Foram encontradas um total de 10.808 enzimas presentes nos solos de MN e PD. Desse total, 44, 46 e 65 enzimas correspondem respectivamente aos metabolismos de nitrogênio, fósforo e enxofre do solo de MN. Com relação ao solo sob manejo de plantio direto, 56, 54 e 73 enzimas correspondem respectivamente aos metabolismos de nitrogênio, fósforo e enxofre. No solo de MN, as enzimas mais abundantes dos ciclos de nitrogênio, fósforo e enxofre foram respectivamente glutamate synthase [NADPH], phnB protein e arylsulfatase enquanto no solo sob manejo de de PD, foram as enzimas glutamate synthase [NADPH], pyrophosphate-energized proton pump e thioredoxin reductase respectivamente para os metabolismos de nitrogênio, fósforo e enxofre. Das enzimas encontradas com estatística significativa, a maioria das enzimas do ciclo do nitrogênio estavam presentes no solo de MN; 70% das enzimas do ciclo do fósforo estavam presentes no solo sob manejo de PD; e a maioria das enzimas do ciclo de enxofre estavam presentes no solo de MN. ' Graduanda em Biotecnologia pela Universidade Federal da Grande Dourados. E-mail: [email protected]. Graduando em Biotecnologia pela Universidade Federal da Grande Dourados. E-mail: [email protected]. Doutora em Melhoramento Genético de Plantas Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias pela Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho. E-mail: [email protected]. , Doutora em Ciências dos Alimentos pela Universidade Estadual de Campinas. Docente da Faculdade de Ciências Biológicas e Ambientais (FCBA) da UFGD. E-mail: [email protected]. . Doutor em Microbiologia Agropecuária pela Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho. Docente da Faculdade de Ciências Biológicas e Ambientais (FCBA) da UFGD. E-mail: [email protected]. % - ! " #$ %&'( ) %'* +,-( I CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA AGROPECUÁRIA, AGRÍCOLA E AMBIENTAL (CBMAAA) 09 a 12 de maio de 2016 - Centro de Convenções da UNESP, Câmpus de Jaboticabal, SP Palavras-chave: Enzimas. NGS. Nitrogênio. Fósforo. Enxofre. Bioprospecção. Abstract Microorganisms, especially those present in soil, play important roles for ecosystems maintenance. Microbial enzymes production helps the mineralization in order to obtain better plant assimilation of nutrients. Therefore, search for new enzymes is necessary. This current work compared enzymes of nitrogen, phosphorus and sulfur cycle in two different soils, one from native forest and the other from no-till management system. For this purpose, metagenomic analysis was used with total DNA sequencing of the samples. A total of 10,808 enzymes was found in no-till management system and native forest soil. From this total, 44, 46 and 65 enzymes corresponded respectively to nitrogen, phosphorus and sulfur metabolisms in native forest soil. About no-till management system soil, 56, 54, and 73 enzymes corresponded respectively to nitrogen, phosphorus and sulfur metabolisms. In native forest soil, the most abundant enzymes of nitrogen, phosphorus, and sulfur cycle were respectively glutamate synthase [NADPH], phnB protein, and arylsulfatase while in no-till management system soil, the most abundant enzymes were glutamate synthase [NADPH], pyrophosphateenergized proton pump and thioredoxin reductase respectively for nitrogen, phosphorus, and sulfur metabolisms. Most of the found nitrogen cycle enzymes with statistical significance were present in native forest soil; 70% of phosphorus cycle enzymes were present in no-till management system soil; and most of the sulfur cycle enzymes were present in native forest soil. Keywords: Enzymes. NGS. Nitrogen. Phosphorus. Sulfur. Bioprospecting. 1 Introdução A diversidade microbiana do solo é uma área de muito interesse, já que a diversidade por grama de amostra encontrada tem demonstrado que este ambiente seria o mais diverso com relação as bactérias do planeta Terra (ROESCH et al., 2007). Consequentemente, o solo se torna uma fonte genética potencial para a exploração de enzimas de interesse de aplicação na agricultura e na indústria. Comunidades microbianas são componentes de extrema importância na manutenção da fertilidade (SICILIANO et al., 2014) e na funcionalidade e sustentabilidade dos ecossistemas do solo (WAGG et al., 2014). A contribuição de microrganismos do solo para a nutrição de plantas é relacionada aos ciclos biogeoquímicos / ciclos do carbono, nitrogênio, fósforo, enxofre e de micronutrientes / na qual enzimas microbianas catalisam diferentes etapas (FALKOWSKI et al., 2008; MATSUMOTO et al., 2005). O nitrogênio é um elemento que compõe biomoléculas essenciais como peptídeos, proteínas, peptideoglicanos e bases nitrogenadas (MOREIRA; SIQUEIRA, 2006). As enzimas que participam no ciclo de nitrogênio são conhecidas desde a fixação de nitrogênio pela atividade das nitrogenases produzidas por um grupo de microrganismos (DOS SANTOS et ! " #$ %&'( ) %'* +,-( I CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA AGROPECUÁRIA, AGRÍCOLA E AMBIENTAL (CBMAAA) 09 a 12 de maio de 2016 - Centro de Convenções da UNESP, Câmpus de Jaboticabal, SP al., 2012) até a redução do óxido de nitrogênio (NO) ao N2 desnitrificação) (FALKOWSKI et al., 2008). O enxofre também é um elemento essencial necessário para a síntese de aminoácidos que constituem as vitaminas, os hormônios e as enzimas. Diversos microrganismos estão envolvidos na transformação e no processo de oxidação de enxofre, disponibilizando ao solo o sulfato (SO4-2) / forma de enxofre assimilado pelas plantas (MOREIRA; SIQUEIRA, 2006). Por sua vez, o fósforo apresenta importância como constituinte de ácidos nucleicos e ATP. Diversos microrganismos são responsáveis pelo processo de mineralização do fósforo orgânico, sendo capazes de hidrolisar o elemento por meio da produção de fosfatases, e atuando na disponibilidade de P para as plantas (MOREIRA; SIQUEIRA, 2006). Apesar da rica diversidade microbiana e do potencial de exploração de enzimas relacionadas ao ciclo biogeoquímico do solo, menos de 1% dos microrganismos são cultiváveis por meio do método tradicional de isolamento (TORSVIK; SØRHEIM; GOKSØYR, 1996). Desse modo, métodos independentes de cultivo como a metagenômica têm sido utilizados em solos como meio para investigar, classificar e manipular sistematicamente o material genético inteiro obtido diretamente de amostras ambientais (SHARMA; VAKHLU, 2014). Assim, este trabalho teve como objetivo a bioprospecção in silico de enzimas dos ciclos de nitrogênio, fósforo e enxofre em solos de mata nativa e sob manejo do sistema de plantio direto utilizando métodos metagenômicos. 2 Material e Métodos As amostras foram coletadas em Mata Nativa (MN) (Floresta Semidecidual; S22°28’2231’’, W54°81’4571’’) e manejo de sistema de Plantio Direto (PD) (S22.279410, W54.812593) na Embrapa Agropecuária Oeste (CPAO) localizada no município de Dourados-MS. Essas amostras de solos foram coletados a uma profundidade de 0 a 10 cm da superfície. Foram necessárias 10 amostras simples para a obtenção de uma amostra composta representativa de cada sistema de manejo de solo. Essas amostras foram armazenadas em sacos plásticos estéreis, mantidos sob refrigeração e transportados para UNESP - Campus Jaboticabal-SP, para sequenciamento genético, e ao laboratório de análise de solos da Universidade Federal da Grande Dourados para análise química. A extração do DNA foi realizada utilizando-se o DNA Spin Kit (MoBio Laboratories, USA) de acordo com as instruções do fabricante. A quantidade e qualidade do DNA foi ! " #$ %&'( ) %'* +,-( I CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA AGROPECUÁRIA, AGRÍCOLA E AMBIENTAL (CBMAAA) 09 a 12 de maio de 2016 - Centro de Convenções da UNESP, Câmpus de Jaboticabal, SP verificada nos equipamentos NanoDrop® (Thermo Fisher Scientific) e Quibit® (Invitrogen), de acordo com as instruções do fabricante. O DNA foi sequenciado utilizando a metodologia Ilumina HiScanSQ. Verificou-se também a qualidade do sequenciamento utilizando-se o programa FastQC (ANDREWS, 2010). Sequências ruins que apresentavam baixa qualidade ou que eram muito curtas foram retiradas por meio do programa Prinseq-lite (SCHMIEDER et al. 2011). Para a montagem das sequências, o algoritmo IDBA-UD (PENG, 2012). Para a identificação de ORFs, executou-se o software FragGeneScan (RHO, 2010). Os dados foram anotados no servidor MG-RAST (MEYER et al., 2008) utilizando o banco de dados Subsystems como fonte de anotação em classificação hierárquica. Foi realizada a análise estatística dos dois solos utilizando a ferramenta STAMP (Statistical Analysis of Metagenomics Profiles), com o teste estatístico G-test (W/Yates’) + Fisher’s com taxa de confiabilidade de 95% para p-value maiores que 0,055 (PARKS et al., 2014). 3 Resultados e Discussão Obtiveram-se um total de 10.808 enzimas presentes nos solos de mata nativa e sob manejo do sistema de plantio direto, porém apenas 44, 46 e 65 enzimas correspondem respectivamente aos metabolismos de nitrogênio, fósforo e enxofre do solo de mata nativa. Do solo sob manejo de plantio direto, 56, 54 e 73 enzimas correspondem respectivamente aos metabolismos de nitrogênio, fósforo e enxofre. Apenas as enzimas da Figura 1 foram as mais frequentemente encontradas. A abundância destas enzimas está representada nas Tabelas 1, 2 e 3, respectivamente. Referente ao ciclo do nitrogênio, entre as cinco enzimas mais abundantes de cada solo, a enzima Putative cytochrome P450 hydroxylase foi encontrada tanto no solo de mata nativa quanto no solo sob manejo de plantio direto. Essa enzima está relacionada ao processo de síntese do óxido nítrico. Foram encontradas também, entre as mais abundantes, as enzimas glutamate synthase [NADPH] (EC 1.4.1.13), ammonium transporter e glutamine synthetase type I (EC 6.3.1.2) nos dois solos (Tabela 1). Estas enzimas possuem um papel essencial durante o processo de assimilação de amônio em organismos biológicos. Nesse processo, ocorre a incorporação de amônio em aminoácidos. Em plantas, o nitrogênio pode ser absorvido pelas raízes na forma de nitrato (NO3-) ou amônio (NH4+). O amônio deve ser rapidamente incorporado pelas enzimas glutamate synthase e glutamine synthetase, formando glutamina, glutamato e outros aminoácidos (BREDEMEIER; MUNDSTOCK, 2000). A ! " #$ %&'( ) %'* +,-( I CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA AGROPECUÁRIA, AGRÍCOLA E AMBIENTAL (CBMAAA) 09 a 12 de maio de 2016 - Centro de Convenções da UNESP, Câmpus de Jaboticabal, SP assimilação de amônia pode ocorrer por bactérias do rúmen. Ruminantes não são capazes de utilizar diretamente o nitrogênio da amônia, porém bactérias presentes no rúmen desses animais são capazes de metabolizar a amônia por meio de diversas enzimas, incluindo a glutamate synthase e a glutamine synthetase (PENGPENG, WANG; ZHILIANG TAN, 2013). Quanto aos dados gerados pelo STAMP (Figura 1), as enzimas que fazem parte do ciclo de nitrogênio foram encontradas mais frequentemente no solo de mata nativa. As enzimas cyanate ABC transporter-ATP-binding protein, ureidoglycolate dehydrogenase (EC 1.1.1.154) e a cysteine desulfurase (EC 2.8.1.7) NifS subfamily foram encontradas e consideradas estatisticamente significativas. A nitrogenase (molybdenum-iron)-specific transcriptional regulator NifA foi encontrada e apresentou p-value de 0,055. A ureidoglycolate dehydrogenase (EC 1.1.1.154) está envolvida na metabolização de alantoína. Visto a importância do nitrogênio em organismos biológicos, algumas plantas e microrganismos são capazes de usar a alantoína como fonte de nitrogênio (DESIMONE et al., 2002; CUSA et al., 1999), sendo que em bactérias, uma das enzimas que participam desse processo é a ureidoglycolate dehydrogenase (EC 1.1.1.154) (KIM et al., 2012). Em relação à enzima cyanate ABC transporter-ATP-binding protein, esta é uma proteína transportadora envolvida na hidrólise de cianato. Estudos recentes apresentaram o uso de cianato por microrganismos nitrificantes como fonte de energia, na qual o cianato é convertido em amônio e dióxido de carbono pela enzima cianase. Por meio de análises metagenômicas, essas enzimas foram encontradas em microrganismos nitrificantes (PALATINSZKY et al., 2015). Quanto às enzimas cysteine desulfurase (EC 2.8.1.7) e nitrogenase (molybdenum-iron)specific transcriptional regulator NifA, ambas participam do processo de fixação de nitrogênio (MIHARA; ESAKI, 2002; VARLEY et al., 2015). Grande parte do elemento nitrogênio encontra-se na forma de gás (N2). Entretanto, muitos organismos não conseguem metabolizar o nitrogênio nesta forma, sendo necessário a conversão do gás em amônia (NH3) ou nitrato (NO3-). Esse processo é conhecido como fixação de nitrogênio e é um passo essencial no ciclo de nitrogênio (HOFFMAN et al., 2014). Considerando-se o ciclo do fósforo, das cinco enzimas mais abundantes para cada tipo de solo, Pyrophosphate-energized proton pump (EC 3.6.1.1) estava em ambos os solos (Tabela 2). ! " #$ %&'( ) %'* +,-( I CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA AGROPECUÁRIA, AGRÍCOLA E AMBIENTAL (CBMAAA) 09 a 12 de maio de 2016 - Centro de Convenções da UNESP, Câmpus de Jaboticabal, SP Tabela 1 – Cinco enzimas mais abundantes do ciclo do nitrogênio encontradas na anotação feita no MG-RAST em cada tipo de solo. Tipo de solo Enzimas Ab. e-value médio % id méd. comp. alinh. Médio nº de hits MN Glutamate synthase [NADPH] large chain (EC 1.4.1.13) 38 -42,09 74,38 108,09 25 MN Ammonium transporter 20 -31,82 69,55 91,09 19 MN Glutamine synthetase type I (EC 6.3.1.2) 18 -37,28 71,76 101,83 15 MN Putative cytochrome P450 hydroxylase 17 -20,89 65,60 73,11 17 MN [Protein-PII] uridylyltransferase (EC 2.7.7.59) 13 -18,57 63,95 66,79 13 PD Glutamate synthase [NADPH] large chain (EC 1.4.1.13) 65 -50,36 77,78 121,83 39 PD Glutamine synthetase type I (EC 6.3.1.2) 30 -51,70 76,70 122,10 22 PD Ammonium transporter 29 -38,68 74,11 100,50 21 PD Putative cytochrome P450 hydroxylase 27 -21,84 65,00 77,84 27 PD Glutamate synthase [NADPH] small chain (EC 1.4.1.13) 24 -42,04 74,78 104,04 21 MN = Mata Nativa; PD: Plantio Direto. Ab. = Abundância; % id méd. = porcentagem de identidade média; comp. alinh. médio = comprimento do alinhamento médio. No ciclo do fósforo, a exopolyphosphatase (EC 3.6.1.11) e phosphate transport ATPbinding protein PstB foram encontradas com mais frequência no solo sob manejo de plantio direto, enquanto secreted alkaline phosphatase no solo de mata nativa. A exopolyphosphatase (EC 3.6.1.11) é a principal enzima responsável por catalizar a polyP, a principal reserva de fósforo em microrganismos. Essa enzima facilmente hidrolisa e gradualmente separa o fósforo inorgânico do final da cadeia de polifosfatos (polyP) inorgânicos (ALBI; SERRANO, 2016). Quanto ao ciclo do enxofre, arylsulfatase (EC 3.1.6.1), thioredoxin reductase (EC 1.8.1.9) e gamma-glutamyltranspeptidase (EC 2.3.2.2) foram as enzimas de maior abundância presentes tanto no solo de mata nativa como no solo sob manejo de plantio direto (Tabela 3). ! " #$ %&'( ) %'* +,-( I CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA AGROPECUÁRIA, AGRÍCOLA E AMBIENTAL (CBMAAA) 09 a 12 de maio de 2016 - Centro de Convenções da UNESP, Câmpus de Jaboticabal, SP A partir do gráfico gerado no programa STAMP é possível observar que houve diferença estatística significativa com relação à presença destas enzimas nos dois tipos de solo (Figura 1). A arylsulfatase (EC 3.1.6.1) e a gamma-glutamyltranspeptidase (EC 2.3.2.2) foram mais frequentemente encontradas no solo de mata nativa do que no solo sob manejo de plantio direto, o oposto ocorreu com a enzima thioredoxin reductase (EC 1.8.1.9). Tabela 2 – Cinco enzimas mais abundantes do ciclo do fósforo encontradas na anotação feita no MG-RAST em cada tipo de solo. Tipo de solo Enzimas Ab. evalue médio % id méd. comp. alinh. médio nº de hits MN PhnB protein 15 -18.05 68.7 63.63 14 MN Pyrophosphate-energized proton pump (EC 3.6.1.1) 12 -27.92 71.45 82.58 12 MN Phosphate ABC transporter, periplasmic phosphate-binding protein PstS (TC 3.A.1.7.1) 10 -31.5 69.29 89.9 10 MN Phosphate transport system permease protein PstC (TC 3.A.1.7.1) 9 -30.89 69.51 90.89 9 MN Soluble pyridine nucleotide transhydrogenase (EC 1.6.1.1) 7 -18.86 66.14 69.43 7 PD Pyrophosphate-energized proton pump (EC 3.6.1.1) 32 -41.44 82.15 104.6 15 PD Phosphate transport ATP-binding protein PstB (TC 3.A.1.7.1) 23 -40.25 74.62 106.15 17 PD Phosphate regulon sensor protein PhoR (SphS) (EC 2.7.13.3) 21 -19.96 64.67 74.25 21 PD Polyphosphate kinase (EC 2.7.4.1) 19 -43.72 73.84 114.44 14 PD Exopolyphosphatase (EC 3.6.1.11) 19 -23.05 66.46 80.3 19 MN = Mata Nativa; PD: Plantio Direto. Ab. = Abundância; % id méd. = porcentagem de identidade média; comp. alinh. médio = comprimento do alinhamento médio. A arylsulfatase (EC 3.1.6.1) foi reportada como sendo capaz de hidrolisar o éster de sulfato (SLEZACK-DESCHAUMES et al., 2012). Como grande parte do enxofre orgânico do solo está na forma de ésteres de sulfato, a enzima possui um papel importante na mineralização do enxofre, processo que aumenta a biodisponibilidade de sulfato. O sulfato é a forma do enxofre que é absorvida pelas plantas e também é a forma alguns microrganismos assimilam. A mineralização de enxofre também possui forte relação com a acidez do solo ! " #$ %&'( ) %'* +,-( I CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA AGROPECUÁRIA, AGRÍCOLA E AMBIENTAL (CBMAAA) 09 a 12 de maio de 2016 - Centro de Convenções da UNESP, Câmpus de Jaboticabal, SP (MOREIRA; SIQUEIRA, 2006). Thioredoxin reductase (EC 1.8.1.9) é a única enzima capaz de reduzir a tioredoxina. Essa enzima participa do processo de formar ligações dissulfídicas reduzidas e no balanço redox das células, estando presente em quase todos os compartimentos celulares (cloroplasto, mitocôndria e citoplasma) (MARCHAL et al., 2014). A expressão dessas enzimas foi reportada como conferindo tolerância vegetal ao stress oxidativo e à seca (CHA et al., 2014). A gamma-glutamyltranspeptidase utiliza a glutationa como fonte de enxofre prosseguindo o ciclo do enxofre. Tabela 3 – Cinco enzimas mais abundantes do ciclo do enxofre encontradas na anotação feita no MG-RAST em cada tipo de solo Tipo de solo Enzimas Ab. evalue médio % id méd. comp. alinh. médio nº de hits MN Arylsulfatase (EC 3.1.6.1) 56 -39.02 73.12 99.58 38 MN Gamma-glutamyltranspeptidase (EC 2.3.2.2) 39 -16.98 69.6 60.45 39 MN Ferredoxin 37 -18.24 68.07 62.14 30 MN Thioredoxin reductase (EC 1.8.1.9) 27 -23.91 67.57 81.64 24 MN Alkyl hydroperoxide reductase subunit C-like protein 14 -25.47 72.12 75.93 13 PD Thioredoxin reductase (EC 1.8.1.9) 106 -33.84 70 101.91 53 PD Ferredoxin 92 -29.59 69.94 86.38 70 PD Gamma-glutamyltranspeptidase (EC 2.3.2.2) 45 -31.64 70.31 95.07 37 PD Beta-galactosidase (EC 3.2.1.23) 21 -30.82 70.34 87.45 13 PD Arylsulfatase (EC 3.1.6.1) 20 -34.52 76.35 85.24 14 MN = Mata Nativa; PD: Plantio Direto. Ab. = Abundância; % id méd. = porcentagem de identidade média; comp. alinh. médio = comprimento do alinhamento médio. ! " #$ %&'( ) %'* +,-( I CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA AGROPECUÁRIA, AGRÍCOLA E AMBIENTAL (CBMAAA) 09 a 12 de maio de 2016 - Centro de Convenções da UNESP, Câmpus de Jaboticabal, SP Figura 1 – Enzimas encontradas nos solos de mata nativa e sob manejo de plantio direto e dfdfdffd.Dourados-MS. . MN = Mata Nativa; PD: Plantio Direto. Foi considerado apenas p-value (corrected) menores que 0,055. As letras S, P e N significam os ciclos de enxofre, fósforo e nitrogênio respectivamente. 4 Conclusões Das enzimas encontradas com estatística significativa, a maioria das enzimas do ciclo do nitrogênio estavam presentes no solo de mata nativa; 70% das enzimas do ciclo do fósforo estavam presentes no solo sob manejo de plantio direto; e a maioria das enzimas do ciclo de enxofre estavam presentes no solo de mata nativa. O presente trabalho foi apenas um esforço inicial para o estudo da diversidade metabólica funcional em diferentes tipos de solo. 5 Agradecimentos/ Apoio financeiro Agradecemos a Fundação de Apoio ao Desenvolvimento do Ensino, Ciência e Tecnologia do Estado do Mato Grosso do Sul (FUNDECT), à Embrapa Agropecuária Oeste ! " #$ %&'( ) %'* +,-( I CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA AGROPECUÁRIA, AGRÍCOLA E AMBIENTAL (CBMAAA) 09 a 12 de maio de 2016 - Centro de Convenções da UNESP, Câmpus de Jaboticabal, SP (CPAO) pela disponibilização dos solos, à UNESP - Campus Jaboticabal pelo sequenciamento das amostras. Referências ALBI, Tomás; SERRANO, Aurelio. Inorganic polyphosphate in the microbial world. Emerging roles for a multifaceted biopolymer. World Journal of Microbiology and Biotechnology, v. 32, n. 2, p. 1-12, 2016. ANDREWS, Simon et al. FastQC: A quality control tool for high throughput sequence data. Reference Source, 2010. <http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/>. 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" #$ %&'( ) %'* +,-( I CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA AGROPECUÁRIA, AGRÍCOLA E AMBIENTAL (CBMAAA) 09 a 12 de maio de 2016 - Centro de Convenções da UNESP, Câmpus de Jaboticabal, SP MIHARA, H.; ESAKI, N. Bacterial cysteine desulfurases: their function and mechanisms. Applied Microbiology and Biotechnology, v. 60, n. 1-2, p. 12-23, 2002. MOREIRA, Fátima M. de S.; SIQUEIRA, José O. Transformações bioquímicas e ciclos dos elementos do solo. In: MOREIRA, Fátima M. de S.; SIQUEIRA, José O. Microbiologia e Bioquímica do Solo. 2 ed. Lavras: Editora UFLA, 2006. P.313-404. PARKS, Donovan H. et al. STAMP: statistical analysis of taxonomic and functional profiles. Bioinformatics, v. 30, n. 21, p. 3123-3124, 2014. PENG, Y.; HENRY, C. M.; LEUNG, S.; YIU, M.; FRANCIS, Y.L.; IDBA-UD: a de novo assembler for single-cell and metagenomic sequencing data with highly uneven depth. Oxford Journals. 2012. PENGPENG, Wang; TAN, Zhiliang. Ammonia assimilation in rumen bacteria: a review. 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