Andreone Teles Medrado*, Claudia Marie Araki**

ESTABELECIMENTO DOS PARÂMETROS PARA FERTILIZAÇÃO ARTIFICIAL DE
OURIÇOS-DO-MAR
(Lytechinus variegatus, Echinometra lucunter)
Andreone Teles Medrado*, Claudia Marie Araki**
*Aluno de Iniciação Científica do Curso de Ciências Biológicas - Centro Universitário FIEO
**Professora Doutora Coordenadora do Curso de Ciências Biológicas - Centro Universitário FIEO
Na classe Echinoidea, o corpo esférico ou achatado não se estende formando
braços, a superfície é coberta por espinhos móveis os quais se articulam com uma
carapaça de ossículos suturados. As áreas ambulacrárias contendo os pés ambulacrários
alternam-se com áreas interambulacrárias organizadas em meridianos em torno do
corpo. As placas da carapaça são perfuradas para a saída de gametas e para a passagem
dos canais que conectam os pés ambulacrários com as .
As espécies de ouriço-do-mar são dióicas, ou seja, cada indivíduo produz apenas
um tipo de gameta (espermatozóide ou óvulo), mas poucos apresentam dimorfismo
sexual. Os gametas são lançados no ambiente e se atraem quimicamente para ocorrer a
fecundação e formação do zigoto. Este geralmente se desenvolve externamente,
embora haja espécies que incubem seus ovos.
O
aquário projetado e desenvolvido pode ser dividido em quatro partes:
Circulação Aquário-Sump (CAS – Fig. 01), Circulação Sump-Skimmer (CSS – Fig.
02), Sistema Automático de Reposição de Água (SARA) e Sistema de Esterilização
da Água por Ultra-Violeta (SEAUV).
Fig.
01.
Esquema
“SIPANTEME”
de
(Sistema
montagem
Padronizado
Andreone Teles Medrado) (CAS), para
criação de ouriços do mar. (A e B) aquários
tanque, onde serão mantidos os animais; (C)
caixa de filtragem e circulação da água
(Sump); (D) Motobomba, realiza a circulação
da água em todo o sistema. (E, F, G, H, I, J,
K, L, M, N, O e P) Etapas da circulação da
água no ciclo de alimentação do sistema.
A) Blástula de um ouriço-do-mar. A:
aspecto superficial; B) secção da blástula;
bl-blastocélio; cl- cílios; C) Início da
Fig. 02. CSS - Esquema de montagem e
gastrulação no ouriço-do-mar, formação do
instalação do Skimmer HSA - A –Skimmer
mesênquima primário, bl-blastocélio; D)
HSA. B - Motobomba Orca 6000, C – Tubo
início da invaginação gastrular; E) fim da
condutor de água para o Skimmer, D – Válvula
gastrulação, e.l.- esqueleto larval; F) larva
Spray jet ou becket, E- Caixa , F – Tubo
jovem; a- ânus; e.l.- esqueleto larvar, ar-
Principal, G – Copo Coletor, H – “T” branco de
arquêntero; b-boca;; bp-blastóporo; ec-
50mm, com registro, I –Registro Esfera PVC
ectoderme; en- endoderme; i- intestino; m-
marro 50mm e J – Cano PVC marrom,
mesoderme; mes.1º- mesênquima primário;
condutor de água que retorna ao Sump, K -
mês. 2º- mesênquima secundário. As setas
Bancada de apoio do Skimmer.
indicam
os
locais
de
invaginação
(adaptado de Hadorn & Wehner, 1978).
Arte: Andreone Medrado
pH
NO2
NO3
NH3
T°C
SA
8.2 - 8.4
0ppm
0ppm
0ppm
29°C
32 - 35
Indicação de valores esperados para serem mantidos como padrão. Onde, pH,NO2, NO3, NH3, T°C e AS representam: potencial
hidrogeniônico, Nitrito, Nitrato, Amônia, Temperatura e Salinidade da Água, respectivamente.
Todos os materiais empregados durante o processo de fertilização foram previamente
Echinometra lucunter
Fonte:http://www.coralvivo.org.br/new/upload/img/Echinometra%20lucunter-big.jpg
Lytechinus variegatus
Fonte:http://reefguide.org/pix/thumb2/variegatedurchin2.jpg
Padronização do ambiente para criação de ouriço do mar com o intuito de obter
e extrair gametas através de estímulos químicos com cloreto de potássio (KCl à
5%) e/ou elétricos e realizar a fertilização artificial. Sendo o principal objetivo,
obter condições adequadas para atingir a formação até a larva pluteus.
Montagem e padronização do sistema para criação de ouriço-do-mar. Obtenção
de gametas para realização e padronização da fertilização artificial. Além disso,
fornecer óvulos fecundados para estudos didáticos ou emprego de testes
toxicológicos.
Nossos experimentos foram satisfatórios e corroboram com
experimentos anteriores em relação aos tempos e etapas da
divisão celular (ABNT 15350, 2006). A despeito de não ter
sido observada a fase larval, provavelmente por alterações
na temperatura e oxigenação, experimentos futuros podem
vir a ser realizados com o intuito de melhor estabelecer os
parâmetros para a manutenção dos zigotos e evolução para a
fase larval e até mesmo, adulta.
Os animais mantidos nos aquários se
adaptaram de maneira satisfatória
mantendo seu comportamento natural,
alimentando-se de forma autônoma ou
induzida, não sendo observados óbitos
dos animais que não passaram por
experimentação.
esterilizados para evitar ao máximo qualquer tipo de contaminação. Os gametas foram
retirados da geladeira e, em seguida a lavagem dos óvulos foi feita em água salgada
autoclavada (120°C). A adição de água salgada nos espermatozóides só foi realizada no
momento da fertilização para evitar ativação prematura dos gametas. Foram utilizados
1ml de óvulos, colocados em um Becker com 200ml de água salgada. Após a decantação
(aproximadamente 20 minutos), foram descartados os sobrenadantes e o processo repetido
por 3 vezes.
Terminada a lavagem dos óvulos, foi adicionado 5ml de espermatozóides diluídos a
1:200, sendo que previamente foram levemente misturados para dissolução dos grumos e
ativação dos espermatozóides.
Logo após a fecundação, com o auxílio de uma pipeta, foram coletadas várias amostras
em lâminas de vidro em diferentes momentos e cobertas com lamínulas para observação
ao microscópio.
Formação da membrana de Fecundação
Dois Blastómeros
Quatro Blastómeros
Oito Blastómeros
Blástula
Gástrula
A Fertilização artificial foi efetuada com sucesso e
diferentes fases do estágio embriolarval das espécies
estudadas e cultivadas no aquário desenvolvido pode
ser observada. O sucesso do experimento permitiu
avaliar que há uma viabilidade dos gametas para a
fecundação após serem mantidos à temperatura de
18○C por um período de até 24 horas.
Site do Autor: andreonetm.webnode.com.br
2-5 minutos
50-70 minutos
78-107 minutos
103-145 minutos
6-10 horas
12-20 horas
Duração aproximada dos estágios do
desenvolvimento
ouriço-do-mar
embriolarval
do
(Lytechinus
variegatus), obtidos a partir dos
animais mantidos no SIPANTEME
Além disso, estes resultados mostraram que
o sistema desenvolvido neste trabalho
(SIPANTEME) apresentou-se muito eficiente
no controle dos parâmetros do ambiente,
permitindo uma grande similaridade com o
ambiente marinho.