GOT/AST UV - GT Laboratorio
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GOT/AST UV Liquid Plus FINALIDADE Kit para determinação da atividade da Transaminase Glutâmica Oxalacética no soro ou plasma pelo método IFCC modificado. SIGNIFICADO CLÍNICO A atividade da Transaminase Glutâmica Oxalacética (TGO ou GOT) ou Aspartato Aminotransferase (AST ou ASAT) é amplamente distribuída no organismo, tanto no citoplasma como nas mitocôndrias, especialmente no coração e no fígado. A atividade aumenta no infarto do miocárdio e nas afecções hepáticas como hepatite e necrose. Sua determinação é importante quando combinada com outras determinações enzimáticas. PRINCÍPIO DO ENSAIO TGO L-aspartato + 2-oxoglutarato--------> L-glutamato + oxalacetato MDH piruvato + NADH + H+--------> L-malato + NAD+ O decremento da concentração de NADH, medido a 340 nm (Hg334, Hg366) é proporcional à atividade de TGO da amostra. REAGENTES FORNECIDOS Código 465050 (50 ml): 1 x 40 ml R1 + 1 x 10 ml R2 R1: 1 frasco com 40 ml de reagente. R2: 1 frasco com 10 ml de reagente. Código 464250 (250 ml): 1 x 200 ml R1 +1 x 50 ml R2 R1: 1 frasco com 200 ml de reagente. R2: 1 frasco com 50 ml de reagente. Composição dos reagentes fornecidos R1: Tris 110 mmol/l pH = 7,8 LDH ≥2060 U/l MDH ≥1625 U/l Aspartato 32 mmol/l R2: NADH 1 mmol/l 2-oxoglutarato 75 mmo/l Conservação e estabilidade dos reagentes Conservar em refrigerador de 2-8oC. Todos os reagentes são estáveis até a data de vencimento marcada no rótulo. Sinais de instabilidade ou deterioração dos reagentes Turbidez ou sedimento nos reagentes indicam deterioração. Neste caso, o kit deverá ser descartado. Cuidados e precauções Este kit é destinado somente para uso diagnóstico in vitro. A caixa e os frascos deste produto não podem ser reutilizados. Eles devem ser descartados como resíduos perigosos de acordo com a legislação vigente. O pessoal que manipulá-los deverá ser devidamente treinado para a manipulação e eliminação pela instituição ou pelo laboratório que utilizá-los. REAGENTE DE TRABALHO Preparação Códigos 465050, 464200, 464250, 464500 e 465500: agregue o conteúdo de um frasco de R2 para um frasco de R1 e homogenize. Alternativamente, misture 4 volumes de R1 com 1 volume de R2 num balão limpo e seco. Anote a data de preparação no rótulo. Composição do Reagente de Trabalho Tris 88 mmol/l pH = 7,8 LDH ≥1650 U/l MDH ≥1300 U/l Aspartato 260 mmol/l NADH 0.2 mmol/l 2-oxoglutarato 15 mmol/l Conservação e estabilidade do Reagente de Trabalho Refrigerado (2-8ºC): estável por 21 dias. Temperatura ambiente (15-25ºC): estável por 3 dias. Sinais de instabilidade ou deterioração Leituras do branco de reagente contra água destilada inferiores a 1.000 D.O. (340 nm) indicam deterioração do reagente que deverá ser descartado. MATERIAIS NECESSÁRIOS, MAS NÃO FORNECIDOS - Banho-maria de 37ºC. - Cronômetro. - Pipetas e micropipetas para os volumes citados em PROCEDIMENTO DO TESTE. - Tubos e cubetas de vidro. - Fotômetro ou espectrofotômetro. - Centrífuga. COLETA E OBTENÇÃO DA AMOSTRA Amostra: Soro fresco ou plasma obtido com heparina, separados das hemácias antes dos 30 minutos de obtenção do espécime. Condições de conservação da amostra: Temperatura ambiente (20-25 ºC)……24 horas. Refrigerador (2-8 ºC)…………48 horas. Congelado (-20ºC).................estável por 4 meses. Substâncias interferentes: A bilirrubinemia moderada não interfere. A hiperlipemia pode causar turbidez. Espécimes hiperlipêmicos devem ser ensaiados após diluir com solução fisiológica; o resultado obtido deve ser multiplicado pela diluição efetuada. A hemólise libera grandes quantidades de transaminases eritrocitárias, dando resultados falsamente elevados. Eliminação: Todos os espécimes devem ser considerados como potencialmente infecciosos, assim como o material em contato com eles. As boas práticas laboratoriais e regulamentos locais deverão ser observados para prosseguir com sua eliminação. Um método sugerido é a autoclave a 121º C durante 1 hora. Os líquidos devem ser eliminados em hipoclorito de sódio 5%, deixando a inativação proceder por 1 hora. PROCEDIMENTO DO TESTE - Traga o reagente para a temperatura ambiente. - Coloque o espectrofotômetro nas condições de reação: Temperatura: 25º, 30º ou 37ºC Comprimento de onda: 340 nm (Hg 334 ou 366 nm) Procedimento: Em uma cubeta equilibrada à temperatura de reação, agregue (NOTA 1): 25ºC /30ºC 37ºC R1 de trabalho 1.0 ml 1.0 ml Amostra 100 µl 50 µl Misture e dispare o cronômetro. Leia a primeira absorbância após 60 segundos. Repita a leitura após outros 60, 120 e 180 segundos. CÁLCULOS ∆A / minuto: calcule a diferença de leitura a cada 60 segundos e obtenha a média entre elas. Cálculo da atividade: Atividade U/l = fator x ∆A / minuto FATOR Temperatura de reação 25ºC/ 30º 37ºC 340 nm 1768 3370 334 nm 1833 3437 366 nm 3333 6234 CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO 1- Sensibilidade: aproximadamente 2 U/l, lido em espectrofotômetro em 340 nm com cubetas de faces retas de 1 cm de passo de luz. 2- Especificidade: na ausência de cetoácidos, a reação é específica para GOT. 3-Faixa dinâmica: 2-300 U/l para procedimento a 25 ºC e 30 ºC, e até 800 UI/l para procedimento a 37 ºC (leituras a 340 nm). Se a atividade for maior, repita a determinação utilizando uma diluição da amostra em solução salina; o resultado deverá ser multiplicado pela diluição realizada. 4-Precisão: Intraensayo AMOSTRA 1 2 3 MEDIA U/l 33,5 72,2 186,9 SD U/l ± 1,0 1,2 1,0 C.V.%± 2,9 2,0 0,5 Interensayo AMOSTRA 1 2 3 MEDIA U/l 36,0 73,5 191,4 SD U/l ± 2,5 2,6 3,6 C.V.%± 6,8 3,6 1,9 LIMITAÇÕES DO TESTE A GOT está concentrada principalmente no fígado e no músculo cardíaco, presente nas mitocôndrias. Seu aumento de atividade, portanto, liga-se aos danos em tais órgãos, mas não é específico para nenhum deles. A determinação tem valor apenas no contexto de um perfil enzimático que inclui outros marcadores dos órgãos estudados. CONTROLE DE QUALIDADE As boas práticas laboratoriais recomendam processar diariamente, amostras normais e patológicas. Recomenda-se o uso de Soro Controle Qualiset GT Lab Nível 1 e 2 (código 602.105 e 602.205). Cada laboratório deverá desenvolver o seu próprio controle interno de qualidade e ações corretivas se exceder os limites de tolerância aceitáveis. VALORES DE REFERÊNCIA Os valores são aproximados, recomendando-se que cada laboratório determine os valores da sua região. 25º C 30º C 37º C Mulheres: até 16 U/l 21 U/l 32 U/l Homens: até 19 U/l 27 U/l 38 U/l FATORES DE CONVERSÃO DE TEMPERATURAS As atividades obtidas a uma temperatura de trabalho podem ser expressas em uma temperatura diferente utilizando os seguintes fatores. Note-se que esta estimativa é apenas uma aproximação, pois nem todas as isoenzimas reagem da mesma forma com a mudança de temperatura. Temperatura de trabalho Fator para expressar a 25ºC 30 ºC 37 ºC 25ºC 1.0 1.37 1.98 30ºC 0.73 1.0 1.45 37ºC 0.504 0.69 1.0 NOTAS: 1- Os volumes de amostra e reagente podem ser modificados desde que se mantenham as proporções indicadas em PROCEDIMENTO DO TESTE. 2- Aplicações para analisadores automáticos estão disponíveis a pedido do cliente e no site: www.gtlab.com.ar APRESENTAÇÃO Código 465050 (50 ml): 1 x 40 ml R1 + 1 x 10 ml R2 Código 464250 (250 ml): 1 x 200 ml R1 + 1 x 50 ml R2 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1- Bergmeyer HU: Clin. Chem. 54/58 (1978) 2- International Federaton for Clincal Chemistry: Clin. Chim. Acta 105:147F (1980) 3- Scandinavian Society of Clinical Chemistry: Scand. J. Clin. Lab. Invest. 33:291 (1974) INFORMAÇÃO AOS CLIENTES Garantia GT Laboratório S.R.L. fabrica e comercializa reagentes para diagnóstico in vitro sob Boas Práticas de Fabricação (Good Manufacturing Practices) certificadas de acordo com O.M.S./W.H.O. Technical Report Series 908/2003, C.E.E. Res. 91/536 e A.N.M.A.T. Disp. Nº 3623/1997, ISO 9001:2008 e ISO 13485:2003. Os termos e as condições da qualidade são absolutos dentro das responsabilidades que correspondem a GT Laboratório S.R.L. Fabricado pela GT Laboratorio S.R.L. Necochea 3274 – Rosário - Argentina Uso profissional exclusivo. Autorizado pela A.N.M.A.T. PM 121-42. Diretor técnico: Daniel Gazzola, Bioquímico INFORMAÇÕES DE CONTATO E-mail: [email protected] Site: www.gtlab.com.ar Código de revisão: 46490000/14
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