procedimento para verificação da performance das pipetas gilson

PROCEDIMENTO PARA VERIFICAÇÃO DA
PERFORMANCE DAS PIPETAS GILSON
(OPERATION QUALIFICATION)
REF: LT802292B
INTRODUÇÃO
Este documento descreve o método para verificação da performance das pipetas Gilson
utilizando-se o método gravimétrico. A utilização dos procedimentos descritos neste
método garante conformidade com as especificações Gilson para exatidão e precisão.
Embora este documento não relacione outros métodos, que podem estar sendo utilizados
pelo usuário, o método e cálculos aqui descritos podem ser aplicados em outros testes, fora
do escopo deste documento.
O teste de conformidade para verificação da exatidão e precisão é aplicável a qualquer
pipeta Gilson: Pipetman (P e F), Pipetman Ultra, Distriman ou Microman. Este teste, que
está de acordo com padrões internacionais, analisa o sistema de pipetagem como um todo:
pipeta, ponteira e operador.
Nota: Para resultados confiáveis, o operador deve ser bem treinado e qualificado.
O método descrito neste documento inclui um procedimento para correção das perdas por
evaporação para pequenos volumes. Também, na conversão para volume das massas
obtidas na balança, são feitas correções referentes à temperatura e pressão no momento da
execução do teste.
O usuário deve estabelecer uma rotina para testar suas pipetas com base em: necessidades
em termos de exatidão e precisão, frequência de uso, número de usuários para uma mesma
pipeta, número de ciclos em cada utilização da pipeta e a natureza dos líquidos pipetados.
Auxílio para se estabelecer estes procedimentos está disponível na Analítica (representante
Exclusivo da Gilson no Brasil).
Nota 1: para a Pipetman Ultra, o teste a ser feito pelo usuário está descrito no Manual de
Operação, como parte do procedimento de recalibração.
Nota 2: As especificações de exatidão e precisão descritas para cada modelo só são
garantidas pelo fabricante quando se utiliza ponteiras originais Gilson (ponteiras
DIAMOND ).
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DOCUMENTOS RELACIONADOS
Documento
Referência
Manual de operação da Pipetman P
LT801117
Manual de operação da Pipetman F
LT801118
Manual de operação da Pipetman 8x200
LT801236
Manual de operação da Microman
LT801367
Manual de operação da Distriman
LT801285
Manual de operação da Pipetman Ultra
LT801441
prEN ISO/ FDIS 8655
*
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DEFINIÇÕES
Exatidão (Erro Médio ou Erro Sistemático): diferença entre o volume dispensado e o
volume nominal ou o volume selecionado na pipeta.
Calibração (Ajuste): conjunto de operações que estabelecem a relação entre o volume
dispensado e o volume nominal ou selecionado correspondente na pipeta.
Volume morto de ar: nas pipetas de deslocamento de ar, é o volume de ar entre a parte
inferior do pistão e a superfície do líquido.
Taxa de evaporação: estimativa da perda de água causada pela evaporação durante o
processo de pesagem.
Análise gravimétrica: procedimento geral baseado na determinação da massa das
alíquotas de água dispensadas por uma pipeta. Os valores são corrigidos com relação à
perda por evaporação, e então, a massa real e o volume são calculados, com base na
densidade da água em temperaturas específicas com correções para a pressão atmosférica
do local (fator Z).
Volume Nominal: maior volume selecionável pelo usuário e especificado pela Gilson.
Nota: isto significa que, para uma pipeta de volume variável com uma faixa de volume útil
de 10µl a 100µl, o seu volume nominal é 100µl.
Volume selecionado: volume ajustado pelo usuário, para a dispensa do volume escolhido
dentro da faixa de volume útil.
Nota: para as pipetas e volume fixo, o volume selecionado é igual ao volume nominal.
Precisão (Erro Aleatório): dispersão dos volumes dispensados ao redor da média dos
volumes dispensados. Também conhecida (de acordo com o contexto) como desvio padrão,
reprodutibilidade ou repetibilidade.
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Repetibilidade: é a dispersão entre os resultados de medidas sucessivas (realizadas em um
curto espaço de tempo), onde não há alteração dos parâmetros nem das condições.
Reprodutibilidade: é a dispersão entre os resultados de medidas realizadas em condições
diferentes (local ou operador diferente), mantendo todos os parâmetros constantes.
Especificações Volumétricas (Erros Máximos Admissíveis): são os extremos permitidos
(superior e inferior) para o desvio entre o volume dispensado e o volume nominal ou o
volume selecionado.
Faixa de volume útil: parte do volume nominal que pode ser dispensado, dentro do erro
máximo especificado na Norma Internacional ISO/ DIS 8655. O valor superior da faixa de
volume útil é sempre o volume nominal. O valor inferior é 10% do volume nominal, se não
estiver especificado de forma diferente pelo fabricante.
Recalibração (ajuste feito pelo operador): é um procedimento, definido pela Gilson e que
pode ser executado pelo usuário final, para garantir que a pipeta opere conforme as
especificações publicadas.
Pesagem: pesar significa determinar a massa de uma alíquota.
Fator Z: fator de conversão (µL/mg) considerando-se a densidade da água em contato com
o ar, em função da temperatura e da pressão.
Ex: Designação (abreviatura) de um instrumento projetado para dispensar volumes.
In: Designação (abreviatura) de um instrumento projetado para aspirar volumes.
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CONDIÇÕES AMBIENTAIS
A sala de teste (laboratório) deve ter controle de temperatura e umidade para que as
condições ambientais do local onde será feita a verificação e a temperatura dos
equipamentos utilizados sejam estáveis e homogêneas antes e durante todo o procedimento.
A temperatura da pipeta e da água destilada utilizada no teste gravimétrico deve estar
estabilizada antes do início do procedimento (coloque-as na sala 12 horas antes do início do
procedimento). Idealmente, a verificação deve ser feita nas seguintes condições:
1) Temperatura estável (água,pipeta e ambiente) em 21.5 ± 1.5ºC
Se por alguma razão a pipeta for verificada em uma temperatura fora da especificada, a
correção é feita utilizando-se um fator Z diferente para a conversão da massa em volume
(µl/mg).
2) Umidade Relativa de 45% a 75%
Para minimizar a taxa de evaporação, esta faixa de umidade relativa deve ser mantida
durante todo o procedimento de verificação.
3) Pressão barométrica de 1013 ± 25 hPa
Se o local do teste possuir uma pressão atmosférica diferente, a correção é feita utilizandose um fator Z diferente na conversão de massa para volume (µl/mg).
OPERADOR
Operação da pipeta
Um procedimento
adequado
de
pipetagem contribui significantemente para a
reprodutibilidade dos resultados no teste de verificação. Operadores sem experiência
podem ter variações importantes nos resultados. Para resultados confiáveis, o operador
deve ser bem treinado e qualificado.
Se deve ter cuidado em manter um ritmo constante na aspiração e na dispensa das
alíquotas: pressionar/ liberar o botão de operação suavemente e com velocidade constante.,
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Observar a profundidade de imersão da ponteira (veja esta informação no manual de
operação da pipeta que está sendo testada).
Treinamento
O teste de conformidade deve ser feito por um operador qualificado. Se necessário, contate
a Analítica para maiores informações sobre treinamento.
PONTEIRAS
A pipeta que será testada deve ser operada segundo as instruções fornecidas pelo manual de
operação. Novamente, com base no manual de operação que acompanha a pipeta que será
testada, tenha certeza, antes de começar o teste, que ela está limpa, montada corretamente e
de estar utilizando genuínas ponteiras Gilson.
Como a qualidade das ponteiras utilizadas no teste é um fator importante para se assegurar
que a performance da pipeta esteja de acordo com a especificação, a escolha da ponteira é
um passo fundamental no processo de calibração. Por exemplo, todos os modelos da
Pipetman possuem calibração de fábrica, realizada com ponteiras Gilson Diamond, de
ótima qualidade. Então, para a Pipetman, você deve usar exclusivamente as ponteiras
Gilson Diamond para realizar o teste gravimétrico.
EQUIPAMENTOS UTILIZADOS NO TESTE
Para garantir a integridade do procedimento de verificação, todos os equipamentos
utilizados durante o procedimento devem ser verificados regularmente.
Balança
Balanças apropriadas, conforme a OIML R 76-1 (OIML - International Organization of
Legal Metrology), devem ser selecionadas para realização do teste de performance da
pipeta, conforme tabela abaixo.
As balanças devem ser calibradas e certificadas por pessoal qualificado usando pesos
rastreáveis a autoridades reconhecidas nacionalmente (Empresas/ Instituições pertencentes
à Rede Brasileira de Calibração - RBC).
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A legibilidade da balança deve ser escolhida de acordo com o nível de exatidão requerido,
que deve ser um décimo do desvio a ser conseguido. Para a Pipetman e Microman, escolha
a balança de acordo com o volume nominal da pipeta - volume máximo - (veja tabela). Para
a Distriman, os volumes que serão testados são específicos para cada modelo de Distritip,
de acordo com a alíquota de volume específica (escolha a legibilidade de acordo com o
volume da alíquota).
VOLUME NOMINAL
DISPLAY (mg)
LEGIBILIDADE DA BALANÇA (g)
< 100µL
0,001
10
100µL a 1000µL
0,01
10-
5
> 1000µL
0,1
10-
4
-6
Termômetro
Use um termômetro calibrado para medir a temperatura da água no começo e no final de
cada série de teste. Use um termômetro com uma incerteza de medição de até 0.1ºC.
Recipientes
Recipientes que serão utilizados durante o procedimento:
-
Recipiente de origem
É o recipiente que contém a água que será utilizada para a realização das medidas (o
volume deste recipiente deve ser suficiente para a execução de TODAS as medidas).
-
Recipiente de pesagem
É o recipiente que será utilizado para a realização da medida (é o que será colocado
no prato de pesagem da balança).
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-
Recipiente de descarte
É um terceiro recipiente que recolherá as alíquotas que não serão pesadas.
Containers especiais são utilizados como recipiente para a dispensa da água durante a
pesagem. O controle da evaporação durante o teste gravimétrico é essencial. Para
minimizar a evaporação, a Gilson utiliza recipientes cilíndricos e com tampa, feitos de
plástico não poroso.
A Gilson fornece um kit para pesagem (ref. F144700) que contém 4 recipientes para
pesagem de tamanhos diferentes (tipos A, B, C e D), 3 recipientes de origem (recipiente
que contém a água que será utilizada para a realização das medidas, e que deve ser
suficiente para a execução de todas as medidas), filtros para limpeza/ secagem dos
recipientes e uma pinça. Componentes individuais do kit também estão disponíveis como
peças de reposição.
Quando os volumes a serem testados são menores do que 200µL, a Gilson utiliza
recipientes para pesagem com tampas (tipo A e B, mostrados na página seguinte).
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•
recipiente tipo A e sua tampa (ambos têm que ser manipulados com a pinça) deve ser
utilizado para volumes de até 20 µL (requer balança de 6 casas).
•
recipiente tipo B e sua tampa devem ser utilizados para volumes entre 21 a 200µL
(requer balança de 5 casas). Este recipiente possui o´rings da Pipetman P5000
acoplados para evitar aquecimento devido a manipulação (evitando-se contato direto da
mão do operador com o recipiente evita-se aquecimento da água).
•
recipiente tipo C (50 mm x 35 mm) deve ser utilizado com volumes entre 201 a 5000µL
(requer balança de 4 casas).
•
recipiente tipo D (70 mm x 50 mm) deve ser utilizado para volumes acima de 5000µL
(requer balança de 4 casas).
Tipo A
Tipo B
Tipo C
Tipo D
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Água
No teste, utiliza-se água destilada ou deionizada e degaseificada, conforme a Norma ISO
3696, à temperatura ambiente. Para evitar flutuações na temperatura da água, use um
recipiente de origem grande (por exemplo, o recipiente tipo D, mostrado anteriormente). O
recipiente de origem deve conter água suficiente para a realização de todas as medidas.
VERIFICAÇÃO DA PERFORMANCE
A verificação da performance analisa tanto a exatidão (erro sistemático) como a precisão
(erro aleatório). Condições, procedimentos e qualificações previamente descritas neste
documento devem ser implantados para garantir a validade dos resultados dos testes.
Após rinsar a ponteira, faça 10 pesagens individuais para cada volume selecionado. Para as
pipetas de volume variável três volumes diferentes devem ser selecionados de acordo com a
faixa de volume do modelo que está sendo avaliado (veja a próxima tabela). Estes volumes
devem ser o volume nominal (máximo), 50% do volume nominal (volume intermediário) e
o volume mínimo da faixa de volume do modelo. Para as pipetas de volume fixo (Pipetman
F) utiliza-se apenas o volume nominal.
1. Ajuste na pipeta o volume do teste (este deve ser mantido durante todo o
procedimento).
2. Estime a taxa de evaporação (para volumes pequenos, menores do que 20µl).
3. Faça o teste de verificação: registre as massas no Relatório de Verificação de
Performance.
4. Faça os cálculos: registre os resultados no Relatório de Verificação de Performance.
5. Compare os resultados com as especificações de exatidão e precisão que estão
relacionadas no manual de operação da pipeta.
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Volume Mínimo (µL)
Volume Intermediário (µL)
Volume Máximo (µL)
P2, U2
0,5
1
2
P10, U10
1
5
10
P20, U20
2
10
20
P100, U100
20
50
100
P200, U200
50
100
200
P8x200
20
100
200
P1000, U1000
200
500
1000
P5000, U5000
1000
2500
5000
P10 ml, U10ml
1000
5000
10000
M10
1
5
10
M25
3
12,5
25
M50
20
-
50
M100
10
50
100
M250
50
125
250
M1000
200
500
1000
125µL
2
5
10
1250 µL
20
50
100
12,5 ml
200
500
1000
PIPETMAN
MICROMAN
DISTRIMAN
Estimando a taxa de evaporação (massa média evaporada por ciclo de pesagem)
Para volumes abaixo de 200 µL, a pesagem requer o uso de tampas nos recipientes para
pesagens. Para volumes abaixo de 20µl, além da tampa, é necessário o uso de pinça. O
objetivo é minimizar, controlar e quantificar a perda por evaporação durante o ciclo de
pesagem.
A evaporação pode ser estimada, realizando-se uma série de quatro simulações de
pesagens, onde se repete o ciclo de pesagem sem que haja dispensa de água no recipiente
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de pesagem. A diferença total atribuída à evaporação é calculada e dividida por 4, para se
obter uma média. A faixa é expressa em mg/ciclo (ou se for um único ciclo, deve ser
expresso em mg).
As taxas de evaporação geralmente estão entre 0,010mg e 0,025 mg por ciclo de pesagem.
Recalcule a taxa de evaporação a cada 4 horas ou sempre que as condições ambientais
forem alteradas (temperatura, pressão e umidade).
1. Adicione água ao recipiente para pesagem até que este esteja com 1/3 do seu volume
cheio.
2. Utilize a pinça para colocar a tampa no recipiente e colocá-lo no prato da balança.
3. Com a pipeta, aspire a alíquota do recipiente de origem.
4. Tare a balança e remova o recipiente para pesagem do prato da balança.
5. Use a pinça para removê-lo.
6. Dispense a alíquota no recipiente de descarte ou retorne-a para o recipiente de origem.
Não a dispense no recipiente para pesagem.
7. Utilize pinças para colocar a tampa no recipiente e colocá-lo no prato da balança.
8. Registre o resultado e1.
9. Repita as etapas de 3 a 8, três vezes para obter e2, e3 e e4.
10. Calcule a perda/ ciclo: e = (e1 + e2 + e3 + e4)/4 (mg).
11. A evaporação por ciclo e (mg) deve ser adicionada ao peso médio antes do cálculo do
volume médio.
Teste Gravimétrico
As técnicas de aspiração e dispensa estão descritas no manual de operação da pipeta que
está sendo testada. Embora vários métodos alternativos de pipetagem sejam possíveis,
sempre utilize o modo normal (modo direto, não utilizar o modo reverso). Para todas as
pipetas, evite segurar ou esquentar o porta-cone com a mão durante o teste.
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Para pipetas multi-canal, encaixe as ponteiras em todos os canais, mas teste um canal por
vez. E registre os resultados para cada canal.
1. Preparação
1.1
Coloque água do recipiente de origem no recipiente para pesagem a uma
profundidade de, no mínimo, 3 mm.
1.2
Meça e registre a temperatura da água do recipiente de origem (t1), a pressão do ar e
a umidade relativa da sala. Se o recipiente para pesagem possui tampa, coloque-a (usando
uma pinça).
1.3
Encaixe uma nova ponteira.
1.4
Selecione e ajuste o volume que será testado (este não deverá ser alterado durante o
teste).
1.5
Pré-rinse a ponteira, aspirando a alíquota do recipiente de origem e dispensando no
recipiente de descarte 5 vezes, para equilibrar a umidade do ar dentro da atmosfera da
pipeta.
1.6
Coloque o recipiente para pesagem com água no prato da balança e tare-a (m0= 0).
2. Ciclo do teste
Cada ciclo do teste deve demorar menos de 1 minuto. Entretanto, um ritmo constante
durante a operação de pesagem deve ser mantido (o ritmo do ciclo e entre os ciclos).
2.1
Encaixe uma nova ponteira na pipeta.
2.2
Pré-rinse a ponteira aspirando e dispensando no recipiente de descarte uma vez.
2.3
Aspire, como especificado no manual de operação da pipeta, o volume a ser testado
(consulte tabela página 12).
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2.4
Se o recipiente para pesagem possuir tampa, remova-a usando a pinça.
2.5
Dispense o volume testado no recipiente para pesagem e recoloque a tampa com o
auxílio da pinça.
2.6
Registre a massa m1 do volume testado.
2.7
Tare a balança.
3. Repita o teste descrito acima (do item 2.1 ao 2.7) até completar 10 medidas (m1 a
m10).
4. Após a última medida, verifique e registre a temperatura da água do recipiente de
origem (t2), a pressão atmosférica e a umidade relativa da sala.
CÁLCULOS
Fórmulas (Parte 1 de 2)
1. Cálculo da temperatura média
Calcule a temperatura média (t) da água
destilada (próximo a 21,5 ± 1,5°C)
t = (t1 + t2)/ 2
2. Cálculo da pressão média
Use a pressão barométrica média (B) e a
temperatura média (t) para determinar o
Fator-Z correspondente na tabela.
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B = (B1 + B2)/ 2
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3. Cálculo do volume a partir da massa
Multiplique as massas (mg), depois das
correções das perdas por evaporação (para
volumes abaixo de 200 µL) pelo fator Z para
obter os volumes (µL).
Vi= Z (mi + e )
Vi = volumes individuais (µL)
mi= massas individuais (mg)
e = taxa de evaporação (mg)
Z= fator Z (µL/ mg)
4. Cálculo do volume médio
Após calcular o volume individual das
pesagens, calcule o volume médio (resultado
expresso em µL).
V = 1
n
n
∑ Vi
i =1
Vi= Volumes individuais
V = volume médio
n= número de pesagens
Fórmulas (Parte 2 de 2)
5. Exatidão (Erro Sistemático)
Diferença entre o volume médio do teste e o
volume ajustado na pipeta. Para pipetas de
volume fixo, substitua Vs por Vo = volume
nominal. A exatidão pode ser expressa em µL
ou...
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es = V - Vs
es = erro médio
V = volume médio
Vs = volume ajustado
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...como porcentagem:
es = 100% (V - Vs)/Vs
6. Precisão (Erro aleatório)
Dispersão dos volumes dispensados ao
redor da média dos volumes dispensados.
Também conhecida (de acordo com o
contexto)
como
desvio
padrão,
reprodutibilidade ou repetibilidade.
Vi = volumes individuais
V = volume médio (calculado como no item
anterior)
n = número de medidas
DP = desvio padrão
Como porcentagem, também conhecido como
coeficiente de variação (CV).
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CV = (DP/ V)x 100%
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Cálculos: fator Z
Z = fator de conversão (µL/ mg), t (°C) = média da temperatura* , B = pressão atmosférica
(hPa)
* esta média é obtida a partir do valor da temperatura da água do recipiente de origem
medida no início do teste (t1)e da temperatura da água do recipiente de origem medida ao
final do teste (t2). Consulte página 15 item "Cálculo da temperatura média".
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RELATÓRIO DO PROCEDIMENTO DE VERIFICAÇÃO
Identificação da pipeta
Modelo
Número de série
Ponteiras utilizadas no teste
Empresa
Nome
Tel/Email
Técnico
Nome
Tel/Email
Identificação do técnico
Condições
Data/ Hora do teste
Temperatura (°C)
Localização
Umidade (%)
Pressão (hPa)
Número de série
Sensitividade
Balança
Modelo
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Resultados do teste
De acordo com o documento "Procedimento para Verificação da Performance das Pipetas
Gilson".
mi (mg)
Vi (µL)
mi (mg)
Vi (µL)
mi (mg) Vi (µL)
Pesagem 1
Pesagem 2
Pesagem 3
Pesagem 4
Pesagem 5
Pesagem 6
Pesagem 7
Pesagem 8
Pesagem 9
Pesagem 10
Volume médio (V, µL)
Exatidão (V - Vo)
Exatidão (%)
Precisão (DP)
Precisão (CV, %)
COMPARADO COM AS ESPECIFICAÇÕES:
APROVADA
REPROVADA
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TABELAS DE ESPECIFICAÇÕES GILSON
Pipetman Ultra
U2
U10
U20
U100
U200
U1000
U5000
U10 ml
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Pipetman F
Microman
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Distriman
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Laboratório de Serviços de Pipetas (LSP)
Um dos nossos laboratórios (sob orientação e supervisão da Gilson) é dedicado
exclusivamente às manutenções e calibrações das pipetas Gilson. Peças originais e pessoal
treinado na França garantem serviços de qualidade internacional. Cada pipeta recebida
passa por um processo de descontaminação, desmontagem, limpeza, troca de peças
danificadas, montagem e calibração. Todo o trabalho é feito de acordo com as Normas
Internacionais Gilson, em ambiente controlado e com instrumentos de medidas (balanças,
pesos padrão, termômetros, etc) calibrados e com certificados rastreavéis à Rede Brasileira
de Calibração (RBC). O Certificado de Conformidade, que é emitido ao final dos serviços,
garante que sua pipeta está operando dentro das rígidas especificações Gilson. Peças
originais (porta-cone, selo, o’ring, botão, etc) são disponíveis para que o usuário possa, ele
mesmo, realizar os procedimentos básicos de manutenção.
O envio das suas pipetas é muito fácil!!
Importante: Descontamine suas pipetas antes de envia-las
Se você está na CIDADE DE SÃO PAULO ou GRANDE SÃO PAULO, solicite a
retirada das suas pipetas via fax ou via e-mail:
Fax: (11) 2162-8081
E-mail: [email protected], aos cuidados do Laboratório de Serviços de
Pipetas.
Se você preferir, envie-nos sua pipeta via Sedex (lembre-se de reforçar a embalagem,
evitando danos durante o transporte), ao seguinte endereço:
Nova Analítica Ltda
Rua Assungui, 432 - Saúde
04131-000 - São Paulo - SP
Aos cuidados do Laboratório de Serviços de Pipetas
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Em outras localidades, envie-nos sua pipeta via Sedex para o mesmo endereço
mencionado acima ou contate um de nossos representantes, espalhados pelo Brasil.
Consulte-nos para maiores detalhes.
Orçamento Prévio
Assim que a pipeta é recebida em nosso laboratório, ela é inspecionada e um orçamento
prévio é enviado via fax ou e-mail ao cliente. Nenhuma pipeta será reparada ou
calibrada sem aprovação prévia do responsável. O orçamento é gratuito. Caso você não
aprove os serviços, não haverá outras despesas exceto o transporte de ida e volta
Rua Assugui, 432
04131-000 - São Paulo - SP
Fone (0XX11) 2162 - 8080
Fax (0XX11) 2162 - 8081
Email: [email protected]
REF: LT802292B
Rua da Tranquilidade, 38
21221-270 - Rio de Janeiro -RJ
Fone (0XX21) 3351 - 6895
Fax (0XX21) 3351 - 4653
E-mail: [email protected]
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