CITOLOGIA_Microscopia_2014 - AULAS VERA REGINA ANDRADE

Vera Andrade
http://histologiavvargas.wordpress.com/
Microscópio
• O microscópio é um instrumento que permite
observar objetos não visíveis a olho nu.
• Isto se consegue através de um sistema
óptico composto por lentes de cristal
que aumentam a imagem do objeto.
Microscopia de Luz
Evolução do microscópio de luz
• Galileu Galilei inventou o telescópio no século
XVI – duas lentes num tubo
• Zacarias Jansen (holandês) inventou o primeiro
microscópio composto, em 1660 Século XVII,
formado por três tubos encaixados
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Microscopia de Luz
Evolução do microscópio de luz
Leeuwenhoek,
final de 1600
Microscopia de Luz
Evolução do microscópio de luz
Robert Hooke
Microscopia de Luz
Evolução do microscópio de luz
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Microscópio óptico, Microscópio composto ou
Microscópio de Campo claro
• Instrumento usado pelo estudante de
citologia, histologia, microbiologia e outras
disciplinas que estudam microrganismos
ou objetos com medidas micrométricas
• Constituído por uma parte mecânica e
uma parte óptica
Parte Mecânica
Tubo
Coluna ou braço
Revólver
Platina
Parafuso
Macrométrico
Parafuso
Micrométrico
Base ou pé
• Parte Mecânica
Base ou pé  suporte
Coluna ou braço  apoio paras as estruturas
Tubo  peça de ligação entre a ocular e o revólver
Revólver  peça giratória que contém as lentes
objetivas
– Platina  suporta a preparação
– Parafuso Macrométrico, de passo largo, é para
movimento de grande amplitude
– Parafuso Micrométrico, de pequeno passo, é
destinado a focar o material
–
–
–
–
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Parte Óptica
Lentes
oculares
Lentes
objetivas
Condensador
Parte Óptica
–
Condensador, concentra os raios
luminosos  objeto
•
possui um diafragma de diâmetro
modificável, proporciona uma maior ou menor
intensidade luminosa
–
Lentes objetivas, próximas do objeto,
projetam a imagem ampliada do objeto em
direção a ocular
–
Lente ocular, funciona como uma lupa,
amplia a imagem fornecida pela objetiva
Parte Óptica
• CONDENSADOR – geralmente
negligenciado - não interfere no
aumento da imagem, mas ele influencia
em sua nitidez e riqueza de detalhes
• Age no LIMITE DA RESOLUÇÃO do
sistema óptico, embora esta propriedade
dependa principalmente das lentes
objetivas
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LIMITE DE RESOLUÇÃO
• LR de um microscópio é a
capacidade de:
– Separar detalhes
– Produzir imagens separadas de
partículas muito próximas
– É a menor distância que deve existir
entre dois pontos para que eles
apareçam separado
Limite de Resolução
LR = K . 
AN
– K é uma constante 0,612
–  é o comprimento de onda luz branca (verdeamarelo) = 0,55 m
– AN é a abertura numérica da lente objetiva
LR = 0,612 . 0,55
AN
– O limite e resolução é diretamente proporcional ao
comprimento de onda e inversamente proporcional a
abertura numérica.
• ABERTURA NUMÉRICA (AN), vem gravado na
lente objetiva e sua determinação cabe ao
fabricante da lente.
• Indica a resolução de uma lente objetiva
• Capacidade de captar a luz
• Fornecer detalhes da amostra
AN = n. sen 
– n = menor índice da refração
–  = semi-ângulo de abertura
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• As objetivas trazem outras informações
– 160 ou 170, indica em milímetro o comprimento do
tubo do microscópio, onde devem ser usadas as
objetivas para que dêem melhores resultados.
– 0,17, distância de trabalho, que significa o tamanho
da lamínula, para a qual as aberrações são corrigidas.
Códigos de cores das lentes objetivas
Aumento
Cores
4X ou 5X
10X
40 ou 50X
100X
Imersão – óleo
Vermelho
Amarelo
Azul claro
Branco
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Imagem real ampliada e invertida
• Outros tipos de microscópios
– Microscópios Ópticos – MO
• Microscópio
• Microscópio
• Microscópio
• Microscópio
de Contraste de Fase
de Campo Escuro
de Fluorescência
de Polarização
– Microscópio Eletrônico – ME
Microscópio de contraste de fase – células vivas
• Usa as propriedades da
refração da luz
– Refração é a passagem da
luz de um meio para outro.
• Microscópio de contraste
de fase transforma
diferentes fases
luminosas em diferentes
intensidade luminosa
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Microscopia de luz convencional
Microscopia de contraste de fase
Microscópio de campo escuro
Objetiva
LUZ
• Condensador é
substituído por um
condensador de fundo
escuro
• A preparação é iluminada
por raios oblíquos
CONDENSADOR
• A célula fica com
aparência brilhante e o
fundo escuro
Microscopia de campo escuro - células de sangue.
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Microscópio de Polarização
2 raios de luz = Raios polarizados
• Quando um raio de luz
atravessa certas substâncias
do nosso corpo  acontece
uma dupla refração
• Substâncias como dentes,
ossos, fibras de colágeno e
outras possuem um estado
cristalino, arranjo molecular
interno
• Prisma utiliza as propriedades
de um único raio eliminando o
outro
Microscópio de luz polarizada:
da dentina (dente).
Microscópio de luz polarizada:
Fibras de colágeno exibem
birrefringência (brilhantes ou
amarelas).
Microscópio de Fluorescência
Utiliza luz fluorescente –
permite detectar proteínas
ou estruturas marcadas
com compostos
fluorescentes
Similar ao MO, exceto pela
luz empregada  Luz
ultra-violeta e pelos 2
conjuntos de filtros que
desviam os raios do olho do
observador.
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Cultivo de astrócitos. Imunofluorescência verde contra GFAP
(proteína de filamentos intermediários) e azul (união com DNA)
Alberts et al. Biología Molecular de la célula. (1996) p. 856.
Microscopia Eletrônica
Microscopia
Eletrônica
• Inventado em 1932,
na Alemanha,
Ernest Ruska e
Max Knoll
• Utiliza elétrons,
comprimento de
onda muito
pequeno, limite de
resolução 1.000X
menor que
microscópio de luz
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Microscopia eletrônica, músculo estriado cardíaco.
Medidas
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Medidas
Unidade de medida
Símbolo
Valor
Micrômetro
m
0,001 mm
Nanômetro
nm
0,000001 mm (10-6 mm) ou 10-3 m
Medidas
Discuta com seus colegas e responda:
• Para transportar um microscópio, qual a melhor maneira de segurálo?
• Que peça é movimentada quando giramos o parafuso
macrométrico?
• Para que serve o parafuso micrométrico? O que ocorre quando o
giramos? O movimento é tão nítido quanto o do parafuso
macrométrico?
• Como calcular o aumento que o microscópio fornece?
• Onde deve ser colocada a lâmina contendo a preparação para
observação? Qual objetiva deve ser inicialmente usada para o
procedimento de focalização?
• Qual parafuso deve ser usado inicialmente para focalizar o
material?
• Acoplado ao condensador existe um diafragma. Descrever o que
ocorre quando se move a alavanca do diafragma.
• O que é limite de resolução de um microscópio.
• Quais as diferenças que existem entre o MO e ME?
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