Reagente de Cálcio Dimension
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Reagente de Cálcio Dimension
DADE BEHRING DIAGNOSTICA SÃO PAULO REAGENTE DE CÁLCIO DIMENSION Código DF23A USO DO PRODUTO - O método CA empregado no sistema de química clínica DIMENSION é uma análise de diagnóstico in vitro, que tem por objetivo a determinação quantitativa de cálcio no soro, plasma e urina. RESUMO - O método CA é uma modificação da reação cálcio o-cresolftaleína complexona (OCPC) descrita originalmente por Schwartzenbach, et al. Mais tarde, Stern and Lewis adaptaram esta reação para um ensaio colorimétrico de cálcio. Connerty e Briggs demonstraram o uso do 8-quinolinol para reduzir as interferências pelo magnésio, e Sarkar e Chauhan4 descreveram o emprego deste procedimento para determinar cálcio sérico sem precipitação protéica. Este método incorpora o emprego de 8-quinolinol para reduzir interferências de magnésio e glicina como tampão para controle do pH. PRINCÍPIO DE PROCEDIMENTO - O cálcio reage com o OCPC para formar um complexo de cor púrpura. A quantidade de complexo assim formado é proporcional a concentração de cálcio e a medição é feita empregando-se uma técnica bicromática de ponto final (577, 540 nm). Íons de magnésio, que também formam um complexo colorido com o OCPC, são removidos da reação mediante a formação de complexos com 8quinolinol. Ca+++ + OCPC→Complexo Ca-OCPC pH 9.7 (absorbe a 577 nm) Mg++ + 8-quinolinol→Quinolinato magnésico ( não absorbe a 577 nm) REAGENTES Compartimentos Forma 1-6 Líquido 7-8c Líquido Ingredientes Concentração Tampão Glicina 0.22 mmol/L OCPC/ 0.39 mmol/L 8-Quinolinol 6.60 mmol/L a. Os compartimentos estão enumerados consecutivamente a partir do extremo fim do cartucho. b. Valor normal por análise por fabricação. c. Ver PRECAUÇÕES. PRECAUÇÕES - IRRITANTE. O COMPARTIMENTO 7 CONTÉM 6.5 ML DE REAGENTE OCRESOLFTALEÍNA / 8-QUINOLINOL E O COMPARTIMENTO 8 CONTÉM 3.3 ML DE REAGENTE OCRESOLFTALEÍNA / 8-QUINOLINOL. AMBOS SÃO IRRITANTES PARA OS OLHOS E A PELE. ENXAGÜAR A ÁREA AFETADA COM ÁGUA POR PELO MENOS 15 MINUTOS E CONSULTAR UM MÉDICO. AS CUBETAS USADAS CONTENDO FLUÍDOS ORGÂNICOS HUMANOS, DEVEM SER MANIPULADAS COM CUIDADO APROPRIADO PARA EVITAR CONTATO COM A PELE OU INGESTÃO. 5 Para uso diagnóstico IN VITRO DILUIÇÃO E MISTURA - A diluição e mistura de reagente e amostra é efetuada automaticamente pelo sistema Dimension. O copo da amostra deve ter capacidade de volume suficiente para conter a amostra e o “volume morto”; não é necessário o volume exato do copo. O volume morto é de 30µl para um copo de capacidade de 1.5ml. CONSERVAÇÃO - Guardar em ambiente refrigerado de 2 - 8 ºC. PRAZO DE VALIDADE - Verificar o prazo de validade na caixa de cada cartucho de reativo fechado. Os compartimentos fechados e não hidratados de cartuchos dentro do equipamento são estáveis por 30 dias. Os compartimentos 1-6 uma vez abertos pelo instrumento são estáveis por 24 horas. Os compartimentos 7-8 uma vez abertos pelo instrumento são estáveis por 10 dias. TOMADA DE AMOSTRA - Para as amostras a serem analisadas por este método, deve-se empregar os métodos e procedimentos normais de coleta e armazenamento, para conservação de soro e plasma.5 Soro deve ser separado dos glóbulos vermelhos e analisados imediatamente.6 A coleta de urina 24 horas deve ser feita em recipientes contendo 10 ml de HCL 6M.5 SUBSTÂNCIA DE INTERFERÊNCIA CONHECIDA - Interferências devidas ao magnésio são insignificantes nos níveis normalmente encontrados no soro humano. Uma interferência positiva máxima de 0.7 mg/dl[0.17 mmol/L] ocorre num nível de magnésio de 7 mg/dl(2.9 mmol/L). As substâncias seguintes não têm efeitos significativos no método CA nas concentrações indicadas: Acetaminofeno Ampicilina Bilirrubina Diazepan Digoxina Etanol Gentamicina Hemoglobina Heparina Lítica Lipemia Nortriptilina Fenobarbital Fenitoína Salicilato Fluoreto Sódico Teofilina 200 µg/ml 20 µg/ml 20 mg/dL 20 µg/dl 20 ng/ml 800 mg/dl 16 µg/ml 500 mg/dL 280 U/mL 600 mg/dl 1000 ng/ml 80 µg/ml 30 µg/ml 100 mg/dl 400 mg/dL 100 µg/ml [ 1.3mmol/l] [ 57 µmol/l] [342 µmol/L] [ 70 µmol/l] [ 25.6 nmol/l] [174 mmol/l] [ 29.4 µmol/l] [0.31 mmol/L (monômero)] [280000 U/L]e [6.86 mmol/l] triglicérides [3797 nmol/l] [344 µmol/l] [119 µmol/l] [ 7.24 mmol/l] [4 g/L]e [555 µmol/l] EDTA quando presente a 200 mg/dL [2 g/L]e e Oxalato Potássico quando presente a 500 mg/dL [5g/L] reduz os resultados de CA a valores inferiores aos limites analíticos do método. Os tubos de coleta de sangue Corvac e SST não afetam os resultados de CA. Cada laboratório deve estabelecer as normas de aceitação de seus tubos de coleta de amostra de sangue, como também os produtos para separação de soro. Já que estes produtos podem apresentar variações de um fabricante para outro e às vezes entre lotes do mesmo fabricante. Corvac é uma marca registrada de Monoject, Division of Sherwood Medical, St. Louis, MO. SST é uma marca registrada da Becton - Dickinson, Rutherford, NJ. d. As unidades do Sistema internacional de unidades estão entre parênteses. e. Concentrações normalmente presentes em tubos de coleta de sangue. PROCEDIMENTO MATERIAIS NECESSÁRIOS CAL Flex Cartucho de reagente Papel para impressa Copos para amostras ( 1,5 ml) Água purificada ou equivalente (diluente)f Cartucho de cubetas f- referência no manual de seu Dimension. CATALÓGO NÚMERO DF23A D827 DSC4 710615901 D828 2 PROCESSO DE ANÁLISE - O sistema de química clínica Dimension Dade Behring processa a amostra automaticamente através das etapas necessárias e imprime os resultados. CONDIÇÕES DO TESTE Volume da amostra: Volume de Reativo 1: \Volume de Reativo 2: Volume de diluente: Temperatura do ensaio: Comprimento de onda: Tipo de medição: 5 µl 145 µl 33 µl 258 µl 37 ºC 577 e 540 nm bicromática de ponto final CALIBRAÇÃO - O procedimento geral de calibração é descrito no manual do seu sistema Dimension. As seguintes informações devem ser consideradas quando da calibração do método CA: Limite de ensaio: Material de referência: Níveis de Calibração recomendados: Esquema de Calibração: Freqüência de Calibração: Coeficiente linear: 5.0-15.0 mg/dL[1.25-3.74 mmol/L] Calibradores secundários, como o Calibrador Química I Dade Behring ( CAT.NO.DC18). 7, 10, 13mg/dL(1.8, 2.5, 3.2 mmol/L] Três níveis em triplicata. A cada novo lote de reagente ou a cada 3 meses para um mesmo lote. Co 1.000 C1 0.090 CONTROLE DE QUALIDADE - Pelo menos uma vez ao dia, analisar uma solução em dois níveis de um controle com concentrações conhecidas. Os resultados obtidos devem estar dentro dos limites de variabilidade diária do sistema, medida no laboratório do usuário. Se os resultados não estiverem dentro dos limites aceitáveis do laboratório do usuário, seguir os procedimentos descritos no manual de seu sistema Dimension. Existe a possibilidade de um funcionamento incorreto do instrumento, se for observada a precisão seguinte em 5 testes consecutivos: *Concentração 7.0 mg/dL [1.75 mmol/L] 13.5 mg/dL [3.37 mmol/L] D. P. ( desvio padrão) > 0.17 mg/dL [0.04 mmol/L] > 0.23 mg/dL [0.06 mmol/L] RESULTADOS - O instrumento calcula e imprime automaticamente a concentração de cálcio em mg/dL [mmol/L] usando o esquema de cálculo ilustrado no manual do seu sistema Dimension. LIMITAÇÕES DOS PROCEDIMENTOS - Os resultados com excesso de 15.0 mg/dL [3.75 mmol/L] devem ser repetidos após se diluir a amostra com Água Purificada DuPont ou equivalente para se obter uma concentração dentro dos limites do ensaio. O resultado deve ser multiplicado pelo fator de diluição para se obter a concentração da amostra não diluída. O sistema de informações do instrumento contém mensagens de erro que advertem o operador sobre falhas específicas de funcionamento. Qualquer informação que contenha estas mensagens de erro deve ser guardada para comprovação. INTERVALO DE REFERÊNCIA Soro: 8.8-10.5 mg/dL [2.20-2.62 mmol/L] Urina: 42-353 mg/24hr [1.0-8.8 mmol/24hr] População de referência: 52 homens, com idades entre 17-61 anos 3 49 mulheres, com idades entre 17-61 anos O intervalo de referência foi calculado não parametricamente e representa 95% central da população. Cada laboratório deve estabelecer seu próprio intervalo de referência para as análises de Cálcio processadas no sistema Dimension. CARACTERÍSTICAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMENTO g REPRODUTIBILIDADE h Material Média Desvio Padrão(%CV) Dentro do mesmo dia Total mg/dL[mmol/L] Moni-Trol Soro Nível 1 9.2[2.3] 0.08[0.02](0.8) 0.16[0.04](1.7) Nível 2 12.9[3.2] 0.12[0.03](0.9) 0.24[0.06](1.9) LYPHOCHEK Urine Control Urina Normal 8.4[2.1] 0.06[0.02](0.7) 0.08[0.02](0.9) Moni-Trol é marca registrada de Baxter Healthcare Corp., Miami, FL 33152. LYPHOCHEK é marca regitrada de Bio-Rad, Anaheim, CA 92806 CORRELAÇÃO Estatísticas de Regressão Método Comparativo Pendente Soro Método CALCM no analisador clínico ACA 0.95 DuPont Urina Método CALCM no 0.97 analisador clínico ACA Dade Behring Interseção Coeficiente de Correlação 0.22[0.06] 0.96 0.12[0.03] 0.987 n 106 112 g.Todos os ensaios para definir as características específicas de funcionamento, foram processados depois que se efetuaram as comprovações normais e recomendadas de controle de qualidade do equipamento. h. As amostras foram analisadas durante 20 dias em duplicata para cada nível, o desvio padrão intradia e total foram calculados pelo método de análise de variância. i. O modelo da equação para os cálculos estatísticos de regressão é: [resultado do sistema Dimension]= inclinação X [resultado do método comparativo] + intercessão. ESPECIFICIDADE ANALÍTICA - Para maiores detalhes ver a seção de Substâncias de interferência conhecida descrita anteriormente. BIBLIOGRAFIA 1. Anderegg, G, Flaschka, H, Sallmann, R, Schwartzenbach, G, Metallindikatoren VII ein auf Erdalkaluonen ansprechendes Phtalein und seine analytyische Veswendung HELV, Chim Acta 1954; 37:113-120. 2. Stern, J, Lewis, WHP, The colorimetric estimation of calcium in serum with O-cresolphtalein complexone, Clin Chim Acta 1957; 2:576-580. 3. Connerty, HV, Briggs, AR, Determination of serum calcium by means of O-cresolphtalein complexone, Am J Clin Path 1966; 45:290-296. 4. Sarker, B, Ray, C, Chauhan, UPS, A new method for determining micro-quantities of calcium in biological materials, Anal Biochem 1967; 20:155-166. 4 5. Tietz, NW, Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, PA 1986, pp 52-53(techniques and procedures to minimize laboratory infections) and pp 478-497 (specimen collection and storage recommendations). 6. Henry, RJ, Clinical Chemistry, Principles and Technics, Harper and Row, New York, NY, 1974, p 656. 7. Henry, JB, and LaFever, D, An Evaluation of a Calcium Method for the Dade Behring ACA, Dade Behring Company, Wilimington, DE (1974). Diagnóstica São Paulo – Produtos e Equipamentos para Laboratórios Ltda Av. Indianópolis, 3231 1º andar – Tele Fax: 5581.0157 Site: diagnosticasp.com.br – E:mail: [email protected] 5