(Microsoft PowerPoint - Valida\347\343o Techno \(Ana Paula Cozac

Techno
TwinStation
Ana Paula Costa Nunes da Cunha Cozac
Hemocentro de Ribeirã
Ribeirão Preto
Techno
TwinStation
Techno
TwinStation
Realizados testes para validação da automação (Techno) para pacientes
Total de 299 amostras foram testadas para:
Tipagem ABO, Rh D
Pesquisa de quimeras ABO e RhD artificiais
Pesquisa de anticorpos irregulares (soro e plasma)
Identificação de anticorpos irregulares (soro e plasma)
Autocontrole
Techno
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Objetivos da validação da automação para pacientes
Avaliar a capacidade de realização de tipagem ABO nas seguintes situações
1. Na presença de dupla população seja por subgrupo seja por politransfusão
2. Em pacientes imunodeprimidos por QT (detectar Ig em baixos títulos)
3. Presença de interferentes (MM)
4. Presença de quimeras
5. Presença de autoanticorpo em altos títulos
Avaliar a capacidade de realização de tipagem RhD nas seguintes situações
1. Presença de interferentes (MM)
2. Presença de quimeras
3. Presença de autoanticorpo em altos títulos
Techno
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Objetivos da validação da automação para pacientes
Avaliar a sensibilidade e especificidade da PAI
1. Detectar anticorpos de importância clínica
2. Não detectar anticorpos frios
3. Reproduzir resultados da rotina
4. Utilizando plasma x soro
Avaliar a sensibilidade e especificidade da IAI
1. Identificar anticorpos de importância clínica
2. Identificar anticorpos com efeito de dose
3. Utilizando plasma x soro
Techno
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Objetivos da validação da automação para pacientes
VERIFICAR SE HÁ REPRODUTIBILIDADE DOS RESULTADOS OBTIDOS NA ROTINA
Techno
Patologias
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Número
Doença de base
5
LMC
2
LLC
6
LMA
2
LLA
11
SMD
3
AA
4
Beta Talassemia
2
Anemia Falciforme
16
Mieloma Múltiplo
4
Linfoma
1
Policitemia Vera
1
Mielofibrose
1
Ca de Pulmão
1
Sarcoma de Ewing
1
Síndrome de Mey Hegglin
1
Rabdomiossarcoma
1
Traombastenia de Glansmam
1
Neoplasia de Mama
234
Diversos
299
Total
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Anticorpos testados na PAI utilizando plasma
5 plasmas contendo anti-D
1 plasma contendo anti-K
2 plasmas contendo anti-E
1 plasma contendo anti-c
1 plasma contendo anti-Jka
1 plasma contendo anti-s
1 plasma contendo anti-D, -C, -K
1 plasma contendo anti-Leb
1 plasma contendo anti-M com efeito de dose
Todos os resultados foram
concordantes com os testes
realizados na rotina
transfusional utilizando soro
Techno
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Anticorpos testados na PAI utilizando plasma
PAI + paciente MM em atividade
27 soros com PAI + (rotina) = 23 plasmas
com PAI + Techno (4 PAI por anticorpo frio)
Maior especificidade
186 soros com PAI - (rotina) = 186 plasmas
com PAI - Techno
PAI negativa em paciente sem anticorpo
Total de 227 plasmas testados
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Analisando os resultados da PAI:
1. Quanto à capacidade de detectar anticorpos de importância clínica
Anticorpos clinicamente significantes foram detectados (anti-D, -K, -E, -c, -Jka, -s, -C)
2. Quanto à sensibilidade da PAI
Anticorpos em baixo título e apresentando efeito de dose também foram detectados
(anti-Leb , -M com efeito de dose)
As intensidade de reação foram as mesmas da rotina quando da utilização de soro.
3. Quanto à especificidade
Pacientes com PAI (soros previamente testados) tiveram seus plasmas testados e
confirmados como negativos
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4. Quanto à reprodutibilidade soro x plasma
Anticorpos clinicamente significantes foram detectados (anti-D, -K, -E, -c, -Jka, -s, -C)
no plasma da mesma forma que foram detectados no soro.
Techno
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Anticorpos testados na IAI utilizando plasma
5 plasmas contendo anti-E
1 plasma contendo anti-Dia, -K
8 plasmas contendo anti-D
1 plasma contendo anti-D, -K, -Dia
1 plasmas contendo anti-Dia
3 plasma contendo anti-C, -D
1 plasma contendo anti-e
1 plasma contendo anti-C, -D, -K
1 plasma contendo anti-c
1 plasma contendo anti-D, -K
2 plasma contendo anti-S
1 plasma contendo anti-E, -c
3 plasmas contendo anti-K
1 plasma contendo anti-Leb
3 plasma contendo anti-Jka
3 plasma contendo anti-M com efeito de dose
38 plasmas foram testados, todos os resultados foram concordantes
com os testes realizados na rotina transfusional utilizando soro
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Analisando os resultados da IAI:
1. Quanto à capacidade de identificar anticorpos de importância clínica
Anticorpos clinicamente significantes foram detectados (anti-D, -K, -E, -e, -c, -Jka, -S, -C, -Dia)
2. Quanto à sensibilidade da IAI
Anticorpos em baixo título e apresentando efeito de dose também foram identificados (anti-Leb ,
-M com efeito de dose)
As intensidade de reação foram as mesmas da rotina quando da utilização de soro.
3. Quanto à especificidade
Resultados compatíveis com os da rotina
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4. Quanto à capacidade de identificar anticorpos de importância clínica soro x plasma
Anticorpos clinicamente significantes foram detectados (anti-D (2), -K (2), -E (2), -e (1), -c (1),
-S (1), -C (1), -Dia (4)) no plasma da mesma forma que foram detectados no soro.
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Autocontrole:
Foram testadas 12 amostras com autocontrole positivo
LISS/Coombs
Enzima
Autocontole negativo
6 amostras
7 amostras
Autocontrole positivo
6 amostras
5 amostras
Todos os resultados foram compatíveis com os da rotina
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Tipagem ABO
227 amostras de pacientes foram testadas
214 apresentaram tipagem ABO sem discrepância
13 apresentaram discrepância ABO:
6 delas haviam sido detectadas na rotina
7 não foram detectadas na rotina
Em ambas situações os pacientes
apresentavam doença de base que
justificasse o aparecimento de
discrepância ABO.
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Tipagem ABO
ABO
Discrepância
Motivo da discrepância
1
B+
DP na direta
Pac cronicamente transfundido com HcO Beta Talassemia
2
A+
DP na direta
Pac cronicamente transfundido com HcO Beta Talassemia
3
A+
Direta de A reversa de AB
Redução na produção de Imunoglobulina SMD
4
B+
DP na direta
Pac cronicamente transfundido com HcO Anemia Falciforme
5
O+
Direta de B e reversa de O
Pac com hipergamaglobulinemia
6
B+
DP na direta
Pac cronicamente transfundido com HcO Anemia Falciforme
7
B+
Direta de B reversa de O
Pico monoclonal
8
AB+
Direta de AB e reversa de O Síndrome de hiperviscosidade
LMC
9
O-
Direta de A e reversa de O
LLC
Paciente com hipergamaglobulinemia
Diagnóstico
LNH
MM em atividade
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Tipagem ABO
ABO
Discrepância
Motivo da discrepância
10 B+
Reversa de AB
Condicionamento pré-Transplante MM pré-transplante
11 O+
Reversa de A
Condicionamento pré-Transplante MM
12 A+
Reversa de O (reag Hc A2)
Pico Monoclonal
MM em atividade
13 A+
Reversa de O (reag Hc A2)
Pico Monoclonal
MM em atividade
Sem discrepância
Rotina (direta de AB)
Hipergamaglobulinemia
LNH
O+
Diagnóstico
Techno
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Paciente com MM em atividade. Paciente é A.
Reversa era considerada + com HcA2
Techno
Tipagem ABO
Beta Talassemia em transfusão crônica
Paciente é B
CM na direta com soro anti-A
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Techno
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Paciente portador MM em condicionamento pré-transplante. Paciente é O
Reversa negativa com HcA
Techno
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Paciente portador de MM em atividade. Paciente é A.
Reversa reagiu com Hc A2
Techno
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Paciente portador de MM em condicionamento pré-transplante. Paciente é B.
Direta de B e reversa de AB
Techno
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Tipagem ABO em paciente com altos títulos de autoanticorpo da classe IgG
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Tipagem ABO Finalidade do teste:
Detectar população de células antígeno-positivas na presença de dupla
população seja por subgrupo seja por politransfusão
•
O teste foi mais sensível que o realizado na rotina, provavelmente pela retirada do
efeito “conhecimento prévio”.
•
Pacientes cronicamente transfundidos puderam ser fenotipados apesar da
discrepância
Detectar Ig em baixos títulos em pacientes imunodeprimidos por QT
•
De 227 casos em apenas 3 não houve detecção da Ig na reversa (rotina com mesmo
resultado)
Techno
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Tipagem ABO Finalidade do teste:
Possibilitar a tipagem ABO mesmo na presença de interferentes (MM)
•
De 227 casos em apenas 6 houve interferência de Ig (resultado compatível com o da
rotina), porém, em um caso apesar da presença de Ig interferindo na tipagem da
rotina o mesmo não ocorreu com a tipagem realizada pelo Techno.
Possibilitar a tipagem ABO mesmo na presença de autoanticorpo em altos títulos
•
Na amostra testada houve interferência da tipagem ABO e RhD (resultado compatível
com o da rotina).
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Avaliação de Quimera ABO
% de hemácias A
% de hemácias O
Resultado
A+ 90%
O+ 10%
A+
A+ 80%
O+ 20%
A+
A+ 70%
O+ 30%
A+
A+ 60%
O+ 40%
A+ (reação anti-A 1+)
A+ 50%
O+ 50%
A+ (reação anti-A 1+)
Techno
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Avaliação de Quimera ABO
% de hemácias B
% de hemácias O
Resultado
B+ 90%
O+ 10%
B+
B+ 80%
O+ 20%
B+
B+ 70%
O+ 30%
B+
B+ 60%
O+ 40%
B+
B+ 50%
O+ 50%
B+
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Avaliação de Quimera RhD
% de hemácias O+
% de hemácias O-
Resultado
O+ 90%
O- 10%
O+
O+ 80%
O- 20%
O+
O+ 70%
O- 30%
O+
O+ 60%
O- 40%
O+ (CM)
O+ 50%
O- 50%
O+ (CM)
O+ 40%
O-60%
O-
O+ 30%
O- 70%
O-
O+ 20%
O- 80%
O-
O+ 10%
O- 90%
O-
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Quimera de RhD
Fenotipagem RhD- em quimera com 40% Hc D+
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Quimeras de RhD
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
Techno
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Analisando os resultados da pesquisa de quimeras:
Quanto à capacidade de detectar hemácias antígeno-positivas.
Detecção de hemácias A dentro de uma população de hemácias O: houve redução de
sensibilidade quando da presença de 60% de Hc antígeno-positivas
Detecção de hemácias B dentro de uma população de hemácias O: não houve
redução de sensibilidade das amostras com até 50% de Hc antígeno-positivas
Detecção de hemácias D+ dentro de uma população de hemácias D-: houve redução
de sensibilidade das amostras com até 60% de Hc antígeno-positivas. Houve perda
de sensibilidade das amostras a partir de 40% de Hc antígeno-positivas.
Techno
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Tipagem RhD de amostras que se mostraram D fraco na rotina:
LI ≤ 2+: 22 amostras
Positivo apenas em AGH: 5 amostra
Reatividade
Microplaca rotina Microplaca Techno MC rotina + MC Techno
1
Total
1
2
2
3
2
5
2
2
2
5
9
1
17
67%
Techno
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O aparelho foi capaz de realizar os teste de tipagem ABO/RhD, PAI e IAI de amostras
nas seguintes condições:
Presença de hemólise
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O aparelho foi capaz de realizar os teste de tipagem ABO/RhD, PAI e IAI de amostras
nas seguintes condições:
Amostra de paciente com síndrome de hiperviscosidade por LMC em crise blástica
Techno
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O aparelho foi capaz de realizar os teste de tipagem ABO/RhD, PAI e IAI de amostras
nas seguintes condições:
Amostra de paciente extremamente anêmico
Techno
•
TwinStation
O aparelho apresentou reprodutibilidade uma vez que 3 paciente tiveram suas amostras
testadas em 3 baterias realizadas em diferentes dias apresentando os mesmos resultados
em todas as baterias.
•
Houve reprodutibilidade dos teste, em relação aos previamente realizados na rotina, em
amostras colhidas em diferentes datas de coleta, que variou de 1 a 7 dias.
•
9 amostras A R1r e 9 amostras O R1r foram fenotipadas para RhD para verificar a
sensibilidade do teste e todas apresentaram boa reatividade.
Techno
•
TwinStation
O tempo gasto em média para uma bateria de 36 amostras foi de 1h 8mim e o
correspondente na nossa rotina atual semi-automatizada é de 2h 30 min (não incluído IAI).
•
A vantagem do Techno sobre a rotina atual, em relação a pacientes, é que ele usa a técnica
de gel para PAI além de realizar a IAI.
•
Testes futuros devem ser feitos para pacientes que necessitem de transfusões esporádicas
com vistas a auxiliar a rotina pré-transfusional de pacientes não complicados (pré-cirúrgico).
Techno
TwinStation
Agradecimentos
Denise Rondi
Luciana Corrêa Oliveira
Techno
TwinStation
[email protected]