PARA USO DIAGNOSTICO IN VITRO SOMENTE PARA - D-Med
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PARA USO DIAGNOSTICO IN VITRO SOMENTE PARA - D-Med
MANUAL DE INSTRUÇÃO Kit ORANGE DIPSTICK® HIV 1/2 PARA USO DIAGNOSTICO IN VITRO SOMENTE PARA USO PROFISSIONAL Um Kit de Teste de Triagem Qualitativa para Detecção de Anticorpos para HIV 1/2 em Soro, Plasma ou Sangue Total Humano, Venoso ou de Punção Digital. O sachê laminado contendo as tiras de teste só deve ser aberto imediatamente antes de ser testado. PRECAUÇÕES Precauções de Segurança 1. Não comer, beber ou fumar na área de manusear amostras ou reagentes. Evitar qualquer contato com mãos, olhos ou boca durante a coleta de amostras e testes. 2. Vestir Equipamentos de Proteção Individual (EPI) apropriados tais como jalecos, luvas descartáveis e óculos de proteção quando manuseando amostras de pacientes. 3. Descartar todas as amostras e materiais utilizados nos procedimentos de teste em recipientes apropriados para descarte de material biológico. As lancetas devem ser colocadas em um recipiente apropriado resistente a punctura antes de descarte. O método recomendado de descarte de resíduos biológicos é autoclavagem por um mínimo de uma hora a uma temperatura de 121°C. Materiais descartáveis podem ser incinerados. Resíduos líquidos podem ser misturados a desinfetantes químicos apropriados. Uma solução recente de 10% de água sanitária (solução de hipoclorito de sódio a 0,5%) é recomendado por um prazo mínimo de 60 minutos de modo a assegurar completa descontaminação. ARMAZENAMENTO: Armazenar entre 8 e 30°C (46 a 86° F) USO PREVISTO O Teste ORANGE DIPSTICK™ HIV 1/2 é um teste rápido imunocromatográfico de triagem de uso único para a detecção de anticorpos do Vírus da Imunodeficiência Humana Tipos 1 e 2 (HIV 1/2) em amostras de sangue total de punção digital, sangue total venoso, soro ou plasma. O Teste ORANGE DIPSTICK™ HIV 1/2 é previsto para ser utilizado como um teste laboratorial remoto (point-of-care- test) para ajudar no diagnostico de infecção com o HIV 1 e HIV 2.Resultados reativos são evidências de exposição ao HIV 1 / 2 e pode ser usado para apoiar um diagnóstico de HIV 1 e HIV 2. Resultado não reativo no entanto, não deverá ser utilizado para excluir a infecção com o HIV 1 ou 2. RESUMO E DESCRIÇÃO Descoberta em 1983, o Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) é um retrovírus identificado como sendo o agente etiológico da Síndrome de Imunodeficiência Adquirida (AIDS) [1]. A AIDS é caracterizada por mudanças na população de células linfócitos T, que desenvolvem um papel chave no sistema imunológico. O vírus causa uma redução da subpopulação das células T – denominadas células “T-helper” – no indivíduo infectado, o que deixam estes pacientes suscetíveis a infecções oportunistas e certas doenças malignas. As principais vias de transmissão são: contato sexual direto, contaminação por sangue ou hemoderivados e a transmissão de mãe para filho no parto [2-4]. Apesar de ter ocorrido uma redução na taxa de infecção em certos paises, o número de pessoas infectadas com o HIV tem aumentado globalmente. Havia aproximadamente 40,3 milhões de pessoas vivendo com HIV/AIDS no final de 2005, o que representa um aumento comparado aos 37,5 milhões em 2003. É estimado que 5 milhões de pessoas adquiriram o HIV/AIDS em 2005. Neste mesmo ano, mais de 3 milhões de pessoas morreram devido a doenças relacionadas ao AIDS sendo que mais de 500,000 das vitimas eram crianças [5]. O HIV é constituído por uma molécula de RNA genômico, protegida por um capsídeo e um envelope. O envelope do HIV constitui o principal alvo da resposta imune humoral por anticorpos. A presença do vírus faz com que o sistema imune dos pacientes produza anticorpos anti-HIV. A detecção destes anticorpos pode ser usada como uma ferramenta de diagnóstico. Testes como ELISA, Western Blot e técnicas de PCR além de diversos outros testes são atualmente disponíveis para a detecção do HIV-1/2 [6-10]. O Teste ORANGE DIPSTICK™ HIV 1/2 é um teste imunocromatográfico rápido de uso fácil e simples. O Teste ORANGE DIPSTICK™ HIV 1/2 utiliza antígenos de alta sensibilidade e especificidade fixados para a detecção de anticorpos de HIV-1/2 em soro, plasma ou sangue total humano. PRINCÍPIO DO TESTE O Teste ORANGE DIPSTICK™ HIV 1/2 utiliza o principio de imunocromatografia e emprega uma combinação única de uma proteína específica ligada a anticorpos conjugada a partículas de ouro coloidal e antígenos de HIV-1/2 ligados a uma fase sólida (membrana). A amostra e a solução tampão são aplicadas na almofada da amostra. A solução tampão facilita o fluxo lateral da amostra através da membrana e promove a ligação dos anticorpos aos antígenos. As partículas conjugadas com o ouro migram sobre a membrana de nitrocelulose e são capturadas pelo complexo anticorpo-antígeno na área de TESTE (T) produzindo uma linha rosa / roxo. Na ausência de anticorpos de HIV 1/2 não há aparecimento de linha rosa / roxo na área de teste (T). Partículas de ouro coloidal do conjugado, não ligadas, continuam a migrar ao longo da membrana e produzem uma linha rosa / roxa na área do CONTROLE (C) contendo proteína A. Este controle serve para demonstrar que a amostra e os reagentes foram devidamente aplicados e que migraram através do dispositivo. NOTA: Não colocar soluções contendo água sanitária na autoclave. 4. Para maiores informações contatar: Orangelife Comércio e Indústria Ltda. SAC 55-21-24421349 ou [email protected] Precauções de Manuseio 1. Não utilizar dispositivos cujo invólucro estiver violado. 2. Cada dispositivo é para uso único. 3. Sempre verificar a data de validade antes de realizar o teste. 4. Não utilizar o teste após a data de validade impressa no invólucro. 5. Não misturar os reagentes de lotes de kits de números diferentes. 6. É necessária iluminação adequada para ler os resultados dos testes. COLETA DAS AMOSTRAS O teste ORANGE DIPSTICK HIV 1/2 pode ser realizado com amostras de sangue total venoso ou de punção digital, soro ou plasma. Sangue Total de Punção Digital Seguindo procedimentos normais de laboratório, puncionar a extremidade do dedo e descartar a primeira gota de sangue a surgir. Coletar a amostra da segunda gota utilizando a alça coletora fornecida. Seguir as instruções de procedimento do teste. Sangue Total Venoso Seguindo procedimentos normais de laboratório, retirar sangue venoso. Dependendo do uso previsto, transferir a amostra para um tubo contendo EDTA, heparina ou citrato de sódio. Assegurar que o tubo contendo o sangue foi bem homogeneizado antes de realizar a amostragem. Seguir as instruções de procedimento do teste. Soro ou Plasma Seguindo procedimentos normais de laboratório, transferir o soro ou plasma (EDTA) para um recipiente limpo. Seguir as instruções de procedimento do teste. As amostras de sangue dos pacientes geram melhores resultados quando testadas imediatamente após a coleta. Quando não testadas imediatamente, estas amostras devem ser refrigeradas entre 2 e 8°C (36 a 46° F) logo após a coleta, podendo ser usadas em até 3 dias após coleta. Amostras de soro ou plasma devem ser congeladas a -20°C ou menos caso os testes não sejam realizados em até 3 dias após a coleta. NÃO CONGELAR SANGUE TOTAL! NOTA: Quando precisam ser transportadas, as amostras devem ser acondicionadas conforme as normas vigentes para o transporte de agentes etiológicos. CONFIRMAÇÃO DO DESEMPENHO DO TESTE Ao término do teste, uma linha rosa/roxa aparecerá na área de CONTROLE (C) do dispositivo de teste, tanto nas amostras não reagentes (negativas) quanto nas reagentes (positivas). Esta linha serve de controle incorporado confirmando o acréscimo de amostra e o desempenho adequado do teste. Linhas rosa/roxa em ambas as áreas de TESTE (T) e CONTROLE (C) indicam uma amostra reagente (positiva). MATERIAIS FORNECIDOS Cada kit contém itens suficientes para realizar 20 testes: • 20 Tiras DIPSTICK HIV 1/2 • 1 Solução tampão HIV (8 ml) • 20 Alças Coletoras Descartáveis de 5µl • 20 Lancetas estéreis • 20 Cartões de Apoio • 1 Manual de Instrução MATERIAL COMPLEMENTAR NÃO FORNECIDO • Cronômetro ou relógio • Micropipetador calibrado para 5µl (pode ser empregado ao invés das alças coletoras descartáveis fornecidas com o kit no caso de usar amostras obtidas outras do que por punção digital) • Swab com álcool estéril (unicamente para amostras obtidas por punção digital) • Dispositivos coletores para amostras obtidas por punção venosa • Recipiente seguro para descarte de material biológico ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE As tiras de teste HIV 1/2 DIPSTICK devem ser armazenadas em um sachê laminado com desumidificador entre 8 e 30°C (46 a 86° F). Não congelar. Não utilizar após a data de validade indicada. Os dispositivos de teste permanecem estáveis até a data de validade impressa no invólucro quando devidamente armazenados. Tampão de corrida deve ser armazenado entre 8 e 30°C (46 a 86°F) nos frascos de origem. PROCEDIMENTO DO TESTE Caso tenha sido armazenada refrigerada, deixar a amostra prestes a ser testada atingir a temperatura ambiente antes de realizar o teste. 1. 2. 3. 4. 5. Abrir o sache laminado e retirar o cartão de apoio a ser executado. Digite o nome do paciente ou código de identificação no espaço marcado no cartão “IDENTIFICAÇÃO”. Retire a tira do teste DIPSTICK HIV ½ do sachê laminado. Tomando cuidado para não tocar a membrana, remova a fita adesiva que está no verso da tira de teste. Coloque a tira de teste no cartão de apoio no espaço marcado com a fita verde para cima e as setas em frente a fita na mesma direção das setas no cartão de apoio. Monte a tira de teste no cartão de apoio numa superfície limpa e plana. COLETA DE AMOSTRA A. Sangue Capilar Obtido de Punção Digital I. Seguindo o procedimento normal de laboratório, picar o dedo com uma lanceta e desprezar a primeira gota. II. Coletar a segunda gota da amostra com a alça coletora 5 µL fornecida no kit (Pule para o tópico 6.) B. Soro, Plasma, Sangue Total Obtido por punção Venosa I. Tocar a alça coletora 5 µL fornecida no kit na amostra em questão, permitindo que a alça se encha do liquido (soro, plasma ou sangue total). 6. Aplicar a amostra (soro, plasma ou sangue total) com a alça coletora 5 µL no centro da almofada de teste da tira. Assegurar que a alça esteja na posição vertical. Verter o frasco da Solução Tampão e dispensar 3 gotas (~105µ L) lentamente, gota a gota certo que cada gota foi absorvida antes de adicionar a próxima, na Al mofada da Amostra e segurar verticalmente para garantir que o volume dispensado seja o adequado. 7. Resultado Inválido: Um resultado inválido indica um problema ao realizar o teste, tanto relacionado à amostra ou ao dispositivo de teste. Repetir o teste com um dispositivo novo e/ou nova amostra. Caso os resultados inválidos persistirem, contatar Orangelife Comercio e Industria Ltda (55-21-24422327 ou [email protected]). NOTA: No caso de líquidos não começa a fluir para a membrana em 2 minutos, adicionar uma gota adicional de tampão. LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO 8. Ler o resultado do teste 15 a 20 após a adição da Solução Tampão na Almofada da Amostra. Em alguns casos a linha Teste pode aparecer em menos de 15 minutos, porém são necessários no mínimo 15 minutos para considerar o resultado não-reativo. Ler o resultado em área bem iluminada. NOTA: No caso de líquidos não começar a fluir para a membrana em 2 minutos, adicionar uma gota adicional de tampão. 1. 2. PROCEDIMENTO ALTERNATIVO (em tubo) 3. NOTA: Este procedimento requer tubos de amostra e um rack para prender dois tubos. Se a amostra a ser testada estiver refrigerada, removê-lo da geladeira e deixar voltar à temperatura ambiente antes do teste. 1. Coloque o número adequado de tubos de ensaio em um rack de tubo de ensaio. 2. Retire a tampa do frasco da solução tampão e dispense 5 gotas de solução tampão em cada tubo (~ 200 µL por tubo). 4. 5. 6. 7. 8. 3. COLETA DE AMOSTRA A. I. II. III. Sangue total obtida por punção digital Etiquete o tubo com o nome do paciente ou código de identificação. Seguindo o procedimento normal de laboratório, picar o dedo com uma lanceta e desprezar a primeira gota. Coletar a segunda gota da amostra com a alça coletora 5 µL fornecida no kit (Pule para o tópico 4.) B. Soro, Plasma e Sangue Total Venoso I. Tocar a alça coletora 5 µL fornecida no kit na amostra em questão, permitindo que a alça se encha do liquido (soro, plasma ou sangue total). 4. Colocar a amostra da alça coletora diretamente no tubo de ensaio com tampão. Agitar a solução suavemente com a alça coletora e depois removê-la e descarta-la. 5. Remova a tira do teste DIPSTICK HIV 1/2 do sachê laminado. 6. Coloque a tira de teste no tubo de ensaio, contendo a mistura amostra + tampão, com as setas voltadas para baixo. 7. Deixar a tira de teste em pé no tubo por 15 minutos. Não deixar por mais de 20 minutos. 8. Leia os resultados do teste de 15 a 20 minutos depois de colocar a tira de teste imerso na mistura amostra + tampão. Alguns resultados reativos podem aparecer em menos de 15 minutos, mas 15 minutos são necessários para considerar um resultado não reativo. Não considerar a leitura após 20 minutos. NOTA: Descartar a alça coletora utilizada, tubo de ensaio e luvas em um recipiente de resíduos de risco biológico. 9. 10. O kit de teste ORANGE DIPSTICK HIV 1/2 deve somente ser utilizado com sangue total venoso ou de punção digital, soro ou plasma. Outros tipos de amostra ou testes com amostras de sangue total por venipuntura coletados em tubos contendo anti-coagulantes outros que citratos, heparina ou EDTA podem gerar resultados falhos. O sangue para amostras de soro deve ser coletado sem anti-coagulantes. O teste ORANGE DIPSTICK HIV 1/2 deve ser utilizado de acordo com as instruções contidas neste Manual de Instrução de modo a obter resultados precisos. O acréscimo de mais do que três gotas de Tampão de Corrida à amostra de sangue pode acarretar a formação de uma linha vermelha na base da janela e deve ser evitado. A leitura do resultado do teste antes dos 15 minutos previstos ou após 20 minutos poderá fornecer resultados falhos. Não utilizar os conteúdos dos testes após a data de validade que consta no rotulo. Assegurar que a extremidade do dedo selecionado para a coleta de amostra se encontra completamente limpa e seca antes de prosseguir com a punção digital. Ler os resultados em um local bem iluminado. Um resultado reagente (positivo) mostrado no teste ORANGE DIPSTICK HIV 1/2 sugere a presença de anticorpos para o HIV-1 ou HIV-2 na amostra. O teste ORANGE DIPSTICK HIV ½ é previsto para apoiar o diagnostico de infecção com o HIV-1/2. Um resultado não reagente (negativo) não exclui a possibilidade de exposição ou infecção por o HIV. Uma resposta imunológica à uma exposição recente pode levar alguns meses até atingir níveis detectáveis. Um paciente infectado com o HIV-1 ou HIV-2 e recebendo Terapia Antiretroviral de Alta Potência pode gerar resultados falso-negativos. RESULTADOS PREVISTOS O teste ORANGE DIPSTICK HIV ½ é um teste de triagem qualitativa para detecção de anticorpos para HIV 1/2 em Soro, Plasma ou Sangue Total. Conforme descrito na seção CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO abaixo, a sensibilidade deste teste foi demonstrada ser substancialmente equivalente aos testes ELISA ou Western Blot quando testados com seletos painéis de desempenho. CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO Os dados de desempenho foram obtidos em três estudos externos usando o procedimento de teste alternativo em um tubo. Em uma avaliação com 770 amostras da Organização Mundial da Saúde (OMS), a sensibilidade final foi de 99,0% e especificidade foi de 100% em comparação com os ensaios de referência. Neste estudo, nenhum dos resultados foi registrado como indeterminado. Avaliações com 236 amostras da Zâmbia (125 reativas / 111 não reativos) e com 503 amostras da Uganda (90 reativos / 413 não reativos) ambos resultaram em 100% de sensibilidade e especificidade de 100% para o teste ORANGE DIPSTICK HIV ½. PRECISÃO Intraensaio A precisão intra-corrida foi determinada utilizando 10 duplicatas de duas amostras contendo diferentes níveis de anticorpos do HIV 1/2. Os resultados reagentes e não reagentes foram identificados corretamente 100% das vezes. Interensaio A precisão inter-corrida foi determinada utilizando as duas mesmas amostras em 10 duplicatas diferentes com três lotes diferentes de dispositivos de teste. Novamente, Os resultados reagentes e não reagentes foram identificados 100% das vezes. CONTROLE DE QUALIDADE Modo de Controle Incorporado Uma linha rosa/roxa aparece na área de CONTROLE (C) quando o teste for corretamente realizado e o dispositivo de teste estiver funcionando devidamente. Esta linha serve de controle procedimental incorporado. INTERPRETAÇÃO DE RESULTADOS Resultados Não reagentes Resultado Não reagente: Uma linha rosa/roxa na área de CONTROLE (C) e nenhuma linha na área de TESTE (T) indica um resultado não reagente (negativo). Um resultado não reagente após 15 minutos significa que não existem anticorpos para o HIV detectáveis na amostra. No entanto, um resultado não reagente não exclui a possibilidade de infecção por HIV. Resultados Reagentes Resultado Reagente: Linhas rosa/roxa ambas nas áreas de TESTE (T) e de CONTROLE (C) indica um resultado reagente (positivo). A linha na área de TESTE (T) pode parecer diferente da linha na área de CONTROLE (C). NOTA: A intensidade das linhas na área de TESTE (T) e na área de CONTROLE (C) pode variar de acordo com a concentração de anticorpos específicos, de pouco visível à muito escuro. No entanto, se qualquer linha for visível na área de TESTE (T) e na área de CONTROLE (C), o resultado é reagente (positivo). Mesmo uma linha muito tênue na área teste deve ser considerada reativa. Recomenda-se que um resultado reativo seja confirmado pelo western blot e IFI, em conformidade com as recomendações do MS. Resultados Inválidos Reatividade Cruzada e Interferência Não foi detectada nenhuma reatividade cruzada do teste ORANGE DIPSTICK HIV1/2 com Hepatite B, Fator Reumatóide (~80UI/mL) e hCG (~500UI/mL). Além disto, não foi observada nenhuma interferência com bilirrubina, hemoglobina ou triglicerídeos. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Essex, M. (1999) Human immunodeficiency viruses in the developing world. Adv Virus Res 53 : 71-88. 2. Kanki, P.J., Hopper, J.R. e Essex, M. (1987) The origins of HIV-1 and HTLV-4/HIV/2. Ann N Y Acad Sci 511 : 370-375. 3. Nicoll, A., Gill, O.N. (1999) The global impact of HIV infection and disease. Commun Dis Publ Health 2 : 85-95. 4. Valdiserri R.O., Holtgrave, D.R., West, G.R. (1999) Promoting early diagnosis and entry into care. AIDS 13 : 2317-2330. 5. UNAIDS / WHO Press Release (2005) HIV Infection Rates Decreasing in Several Countries but Globally Number of People Living with HIV Continue to Rise. Disponivel em: www.unaids.org/epi/2005/doc/docs/PR EpiUpData:Nov05en.pdf: 1-3. 6. Essex, M., Kanki, P. J., Marlink, R., et al. (1990) Antigenic characterization of the human immunodeficiency viruses. J Am Acad Dermatol 22 : 1206-1210. 7. Essex, M., McLane, M.F., Lee, T.H. et al. (1983) Antibodies to cell membrane antigens associated with human T-cell leukemia virus in patients with AIDS. Science 220 : 859-862. 8. Gallo, R.C., Saluahuddin, S.Z., Popovic, M., et al. (1984) Frequent detection and isolation of cytopathic retroviruses (HTLV-III) from patients with AIDS and at risk for AIDS. Science 224 : 500-503. 9. Kenealy, W., Reed, D., Cybulsky, R., et al. (1987) Analysis of human serum antibodies to human immunodeficiency virus (HIV) using recombinant ENV and GAG antigens. AIDS Res Human Retrovir 3 : 95-105. 10. Kovacs, A., Xu, J., Rasheed, S., et al. (1995) Comparison of a rapid non-isotopic polymerase chain reaction assay with four commonly used methods for the early diagnosis of human Immunodeficiency Virus type 1 infection in neonates and children. Pediatr Infect Dis J 14 : 948-954. 11. Centers for Disease Control (CDC): UpData:d U.S. Public Health Service Guidelines for the Management of Occupational Exposures to HIV and Recommendations for Postexposure Prophylaxis. MMWR 2005; 54(RR09): 1-17. Identificação do Paciente 1 8 SORO, PLASMA OU SANGUE TOTAL VENOSO 2 3 9 4 5 COLETA DE AMOSTRA SANGUE TOTAL POR PUNÇÃO DIGITAL 10 6 11 7 15 Minutos... PROCEDIMENTO ALTERNATIVO (NO TUBO) 15 Minutos... Resultados 1 SANGUE TOTAL OU PLASMA 2 Reativo Não Reativo Inválido Inválido 3 Fabricado por: ORANGELIFE COMÉRCIO E INDÚSTRIA LTDA Distribuido por: 4 5 Dmed Material Médico Laboratorial LTDA. Rua Vaz da Costa 103 - Inhauma CEP: 20760-510 Rio de Janeiro Tels.: (21)2289.8089 / 2597.9021 Fax.: (21)2592.9161 E-mail: [email protected] www.dmed.com.br