Bilirrubina Directa

Bilirrubina Directa
AA
C
Método DPD para a determinação de bilirrubina direta
em soro ou plasma
SIGNIFICADO CLÍNICO
A bilirrubina, composto produzido pela degradação da hemoglobina, é captado pelo fígado para sua conjugação e
excreção biliar. As alterações hepatocelulares e obstruções
biliares podem provocar hiperbilirrubinemias.
A eritroblastose fetal ou anemia hemolítica do recém nascido
é uma patologia provocada pela incompatibilidade maternofetal. Nestas patologias se produz a destruição massiva de
glóbulos vermelhos que resulta num considerável aumento
da bilirrubina sérica com o conseqüente risco de espalharse o pigmento ao sistema nervoso central. Por tal motivo,
a determinação da bilirrubina no recém nascido, resulta
muito importante.
FUNDAMENTOS DO MÉTODO
A bilirrubina direta reage com o sal de diclorofenildiazonio
(DPD) produzindo um azo composto cor vermelho em
solução ácida.
REAGENTES FORNECIDOS
A. Reagente A: frascos contendo sal de diclorofenildiazonio.
B. Reagente B: solução aquosa contendo ácido sulfámico
90 mmol/l.
C. Reagente C (Reagente para Branco de Amostra): solução
aquosa contendo ácido sulfámico 90 mmol/l.
Concentrações finais
ácido sulfámico..................................................... 90 mmol/l
cloreto de sódio..........................................................6,6 g/l
diclorofenildiazonio.............................................. 0,1 mmol/l
REAGENTES NÃO FORNECIDOS
Calibrador A plus da Wiener lab.
INSTRUÇÕES DE USO
Reagentes B y C: prontos para uso.
Reagente de Trabalho: reconstituir cada frasco de Reagente A com 10 ml de Reagente B. Tampar e agitar até dissolução
completa. Homogeneizar e datar.
PRECAUÇÕES
Os reagentes são para uso diagnóstico "in vitro".
Os Reagentes B e C são corrosivos. R36/38: irrita os olhos
e a pele. S24/25: evitar o contato com os olhos e a pele.
S26: caso de contato com a pele, lavar imediatamente com
abundante água e acudir ao médico. S37: utilizar luvas
apropriadas.
Utilizar os reagentes observando as precauções habituais
de trabalho no laboratório de análises clínicas.
Todos os reagentes e as amostras devem ser descartadas
conforme à regulação local vigente.
INDÍCIOS DE INSTABILIDADE OU DETERIORAMENTO
DOS REAGENTES
Leituras do Branco de Reagentes por acima de 0,100 D.O. a
546 nm, indicam deterioramento dos reagentes. Descartálos.
A turbidez indica deterioramento dos reagentes. Neste caso,
descartá-los.
ESTABILIDADE E INSTRUÇÕES DE
ARMAZENAMENTO
Reagentes Fornecidos: são estáveis sob refrigeração (210oC) até a data do vencimento indicada na embalagem.
Reagente de Trabalho: estável 21 dias sob refrigeração
(2-10oC).
AMOSTRA
Soro ou plasma
a) Coleta: obter a amostra da maneira habitual. Manter
protegido da luz natural ou artificial, cobrindo o tubo com
papel escuro.
b) Aditivos: caso de que a amostra seja plasma, deve-se
utilizar heparina para sua obtenção.
c) Substâncias interferentes conhecidas: não se observam interferências por hemoglobina até 180 mg/dl, triglicerídeos até 550 mg/dl (5,50 g/l), nem heparina até 20 U/ml.
Referência bibliográfica de Young para efeitos de drogas
neste método.
d) Estabilidade e instruções de armazenamento: a amostra deve ser preferencialmente fresca. Caso de não realizarse o ensaio na hora, a amostra deve ser conservarda até
48 horas sob refrigeração (2-10oC) e o sangue inteira, não
mais de 24 horas sob refrigeração (2-10oC) ou 12 horas a
temperatura ambiente (menor a 25oC).
A ação da luz pode destruir em uma hora até 50% da
bilirrubina presente na amostra. Por tal motivo deve-se
proteger da luz.
MATERIAL NECESSÁRIO (não fornecido)
- Espectrofotômetro ou fotocolorímetro
- Micropipetas ou pipetas para medir os volumes indicados
- Tubos ou cubetas espectrofotométricas
- Cronômetro
CONDIÇÕES DE REAÇÃO
- Comprimento de onda: 546 nm em espectrofotômetro ou
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520-550 nm em fotocolorímetro com filtro verde.
- Temperatura de reação: temperatura ambiente (menor a
25oC)
- Tempo de reação: 10 minutos
- Volume de amostra: 40 ul
- Volume final de reação: 0,54 ml
PROCEDIMENTO
Em 4 tubos marcados BC (Branco de Calibrador), C
(Calibrador), BD (Branco de Desconhecido) e D (Desconhecido), colocar:
BC
C
BD
D
Reagente C
0,5 ml
-
0,5 ml
-
Reagente B
-
0,4 ml
-
0,4 ml
Calibrador
40 ul
40 ul
-
-
-
40 ul
40 ul
0,1 ml
-
0,1 ml
Amostra
-
Reagente de Trabalho -
Misturar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente
(menor a 25oC). Ler em espectrofotômetro a 546 nm ou
em fotocolorímetro com filtro verde (520-550 nm) levando
o aparelho a zero com o Branco de Reagente (BR).
Podem-se aumentar proporcionalmente os volumes.
Nota: processar um Branco de Reagente (BR) por cada
série de determinações misturando 0,4 ml de Reagente
B + 40 ul de água destilada + 0,1 ml de Reagente de
Trabalho.
ESTABILIDADE DA MISTURA DE REAÇÃO FINAL
A absorbância deve ser lida aos 10 minutos exatos.
MÉTODO DE CONTROLE DE QUALIDADE
Processar 2 níveis de um material de controle de qualidade
(Standatrol S-E 2 niveles) com concentrações conhecidas
de bilirrubina direta, com cada determinação.
VALORES DE REFERÊNCIA
Bilirrubina direta em soro ou plasma
Adultos: até 2 mg/l
Recomenda-se que cada laboratório estabeleça seus próprios valores de referência.
CONVERSÃO DE UNIDADES
Bilirrubina (mg/l) = Bilirrubina (mg/dl) x 10
Bilirrubina (mg/dl) x 17,1 = Bilirrubina (umol/l)
LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
Vide Substâncias interferentes conhecidas em AMOSTRA.
A ação da luz sobre as amostras e soluções padrão, pode
destruir em 1 hora até o 50% da bilirrubina presente.
DESEMPENHO
Os ensaios foram realizados em analisador automático
Express Plus(*). Se se utiliza o procedimento manual, devese validar que seja obtida uma performance semelhante à
seguinte:
a) Reprodutibilidade: aplicando o protocolo EP5-A do CLSI
(ex NCCLS), obtiveram-se os seguintes dados:
Precisão intra-ensaio
Nível
1,4 mg/l
18,0 mg/l
D.P.
± 0,05 mg/l
± 0,24 mg/l
C.V.
4,03 %
1,33 %
D.P.
± 0,06 mg/l
± 0,36 mg/l
C.V.
5,09 %
2,00 %
Precisião total
Nível
1,4 mg/l
18,0 mg/l
CÁLCULO DOS RESULTADOS
Bilirrubina direta (mg/l) = (D - BD) x f
onde:
X* mg/l
f=
C - BC
* concentração de bilirrubina direta no Calibrador A plus
da Wiener lab.
Exemplo:
BC = 0,008
C = 0,135
BD = 0,009
D = 0,029
X = 23,9 mg/l
23,9 mg/l
f =
= 188,2 mg/l
0,135 - 0,008
Bilirrubina direta (mg/l) = (0,029 - 0,009) x 188,2 = 3,8 mg/l
Também pode-se utilizar o fator colorimétrico (f) calculado,
empregando Bilirrubina Standard da Wiener lab. na técnica
de Bilirrubina Total AA da Wiener lab. (método DPD).
b) Linearidade: aplicando o protocolor EP6-P obteve-se
uma linearidade de 140 mg/l. Para valores superiores repetir a determinação com amostra diluída 1:2 ou 1:4 com
solução fisiológica e multiplicar o resultado obtido por 2 ou
4 respectivamente.
c) Sensibilidade analítica: 1,1 mg/l.
PARÂMETROS PARA ANALISADORES AUTOMÁTICOS
Para a programação consultar o manual de uso do analisador
a ser utilizado.
Para a calibração deve-se utilizar Calibrador A plus da
Wiener lab.
O kit fornece Reagente para Branco de Amostra (Reagente
C) que somente é necessário em alguns analisadores automáticos. No resto dos analisadores este Reagente não é
necessário.
Para obter maior informação deve-se consultar o manual de adaptações de Reagentes Wiener lab. do seu
analisador.
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APRESENTAÇÃO
- 4 frascos Reagente A
- 4 x 10 ml Reagente B
- 4 x 40 ml Reagente C
Cód. 1009306
SÍMBOLOS
Os seguintes símbolos são utilizados nos kits de reagentes
para diagnóstico da Wiener lab.
C
- 4 frascos Reagente A
- 4 x 50 ml Reagente B
- 2 x 100 ml Reagente C
Cód. 1120006
Este produto preenche os requisitos da Diretiva Européia
98/79 CE para dispositivos médicos de diagnóstico "in
vitro"
P Representante autorizado na Comunidade Européia
REFERÊNCIAS
- Bartels, H. and Boehmer, M. - Z. Klin. Chem. Klin. Biochem.
(1971).
- Colombo, J.; Peheim, E.; Kyburz, S. and Hoffman - Clin.
Chim. Acta 51/2:217 (1974).
- Botwell, J. H. - Clin. Chem. 10/3:197 (1964).
- Watson, D. - Clin. Chem. 7/6:603 (1961).
- Ichida, T. and Nobuoka, M. - Clin. Chim. Acta 19/2:249
(1968).
- Rand and Di Pascua - Clin. Chem. 8/6 (1962).
- Zaroda, R. - Am. J. Clin. Path. 45/1:70 (1996).
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
AACC Press, 3rd ed. (1990).
- Tietz Textbook of Clinical Chemistry - Saunders Co., 3rd
ed. (1999).
- CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute (ex-NCCLS). Document “Evaluation of the Linearity of Quantitative
Analytical Methods“, EP6-P (1986).
- CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute (exNCCLS). Document “Evaluation of Precision Performance
of Clinical Laboratory Devices“, EP5-A (1999).
V
Uso médico-diagnóstico "in vitro"
X
Conteúdo suficiente para <n> testes
H
Data de validade
l
Limite de temperatura (conservar a)

Não congelar
F
Risco biológico
Volume após da reconstituição
Cont.
Conteúdo
g
Número de lote
M
Elaborado por:
Xn
Nocivo
Corrosivo / Caústico
Xi
i
Calibr.
b
b
c
h
Irritante
Consultar as instruções de uso
Calibrador
Controle
Controle Positivo
Controle Negativo
Número de catálogo
Wiener lab.
2000 Rosario - Argentina
870190000 / 01 p. 6/6
UR160223