Direct Androstenedione

Transcrição

®
Coat-A-Count
English
Intended Use: Coat-A-Count Direct
125
Androstenedione is a solid phase I
radioimmunoassay designed for the
4
quantitative measurement of Δ androstenedione in serum and EDTA or
heparinized plasma. It is intended strictly
for in vitro diagnostic use.
sample. The quantity of androstenedione
in the sample is determined by comparing
the counts to a calibration curve.
No Extraction: Androstenedione
determinations by the Coat-A-Count Direct
Androstenedione method require neither
extraction nor chromatography.
Reagents to Pipet: 1
Total Incubation Time: 2 Hours.
Catalog Numbers: TKAN1 (100 tubes).
Total Counts at Iodination:
approximately 90,000 cpm.
The 100-tube kit contains less
than 6.5 microcuries
(241 kilobecquerels) of
125
radioactive I androstenedione.
Warnings and Precautions
Summary and Explanation
4
Δ -Androstenedione is a steroid which
serves as a major precursor for
testosterone and estrone. Its clinical
interest derives from the fact that it is often
elevated in cases of abnormal hair growth
(hirsutism) and virilization.
Unlike the adrenal androgens
dehydroepiandrosterone and its sulfate,
circulating androstenedione originates
both from the adrenals and from the
ovaries. Plasma levels increase steadily
from about the seventh year of life, then
gradually decline after the third decade.
Androstenedione exhibits a diurnal
variation, being highest in the morning,
and also a cyclical variation during the
menstrual cycle, being highest near
midcycle. During pregnancy, there is an
increase in the plasma level.
Principle of the Procedure
The Coat-A-Count Direct Androstenedione
procedure is a competitive immunoassay
based on antibody-coated tubes.
125
I-labeled androstenedione competes
with androstenedione in the patient
sample for antibody sites. After incubation,
separation of bound from free is achieved
by decanting. The tube is then counted in
a gamma counter, the counts being
inversely related to the amount of
androstenedione present in the patient
2
For in vitro diagnostic use.
Reagents: Store at 2–8°C in a refrigerator
designated for incoming radioactive
materials. Dispose of in accordance with
applicable laws.
Do not use reagents beyond their
expiration dates.
Some components supplied in this kit may
contain human source material and/or
other potentially hazardous ingredients
which necessitate certain precautions.
Follow universal precautions, and handle
all components as if capable of
transmitting infectious agents. Source
materials derived from human blood were
tested and found nonreactive for syphilis;
for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis
B surface antigen; and for antibodies to
hepatitis C.
Sodium azide, at concentrations less than
0.1 g/dL, has been added as a
preservative. On disposal, flush with large
volumes of water to prevent the buildup of
potentially explosive metal azides in lead
and copper plumbing.
Water: Use distilled or deionized water.
Radioactivity
A copy of any radioisotope license
certificate (Specific or General) issued to a
US customer must be on file with Siemens
Healthcare Diagnostics before kits or
components containing radioactive
material can be shipped. These
radioactive materials may be acquired by
Coat-A-Count Direct Androstenedione (PITKAN-11, 2010-10-22)
any customer with the appropriate Specific
license. Under a General license these
radioactive materials may be acquired
only by physicians, veterinarians in the
practice of veterinary medicine, clinical
laboratories and hospitals — and strictly
for in vitro clinical or laboratory tests not
involving external or internal
administration of the radioactive material
or its radiation to human beings or other
animals. Its acquisition, receipt, storage,
use, transfer and disposal are all subject
to the regulations and a (General or
Specific) license of the U.S. Nuclear
Regulatory Commission or a State with
which the NRC has entered into an
agreement for the exercise of regulatory
control.
Handle radioactive materials according to
the requirements of your General or
Specific license. To minimize exposure to
radiation, the user should adhere to
guidelines set forth in the National Bureau
of Standards publication on the Safe
Handling of Radioactive Materials
(Handbook No. 92, issued March 9, 1964)
and in subsequent publications issued by
State and Federal authorities.
Wipe up spills promptly and
decontaminate affected surfaces. Avoid
generation of aerosols. Dispose of solid
radioactive waste according to license
requirements. General licensees (holders
of NRC Form 483) may dispose of solid
radioactive waste as nonradioactive
waste, after removing labeling. Specific
licensees (NRC Form 313) should refer to
Title 10, Code of Federal Regulations,
Part 20. Licensees in Agreement States
should refer to the appropriate regulations
of their own state. General licensees may
dispose of liquid radioactive waste of the
type contained in this product through a
laboratory sink drain. Licensees must
remove or deface labels from empty
containers of radioactive materials before
disposal of solid waste. Specific licensees
may dispose of small quantities of liquid
radioactive waste of the type used in this
product through a laboratory sink drain.
Refer to the appropriate regulations
applicable to your laboratory.
Materials Supplied:
Initial Preparation
Direct Androstenedione Ab-Coated
Tubes (TAN1)
Polypropylene tubes coated with rabbit
polyclonal antibodies to androstenedione
and packaged in zip-lock bags. Store
refrigerated and protected from moisture,
carefully resealing the bags after opening.
Stable at 2–8°C until the expiration date
marked on the bag.
Color: fluorescent orange.
TKAN1: 100 tubes.
125
I Direct Androstenedione (TAN2)
105 mL of Iodinated androstenedione,
with preservative. Stable at 2–8°C for
30 days after opening, or until the
expiration date marked on the vial.
TKAN1: 1 vial.
Direct Androstenedione Calibrators
(TAN3–8)
Six vials, labeled A through F, containing
different concentrations of
androstenedione in a human serum-based
matrix, with preservative. The zero
calibrator A contains 5 mL, and the
remaining calibrators B through F contain
2 mL each. Stable at 2–8°C for 30 days
after opening, or for 6 months (aliquotted)
at –20°C.
TKAN1: 1 set.
The nonzero calibrators represent,
respectively, 0.15, 0.4, 1.5, 4.0 and
10 nanograms of androstenedione per
milliliter (ng/mL); equivalently, 0.52, 1.4,
5.2, 14 and 35 nanomoles per liter
(nmol/L). Intermediate calibration points
may be obtained by mixing the calibrators
in suitable proportions.
Direct Androstenedione Controls
(TANC1–2)
2 vials (2 mL each) of Direct
Androstenedione Control 1 and 2,
containing different concentrations of
androstenedione in processed human
serum, with preservatives. Stable at 2–
8°C for 30 days after opening, or for
6 months (aliquotted) at –20°C. Refer to
Direct Androstenedione control insert for
the respective concentrations.
TKAN1: 1 set.
3
Materials Required But Not
Provided
specimens by heating them in a
waterbath.
Gamma counter — compatible with
standard 12x75 mm tubes
Radioimmunoassay Procedure
Vortex mixer
Radioimmunoassay
Plain 12x75 mm polypropylene tubes —
for use as Total Counts and NSB tubes,
available from Siemens Healthcare
Diagnostics (catalog number: PPO)
All components must be at room
temperature (15–28°C) before use.
1
Because nonspecific binding in the
Coat-A-Count procedure is
characteristically low, the NSB tubes
may be safely omitted without
compromising accuracy or quality
control.
Micropipets with disposable tips: 100 µL
and 1.0 mL.
Foam decanting rack — available from
Siemens Healthcare Diagnostics (catalog
number: FDR)
Logit-log graph paper
Specimen Collection
The patient need not be fasting, and no
special preparations are necessary.
16
Collect blood by venipuncture into plain
tubes, noting the time of collection, and
separate the serum from the cells.
Heparinized and EDTA plasma are also
suitable.
Plain Tubes: Label four plain
(uncoated) 12x75 mm polypropylene
tubes T (total counts) and NSB
(nonspecific binding) in duplicate.
Coated Tubes: Label twelve Direct
Androstenedione Ab-Coated Tubes A
(maximum binding) and B through F in
duplicate. Label additional antibodycoated tubes, also in duplicate, for
controls and patient samples.
Calibrators
ng/mL
A (MB)
0
0
B
0.15
0.52
Icteric or grossly contaminated samples
may give erroneous results.
C
0.4
1.4
D
1.5
5.2
The use of an ultracentrifuge is
recommended to clear lipemic samples.
E
4.0
14
F
10
35
Hemolyzed samples may indicate
mistreatment of a specimen before receipt
by the laboratory; hence the results should
be interpreted with caution.
2
Blood collection tubes from different
manufacturers may yield differing values,
depending on materials and additives,
including gel or physical barriers, clot
activators and/or anticoagulants. Coat-ACount Direct Androstenedione has not
been tested with all possible variations of
tube types. Consult the section on
Alternate Sample Types for details on
tubes that have been tested.
Before assay, allow the samples to come
to room temperature (15–28°C) and mix
by gentle swirling or inversion. Aliquot, if
necessary, to avoid repeated thawing and
freezing. Do not attempt to thaw frozen
4
Pipet 100 µL of the zero calibrator A
into the NSB and A tubes, and 100 µL
of each nonzero calibrator into the
tubes marked B through F. Pipet
100 µL of each control and patient
sample into the tubes prepared. Pipet
directly to the bottom.
It is good practice to use a disposabletip micropipet, changing the tip
between samples, in order to avoid
carryover contamination.
Patient samples expected to contain
androstenedione concentrations
greater than the highest calibrator
(10 ng/mL) should be diluted in the
zero calibrator before assay.
Volume Required: 100 µL of serum or
plasma per tube
Storage: 2–8°C for 2 days, or for up to
2 months frozen at –20°C.
nmol/L
3
125
Add 1.0 mL of I Direct
Androstenedione to every tube.
Vortex.
No more than 10 minutes should
elapse during the dispensing of the
tracer. Set the T tubes aside for
counting at step 6; they require no
further processing.
calibration points. We also recommend
keeping track of these data reduction
parameters:
4
Incubate for 2 hours at room
temperature (15–28°C).
T = Total Counts (as counts per minute)
5
Decant thoroughly.
Removing all visible moisture will
greatly enhance precision. Using a
foam decanting rack, decant the
contents of all tubes (except the T
tubes) and allow them to drain for 2 or
3 minutes. Then strike the tubes
sharply on absorbent paper to shake
off all residual droplets.
6
Count for 1 minute in a gamma
counter.
Calculation of Results
To obtain results in terms of concentration
from a logit-log representation of the
calibration curve, first calculate for each
pair of tubes the average NSB-corrected
counts per minute:
Net Counts = (Average CPM) minus (Average
NSB CPM)
Then determine the binding of each pair of
tubes as a percent of maximum binding
(MB), with the NSB-corrected counts of
the A tubes taken as 100%:
Percent Bound = (Net Counts / Net MB Counts)
× 100
The calculation can be simplified by
omitting the correction for nonspecific
binding; samples within range of the
calibrators yield virtually the same results
when Percent Bound is calculated directly
from Average CPM.)
Using logit-log graph paper, plot Percent
Bound on the vertical (probability) axis
against Concentration on the horizontal
(logarithmic) axis for each of the nonzero
calibrators, and draw a straight line
approximating the path of these points.
Results for the unknowns may then be
read from the line by interpolation.
It is good practice to inspect results for
agreement within replicates, and to
construct a graph of the calibration curve
(even if the calculations are handled by
computer) as a visual check on the
appropriateness of the transformation
used and as a way to detect deviant
%NSB = 100 × (Average NSB Counts / Total
Counts)
%MB = 100 × (Net Counts / Total Counts)
And the 20, 50 and 80 percent
"intercepts," where
20% = Concentration at 20 Percent Bound, etc.
Note that other approaches, e.g. a sound
implementation of the 4-parameter logistic,
are also acceptable. See Dudley RA, et al.
Guidelines for immunoassay data
reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71.
Example Run: For illustration only, not for
calculating results from another run. (See
“Example Run” table.)
Quality Control
Controls (or serum pools) with at least two
androstenedione concentration levels —
low and high — should routinely be
assayed as unknowns. The Direct
Androstenedione Controls supplied with
the kit should be used as quality control
material to monitor assay performance.
Report patient results only if the control
results for that assay meet your
laboratory's established criteria for
acceptability.
It is good laboratory practice to record for
each assay the lot numbers of the
components used, as well as the dates
when they were first reconstituted or
opened. We also recommend charting
control results from day to day — as
described, for example, in Westgard JO,
et al. A multi-rule chart for quality control.
Clin Chem 1981;27:493-501. Note that
repeat samples can serve as a valuable
additional tool for monitoring interassay
precision, and that pairs of control tubes
can be spaced throughout the assay to
help verify the absence of significant drift.
Expected Values
Males: A reference range study was
performed on serum samples using the
Coat-A-Count Direct Androstenedione
procedure. The study included 124 males.
The results showed a central 95% range
5
of approximately 0.8 to 3.0 ng/mL, with a
median of 1.8 ng/mL.
Calibration Range: 0.15 to 10 ng/mL
(0.52 to 35 nmol/L).
Females: In a study of 122 women, the
results showed a central 95% range of
approximately 0.5 to 3.7 ng/mL, with a
median of 1.7 ng/mL.
Analytical Sensitivity: 0.04 ng/mL
(0.14 nmol/L).
Laboratories should consider these results
as guidelines only. Each laboratory should
establish its own reference ranges.
Limitations
The growing graafian follicle secretes
androstenedione, and a two-fold increase
in its production occurs near the midcycle.
Specimens drawn during this time may
therefore yield androstenedione results
which fall above the upper central 95%
1,2
limit.
Diurnal variation has been observed. For
example, in 11 healthy men 18 to 30 years
of age, the mean 24-hour
androstenedione concentration was
0.93 ng/mL, with a circadian amplitude
equaling 42% of the mean. The major
acrophase occurred in the morning at
07:10 hours; the major nadir occurred in
the evening at 23:00; and there was a
secondary acrophase at 16:35. The 95%
confidence interval for acrophase/nadir
13
was 68 minutes. Accordingly, the time of
collection should be noted.
It should be remembered that exercise
can have a significant impact on
circulating androstenedione levels. Thus,
in a study of 18 professional soccer
players, the mean androstenedione
concentration increased from a baseline of
approximately 0.9 ng/mL to 1.8 ng/mL at
end of game, declining to 0.7 ng/mL ninety
14
minutes afterwards. In another study, the
mean androstenedione level for 20
moderately trained men increased
significantly, from a baseline mean of
1.11 ng/mL, to 1.41 ng/mL five minutes
15
after a one-hour swim.
Performance Data
See Tables and Graphs for data
representative of the Coat-A-Count Direct
Androstenedione kit's performance.
Except as noted, all results in the sections
below were obtained on serum samples.
Results are expressed as ng/mL.
Conversion Factor:
ng/mL × 3.4916 → nmol/L
6
Intraassay Precision (Within-Run):
Statistics were calculated for samples
from the results of 20 pairs of tubes in a
single assay. (See “Intraassay Precision”
table.)
Interassay Precision (Run-to-Run):
Statistics were calculated for samples
from the results of pairs of tubes in 20
different assays. (See “Interassay
Precision” table.)
Specificity: The Coat-A-Count Direct
Androstenedione antiserum is highly
specific for androstenedione, with an
extremely low crossreactivity to other
naturally occurring steroids or therapeutic
drugs that may be present in patient
samples. (See “Specificity” table.)
Linearity: Samples were assayed under
various dilutions. (See "Linearity" table for
representative data.)
End-of-Run Effect: None up to
approximately 400 tubes. (See "End-ofRun Effect" table.)
Recovery: Samples spiked 1 to 19 with
five androstenedione solutions (4, 10, 20,
40 and 100 ng/mL) were assayed. (See
"Recovery" table for representative data.)
Bilirubin: May cause a depression of
values. (See “Bilirubin” Table.)
Hemolysis: Presence of packed red blood
cells in concentrations up to 30 µL/mL has
no effect on results, within the precision of
the assay.
Lipemia: May interfere with the assay.
(See “Lipemia” Table.)
Alternate Sample Type: To assess the
effect of alternate sample types, blood
was collected from 40 volunteers into
plain, heparinized, EDTA and Becton
®
Dickinson SST vacutainer tubes. All
samples were assayed by the
Coat-A-Count Direct Androstenedione
procedure.
(Heparin) = 0.95 (Serum) + 0.02 ng/mL
r = 0.997
(EDTA) = 1.02 (Serum) – 0.01 ng/mL
r = 0.997
(SST) = 1.00 (Plain Tubes) – 0.15 ng/mL
r = 0.996
Means:
4.1 ng/mL (Serum)
3.9 ng/mL (Heparin)
4.2 ng/mL (EDTA)
3.9 ng/mL (SST)
The results show that serum and both
EDTA and heparinized plasma yield
essentially equivalent results.
Method Comparison 1: Sixty patient
samples were simultaneously assayed by
the Coat-A-Count Direct Androstenedione
procedure and Coat-A-Count
Androstenedione kit (extraction method),
with androstenedione concentrations
ranging from 0.25 to approximately 11
ng/mL. By linear regression. (See “Method
Comparison 1” graph.)
(CAC Direct) =
0.81 (CAC Extraction) + 0.39 ng/mL
r = 0.952
Means:
2.5 ng/mL (Coat-A-Count Direct)
2.6 ng/mL (Coat-A-Count Extraction)
Method Comparison 2: In another
experiment, thirty-eight patient samples
were assayed by the Coat-A-Count Direct
Androstenedione procedure and a
commercially available direct coated tube
radioimmunoassay for androstenedione
(Kit A), with androstenedione
concentrations ranging from approximately
0.74 to 3.48 ng/mL. By linear regression.
(See “Method Comparison 2” graph.)
(CAC Direct) = 1.33 (Kit A) + 0.054 ng/mL
r = 0.860
Means:
2.2 ng/mL (Coat-A-Count Direct)
1.6 ng/mL (Kit A)
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contribution to peripheral androgens during the
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Committee for Clinical Laboratory Standards.
Procedures for the collection of diagnostic blood
specimens by venipuncture; approved standard.
4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA:
NCCLS, 1998.
Technical Assistance
In the United States, contact Siemens
Healthcare Diagnostics Technical
Services department. Tel: 877.229.3711.
To place an order: Tel: 800.255.3232.
Outside the United States, contact your
National Distributor.
www.siemens.com/diagnostics
The Quality System of Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. is certified to ISO 13485:2003.
7
Interassay Precision (ng/mL)
Tables and Graphs
Mean1
1
0.27
0.04
14.8%
0.32
0.05
15.6%
3
0.87
0.09
10.3%
4
1.0
0.07
7.0%
5
1.7
0.07
4.1%
88,644
6
2.7
0.15
5.6%
780
7
4.7
0.22
4.7%
8
7.0
0.34
4.9%
Duplicate Average Net Percent
Tube1 CPM2
CPM3
CPM4 Bound5
88,472
88,816
(NSB)
777
782
8
Androstenedione
6
ng/mL
0
A
32,887
(MB)9 32,710
32,799
32,019 100%
B
29,847
30,003
29,925
29,146
91%
0.15
C
27,231
27,764
27,498
26,718
83%
0.4
D
20,848
20,502
20,675
19,896
62%
1.5
E
14,176
13,679
13,928
13,148
41%
4.0
8,632
8,715
8,674
F
CV3
2
Example Run
T7
SD2
0
End-of-Run Effect (ng/mL)
7,894
25%
10
Unknowns10
X1
29,605
29,390
29,498
28,718
90%
0.20
X2
16,159
15,875
16,017
15,238
48%
3.0
X3
9,431
9,593
9,512
8,733
27%
8.5
Tubes1
90–101
Tubes
Tubes
Tubes
Tubes
152–163 214–225 276–287 400–411
1
0.27
0.29
0.31
0.32
0.29
2
1.0
1.0
0.9
1.0
1.0
3
1.6
1.6
1.7
1.7
1.7
4
2.6
2.7
2.8
2.9
2.8
5
4.9
4.7
4.8
4.9
4.8
6
6.6
6.8
6.7
6.7
6.6
11
Quality Control Parameters:
T7 = 88,644 cpm
%NSB8 = 0.88%
%MB9 = 36%
20% Intercept12 = 13.7 ng/mL
50% Intercept = 2.6 ng/mL
80% Intercept = 0.51 ng/mL
Intraassay Precision (ng/mL)
Mean1
8
SD2
CV3
1
0.32
0.03
9.4%
2
0.39
0.03
7.7%
3
0.94
0.08
8.5%
4
1.0
0.05
5.0%
5
1.7
0.07
4.1%
6
2.8
0.09
3.2%
7
4.7
0.20
4.3%
8
7.6
0.28
3.7%
Specificity
Linearity (ng/mL)
Dilution1
Observed2 Expected3 %O/E4
ng/mL
2
Added
Apparent
3
ng/mL
% Cross4
reactivity
Adrenosterone
1,000
1.35
0.135%
16 in 16
3.0
—
—
Aldosterone
10,000
ND
ND
8 in 16
1.5
1.5
100%
5β-Androstan-3α,17β-diol
1,000
0.02
0.002%
4 in 16
0.75
0.75
100%
2 in 16
0.37
0.38
97%
1 in 16
0.18
0.19
95%
32 in 32
5.9
—
—
16 in 32
3.0
3.0
100%
1
Compound
Δ4-Androsten-11β-ol-3,17- 10,000
dione
6.30
1
0.063%
Androsterone
10,000
1.65
0.017%
Cholesterol
1,000
ND
ND
2
5
Corticosterone
1,000
0.09
0.009%
Cortisol
10,000
0.16
0.002%
8 in 32
1.4
1.5
93%
0.73
0.74
99%
Cortisone
1,000
0.07
0.007%
4 in 32
Dexamethasone
1,000
ND
ND
2 in 32
0.41
0.37
111%
DHEA
1,000
1.64
0.164%
1 in 32
0.21
0.18
117%
DHEA-SO4
100,000
3.01
0.003%
32 in 32
7.5
—
—
Deoxycorticosterone
10,000
6.86
0.069%
16 in 32
3.6
3.8
95%
Estradiol-17β
10,000
ND
ND
Estriol
1,000
ND
ND
Estrone
1,000
0.13
0.013%
11-Ketotestosterone
10,000
0.25
0.003%
Norethindrone
1,000
ND
ND
17α-Hydroxypregnenolone
1,000
ND
ND
17α-Hydroxyprogesterone 10,000
3.76
0.038%
Pregnenolone
10,000
0.06
0.001%
Prednisone
1,000
ND
ND
Progesterone
1,000
1.60
0.160%
Spironolactone
1,000
1.09
0.109%
5α-Dihydrotestosterone
1,000
2.12
0.212%
100
1.49
1.49%
Testosterone
ND: not detectable
3
4
5
8 in 32
1.9
1.9
100%
4 in 32
0.99
0.94
105%
2 in 32
0.43
0.47
91%
1 in 32
0.24
0.23
104%
32 in 32
8.5
—
—
16 in 32
3.8
4.3
88%
8 in 32
2.0
2.1
95%
4 in 32
1.0
1.1
91%
2 in 32
0.53
0.53
100%
85%
1 in 32
0.23
0.27
64 in 64
9.5
—
—
32 in 64
4.6
4.8
96%
16 in 64
2.3
2.4
96%
8 in 64
1.2
1.2
100%
4 in 64
0.65
0.59
110%
2 in 64
0.30
0.30
100%
1 in 64
0.15
0.15
100%
9
Recovery (ng/mL)
1
2
3
4
5
Lipemia
2
Expected
3
4
Solution
Observed
—
0.5
—
% O/E
—
A
0.7
0.7
100%
B
1.0
1.0
100%
C
1.4
1.5
93%
D
2.1
2.5
84%
E
5.4
5.5
98%
—
0.8
—
—
A
1.0
1.0
100%
B
1.2
1.3
92%
C
1.7
1.8
94%
D
2.8
2.8
100%
E
5.7
5.8
98%
—
1.0
—
—
A
1.2
1.2
100%
B
1.5
1.5
100%
C
2.0
2.0
100%
D
3.1
3.0
103%
E
6.5
6.0
108%
—
1.1
—
—
A
1.3
1.2
108%
B
1.5
1.5
100%
C
2.0
2.0
100%
D
3.1
3.0
103%
E
6.4
6.0
107%
—
1.2
—
—
A
1.5
1.3
115%
B
1.7
1.6
106%
C
2.0
2.1
95%
D
3.1
3.1
100%
E
5.4
6.1
89%
Bilirubin
Bilirubin
Unspiked1
100 mg/L
200 mg/L
1
1.8
1.3
1.4
2
2.1
1.5
1.7
3
4.3
3.7
3.6
4
6.5
5.7
5.9
5
8.2
7.6
7.8
Triglycerides
Added
Observed2 Expected3 %O/E4
mg/dL1
1
2
3
4
5
unspiked5
1.8
—
—
500
1.7
1.8
94%
1,000
1.5
1.7
88%
2,000
1.4
1.6
88%
3,000
1.2
1.5
80%
unspiked
2.1
—
—
500
1.9
2.1
90%
1,000
1.7
2.0
85%
2,000
1.7
1.9
89%
3,000
1.5
1.8
83%
unspiked
4.3
—
—
500
4.0
4.2
95%
1,000
3.6
4.1
88%
2,000
3.5
3.9
90%
3,000
3.0
3.6
83%
unspiked
6.5
—
—
500
6.2
6.3
98%
1,000
5.8
6.1
95%
2,000
5.6
5.8
97%
3,000
4.8
5.5
87%
unspiked
8.2
—
—
500
8.5
8.0
106%
1,000
7.8
7.8
100%
2,000
7.0
7.4
95%
3,000
6.4
7.0
91%
Method Comparison 1
10
CAC Direct Androstenedione
1
8
6
4
2
0
0
2
4
6
8
10
12
CAC Androstenedione (extraction), ng/mL
(CAC Direct) = 0.81 (CAC Extraction) +
0.39 ng/mL
r = 0.952
10
2
SD, 3CV. Interassay Précision : 1Moyenne,
SD, 3CV. Test de dilution : 1Dilution, 2Observé
(O), 3Attendu (A), 4%O/A, 58 dans 8. Test de
récupération : 1Solution, 2Observé (O),
3
Attendu (A), 4%O/A. Spécificité : 1Composé,
2
ajouté, 3Concentration apparente, 4Réaction
croisée %. 5ND: non détectable. Effet de la
position des tubes : 1Tubes. Effect of
Bilirubine : 1Non chargés. Lipémie :
1
Triglycerides Added, 2Observé (O), 3Attendu
(A), 4%O/A, 5Non chargés. Comparaison de
méthodes: Androstenedione: Androstènedione.
Method Comparison 2
2
6
CAC Direct Androstenedione
5
4
3
2
1
1
2
3
4
5
Kit A, ng/mL
(CAC Direct) = 1.33 (Kit A) + 0.54 ng/mL
r = 0.860
Deutsch. Example Run: 1Röhrchen, 2Duplikat
CPM, 3Mittelwert CPM, 4Netto CPM, 5Prozent
Bindung, 6Ca. Androstendion, ng/mL, 7Total,
8
%NSB, 9%MB, 10Unbekannte,
11
Qualitätskontrollparameter, 1220% Intercept.
Intraassay Präzision: 1Mittelwert, 2SD
(Standardabweichung), 3CV
(Variationskoeffizient). Interassay Präzision:
1
Mittelwert, 2SD (Standardabweichung), 3CV
(Variationskoeffizient). Linearität: 1Verdünnung,
2
Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 58 in 8.
Wiederfindung: 1Lösung, 2Beobachtet (B),
3
Erwartet (E), 4% B/E. Spezifität: 1Verbindung,
2
zugesetzte Menge, 3Gemessene Konzentration,
4
% Kreuzreaktivität, 5NN: Nicht nachweisbar.
"End of Run" Effekt: 1Röhrchen. Effect of
Bilirubin: 1Ohne Zugabe von. Lipämie:
1
Triglyceride zugesetzt, 2Beobachtet (B),
3
Erwartet (E), 4% B/E, 5Ohne Zugabe von.
Methodenvergleich: Androstenedione:
Androstendion.
Español. Example Run: 1Tubo, 2Duplicado
CPM, 3Media CPM, 4CPM Netas, 5Porcentaje de
unión, 6Androstenodiona, aprox., ng/mL, 7Total,
8
%NSB, 9%MB, 10Desconocido, 11Parámetros
del control de calidad, 12Corte al 20%.
Intraassay Precisión: 1Media, 2DS, 3CV.
Interassay Precisión: 1Media, 2DS, 3CV.
Linealidad: 1 Dilución, 2Observado (O),
3
Esperado (E), 4%O/E, 58 en 8. Recuperación:
1
Solución, 2Observado (O), 3Esperado (E),
4
%O/E. Especificidad: 1Compuesto, 2Cantidad
añadida, 3Concentración aparente, 4% Reacción
cruzada, 5ND: no detectable. Efecto deriva:
1
Tubos. Effect of Bilirrubina: 1Sin añadir.
Lipemia: 1Triglicéridos añadida, 2Observado
(O), 3Esperado (E), 4%O/E, 5Sin añadir.
Comparación de los métodos:
Androstenedione: Androstenodiona.
Italiano. Example Run: 1Provetta, 2CPM in
duplicato, 3CPM Medio, 4CPM Netti,
5
Percentuale di Legato, 6Appross.
Androstenedione, ng/mL, 7Totale, 8%NSB,
9
%MB, 10Campioni Non Noti, 11Parametri per il
Controllo di Qualità, 12Intercetta al 20%.
Intraassay Precisione: 1Media, 2SD
(Deviazione Standard), 3CV (Coefficiente di
Variazione). Interassay Precisione: 1Media,
2
SD (Deviazione Standard), 3CV (Coefficiente di
Variazione). Linearità: 1Diluizione, 2Osservato
(O), 3Atteso (A), 4%O/A, 58 in 8. Ricupero:
1
Soluzione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A.
Specificità: 1Composto, 2quantità aggiunta,
3
Concentrazione apparente, 4Percentuale di
Crossreattività, 5ND: non determinabile. Effetto
Fine-Seduta: 1Provette. Effect of Bilirubina:
1
Semplice. Lipemia: 1Trigliceridi aggiunta,
2
Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A, 5Semplice.
Paragone dei metodi: Androstenedione:
Androstenedione.
Português. Example Run: 1Tubo, 2Duplicado
CPM, 3Média de CPM, 4Net CPM, 5Percentagem
de Ligação, 6Aprox. Androstenediona, ng/mL,
7
Total, 8%NSB, 9%MB, 10Desconhecidas,
11
Parâmetros do controlo de qualidade, 1220%
Intercepção. Intraassay Precisão: 1Média,
2
Desvio padrão, 3Coeficiente de variação.
Interassay Precisão: 1Média, 2Desvio padrão,
3
Coeficiente de variação. Linearidade:
1
Diluição, 2Observado (O), 3Esperado (E),
4
%O/E, 58 em 8. Recuperação: 1Solução,
2
Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E.
Especificidade: 1Composto, 2Quantidade
adicionada, 3Apparent Concentration,
4
Percentagem de reacção cruzada, 5ND: não
detectável. Efeito fim-de-série: 1Tubos. Effect
of Bilirrubina: 1Não adicionada. Lipémia:
1
Triglicéridos Adicionados, 2Observado (O),
3
Esperado (E), 4%O/E, 5Não adicionada.
Comparação de Métodos: Androstenedione:
Androstenediona.
Français. Example Run: 1Tube, 2Duplicate
CPM, 3CPM moyen, 4CPM corrigé,
5
Pourcentage lié, 6Approx. Androstènedione,
ng/mL, 7Total, , 8%NSB, 9%MB, 10Patients,
11
Paramètres Contrôle de Qualité, 1220%
Intercept. Intraassay Précision : 1Moyenne,
11
Deutsch
Coat-A-Count
Direktes Androstendion
Anwendung: Festphasen
Radioimmunoassay (beschichtete
Röhrchen) zur direkten quantitativen
4
Bestimmung des Δ -Androstendion im
Serum und EDTA- oder Heparin-Plasma.
Der Test ist ausschließlich zur In-vitroDiagnostik einzusetzen
freien durch Dekantieren getrennt. Die
Röhrchen werden dann in einem GammaCounter gemessen. Die Counts sind der
Konzentration des Androstendion in der
Patientenprobe umgekehrt proportional.
Die Menge des Androstendions in der
Probe wird durch Vergleichen der Counts
mit einer Standardkurve ermittelt.
Keine Extraktion: Androstendion
Bestimmungen durch die Coat-A-Count
Direkt Androstendion Methode benötigen
weder eine Extraktion noch eine
chromatographische Vorbehandlung der
Proben.
Artikelnummern: TKAN1 (100 Tests).
Zu pipettierende Reagenzien: 1
Die Packung mit 100 Röhrchen
enthält weniger als 6,5 Microcurie
(241 Kilobequerel) an
125
radioaktivem I-markiertem
Androstendion.
Testdauer: 2 Stunden.
Klinische Relevanz
Totalaktivität zum Zeitpunkt der
Markierung: ca. 90 000 cpm,
Hinweise und
Vorsichtsmaßnahmen
Δ -Androstendion ist ein Steroid, das die
hauptsächliche Vorstufe für Testosteron
und Östron darstellt. Es ist klinisch
interessant auf Grund der Tatsache, dass
es in Fällen von abnormalem
Haarwachstum (Hirsutismus) und
Virilisierung erhöht gefunden wird.
Zur In-vitro-Diagnostik.
Anders als die NebennierenrindenAndrogene Dehydroepiandrosteron
(DHEA) und seine sulfatierte Form
(DHEA-S) stammt das Androstendion aus
der Nebennierenrinde und dem Ovar. Die
Plasmaspiegel steigen ab dem 17.
Lebensjahr kontinuierlich an und beginnen
nach der dritten Dekade wieder allmählich
abzufallen. Androstendion unterliegt einer
tageszeitlichen Schwankung mit höchsten
Werten am Morgen und einer zyklischen
Schwankung mit höchsten Werten nahe
der Zyklusmitte. Während der
Schwangerschaft werden erhöhte
Plasmaspiegel beobachtet.
Die Reagenzien dürfen nur bis zum
Verfallsdatum verwendet werden.
4
Methodik
Der Coat-A-Count Direkt Androstendion
RIA ist ein kompetitiver
Radioimmunoassay, basierend auf
Antikörper-beschichteten Röhrchen, in
125
denen I-markiertes Androstendion mit
dem Androstendion in der Patientenprobe
um eine limitierte Zahl von Antikörpern
konkurriert. Nach der Inkubation werden
die gebundenen Komponenten von den
12
Reagenzien: Die Packung mit den
Reagenzien sollte bei 2–8°C in einem
Kühlschrank gelagert werden, der für
radioaktives Material ausgewiesen ist. Die
Entsorgung muss nach den jeweils
gültigen Gesetzen erfolgen.
Einige Komponenten des Kits können
Material humanen Ursprungs und/oder in
anderer Weise gefährliche Inhaltsstoffe
enthalten, die es unbedingt notwendig
machen die folgenden
Vorsichtsmaßnahmen einzuhalten.
Die generell geltenden
Vorsichtsmaßnahmen sind einzuhalten
und alle Komponenten als potenziell
infektiös zu behandeln. Alle aus
menschlichem Blut gewonnenen
Materialien wurden auf Syphilis,
Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2,
Hepatitis-B-Oberflächenantigen und
Hepatitis-C-Antikörper untersucht und
negativ befundet.
Bestimmten Komponenten wurde
Natriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Um
die Bildung von explosiven Metallaziden in
Blei- und Kupferrohren zu vermeiden,
sollten die Reagenzien nur zusammen mit
großen Wassermengen in die Kanalisation
gespült werden.
Wasser: Destilliertes bzw. deionisiertes
Wasser benutzen.
Radioaktivität
Der Umgang mit radioaktivem Material ist
in Deutschland genehmigungspflichtig.
Deshalb muss der Siemens Healthcare
Diagnostics eine Kopie der aktuellen
gültigen Umgangsgenehmigung des
Kunden vorliegen, bevor radioaktive
Reagenzien versendet werden dürfen. Die
Strahlenschutzverordnung ist zu
beachten.
Das radioaktive Material ist gemäß der
jeweiligen Umgangsgenehmigung zu
handhaben.
Die Strahlenexposition ist zu minimieren.
Spritzer sind sofort aufzuwischen und die
betroffene Oberfläche zu dekontaminieren. Aerosolbildung ist zu vermeiden.
Flüssiger und fester radioaktiver Abfall
sind unter Beachtung der gültigen
Richtlinien zu entsorgen.
Bestandteile der Testpackung:
Vorbereitung
Direkt Androstendion Antikörperbeschichtete Röhrchen (TAN1)
Polypropylen-Röhrchen beschichtet mit
polyklonalen Antikörpern vom Kaninchen
gegen Androstendion, verpackt in wiederverschließbaren Plastikbeuteln. Kühl
lagern, vor Feuchtigkeit schützen und
nach dem Öffnen wieder sorgfältig
verschließen. Lagerung bei 2–8°C bis zum
Verfallsdatum. Farbe: Fluoreszierendes
Orange.
TKAN1: 100 Röhrchen.
125
I Direkt Androstendion (TAN2)
105 ml jodiertes Androstendion mit
Konservierungsmitteln. Lagerung bei 2–
8°C. Haltbar bis 30 Tage nach dem
Öffnen oder bis zum Verfallsdatum auf der
Flasche.
TKAN1: 1 Flasche.
Direkt Androstendion Standards
(TAN3–8)
6 Flaschen, A – F, enthalten verschiedene
Konzentrationen von Androstendion in
einer Humanserum-Matrix mit
Konservierungsmitteln. Der 0-Standard A
enthält 5 ml und die anderen Standards
B – F je 2 ml. 30 Tage nach dem Öffnen
bei 2–8°C haltbar oder 6 Monate bei
–20°C (aliquotiert).
TKAN1: 1 Set.
Die Standards B – F enthalten 0,15; 0,4;
1,5; 4,0 und 10 ng/ml; bzw. 0,52; 1,4; 5,2;
14 und 35 nmol/l. Weitere Standardkurvenpunkte können durch Mischen der
Standards hergestellt werden.
Direkt Androstendion Kontrollen
(TANC1–2)
2 Flaschen (je 2 mL) mit Direkt
Androstendion Kontrollen 1 und 2, mit
verschiedenen AndrostendionKonzentrationen in behandeltem
Humanserum, mit Konservierungsmitteln.
30 Tage nach dem Öffnen bei 2–8°C
haltbar oder 6 Monate bei –20°C
(portioniert). Die jeweiligen Zielwerte
können dem Direkt Androstendion
Kontrolldatenblatt entnommen werden.
TKAN1: 1 Set.
Erforderliche Laborgeräte und
Hilfsmittel
Gammacounter – kompatibel mit
12x75 mm Röhrchen
Wirbelmischer
Radioimmunoassay
Unbeschichtete 12x75 mm PolyprophylenRöhrchen – für T und NSB Röhrchen,
erhältlich bei Siemens Healthcare
Diagnostics (Artikelnummer: PPO)
Mikropipetten: 100 µl und 1,0 ml.
Dekantierständer – erhältlich bei Siemens
Healthcare Diagnostics (Artikelnummer:
FDR).
Logit-Log-Papier
Probengewinnung
Es ist keine besondere Vorbereitung der
Patienten nötig. Blutentnahme durch
16
Venenpunktion in unbeschichtete
Röhrchen, Trennung des Serums von den
Blutzellen. Abnahmezeitpunkt notieren.
Heparin- und EDTA-Plasma kann auch
verwendet werden.
Ikterische oder stark kontaminierte Proben
können zu fehlerhaften Ergebnissen
führen.
Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zur
Klärung von lipämischen Proben
empfohlen.
13
Bei hämolysierten Proben besteht die
Möglichkeit einer unsachgemäßen
Handhabung vor Eintreffen im Labor,
daher sind die Ergebnisse mit Vorsicht zu
interpretieren.
Kalibratoren
ng/ml
A (MB)
0
0
B
0,15
0,52
C
0,4
1,4
Blutentnahmeröhrchen von verschiedenen
Herstellern können differierende Werte
verursachen. Dies hängt von den
verwendeten Materialien und Additiven
(Gel oder physische Trennbarrieren,
Gerinnungsaktivatoren und /oder
Antikoagulantien) ab. Coat-A-Count Direkt
Androstendion sind nicht mit allen
möglichen Röhrchenvariationen
ausgetestet worden. Details der
getesteten Röhrchenarten sind dem
Kapitel "Alternative Probenarten" zu
entnehmen.
D
1,5
5,2
E
4,0
14
F
10
35
2
Erforderliche Menge: 100 µl Serum oder
Plasma pro Röhrchen
Die Proben vor Testbeginn auf
Raumtemperatur (15–28°C) bringen und
vorsichtig durchmischen. Um wiederholtes
Einfrieren und Auftauen zu vermeiden bei
Bedarf portionieren. Gefrorene Proben
dürfen nicht durch Erhitzen im Wasserbad
aufgetaut werden.
Alle Testkomponenten vor Testbeginn auf
Raumtemperatur (15–28°C) bringen.
1
Unbeschichtete Röhrchen: Jeweils
2 unbeschichtete 12x75 mm
Polypropylen-Röhrchen mit T (Total
Counts) und NSB (unspezifische
Bindung) beschriften.
Da die unspezifische Bindung im
Coat-A-Count RIA normalerweise
niedrig ist hat sie keinen signifikanten
Einfluss auf die Messwerte. Es kann
deshalb auch auf das Mitführen der
NSB-Röhrchen verzichtet werden.
Patientenproben, in denen
Konzentrationen oberhalb des
höchsten Standards (10 ng/ml)
erwartet werden, sind mit 0-Standard
vor dem Einsatz in den Test zu
verdünnen.
3
125
1,0 ml of I Direkt Androstendion in
jedes Röhrchen hinzufügen. Mischen.
Das Verteilen des Tracers sollte nicht
länger als 10 Minuten dauern. Die TRöhrchen bis zur Messung (siehe
Schritt 6) beiseite stellen; sie bedürfen
keiner weiteren Behandlung.
4
2 Stunden bei Raumtemperatur
inkubieren (15–28°C).
5
Vollständig dekantieren.
Vollständiges Entfernen der
Flüssigkeit verbessert die Präzision
deutlich. Mit Hilfe eines Dekantierständers alle Röhrchen (außer die TRöhrchen) dekantieren oder
absaugen und 2–3 Minuten
umgedreht stehen lassen.
Anschließend werden die Röhrchen
kräftig auf Fließpapier ausgeklopft, um
alle restlichen Tröpfchen zu entfernen.
Beschichtete Röhrchen: Jeweils 2
Antikörper-beschichtete Direkt
Androstendion Röhrchen mit A (maximale
Bindung) und von B bis F beschriften.
Jeweils 2 weitere Antikörper-beschichtete
Röhrchen für Kontrollen und
Patientenproben beschriften.
6
14
Jeweils 100 µl des 0-Standards A in
die NSB und A Röhrchen, und jeweils
100 µl der restlichen Standards in die
entsprechend beschrifteten Röhrchen
pipettieren. Jeweils 100 µl von jeder
Patientenprobe und Kontrolle in die
vorbereiteten Röhrchen pipettieren.
Direkt auf den Boden des
Röhrchens pipettieren.
Es ist gute Laborpraxis Pipetten mit
Einmalspitzen zu verwenden und die
Spitze von Probe zu Probe zu
wechseln um Verschleppung zu
vermeiden.
Lagerung: Bei 2–8°C für 2 Tage, oder für
2 Monate bei –20°C.
Testansatz und Durchführung
nmol/l
Alle Röhrchen 1 Minute im GammaCounter messen.
Berechnung der Ergebnisse
Um die Konzentrationen aus der Logit-Log
Darstellung der Standardkurve abzulesen
werden zunächst der Mittelwert der zwei
Röhrchen bereinigt um den Mittelwert der
NSB Counts pro Minute (cpm) berechnet:
Netto Counts = (Mittelwert CPM) minus
(Mittelwert NSB CPM)
Anschließend wird die Bindung jedes
Röhrchenpaars als Prozent der
Maximalbindung (MB, B0) bestimmt.
Hierzu werden die mittleren CPM des AStandards korrigiert um die mittlere NSB
als 100% gesetzt:
Prozentbindung = (Netto Counts / Netto MB
Counts) × 100
(Die Berechnung kann durch weglassen
der Korrektur um die NSB vereinfacht
werden. Für Proben innerhalb des
Standardbereichs werden nahezu
identische Konzentrationen berechnet,
wenn B/B0 direkt aus den CPM ermittelt
wird.)
Die so ermittelten B/B0 aller Standards
außer des 0-Standards werden auf der yAchse auf Logit-Log Papier gegen die
Konzentration auf der x-Achse
(logarithmisch) aufgetragen. Die Punkte
werden mit bestmöglicher Annäherung
durch eine gerade Linie verbunden. Die
Ergebnisse der unbekannten Proben
können dann durch Interpolation an der
Kurve abgelesen werden.
Es ist gute Laborpraxis die Ergebnisse der
Doppelbestimmung auf Übereinstimmung
zu prüfen und eine Grafik der
Standardkurve darzustellen (auch wenn
die eigentliche Berechnung durch ein
Computerprogramm erfolgt) um visuell zu
überprüfen, ob für die Standardkurve die
geeignete Transformation verwendet
wurde und um eventuell abweichende
Standardkurvenpunkte zu entdecken. Es
wird weiterhin empfohlen, folgende
Parameter der Berechnung zu
protokollieren:
T = Totalaktivität (als Counts pro Minute)
%NSB = 100 × (Mittelwert NSB Counts / Total
Counts)
%MB = 100 × (Netto Counts / Total Counts)
und die 20, 50 und 80 Prozent
"intercepts," wobei
20% = Konzentration bei 20 Prozent Bindung,
etc.
Bitte beachten Sie, dass auch andere
Auswertungen z. B. nach der 4-Parameter-Logistik akzeptabel sind. Siehe:
Dudley RA, et al. Guidelines for
immunoassay data reduction. Clin Chem
1985;31:1264-71.
Auswertebeispiel: Dieses Beispiel dient
nur zur Veranschaulichung und ist nicht
dazu geeignet Werte aus einem anderen
Testansatz damit zu ermitteln. (siehe
Tabelle "Example Run").
Qualitätskontrolle
Es wird empfohlen Kontrollen mit
mindestens 2 Konzentrationen (niedrig
und hoch) an Androstendion routinemäßig
als unbekannte Proben einzusetzen. Die
im Kit enthaltenen Direkt Androstendion
Kontrollen sollten als
Qualitätskontrollmaterial zur Überprüfung
der Leistungsfähigkeit des Assays
eingesetzt werden.
Patientenergebnisse dürfen nur dann
freigegeben werden, wenn die
laborspezifischen Akzeptanzkriterien
erfüllt sind. Hierzu sind die jeweils gültigen
Richtlinien zu berücksichtigen.
Es ist gute Laborpraxis die Chargennummern, sowie das Datum der ersten
Öffnung bzw. Rekonstitution der verwendeten Komponenten zu protokollieren. Die
wiederholte Messung von Proben kann
bei der Beurteilung der Interassay
Präzision hilfreich sein. Der Einsatz von
Kontrollprobenpaaren an unterschiedlichen Positionen des Testansatzes ist
hilfreich, um einen eventuellen Drift zu
erkennen.
Referenzwerte
Männer: Eine Refenrenzwertstudie wurde
an Serumproben mit dem Coat-A-Count
Direkt Androstendion Verfahren
durchgeführt. Die Studie beinhaltete 124
Männer. Die Ergebnisse zeigten einen
zentralen 95% Bereich von ca. 0,8 bis
3,0 ng/ml, mit einem Mittelwert von
1,8 ng/ml.
Frauen: In einer Studie mit 122 Frauen,
zeigten die Ergebnisse einen zentralen
95% Bereich von ca. 0,5 – 3,7 ng/ml, mit
einem Mittelwert von 1,7 ng/ml.
15
Im Labor sollten diese Ergebnisse
lediglich als Richtwerte betrachtet werden.
Jedes Labor sollte seine eigenen
Referenzbereiche etablieren.
Grenzen der Methode
Der wachsende Graafsche-Follikel
sezerniert Androstendion mit einem bis zu
zweifachen Anstieg der Produktion in der
Nähe der Zyklusmitte. Proben, die in
diesem Zeitraum entnommen wurden,
können deshalb Werte über der
Obergrenze des zentralen 95%-Bereichs
1,2
aufweisen.
Eine tageszeitliche Schwankung wurde
beobachtet. Zum Beispiel wurde bei 11
gesunden Männern im Alter zwischen 18
und 30 Jahren die mittlere AndrostendionKonzentration in 24 Stunden mit
0,93 ng/ml gefunden, mit einer
zirkadianen Amplitude von 42% des
Mittelwertes. Der Hauptanstieg erfolgte
am Morgen um 7:10 Uhr; das Maximum
wurde am Abend um 23:00 Uhr erreicht
und es gab einen zweiten Anstieg um
16:35 Uhr. Der 95% VertraueNSBereich
13
für Anstieg/Maximum war 68 Minuten.
Dementsprechend sollte der Zeitpunkt der
Blutentnahme notiert werden.
Es wird daran erinnert, dass körperliches
Training einen signifikanten Einfluss auf
die zirkulierenden Androstendion Spiegel
hat. In einer Studie mit 18 professionellen
Fußballspielern stieg die mittlere
Androstendion Konzentration von den
Basalwerten auf 0,9 bis 1,8 ng/ml zum
Spielende an und fiel nach 90 Minuten
14
wieder auf 0,7 ng/ml ab. In einer
weiteren Studie stieg der Androstendion
Spiegel bei 20 moderat trainierten
Männern signifikant vom Basalmittelwert
von 1,11 ng/ml auf 1,41 ng/ml nach 1
15
Stunde Schwimmen an.
Leistungsdaten
Siehe Tabellen und Grafiken mit
repräsentativen Daten für den Assay.
Wenn nicht anders angegeben, wurden,
alle Ergebnisse in den nachfolgenden
Abschnitten in Serumproben ermittelt.
Ergebnisse sind in ng/ml angegeben.
Umrechnungsfaktor:
ng/ml × 3,4916 → nmol/l
Standardbereich: 0,15 – 10 ng/ml
(0,52 – 35 nmol/l),
16
Analytische Sensitivität: 0,04 ng/ml
(0,14 nmol/l),
Intraassay-Präzision Statistische
Berechnung der Ergebnisse von 8
Proben, die in 20 Röhrchenpaaren in
einem Ansatz gemessen wurden. (Siehe
Tabelle „Intraassay-Precision“.)
Interassay-Präzision Statistische
Berechnung der Ergebnisse von 8
Proben, die in 20 Röhrchenpaaren in
mehreren Ansätzen gemessen wurden.
(Siehe Tabelle „Interassay-Precision“.)
Spezifität: Das in diesem Testbesteck
verwendete Antiserum ist hochspezifisch
mit extrem niedrigen Kreuzreaktivitäten zu
anderen natürlich vorkommenden
Steroiden oder Medikamenten. Bei
Untersuchungen im Labor des Herstellers
wurden folgende Kreuzreaktivitäten
gemessen: (siehe Tabelle „Spezifität“.)
Linearität: Proben wurden in
verschiedenen Verdünnungen getestet.
(Repräsentative Daten entnehmen Sie
bitte der Tabelle „Linearität“.)
"End of Run" Effekt: Tritt bis ca.
400 Röhrchen nicht auf. (siehe Tabelle
"End-of-Run Effect").
Wiederfindung: Proben wurden 1:19 mit
Androstendion Lösungen (4, 10, 20, 40
und 100 ng/ml) versetzt und gemessen.
(Repräsentative Daten entnehmen Sie
bitte der Tabelle „Recovery“.)
Bilirubin: Kann zu niedrigeren Werten
führen. (Siehe Tabelle “Bilirubin”.)
Hämolyse: Erythrozytenkonzentrate
haben in Konzentrationen bis zu 30 µl/ml
keinen Einfluss auf die Messung, der
größer als die Impräzision des Assays
selbst ist.
Lipämie: Kann den Assay beeinflussen.
(Siehe Tabelle “Lipemia”.)
Alternativer Probentyp: Um die
Auswirkungen von verschiedenen
Probenarten zu untersuchen, wurde Blut
von 40 Freiwilligen in Röhrchen ohne
Additiva, in Heparin-, EDTA- und Becton
®
Dickinson SST Vacutainer-Rörchen
gesammelt. Alle Proben wurden mit dem
Coat-A-Count Direkt Androstendion RIA
bestimmt. Durch lineare Regression:
(Heparin) = 0,95 (Serum) + 0,02 ng/ml
r = 0,997
(EDTA) = 1,02 (Serum) – 0,01 ng/ml
r = 0,997
(SST) = 1,00 (einfachen Röhrchen) – 0,15 ng/ml
r = 0,996
Mittelwerte:
4,1 ng/ml (Serum)
3,9 ng/ml (Heparin)
4,2 ng/ml (EDTA)
3,9 ng/ml (SST)
Die Ergebnisse zeigen, dass Serum,
EDTA- und Heparin-Plasma vergleichbare
Ergebnisse liefern.
Methodenvergleich 1: Es wurden 60
Patientenproben parallel im Coat-A-Count
Direct Androstendion RIA und im Coat-ACount Androstendion RIA
(Extraktionsverfahren) gemessen. Die
Androstendion Konzentrationen reichten
von 0,25 ng/ml bis ca. 11 ng/ml. Durch
lineare Regression: (Siehe “Method
Comparison 1” Grafik.)
Español
Coat-A-Count
Androstenodiona directa
Utilidad del análisis: El kit Coat-A-Count
Androstenediona Directa es un
125
radioinmunoanálisis ( I) en fase sólida,
diseñado para la determinación
4
cuantitativa de Δ -androstenediona en
suero y en plasma con EDTA o
heparinizado. Su uso es estrictamente
para diagnóstico in vitro.
(CAC Direct) = 0,81 (CAC Extraction) +
0,39 ng/ml
r = 0,952
Mittelwerte:
2,5 ng/ml (Coat-A-Count Direct)
2,6 ng/ml (Coat-A-Count Extraction)
Methodenvergleich 2: In einer weiteren
Untersuchung wurden 38 Patientenproben
im Coat-A-Count Direct Androstendion
RIA und in einem kommerziell erhältlichen
RIA mit beschichteten Röhrchen (Kit A)
gemessen. Die Androstendion
Konzentrationen reichten von 0,74 ng/ml
bis ca. 3,48 ng/ml. Durch lineare
Regression: (Siehe “Method Comparison
2” Grafik.)
(CAC Direct) = 1,33 (Kit A) + 0,054 ng/mL
r = 0,860
Mittelwerte:
1,6 ng/ml (Kit A)
Anwendungsberatung
Bei Rückfragen wenden Sie sich bitte an
Ihre Niederlassung.
Das Qualitätsmanagement-System der Siemens
Healthcare Diagnostics Inc. ist zertifiziert nach
DIN EN ISO 13485:2003.
17
Referencia: TKAN1 (100 tubos).
El kit de 100 tubos contiene
menos de 6,5 microcurios (241
kilobequerelios) de
125
Androstenodiona marcado con I
radioactivo.
Resumen y Explicación del
Test
4
La Δ -Androstenediona es un esteroide
que actúa como el precursor principal de
la testosterona y la estrona. Su interés
clínico deriva del hecho de que
frecuentemente sus niveles están
elevados en los casos de crecimiento
anormal del vello (hirsutismo) y en la
virilización.
A diferencia de los andrógenos adrenales,
dehidroepiandrosterona y su sulfato, la
androstenediona circulante se origina de
las glándulas adrenales y los ovarios. Los
niveles plasmáticos aumentan en forma
constante desde aproximadamente el
séptimo año de vida, y luego declinan
gradualmente después de los treinta
años. La androstenediona exhibe una
variación diurna, siendo mayor en la
mañana, y también una variación cíclica
durante el ciclo menstrual que es mayor
cerca de la mitad del ciclo. Durante el
embarazo hay un aumento en el nivel
plasmático.
Principio del análisis
El procedimiento Coat-A-Count
Androstenediona Directa es un
imnunoensayo competitivo basado en
tubos recubiertos con anticuerpos. La
125
androstenediona marcada con I compite
con la androstenediona de la muestra del
paciente por los sitios de unión en los
anticuerpos. Después de la incubación, la
androstenediona unida se separa de la
androstenediona libre por decantación
Luego el tubo se lee en un contador
gama. La cantidad de cuentas está
inversamente relacionada con la cantidad
de androstenediona presente en la
muestra del paciente. La cantidad de
androstenediona en la muestra se
determina comparando las cuentas con
una curva de calibración.
Sin extracción: Las determinaciones de
androstenediona realizadas por el método
18
Coat-A-Count Androstenediona Directa no
requieren extracción ni cromatografía.
Reactivos a pipetear: 1
Tiempo total de incubación: 2 horas.
Cuentas totales en la iodización:
aproximadamente 90 000 cpm.
Advertencias y precauciones
Para uso diagnóstico in vitro.
Reactivos: Almacenar a 2–8°C en una
cámara preparada para almacenar
material radioactivo. Desechar de acuerdo
a la legislación en vigor.
No usar los reactivos después de su fecha
de caducidad.
Algunos componentes suministrados en el
kit pueden contener material de origen
humano y/o otros componentes
potencialmente peligrosos que necesiten
ciertas precauciones.
Siga las precauciones universales y
manipule todos los componentes como si
fueran capaces de transmitir agentes
infecciosos. Los materiales derivados de
sangre humana han sido analizados y son
negativos para sífilis; para anticuerpos
frente al HIV 1 y 2; para el antígeno de
superficie de hepatitis B y para los
anticuerpos de hepatitis C.
Se ha usado azida sódica, en
concentraciones menores de 0,1 g/dl,
como conservante. Para su eliminación,
lavar con grandes cantidades de agua
para evitar la constitución de residuos de
azidas metálicas, potencialmente
explosivas, en las cañerías de cobre y
plomo.
Agua: Usar agua destilada o desionizada.
Radioactividad
Una copia de cualquier certificado de
licencia de radioisótopos (específico o
general) emitido a la aduana de los
EE.UU. se registrará en los ficheros de
Siemens Healthcare Diagnostics antes de
que se puedan enviar kits o componentes
conteniendo material radioactivo. Estos
materiales radioactivos pueden adquirirse
por cualquier cliente con la licencia
específica apropiada. Con una licencia
general, estos materiales radioactivos
pueden adquirirse solo por médicos,
veterinarios en la práctica de la medicina
veterinaria, laboratorios clínicos y
hospitales — y estrictamente para la
clínica in vitro o tests de laboratorio que
no conlleven la administración interna o
externa de material radioactivo o su
radiación a humanos u otros animales. Su
adquisición, recepción, almacenaje, uso,
trasferencia y desecho están regulados y
se expenderá una licencia (general o
específica) de la Comisión Nuclear de
EE.UU. o de un Estado con el NRC para
su consiguiente control.
Manejar los materiales radioactivos de
acuerdo a los requerimientos de su
licencia general o específica. Para
minimizar la exposición a la radiación, el
usuario debe adherirse al cuarto conjunto
de guías publicadas por el National
Bureau of Standards con el nombre Safe
Handling of Radioactive Materials
(Handbook No. 92, issued March 9, 1964)
y en las consiguientes publicaciones de
las autoridades Federales o Estatales.
Limpiar y decontaminar rápidamente las
superficies afectadas. Evitar la generación
de aerosoles. Eliminar los residuos sólidos
radioactivos de acuerdo con los
requerimientos de su licencia. Licencias
generales (NRC Form 483) pueden
eliminar sus residuos sólidos radioactivos
como residuos no radioactivos, después
de retirar las etiquetas. Licencias
específicas (NRC Form 313) se deben
referir al Título 10, Código de
Regulaciones Federales, Parte 20. Las
licencias en Estados Asociados deben
referirse a las normativas de su
correspondiente Estado. Licencias
generales pueden eliminar sus residuos
líquidos radioactivos contenidos en este
tipo de productos como cualquier otro
material líquido, quitando las etiquetas de
los contenedores y procesándolos como
residuos sólidos. Licencias específicas
pueden eliminar pequeñas cantidades de
residuos líquidos radioactivos contenidos
en este tipo de productos como cualquier
otro material líquido. Refiérase a la
normativa aplicable a su laboratorio.
Materiales Suministrados:
Preparación Inicial
Tubos recubiertos con anticuerpo antiandrostenediona directa (TAN1)
Tubos de polipropileno recubiertos con
anticuerpo policlonal anti-androstenediona
y embalados en bolsas de cierre
hermético. Almacenar refrigerados y
protegidos de la condensación, cerrando
cuidadosamente las bolsas después de su
uso. Estable a 2–8°C hasta la fecha de
caducidad impresa en la bolsa.
Color: naranja fluorescente.
TKAN1: 100 tubos.
125
I Androstenediona Directa (TAN2)
105 ml de androstenediona iodizada, con
conservante. Estable a 2–8°C durante 30
días después de su apertura, o hasta la
fecha de caducidad impresa en el vial.
TKAN1: 1 vial.
Calibradores de androstenediona
directa (TAN3–8)
Seis viales, marcados A a F, con distintas
concentraciones de androstenediona en
una matriz de suero humano, con
conservante. El calibrador cero A contiene
5 ml, y los calibradores restantes, B a F,
contienen cada uno 2 ml. Estable a 2–8°C
durante 30 días después de abrise, o
hasta 6 meses (alicuotados) a –20°C.
TKAN1: 1 juego.
Los calibradores no cero representan
respectivamente 0,15, 0,4, 1,5, 4,0 y 10
nanogramos de androstenediona por
mililitro (ng/ml); equivalentemente: 0,52,
1,4, 5,2, 14 y 35 nanomoles por litro
(nmol/l). Los puntos de calibración
intermedios se pueden obtener
mezclando los calibradores en las
proporciones adecuadas.
Controles de androstenediona directa
(TANC1–2)
2 viales (cada uno de 2 ml) de Control de
Androstenediona Directa 1 y 2, con
distintas concentraciones de
androstenediona en suero humano
procesado, con conservantes. Estable a
2–8°C durante 30 días después de su
apertura, o hasta 6 meses (alicuotados) a
–20°C. Para conocer las concentraciones
respectivas, consulte el prospecto del
control de androstenediona directa.
TKAN1: 1 juego.
Materiales Requeridos pero no
suministrados
Contador Gamma compatible con los
tubos de 12 x 75 mm.
Vortex
19
Radioinmunoanálisis
Tubos de ensayo de polipropileno de
12 x 75 mm para su uso como tubos T y
NSB, disponibles en Siemens Healthcare
Diagnostics (Referencia: PPO)
Micropipetas con puntas desechables:
100 µl y 1,0 ml.
Rack de decantación – disponible en
Siemens Healthcare Diagnostics
(Referencia: FDR)
descongelación de muestras congeladas
calentándolas en un baño de agua.
Procedimiento del
Radioinmunoanálisis
Todos los componentes deben llevarse a
temperatura ambiente (15–28°C) antes de
su uso.
1
Papel para gráficas Logit-Log
Recogida de la muestra
El paciente no necesita estar en ayunas
así como tampoco cualquier otro tipo de
preparación. Recoger la sangre por
16
venipunción en tubos no tratados, y
separar el suero de las células registrando
la hora en que se tomó la muestra.
También puede usarse plasma
heparinizado y con EDTA.
Las muestras ictericas o ampliamente
contaminadas pueden dar resultados
erróneos.
Se recomienda el uso de una
ultracentrífuga para aclarar las muestras
lipémicas.
Tubos de ensayo: Marcar cuatro
tubos de ensayo de polipropileno (sin
recubrir) 12 x 75 mm. Tubos T
(cuentas totales) y NSB (unión no
específica) por duplicado.
Al ser característicamente baja la
unión no específica en el ensayo
Coat-A-Count, los tubos NSB pueden
ser omitidos sin comprometer la
precisión y control de calidad del
ensayo.
Tubos recubiertos: Marcar doce tubos
recubiertos de anticuerpo frente a la
Androstenediona directa: A (máxima
unión) y B hasta F por duplicado. Marcar
tubos recubiertos de anticuerpo
adicionales, también por duplicado, para
controles y muestras de pacientes.
Calibrador
ng/ml
nmol/l
Las muestras hemolizadas podrían indicar
una mala manipulación de la muestra
antes de ser recibida por el laboratorio; en
este caso, los resultados deben
interpretarse con precaución.
A (MB)
0
0
B
0,15
0,52
C
0,4
1,4
D
1,5
5,2
Los tubos para recoger sangre de
distintos fabricantes pueden producir
valores diferentes, dependiendo del
material del tubo y de los aditivos,
incluyendo barreras de gel o barreras
físicas, activadores de la coagulación y/o
anticoagulantes. El Androstenediona
Directa Coat-A-Count no ha sido
analizado con todos los distintos tipos de
tubos. Para obtener detalles sobre los
tipos tubos que se han analizado,
consulte la sección de Tipos de Muestras
Alternativos.
E
4,0
14
F
10
35
Volumen requerido: 100 µl de suero o
plasma por tubo.
Almacenamiento: 2–8°C durante 2 días,
o hasta 2 meses congelado a –20°C.
Antes del ensayo, llevar todas las
muestras a temperatura ambiente (15–
28°C) y mezclar por inversión. Alicuotar, si
es necesario, para evitar la congelación y
descongelación repetida. No intentar la
20
2
Pipetear 100 µl del calibrador cero A
en los tubos NSB y A, y 100 µl de
cada calibrador no cero en los tubos
marcados B a F. Pipetear 100 µl de
cada control y muestra de los
pacientes en los tubos preparados.
Pipetear directamente en el fondo
del tubo.
Es una buena práctica el uso de
micropipetas con punta desechables,
cambiando las puntas entre las
muestras, para evitar la
contaminación por arrastre.
Las muestras de los pacientes que se
espera que contengan
concentraciones de androstenediona
mayores que la del calibrador más
alto (10 ng/ml) se deberán diluir con el
calibrador cero antes del ensayo.
3
125
Añadir 1,0 ml de I Androstenediona
Directa a cada tubo. Mezclar en el
Vortex.
No se debe tardar más de 10 minutos
durante la dispensación del trazador.
Dejar los tubos T a un lado para su
contaje (paso 6); no requieren más
procesamiento posterior.
4
Incubar durante 2 horas a
temperatura ambiente
5
Decantar.
Eliminar toda la humedad visible para
mejorar la precisión. Usando un rack
de decantación de espuma, decantar
los contenidos de todos lo tubos
(excepto los tubos T), y permitir que
drenen durante 2 o 3 minutos. Luego,
golpear los tubos sobre papel
absorbente para eliminar todas las
gotas residuales.
6
Contar durante 1 minuto en un
contador gamma.
Cálculo de resultados
Para obtener resultados en términos de
concentración a partir de una
representación logit-log de la curva de
calibración, primero hay que calcular para
cada pareja de tubos las cuentas medias
por minuto corregidas con el NSB:
Cuentas netas = (Media CPM) menos
(Media NSB CPM)
Entonces, determinar la unión de cada
pareja de tubos como un porcentaje de la
unión máxima (MB), tomando las cuentas
corregidas con el NSB de los tubos A
como 100%:
Porcentaje de Unión = (Cuentas netas / Cuentas
MB netas) × 100
El cálculo puede simplificarse omitiendo la
corrección de las uniones no específicas;
las muestras dentro del rango de
calibración van a dar prácticamente el
mismo resultado cuando el porcentaje de
unión se calcula directamente a partir de
la media de las CPM).
Usando papel gráfico logit-log, representar
el porcentaje de unión en el eje vertical
frente a la concentración en el eje
horizontal (logarítmico) para cada
calibrador no cero y dibujar la línea que
pase por esos puntos aproximadamente.
Los resultados de las muestras pueden
ser leídos en la curva por interpolación.
Es una buena práctica inspeccionar los
resultados para comprobar la
concordancia entre los replicados, y
realizar una gráfica de la curva de
calibración (aunque los cálculos se
realicen por ordenador) para ver la
transformación más apropiada a usar y las
posibles desviaciones en los puntos de
calibración. También, recomendamos
mantener un registro de los siguientes
parámetros de la reducción de datos:
T = Cuentas totales (como cuentas por minuto)
%NSB = 100 × (Media cuentas NSB / cuentas
totales)
%MB = 100 × (Cuentas netas / Cuentas totales)
Y los cortes 20, 50 y 80 por ciento, donde
20% = Concentración al 20 por ciento de unión,
etc.
Otras aproximaciones, por ejemplo,
logística 4-parámetros, también son
aceptables. Ver Dudley RA, et al.
“Guidelines for immunoassay data
reduction”. Clin Chem 1985;31:1264-71.
Ejemplo: Sólo como ilustración, no se
puede utilizar para calcular resultados.
(Ver la tabla "Example Run").
Control de Calidad
Se deberán analizar rutinariamente
controles (o pools de suero) de por lo
menos dos niveles distintos de
concentración de androstenediona –bajo y
alto– como si fuesen concentraciones
desconocidas. Los Controles de
Androstenediona Directa que se
suministran con el kit deberán usarse
como material de control de calidad para
monitorear el rendimiento del ensayo.
Informar los resultados de los pacientes
sólo si los resultados de los controles para
este ensayo están dentro de los criterios
de aceptabilidad establecidos por su
laboratorio.
Es una buena práctica de laboratorio
registrar para cada ensayo los números
de lote de los componentes usados, así
como las fechas en las que fueron
abiertos por primera vez y reconstituidos.
También recomendamos el uso de
21
gráficos diarios de los controles — como
se describe, por ejemplo, en Westgard
JO, et al. A multi-rule chart for quality
control. Clin Chem 1981;27:493-501. Las
muestras repetidas pueden servircomo
una herramienta de valor adicional para
monitorizar la precision interensayo, y las
parejas de los tubos del control pueden
espaciarse a lo largo de la tanda del
ensayo para verificar la ausencia de
deriva significativa.
Valores esperados
Hombres: Se realizó un estudio del
intervalo de referencia en muestras de
suero usando el procedimiento Coat-ACount Androstenediona Directa. El
estudio incluyó a 124 hombres, los
resultados indicaron un rango 95% central
de aproximadamente 0,8 a 3,0 ng/ml, con
una mediana de 1,8 ng/ml.
Mujeres: En un estudio de 122 mujeres,
los resultados indicaron un rango 95%
central de aproximadamente 0,5 a 3,7
ng/ml, con una mediana de 1,7 ng/ml.
Los laboratorios deben considerar estos
resultados sólo como una guía. Cada
laboratorio deberá establecer sus propios
intervalos de referencia.
Limitaciones
El folículo de De Graaf en crecimiento
secreta androstenediona, y su producción
aumenta al doble cerca de la mitad del
ciclo. Por lo tanto, las muestras que se
recojan durante este momento pueden
producir resultados de androstenediona
por arriba del límite superior 95%
1,2
central.
Se ha observado variación diurna. Por
ejemplo, en 11 hombres sanos de 18 a 30
años de edad, la concentración de
androstenediona media de 24 horas fue
0,93 ng/ml, con una amplitud circadiana
equivalente al 42% de la media. El punto
más alto ocurrió en la mañana a las 07:10
horas y el punto más bajo ocurrió a la
noche a las 23:00 horas; también hubo
una fase alta secundaria a las 16:35
horas. El intervalo de confianza del 95%
para el punto más alto y el punto más bajo
13
fue de 68 minutos. Por consiguiente, se
deberá registrar la hora en que se recoja
la muestra.
22
Es importante recordar que el ejercicio
puede tener un efecto significativo sobre
los niveles de androstenediona circulante.
Por ello, en un estudio de 18 jugadores
profesionales de fútbol, la concentración
media de androstenediona aumentó de un
valor basal de aproximadamente 0,9 ng/ml
a 1,8 ng/ml al final del juego, declinando a
14
0,7 ng/ml noventa minutos más tarde.
En otro estudio, el nivel medio de
androstenediona para 20 hombres en un
entrenamiento moderado aumentó
significativamente de un valor basal medio
de 1,11 ng/ml a 1,41 ng/ml cinco minutos
15
después de hacer una hora de natación.
Características analíticas
Para obtener datos representativos del
rendimiento del kit Coat-A-Count
Androstenediona Directa, ver la sección
Tablas y Gráficos. Excepto cuando se
indica, todos los resultados en las
secciones siguientes se obtuvieron en
muestras de suero. Los resultados se
expresan en ng/ml.
Factor de Conversión:
ng/ml × 3,4916 → nmol/l
Intervalo de calibración: 0,15 a 10 ng/ml
(0,52 a 35 nmol/l),
Sensibilidad analítica: 0,04 ng/ml
(0,14 nmol/l),
Precisión intraensayo (dentro de una
tanda) Las estadísticas se calcularon para
las muestras a partir de los resultados de
20 pares de tubos en una sola tanda de
análisis. (Ver la tabla "Intraassay
Precision").
Precisión interensayo (de una tanda a
otra) Las estadísticas se calcularon para
las muestras a partir de los resultados de
pares de tubos de 20 ensayos distintos.
(Ver la tabla "Interassay Precision".)
Especificidad: El antisuero Coat-A-Count
Androstenediona Directa es altamente
específico para la androstenediona, con
una reactividad cruzada extremadamente
baja para otros esteroides naturales o
fármacos terapéuticos que pueden estar
presentes en las muestras de los
pacientes. (Ver la tabla "Specificity".)
Linealidad: Las muestras fueron
analizadas con varias diluciones. (Ver la
tabla "Linearity" para resultados
representativos.)
Efecto deriva: Ninguno hasta
aproximadamente 400 tubos. (Ver tabla
"End-of-Run Effect").
Medias:
2,5 ng/ml (Coat-A-Count Directo)
2,6 ng/ml (Coat-A-Count Extracción)
Recuperación: Se analizaron muestras
cargadas 1 en 19 con cinco soluciones de
androstenediona (4, 10, 20, 40 y
100 ng/ml). (Ver la tabla "Recovery" para
resultados representativos).
2° comparación del método: En otro
experimento, se analizaron muestras de
treinta y ocho pacientes mediante el
procedimiento Coat-A-Count
Androstenediona Directa y un
radioinmunoanálisis directo
comercialmente disponible de tubos
recubiertos para androstenediona (Kit A),
con concentraciones de androstenediona
de aproximadamente 0,74 a 3,48 ng/ml.
Por regresión lineal. (Ver el gráfico
“Method Comparison 2”).
Bilirrubina: Puede causar una depresión
en los valores. (Ver la tabla “Bilirubin”.)
Hemólisis: La presencia de eritrocitos
hasta concentraciones de 30 µl/ml no
tiene efecto en los resultados, en lo
concerniente a la precisión del ensayo.
Lipemia: La lipemia puede interferir con el
ensayo. (Ver la tabla “Lipemia”.)
Tipo de Muestra Alternativa: para
evaluar el efecto de los diferentes tipos de
muestras alternativos, se recogió sangre
de 40 voluntarios en tubos normales,
tubos con Heparina, tubos con EDTA y
®
tubos vacutainer SST de Becton
Dickinson. Todas las muestras fueron
analizadas mediante el procedimiento
Coat-A-Count Androstenediona Directa.
(Heparina) = 0,95 (Suero) + 0,02 ng/ml
r = 0,997
(EDTA) = 1,02 (Suero) – 0,01 ng/ml
r = 0,997
(CAC Directo) = 1,33 (Kit A) + 0,054 ng/mL
r = 0,860
Medias:
2,2 ng/ml (Coat-A-Count Directo)
1,6 ng/ml (Kit A)
Asistencia técnica
Póngase en contacto con el distribuidor
nacional.
El Sistema de Calidad de Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. está certificado por la ISO
13485:2003.
(SST) = 1,00 (tubos simples) – 0,15 ng/ml
r = 0,996
Français
Medias:
4,1 ng/ml (Suero)
3,9 ng/ml (Heparina)
4,2 ng/ml (EDTA)
3,9 ng/ml (SST)
Coat-A-Count
Androstènedione directe
Los resultados muestran que el suero y el
plasma con EDTA y heparinizado
producen resultados esencialmente
equivalentes.
1° comparación del método: Se
analizaron simultáneamente 60 muestras
de pacientes mediante el procedimiento
Coat-A-Count Androstenediona Directa y
el kit Coat-A-Count Androstenediona
(método con extracción), con
concentraciones de androstenediona de
0,25 a aproximadamente 11 ng/ml. Por
regresión lineal. Ver el gráfico “Method
Comparison 1”).
(CAC Directo) =
0,81 (CAC Extracción) + 0,39 ng/ml
r = 0,952
Domaine d'utilisation: Coat-A-Count
Androstènedione directe est un dosage
radioimmunologique en phase solide pour
la mesure quantitative directe (sans
4
extraction) de l'Δ -androstènedione dans
le sérum ou plasma EDTA ou hépariné.
Réservé à un usage diagnostique in vitro.
Référence catalogue : TKAN1 (100 tubes)
Le coffret de 100-tubes contient
moins de 6.5 micro-curies
(241 kilobecquerels) d'
androstènedione marquée à l'iode 125.
Introduction
La Δ4-Androstènedione est un stéroïde
qui sert de précurseur majeur à la
testostérone et l'estrone. L'intérêt clinique
23
vient du fait qu'il est souvent élevé dans
les cas d'hirsutisme et de virilisation.
A la différence des androgènes
surrénaliens déhydroépiandrostérone
(DHEA) et sa forme sulfatée (DHEA-S),
l'androstènedione circulant provient pour
une part des glandes surrénales et pour
l'autre des ovaires. Le taux plasmatique
augmente régulièrement au cours des 7
premières années de la vie, ensuite
graduellement décline après 30 ans. La
Δ4-Androstènedione présente des
variations diurnes, étant élevée le matin
avec des variations cycliques au cours du
cycle menstruel, pic au milieu du cycle.
Durant la grossesse, le taux plasmatique
est augmenté.
Principe du test
La technique Coat-A-Count
Androstènedione directe est un dosage
radioimmunologique en phase solide. Au
cours de l'incubation, il y a compétition
entre l'androstènedione marquée à l'iode
125 et l'androstènedione de l'échantillon,
vis-à-vis des sites de l'anticorps.
L'anticorps étant fixé sur la paroi des
tubes en polypropylène, après incubation,
il suffit d'éliminer le surnageant par
décantation pour isoler facilement la
fraction radioactive lié à l'anticorps. Le
tube est ensuite compté sur un compteur
gamma, les cpm étant inversement
proportionnels à la concentration de
l'androstènedione présente dans
l'échantillon qui sera déterminée à l'aide
d'une courbe standard.
Aucune Extraction: le dosage de la
l'androstènedione avec la technique
Coat-A-Count ne nécessite pas une
extraction ou chromatographie préalable.
Réactifs à distribuer: 1
Temps d'incubation totale : 2 heures.
Activité totale en début de marquage :
environ 90 000 cpm.
Précautions d'emploi
Réservé à un usage diagnostique in vitro.
Réactifs : Conserver à +2/+8°C dans un
réfrigérateur autorisé à recevoir du
matériel radioactif. Éliminer les déchets
conformément aux lois en vigueur.
Ne pas utiliser les réactifs au delà de leur
date d'expiration.
24
Certains composants fournis avec ce
coffret peuvent contenir des agents
humains et/ou d'autres éléments
potentiellement infectieux qui nécessitent
certaines précautions.
Respecter les précautions d'emploi et
manipuler tous les composants du coffret
comme des produits potentiellement
infectieux. Les réactifs dérivés de produits
humains et utilisés dans ce coffret ont subi
un test sérologique pour la Syphilis et des
tests de dépistage pour les anticorps antiVIH1 et 2, anti-HCV et pour l'antigène de
surface de l'hépatite B, qui se sont tous
avérés négatifs.
De l'azide de sodium à des concentrations
inférieures à 0,1 g/dl a été ajouté comme
conservateur ; lors de l'élimination,
l'évacuer avec de grandes quantités d'eau
pour éviter une accumulation d'azides
métalliques explosifs dans les
canalisations.
Eau : utiliser de l'eau distillée ou
désionisée.
Radioactivité
Ce coffret de réactif est reservé à l'usage
in vitro (Autorisation DGSNR).
Règles de base de protection contre les
rayonnements ionisants et précautions
d'emploi.
Ce produit radioactif ne peut être reçu,
acheté, détenu ou utilisé que par des
personnes autorisées à cette fin et dans
des laboratoires dotés de cette
autorisation. Cette solution ne peut en
aucun cas être administrée à l'homme ou
aux animaux. Respecter impérativement
les dates de péremption indiquées sur
l'emballage extérieur et sur les étiquettes
des différents réactifs du coffret. Tous les
réactifs, dont les tubes revêtus
d'anticorps, doivent être conservés à
+ 4/+ 8° C dans leur conditionnement
d'origine avant d'être utilisés. L'achat, la
possession, l'utilisation et l'échange de
matières radioactives sont soumis aux
réglementations en vigueur dans le pays
de l'utilisateur. Les règles de base de
protection contre les rayonnements
ionisants doivent être respectées selon
des procédures en vigueur. Ne pas
pipeter des solutions radioactives avec la
bouche. Eviter le contact direct avec la
peau ou les muqueuses de tout produit
radioactif en utilisant des blouses et gants
de protection. Toute manipulation de
matières radioactives se fera dans un
local ad hoc éloigné de tout passage. Les
produits radioactifs seront stockés dans
leur conditionnement d'origine dans un
local approprié. Un cahier de réception et
de stockage de produits radioactifs sera
tenu à jour. Le matériel de laboratoire et la
verrerie qui ont été contaminés doivent
être éliminés au fur et à mesure afin
d'éviter une contamination croisée de
plusieurs isotopes. Chaque contamination
ou perte de substance radioactive devra
être réglée selon les procédures établies.
Toute mise aux déchets de matière
radioactive se fera en accord avec les
réglementations en vigueur. Ne pas
manger, ni boire, ni fumer, ni appliquer
des cosmétiques dans les laboratoires où
des produits radioactifs sont utilisés. Les
réactifs radioactifs ne peuvent être vendus
qu'à des personnes habilitées à manipuler
des substances radioactives.
Materiel Fourni :
Préparation Initiale
Tubes revêtus d'anticorps antiAndrostènedione (TAN1)
Tubes en polypropylène revêtus
d'anticorps polyclonaux de lapin, antiandrostènedione dans des sachets à
glissière. Les conserver réfrigérés et
protégés de l'humidité, bien refermer les
sachets après utilisation. Stable à +2/+8°C
jusqu'à la date d'expiration notée sur le
sachet. Couleur: orange fluo.
TKAN1: 100 tubes.
Androstènedione marquée à l'iode 125
(TAN2)
Chaque flacon contient 105 ml d'
androstènedione marquée à l'iode 125,
avec conservateurs Stable à +2/+8°C
pendant 30 jours après ouverture, ou
jusqu'à la date d'expiration notée sur le
flacon.
TKAN1: 1 flacon.
Standards Androstènedione
(TAN3–8)
Six flacons de standards de A à F d'
androstènedione prêts à l'emploi, en
matrice sérique humaine, avec
conservateurs, le standard A contient
5,0 ml, et les standards B à F contiennent
2,0 ml chacun. Stable à +2/ +8 °C pendant
30 jours après ouverture, ou 6 mois
(aliquoté) à –20 °C.
TKAN1: 1 jeu.
Les standards contiennent
respectivement, 0, 0,15, 0,4, 1,5, 4,0 ; et
10 nanogrammes d'androstènedione par
millilitre (ng/ml) en matrice sérique
humaine traitée équivalents à : 0, 0,52,
1,4, 5,2, 14 ; et 35 nanomoles par litre
(nmol/l). Des points intermédiaires
peuvent être obtenus en mélangeant des
standards dans des proportions
compatibles.
Contrôles Androstènedione (TANC1–2)
2 flacons (2 mL chacun)
d'androstènedione (Contrôle 1 et 2),
contenant différentes concentrations d'
androstènedione en matrice sérique
humaine, avec conservateurs. Stable à
+2/ +8 °C pendant 30 jours après
ouverture, ou 6 mois (aliquoté) à –20 °C.
Se reporter à la notice incluse pour les
valeurs exactes des contrôles.
TKAN1: 1 jeu.
Matériel requis mais non fourni
Compteur Gamma – permettant
l'utilisation de tubes standards 12x75 mm
Agitateur de type Vortex
Dosage radioimmunologique
Tubes secs en polypropylène 12x75 mm –
à utiliser pour les tubes LNS, disponibles
chez Siemens Healthcare Diagnostics
(Référence catalogue : PPO)
Micropipettes: 100 µl et 1,0 ml.
Un portoir de décantation – disponible
chez Siemens Healthcare Diagnostics
(Référence catalogue : FDR)
Papier graphe Logit-log
Recueil des échantillons
Le patient n'a pas besoin d'être à jeun et
aucune préparation spéciale n'est requise.
16
Prélever le sang par ponction veineuse
et le recueillir sur tubes secs (sans anticoagulant) EDTA ou héparinés, en notant
l'heure de prélèvement. Séparer le sérum
ou le plasma des cellules, par
centrifugation.
Des échantillons ictériques ou fortement
contaminés peuvent donner des résultats
érronés.
25
Il est recommandé de clarifier les
échantillons hyperlipémiques par
ultracentrifugation.
également en duplicate, pour les contrôles
et les échantillons patients.
Standards
Des échantillons hémolysés peuvent être
révélateurs d'une préparation inadéquate
du prélèvement avant son envoi au
laboratoire ; il faudra donc interpréter les
résultats avec prudence.
Des tubes pour prélèvements sanguins
provenant de fabricants différents peuvent
donner des résultats différents, selon les
matériaux et additifs utilisés, y compris
gels ou barrières physiques, activateurs
de la coagulation et/ou anticoagulants. Le
coffret Androstènedione Coat-A-Count n'a
pas été testé sur tous les types de tubes
possibles. Veuillez consulter le chapitre
intitulé Autres Types d'Échantillons pour
plus de renseignements sur les tubes qui
ont été évalués.
2
Volume nécessaire : 100 µl de sérum ou
plasma par tube
3
26
0
0,15
0,52
C
0,4
1,4
D
1,5
5,2
E
4,0
14
F
10
35
Pipeter 100 µl du standard zéro A
dans les tubes de LNS et les tubes A
(B0). Pipeter 100 µl de chacun des
autres standards, contrôles et
échantillons de patients dans les
tubes correspondants préparés.
Pipeter directement au fond du
tube.
Ajouter 1,0 ml d' Androstènedione
marquée à l'iode 125 dans chaque
tube. Vortexer.
4
Incuber 2 heures à température
ambiante. (15–28°C)
5
Décanter complétement.
La valeur du LNS dans la technique
Coat-A-Count étant très faible, elle
peut être négligée sans que la
précision ou le contrôle de qualité ne
soient modifiés.
Tubes revêtus d'anticorps: Etiqueter 12
tubes revêtus d'anticorps antiAndrostènedione, A (liaison maximale B0)
et de B à F en duplicate. Etiqueter les
tubes revêtus d'anticorps antiAndrostènedione supplémentaires,
0
B
Le temps d'addition du traceur ne doit
pas dépasser 10 minutes. Les tubes T
peuvent être mis de côté jusqu'au
comptage (étape 6); ils n'ont pas
d'autre traitement.
Tous les composants doivent être à
température ambiante avant leur utilisation
(15–28°C).
Tubes secs : Etiqueter deux séries
de tubes (non revêtus) en
polypropylène 12x75 mm tubes T et
LNS (Liaison Non Spécifique) en
duplicate.
A (B0)
Les échantillons de patients
suspectés de contenir des
concentrations d' androstènedione
supérieures au standard le plus élevé
(10 ng/ml) doivent être dilués avec le
standard zéro avant le dosage.
Protocole de dosage
1
nmol/l
Il est bon d'utiliser des embouts de
micropipettes jetables, de changer
d'embout entre les échantillons de
manière à éviter toute contamination.
Conservation: 2 jours à +2/+8° C ou 2
mois à –20°C.
Avant le dosage, laisser les échantillons
revenir à température ambiante (15–
28°C), mélanger doucement par rotations
ou retournement. Aliquoter, si nécessaire,
afin d'éviter de répéter les cycles
congélation / décongélation. Ne pas tenter
de décongeler les spécimens congelés à
l'aide d'un bain marie.
ng/ml
Eliminer toute trace d'humidité pour
améliorer la précision du dosage. A
l'aide d'un portoir de décantation,
décanter ou aspirer le contenu de tous
les tubes (excepté les tubes T) et
laisser les tubes retournés pendant 2
ou 3 minutes. Puis appliquer les
fortement sur du papier absorbant afin
d'éliminer les gouttelettes résiduelles.
6
Compter 1 minute dans un compteur
gamma.
Calcul des Résultats
Afin d'obtenir des résultats en
concentrations à partir d'une
représentation logit-log de la courbe de
calibration, calculer pour chaque doublet
de tubes les coups corrigés: moyenne
cpm-moyenne des cpm du LNS:
CPM corrigés = (Moyenne cpm) moins
(Moyenne cpm LNS)
Puis déterminer pour chaque doublet la
capacité de liaison en pourcentage de
liaison maximale (LM), corrigée des cpm
dus au LNS des tubes A tubes considérés
à 100%:
% liaison = (cpm corrigés / cpm corrigés LM) ×
100
Les échantillons dans la gamme de
calibration donnent des résultats
pratiquement identiques quand la capacité
de liaison est calculée directement à partir
de la moyenne des CPM. : sans correction
de LNS.
En utilisant un papier logit-log, on porte en
ordonnée les pourcentages de liaison en
fonction des concentrations des
calibrateurs qui ne sont pas à zéro, en
abscisse. On trace une ligne droite
passant approximativement par ces
points. Les concentrations des
échantillons inconnus sont déterminées
par interpolation sur la courbe standard.
Il est bon de vérifier les doublets et de
construire une représentation graphique
de la courbe de calibration (même si celleci est faite par ordinateur) avec les
différentes valeurs de façon à visualiser le
meilleur tracé et c'est une façon de
détecter les points deviants. Nous
recommandons aussi de suivre les
paramètres suivants :
T = Activité totale (cpm)
%LNS = 100 × (Moyenne des cpm du LNS /
cpm Totaux)
%LM = 100 × (cpm corrigés / cpm totaux)
Et les intercepts à 20, 50 et 80 % avec
20% = Concentration à 20% de liaison, etc.
Note: d'autres approches sont possibles
comme l'intégration de paramètres 4-p
logistique. Se rapporter à Dudley RA, et
al. Guidelines for immunoassay data
reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71.
Exemple de série : A titre d'exemple
uniquement, et non pour calculer des
résultats provenant d'une autre série. (Voir
le tableau « Example Run ».)
Contrôle de Qualité
Des contrôles (ou pools de sérums) avec
au moins deux taux de concentration de
androstènedione haut et bas doivent être
dosés en routine comme des échantillons
inconnus. Les contrôles fournis avec ce
coffret peuvent être utilisés pour cet
usage.
Les résultats de patient ne doivent être
validés que si les résultats des contrôles
correspondent aux critères d'acceptation
établis par votre laboratoire.
Il est bon d'enregistrer pour chaque
dosage les numéros de lots des
composants utilisés ainsi que la date à
laquelle ils ont été reconstitués ou ouverts.
Nous recommandons également de noter
jour après jour les résultats des contrôles
– comme décrit par exemple dans
Westgard JO, et al. A multi-rule chart for
quality control. Clin Chem 1981;27:493501. Noter qu'un redosage d'échantillon
peut être précieux pour suivre la précision
inter essai, et que les doublets de tubes
contrôle peuvent être espacés de façon à
vérifier l'absence de dérive significative.
Valeurs de référence
Hommes: Une étude comportant 124
hommes donne avec la technique
Coat-A-Count Direct Androstenedione des
valeurs physiologiques comprises entre
0,8 à 3,0 ng/ml à 95 % d'intervalle de
confiance, avec une médiane à 1,8 ng/ml.
Femmes: Une étude comportant 122
femmes montrent des valeurs
physiologiques de 0,5 à 3,7 ng/ml à 95 %
d'intervalle de confiance, avec une
médiane à 1,7 ng/ml.
Ces valeurs sont données à titre indicatif
uniquement. Chaque laboratoire devra
établir ses propres valeurs de référence.
Limites
Le follicule de Graaf en croissance sécrète
de l'androstènedione, doublant son taux
basal en milieu de cycle. Les échantillons
prélevés durant cette période ont des
résultats en androstènedione se situant
27
dans la partie supérieure des valeurs
1,2
physiologiques définies à 95 %.
Des variations diurnes ont été observées.
Par exemple, chez 11 hommes de 18 à 30
ans, la concentration moyenne en
androstènedione de 24 heures est de
0,93 ng/ml, avec une amplitude
circadienne équivalente à 42 % de la
moyenne. L'acrophase majeure se
rencontre le matin vers 7 h 10 ; le nadir
majeur est observé vers 23 heures; et il
existe aussi une seconde acrophase vers
16h35. L'intervalle de confiance pour
13
acrophase/nadir est de 68 minutes. En
conséquence il est nécessaire de noter
l'heure du prélèvement.
Ne pas oublier que l'exercice physique a
un impact significatif sur le taux
d'androstènedione circulant. Ainsi, dans
une étude portant sur 18 joueurs
professionnels de football, la moyenne du
taux d'androstènedione est augmentée
par rapport au taux basal, et se situe
approximativement de 0,9 ng/ml à
1,8 ng/ml à la fin du match, atteignant
14
0,7 ng/ml 90 minutes plus tard. Dans
une autre étude, la moyenne du taux
d'androstènedione pour 20 hommes
moyennement entraînés augmente
significativement par rapport au taux basal
de 1,11 ng/ml à 1,41 ng/ml cinq minutes
15
après 1 heure de natation.
Performances du test
Consulter les tableaux et graphiques pour
obtenir les données représentatives des
performances de ce test. Les résultats
sont exprimés en nanogrammes d'
androstènedione par millilitre (ng/ml).
Tous les résultats ont été obtenus à partir
d'échantillons sériques.
Facteur de conversion :
ng/ml × 3,4916 → nmol/l
Intervalle de linéarité : 0,15 – 10 ng/ml
(0,52 – 35 nmol/l),
Sensibilité analytique : 0,04 ng/ml
(0,14 nmol/l),
Précision intra-dosage (au sein d'une
même série) Les résultats ont été
calculés pour chacun des 8 échantillons à
partir des résultats de 20 tubes en une
même série. (Voir le tableau « Intraassay
Precision ».)
Précision inter-dosage (entre plusieurs
séries) Les résultats ont été calculés pour
28
chacun des 8 échantillons à partir des
résultats de 20 séries en duplicate. (Voir le
tableau « Interassay Precision ».)
Spécificité : L'antisérum utilisé dans le
coffret Coat-A-Count Direct
Androstenedione est très spécifique pour l'
androstènedione, avec des réactions
croisées particulièrement faibles pour les
autres stéroïdes présents naturellement
dans le sérum ou provenant de
médications. (Voir le tableau "Specificity")
Test de dilution : Des échantillons ont
été dosés à différentes concentrations.
(Voir le tableau « Linearity » pour des
données représentatives.)
Effet de la position des tubes : Aucun
jusqu'à 400 tubes. (Voir le tableau « Endof-Run Effect ».)
Test de récupération : 5 échantillons
sont mélangés dans la proportion 19/1
avec 5 solutions d' androstènedione de
concentrations (4, 10, 20, 40 et 100 ng/ml)
puis dosés avec le coffret Coat-A-Count.
Direct Androstenedione. (Voir le tableau
« Recovery » pour des données
représentatives.)
Bilirubine : La présence de bilirubine peut
amener une diminution des résultats. (Se
reporter au tableau “Bilirubin”.)
Hémolyse : La présence d'agrégat
d'hématies jusqu'à une concentration de
30 µl/ml, n'a aucun effet sur les résultats
quant à la précision du dosage.
Lipémie : Des échantillons trés
lipèmiques peuvent amener une
diminution des résultats. (Se reporter au
tableau “Lipemia”.)
Autres types d'échantillons: pour
estimer l'effet de l'utilisation de différents
type d'échantillons, 40 volontaires ont été
prélevés sur tubes secs, héparinés, EDTA
®
et sur tubes vacutainer SST Becton
Dickinson. Tous les échantillons ont été
dosés avec le coffret Coat-A-Count Direct
Androstenedione. Les résultats analysés
par régression linéaire donnent :
(Héparine) = 0,95 (Sérum) + 0,02 ng/ml
r = 0,997
(EDTA) = 1,02 (Sérum) – 0,01 ng/ml
r = 0,997
(SST) = 1,00 (tubes ordinaires) – 0,15 ng/ml
r = 0,996
Moyennes :
4,1 ng/ml (Sérum)
3,9 ng/ml (Héparine)
4,2 ng/ml (EDTA)
3,9 ng/ml (SST)
Codice: TKAN1 (100 provette)
Ce dosage donne les mêmes résultats sur
sérum, plasma hépariné et plasma EDTA
Comparaison de méthodes N°1: La
technique Coat-A-Count Direct
Androstenedione a été comparée avec le
dosage Coat-A-Count Androstenedione kit
(méthode avec extraction), pour des
concentrations allant de 0,25 à 11 ng/ml.
Par régression linéaire. (Voir le graphique
« Method Comparison 1 ».)
(CAC Direct) = 0,81 (CAC Extraction) +
0,39 ng/ml
r = 0,952
Moyennes :
2,6 ng/ml (Coat-A-Count Extraction)
Comparaison de méthodes N°2: La
technique Coat-A-Count Direct
Androstènedione a été comparée sur 38
échantillons avec un autre coffret
Androstenedione (méthode directe avec
tubes coatés) kit A, pour des
concentrations allant de 0,74 à 3,48 ng/ml.
Par régression linéaire. (Voir le graphique
« Method Comparison 2 ».)
r = 0,860
Moyennes :
1,6 ng/ml (Kit A)
Assistance technique
Contacter votre distributeur national.
Le Système Qualité de Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. est certifié ISO 13485:2003.
Italiano
Coat-A-Count
Androstenedione Diretto
Uso: Il dosaggio Coat-A-Count
Androstenedione Diretto è un dosaggio
radioimmunologico in fase solida marcato
125
con I per la misurazione quantitativa del
4
Δ -androstenedione nel siero e nel plasma
eparinizzato ed EDTA. E' a solo uso
diagnostico in vitro.
I
125
Il kit da 100 determinazioni
contiene meno di 6,5 microcurie
(241 kilobecquerel) di
androstenedione marcato con
.
Riassunto e spiegazione del
Test
4
Il Δ -Androstenedione è uno steroide che
serve quale principale precursore del
testosterone e dell'estrone. L'interesse
clinico deriva dal fatto che è spesso
elevato nei casi di crescita anomala dei
peli (irsutismo) e virilizzazione.
A differenza degli androgeni surrenali, il
deidroepiandrosterone ed il suo solfato,
l'androstenedione in circolo ha origine sia
dal surrene che dalle ovaie. I livelli
plasmatici aumento in maniera decisa a
partire dal settimo anno di età, quindi
declinano gradualmente dopo i trenta
anni. L'androstenedione presenta una
variazione diurna, che si presenta più
elevata al mattino, ed anche una
variazione ciclica durante il ciclo
mestruale, con un picco intorno a metà
ciclo. Durante la gravidanza, si verifica un
aumento dei livelli plasmatici.
Procedura del Dosaggio
Il Coat-A-Count Androstenedione Diretto è
un immunodosaggio competitivo, basato
su provette coattate con anticorpo.
125
L'androstenedione marcato con I
compete con l'androstenedione presente
nel campione del paziente per i siti
anticorpali. Dopo incubazione, la provetta
viene decantata per separare il materiale
legato da quello libero e contata in un
gamma counter. Le conte sono
inversamente proporzionali al quantitativo
di androstenedione presente nel
campione. La quantità di androstenedione
presente nel campione del paziente viene
determinata paragonando le conte alla
curva di calibrazione.
Nessuna Estrazione: Le determinazioni
di Androstenedione effettuate con il
metodo Coat-A-Count Androstenedione
Diretto non richiedono né estrazione né
cromatografia.
Reagenti da Dispensare: 1
Tempo Totale di Incubazione: 2 ore.
29
Conte Totali alla iodinazione:
circa 90 000 cpm.
Avvertenze e precauzioni
Per uso diagnostico in vitro.
Reagenti: Conservare a 2–8°C in un
frigorifero appositamente destinato al
materiale radioattivo. Eliminare secondo le
normative di legge vigenti.
Non utilizzare reagenti oltre la data di
scadenza.
Alcuni componenti forniti in questo kit
possono contenere materiale di origine
umana e/o altri ingredienti potenzialmente
pericolosi che necessitano di precauzioni
di utilizzo.
Seguire le precauzioni universali, e
manipolare tutti i componenti come se
potessero trasmettere agenti infettivi.
Sono stati analizzati i materiali di origine
umana e sono stati trovati non reattivi per
la Sifilide; per gli Anticorpi anti-HIV 1 e 2;
per l'Antigene di Superficie dell'Epatite B;
e per gli Anticorpi Anti-Epatite C.
E' stata aggiunta Sodio Azide a
concentrazioni inferiori a 0,1 g/dL come
conservante. Al momento
dell'eliminazione, irrorare con molta acqua
per evitare la formazione di azidi
metalliche potenzialmente esplosive nelle
tubature di piombo e di rame.
Acqua: Utilizzare solo acqua distillata o
deionizzata.
Radioattività
Una copia di tutti i certificati di
Autorizzazione per radioisotopi (Specifica
o Generica) rilasciata ad un cliente
americano deve essere conservata in file
presso la Siemens Healthcare Diagnostics
prima che i kit o i componenti contenenti
materiale radioattivo possano essere
spediti. Questi materiali radioattivi
possono essere acquisiti da qualsivoglia
cliente in possesso dell'Autorizzazione
Specifica. Con l'Autorizzazione Generica
questi materiali radioattivi possono essere
acquistati solo da medici, veterinari che
esercitino la professione, laboratori clinici
ed ospedalieri – e solo per l'esecuzione di
test clinici o di laboratorio in vitro che non
implichino somministrazione interna o
esterna del materiale radioattivo o delle
sue radiazioni alle persone o animali. La
sua acquisizione, ricevimento,
30
conservazione, utilizzo, trasferimento ed
eliminazione sono soggette a
regolamentazioni e ad Autorizzazione
(Generica o Specifica) della Commissione
Statunitense per il Nucleare o dello Stato
con il quale l'NRC abbia stipulato un
accordo per l'esercizio del controllo
regolatorio.
Manipolare i materiali radioattivi secondo
quanto previsto dall'Autorizzazione
Generica o Specifica. Per minimizzare
l'esposizione alle radiazioni, l'utilizzatore
deve attenersi alle linee guida stabilite dal
National Bureau of Standards publication
su “Safe Handling of Radioactive
Materials” “Norme per una corretta
manipolazione dei Materiali
Radioattivi”.(Guida N° 92, pubblicata il 9
Marzo 1964) e successive edizioni
pubblicate dallo Stato e dalle Autorità
Federali.
Assorbire immediatamente le fuoriuscite e
decontaminare le superfici contaminate.
Evitare la formazione di aerosol. Eliminare
i rifiuti solidi radioattivi secondo quanto
previsto dall'Autorizzazione. Le licenze
generiche (possessori di NRC Form 483)
possono eliminare i rifiuti radioattivi solidi
come non radioattivi, dopo aver rimosso
l'etichetta. I detentori di autorizzazioni
specifiche (NRC Form 313) devono fare
riferimento al Titolo 10, Codice delle
Regolamentazioni Federali Parte 20. I
detentori di Autorizzazioni negli Stati che
hanno stipulato un accordo con l'NRC
dovrebbero far riferimento alle
regolamentazioni idonee dei loro stati. I
detentori di Autorizzazioni Generali
possono eliminare i rifiuti radioattivi liquidi
del tipo contenuto in questo prodotto
attraverso il lavello del laboratorio. I
detentori di autorizzazione devono
eliminare o rendere illeggibili le etichette
dei contenitori vuoti di materiali radioattivi
prima di eliminare i rifiuti solidi. I detentori
di autorizzazioni specifiche possono
eliminare piccoli quantitativi di rifiuti
radioattivi liquidi del tipo utilizzato in
questo prodotto attraverso il lavello del
laboratorio. Fare riferimento alle
regolamentazioni appropriate applicabili al
Vostro laboratorio.
Materiali Forniti:
Preparazione Iniziale
Provette Coattate con Anticorpo antiAndrostenedione Diretto (TAN1)
Provette di polipropilene coattate con
anticorpi policlonali di coniglio antiandrostenedione e confezionate in buste a
cerniera. Conservare refrigerate al riparo
dall'umidità, richiudendole dopo l'utilizzo.
Stabili a 2–8°C fino alla data di scadenza
indicata sulla confezione. Colore: Arancio
fluorescente
TKAN1: 100 provette.
Androstenedione Diretto marcato con
125
(TAN2)
I
105 mL di androstenedione iodinato, con
conservanti. Stabile a 2–8°C per 30 giorni
dopo l'apertura, o fino alla data di
scadenza indicata sulla provetta.
TKAN1: 1 flacone.
Calibratori Androstenedione Diretto
(TAN3–8)
Sei flaconi, etichettati dalla A alla F,
contenenti concentrazioni diverse di
androstenedione in una matrice a base di
siero umano, con conservanti. Il
calibratore zero A contiene 5 mL, ed i
restanti calibratori dalla B alla F
contengono 2 mL ciascuno. Stabile a 2–
8°C per 30 giorni dopo l'apertura, o per
6 mesi (aliquotato) a –20°C.
TKAN1: 1 set.
I calibratori non zero rapresentano,
respettivamente, 0,15, 0,4, 1,5, 4,0 e
10 nanogrammi di androstenedione per
millilitro (ng/mL); equivalenti a, 0,52, 1,4,
5,2, 14 e 35 nanomoli per litro (nmol/L). I
punti intermedi della calibrazione possono
essere ottenuti mescolando i calibratori in
proporzioni idonee.
Controlli Androstenedione Diretto
(TANC1–2)
2 flaconi (2 mL ciascuno) di
Androstenedione Diretto, Controllo 1 e 2,
contengono concentrazioni diverse di
androstenedione in siero umano
processato, con conservanti. Stabile a 2–
8°C per 30 giorni dopo l'apertura, o per
6 mesi (aliquotato) a –20°C. Fare
riferimento alla metodica dei controlli
dell'Androstenedione Diretto per le
rispettive concentrazioni.
TKAN1: 1 set.
Materiali Richiesti Ma Non
Forniti
Gamma counter — compatibile con
provette standard da 12x75 mm
Vortex mixer
Radioimmunodosaggio
Provette semplici di polipropilene da
12x75 mm — da utilizzarsi come provette
per le Conte Totali e per le NSB,
disponibili presso Siemens Healthcare
Diagnostics (Codice: PPO).
Micropipette con puntali monouso: 100 µL
e 1,0 mL.
Foam per la decantazione — disponibili
presso Siemens Healthcare Diagnostics
(Codice: FDR)
Carta per grafici Logit-log
Prelievo dei campioni
Non è necessario che il paziente sia a
digiuno, non sono necessarie preparazioni
16
particolari. Prelevare il sangue in
provette semplici, annotando l'ora del
prelievo, e separare il siero dalle cellule.
Possono essere utilizzati campioni di
plasma eparinizzato ed EDTA.
I campioni itterici o grossolamente
contaminati possono produrre risultati
errati.
Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifuga
per schiarire i campioni lipemici.
I campioni emolizzati posson indicare il
trattamento non idoneo del campione
prima dell'arrivo al laboratorio; per questo
motivo, i risultati devono essere
interpretati con prudenza.
Provette per il prelievo di sangue di
produttori diversi possono dare valori
differenti, a seconda dei materiali e degli
additivi usati, incluso gel o barriere fisiche,
attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.
L'Coat-A-Count Androstenedione Diretto
non é stato verificato con tutte le possibili
variazioni di tipi di provette. Consultare la
sezione riguardante Campioni Alternativi
per dettagli sulle provette testate.
Volume Richiesto: 100 µL di siero o di
plasma per provetta
Conservazione: 2–8°C per 2 giorni, o fino
a 2 mesi congelato a –20°C.
Prima del dosaggio, consentire ai
campioni di raggiungere temperatura
31
ambiente (15–28°C) e mescolare
scuotendo leggermente o capovolgendo la
provetta. Aliquotare, se necessario per
evitare cicli ripetuti di congelamento e
scongelamento. Non tentare di scongelare
i campioni congelati riscaldandoli in un
bagnetto termostatato.
calibratore più elevato (10 ng/mL)
devono essere diluiti nel calibratore
zero prima del dosaggio.
3
Non devono passare più di 10 minuti
nella dispensazione del tracciante.
Mettere da parte le provette T per la
conta (al punto 6); non sono necessari
ulteriori passaggi.
Dosaggio Radioimmunologico
Tutti i componenti devono essere a
temperatura ambiente (15–28°C) prima
dell'utilizzo.
1
Provette Semplici: Etichettare
quattro provette 12x75 mm di
polipropilene semplici (non coattate) T
(conte totali) ed NSB (legame non
specifico) in duplicato.
4
Incubare per 2 ore a temperatura
ambiente (15–28°C).
5
Decantare completamente.
Rimuovere tutta l'umidità visibile
aumentando così la precisione.
Utilizzando un foam, decantare il
contenuto di tutte le provette (ad
eccezione delle provette T) e fare in
modo che si asciughino per 2 o 3
minuti. Quindi blottarle energicamente
su carta assorbente per eliminare le
gocce residue.
Poiché il legame non specifico nel
dosaggio Coat-A-Count è
caratteristicamente basso, le provette
NSB possono essere anche omesse
senza compromettere l'accuratezza o
il controllo di qualità.
Provette Coattate: Etichettare con A
dodici provette in duplicato coattate con
anticorpo Androstenedione Diretto
(legame massimo) e dalla B alla F.
Etichettare altre provette coattate con
anticorpo, anch'esse in duplicato, per i
controlli ed i campioni.
2
Calibratori
ng/mL
A (MB)
0
nmol/L
0
B
0,15
0,52
C
0,4
1,4
D
1,5
5,2
E
4,0
14
F
10
35
Dispensare 100 µL del calibratore
zero A nelle provette NSB ed A, e
100 µL di ciascuno dei calibratori non
zero nelle provette contrassegnate
dalla B alla F. Dispensare 100 µL di
ciascun controllo e campione nelle
provette preparate. Pipettare
direttamente al fondo.
Si consiglia di utilizzare un puntale
monouso, cambiando il puntale tra un
campione e l'altro, per evitare la
contaminazione da carryover.
I campioni con concentrazioni attese
di androstenedione superiori al
32
Aggiungere 1,0 mL di
Androstenedione Diretto marcato con
125
I ad ogni provetta. Vortexare.
6
Contare per 1 minuto in un gamma
counter.
Calcolo dei Risultati
Per ottenere i risultati in termini di
concentrazione da una rappresentazione
logit-log della curva di calibrazione,
calcolare inizialmente per ogni coppia di
provette le conte medie al minuto corrette
con NSB:
Conte Nette = (Media dei CPM) Meno (Media
CPM NSB)
Quindi determinare il legame di ogni
coppia di provette come percentuale del
legame massimo (MB), con le conte
corrette-NSB delle provette A prese al
100%:
Percentuale di Legato = (Conte Nette / Conte
Nette MB) × 100
Il calcolo può essere semplificato
omettendo la correzione per il legame non
specifico; i campioni entro il range dei
calibratori danno virtualmente gli stessi
risultati quando la Percentuale di Legato
viene calcolata direttamente dai CPM
Medi).
Utilizzando la carta logit-log, tracciare la
Percentuale di Legato sull'asse verticale
(probabilità) verso la Concentrazione
sull'asse orizzontale (logaritmica) per
ciascuno dei calibratori non zero e
tracciare una linea retta
approssimativamente lungo il tracciato di
questi punti. I risultati per i campioni
sconosciuti possono essere letti dalla retta
attraverso interpolazione.
Si consiglia di visionare i risultati per
stabilire la correlazione entro i replicati e
tracciare un grafico della curva di
calibrazione (anche se i calcoli vengono
effettuati dal computer) per visualizzare
l'appropriatezza della trasformazione
utilizzata e per individuare i punti devianti
all'interno della calibrazione. Consigliamo
anche di mantenere una rintracciabilità dei
parametri utilizzati per il calcolo dei dati:
T = Conte Totali (conte al minuto)
%NSB = 100 × (Conte NSB Medie / Conte
Totali)
%MB = 100 × (Conte Nette / Conte Totali)
E le “intercette” al 20, 50 ed 80%, dove
20% = Concentrazione al 20% di Legato ecc.
Nota: sono accettabili anche altri tipi di
approccio, quali: l'implementazione della
logistica a 4 parametri. Vedi Dudley Ra et
al. Guidelines for immunoassay data
Reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71.
Seduta Esemplificativa: a solo scopo
illustrativo e non per calcolare i risultati di
un'altra seduta. (vedi tabella "Example
Run").
control. Clin Chem 1981;27:493-501.
Campioni ripetuti possono servire come
ulteriore strumento per monitorare la
precisione inter-dosaggio; coppie di
campioni intervallate lungo tutto il
dosaggio possono essere d'aiuto nel
verificare l'assenza di deviazioni
significative.
Valori Attesi
Maschi: E' stato effettuato uno studio sui
range di riferimento utilizzando campioni
di siero con il dosaggio Coat-A-Count
Androstenedione Diretto. Lo studio aveva
incluso 124 maschi. I risultati presentano
un range centrale al 95% da circa 0,8 a
3,0 ng/mL, con una mediana di 1,8 ng/mL.
Femmine: In uno studio effettuato su 122
donne, i risultati hanno presentato un
range da circa 0,5 a 3,7 ng/mL, con una
mediana di 1,7 ng/mL.
I laboratori devono considerare questi
risultati soltanto come linee guida. Ogni
laboratorio dovrebbe stabilire i propri
range di riferimento.
Limiti
Il follico graafiano in crescita secerne
androstenedione, ed un aumento ddoppio
nella sua produzione si verifica a metà del
ciclo. Campioni prelevati durante questo
periodo possono, quindi, produrre risultati
di androstenedione al di sopra del limite
1,2
superiore centrale al 95%
Riportare i risultati dei pazienti solo se i
risultati dei controlli sono conformi ai criteri
di accettabilità del Vostro laboratorio.
E' stata osservata una variazione diurna.
Ad esempio, in 11 uomini sani di età
compresa tra 18 e 30 anni, la
concentrazione media di androstenedione
nelle 24 ore era di 0,93 ng/mL, con
un'ampiezza circadiana uguale al 42%
della media. L'acrofase superiore si
verificava la mattina alle 7.10; il nadir
superiore la sera alle 23.00; vi era anche
una seconda acrofase alle 16.35.
L'intervallo di confidenza al 95% per
13
l'acrofase/nadir era di 68 minuti. In
maniera analoga occorre annotare l'ora
del prelievo.
Si consiglia per ogni dosaggio di annotare
i numeri di lotto dei componenti utilizzati,
quali le date di ricostituzione o di apertura.
Si consiglia anche di tracciare i grafici dei
risultati dei controlli giorno dopo giorno –
come descritto, ad esempio, in Westgard
JO, et al. A multi-rule chart for quality
Occorre ricordare che l'esercizio può
avere un impatto significativo sui livelli di
androstenedione in circolo. Quindi, in uno
studio effettuato su 18 giocatori di calcio
professionisti, la media della
concentrazione di androstenedione
aumentava da un valore base di circa
Controllo di Qualità
Controlli (o pool di sieri) con alMeno due
livelli di concentrazione di
androstenedione — bassa ed alta —
devono essere dosati nella routine come
campioni sconosciuti. I Controlli di
Androstenedione Diretto forniti con il kit
devono essere utilizzati come materiale
per il controllo di qualità per monitorare le
prestazioni del dosaggio.
33
0,9 ng/mL a 1,8 ng/mL alla fine del gioco,
per declinare nuovamente a 0,7 ng/mL
14
novanta minuti dopo. In un altro studio, il
livello medio di androstenedione per 20
uomini moderatamente allenati aumentava
in maniera significativa da una media di
valori di base di 1,11 ng/mL a 1,41 ng/mL
15
cinque minuti dopo un'ora di nuoto.
Bilirubina: Può provocare un decremento
dei valori. (Vedi tabella “Bilirubin”.)
Prestazioni del Dosaggio
Tipo di Campione Alternativo: Per
determinare l'effetto di campioni
alternativi, è stato prelevato del sangue da
40 volontari in provette semplici,
eparinizzate, EDTA e Becton Dickinson
®
vacutainer SST . Tutti i campioni sono
stati dosati con il dosaggio Coat-A-Count
Androstenedione Diretto.
Vedi Tabelle e Grafici per dati
reppresentativi delle prestazioni del
dosaggio Coat-A-Count Androstenedione
Diretto. Ad eccezione di quanto
specificato, tutti i risultati nelle sezioni di
cui di seguito sono stati ottenuti su
campioni di siero. I risultati sono espressi
in ng/mL.
Fattore di Conversione:
ng/mL × 3,4916 → nmol/L
Range di calibrazione: 0,15 – 10 ng/mL
(0,52 – 35 nmol/L),
Sensibilità analitica: 0,04 ng/mL
(0,14 nmol/L),
Precisione Intra-Dosaggio (All'interno
della stessa seduta) Sono state calcolate
statistiche per i campioni dai risultati di 20
coppie di provette in un unico dosaggio.
(Vedi tabella “Intraassay Precision”.)
Precisione Inter-Dosaggio (Da una
seduta all'altra) Sono state calcolate
statistiche per campioni dai risultati di
coppie di provette in 20 dosaggi differenti.
(Vedi tabella “Interassay Precision”.)
Specificità: L'antisiero Coat-A-Count
Androstenedione Diretto è altamente
specifico per l'androstenedione, con una
crossreattività estremamente bassa verso
altri steroidi naturali o farmaci che
possano essere presenti nei campioni.
(Vedi tabella "Specificity".)
Linearità: I campioni sono stati dosati a
varie diluizioni. (Vedi tabella “Linearity” per
dati rappresentativi.)
Effetto Fine-Seduta: Nessuno fino a circa
400 provette. (vedi tabella "End-of-Run
Effect").
Recupero: sono stati dosati campioni a
cui sono state aggiunte soluzioni 1:19 di
androstenedione (4, 10, 20, 40 e
100 ng/mL). (Vedi tabella “Recovery” per
dati rappresentativi).
34
Emolisi: La presenza di globuli rossi
impaccati in concentrazioni fino a
30 µL/mL non ha effetto sui risultati entro il
range di precisione del dosaggio.
Lipemia: Può interferire con il dosaggio.
(Vedi tabella “Lipemia”.)
(Eparina) = 0,95 (Siero) + 0,02 ng/mL
r = 0,997
(EDTA) = 1,02 (Siero) – 0,01 ng/mL
r = 0,997
(SST) = 1,00 (tubi semplici) – 0,15 ng/mL
r = 0,996
Valore medio:
4,1 ng/mL (Siero)
3,9 ng/mL (Eparina)
4,2 ng/mL (EDTA)
3,9 ng/mL (SST)
I risultati mostrano che sia il siero che il
plasma EDTA ed eparinizzato producono
essenzialmente risultati equivalenti.
Comparazione di Metodi 1: Sessanta
pazienti sono stati dosati simultaneamente
con il dosaggio Coat-A-Count
Androstenedione Diretto e Coat-A-Count
Androstenedione (con estrazione), con
concentrazioni di androstenedione da 0,25
a circa 11 ng/mL. Con regressione lineare.
(Vedi grafico “Method Comparison 1”).
(CAC Diretto) = 0,81 (CAC con Estrazione) +
0,39 ng/mL
r = 0,952
Valore medio:
2,5 ng/mL (Coat-A-Count Diretto)
2,6 ng/mL (Coat-A-Count con EStrazione)
Comparazione di Metodi 2: In un altro
esperimento, 38 campioni di pazienti sono
stati dosati con il metodo Coat-A-Count
Androstenedione Diretto ed un
radioimmunodosaggio Coated tube Diretto
disponibile in commercio per
l'androstenedione (Kit A), con
concentrazioni di androstenedione da
circa 0,74 a 3,48 ng/mL. Con regressione
lineare. (Vedi grafico “Method
Comparison 2”.)
(CAC Diretto) = 1,33 (Kit A) + 0,054 ng/mL
r = 0,860
Valore medio:
2,2 ng/mL (Coat-A-Count Diretto)
1,6 ng/mL (Kit A)
Assistenza Tecnica
All'estero: Si prega di contattare il proprio
Distributore Nazionale.
Il Sistema Qualità della Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. è certificato ISO 13485:2003.
Português
Coat-A-Count
Androstenediona directa
Utilização: O Coat-A-Count
Androstenediona Directa é um
125
radioimunoensaio I de fase sólida
concebido para a medição quantitativa de
4
Δ -androstenediona no soro ou plasma de
EDTA ou heparinizado. Destina-se
unicamente a uso de diagnóstico in vitro.
elevado perto do meio do período.
Durante a gravidez, verifica-se um
aumento dos níveis no plasma.
Princípio do Procedimento
O procedimento Coat-A-Count
Androstenediona Directa é um
imunoensaio competitivo baseado em
tubos revestidos com anticorpos. A
125
androstenediona marcada com I
compete com a androstenediona na
amostra de paciente por locais de fixação
de anticorpos. Após a incubação, a
separação da androstenediona ligada da
livre é efectuada por decantação. O tubo
é então contado num contador gama e as
contagens estão inversamente
relacionadas com a quantidade de
androstenediona presente na amostra de
paciente. A quantidade de
androstenediona na amostra é
determinada por comparação das
contagens com uma curva de calibração.
Sem Preparação: As determinações de
androstenediona através do método
Coat-A-Count Androstenediona Directa
não requerem preparação nem
cromatografia.
Números de catálogo: TKAN1 (100 tubos)
Reagentes para Pipetar: 1
O kit de 100 tubos contém Menos
de 6,5 microcuries (241
quilobecquerels) de
125
androstenediona radioactiva I.
Tempo de Incubação: 2 horas.
Sumário e explicação do teste
4
A Δ -androstenediona é um esteróide que
funciona como dos mais importantes
precursores da testosterona e da estrona.
O seu interesse clínico resulta do facto de
ser frequentemente elevada em casos de
crescimento anormal do cabelo
(hirsutismo) e de virilização.
Ao contrário dos androgenes supra-renais
dehidroepiandrosterona e respectivo
sulfato, a androstenediona em circulação
tem origem tanto nas glândulas suprarenais como nos ovários. Os níveis no
plasma aumentam constantemente a
partir aproximadamente do sétimo ano de
vida, começando a diminuir gradualmente
após os trinta anos. A androstenediona
apresenta uma variação diurna, tendo o
nível mais elevado de manhã, bem como
uma variação cíclica durante o período
menstrual, apresentando o nível mais
Contagens Totais na Marcação com o
Iodo: aproximadamente 90 000 cpm,
Precauções
Para uso de diagnóstico in vitro.
Reagentes: Conservar a 2–8°C num
frigorífico destinado para materiais
radioactivos. Eliminar de acordo com as
leis aplicáveis.
Não utilize reagentes com prazo de
validade expirado.
Alguns componentes fornecidos com este
dispositivo podem conter matéria de
origem humana e/ou outros ingredientes
potencialmente perigosos que necessitem
de algumas precauções.
Manipule com as devidas precauções
todos os materiais capazes de transmitir
doenças infecciosas. As matérias primas,
obtidas de soro humano, foram testadas,
revelando resultados negativos para a
sífilis, para os anticorpos do vírus da
imunodeficiência humana (HIV) 1 e 2;
para o antigénio de superfície da hepatite
35
B (HBsAg) e para os anticorpos do vírus
da hepatite C.
Azida de sódio foi adicionada como
conservante; para evitar acumulações de
azidas metálicas explosivas em
canalizações de cobre e alumínio, os
reagentes devem ser rejeitados no esgoto
apenas se estiverem diluídos e forem
lavados com grandes volumes de água.
Água: Utilize água destilada ou
desionizada.
Radioactividade
Uma cópia da licença de uso de produtos
radioactivos (especifico ou geral) enviada
pelo cliente, deve estar em poder da
Siemens Healthcare Diagnostics antes do
envio dos kits ou componentes contendo
material radioactivo. Estes materiais
radioactivos podem ser adquiridos por
qualquer cliente que possua a necessária
licença especifica. Com uma licença
generalista estes produtos radioactivos só
podem ser adquiridos por médicos,
veterinários na prática de medicina
veterinária, laboratórios clinicos e
hospitais. E somente para uso clinico in
vitro ou testes laboratoriais não
envolvendo administração externa ou
interna do material radioactivo ou da sua
radiação para o ser humano ou outros
animais. A sua aquisição, receita,
armazenamento uso, transporte e
eliminação estão sujeitas aos
regulamentos e à licenciada Comissão de
Regulação Nuclear ou do Estado
respectivo de acordo com a lei em vigor.
Tratar os materiais radioactivos de acordo
com a regulamentação da sua licença,
específica ou generalista. De modo a
minimizar a exposição à radiação deve o
utilizador seguir as instruções da
publicação do Departamento Nacional de
Padrões (Utilização segura de materiais
radioactivos-Livro No. 92, publicado em
Março de 1964) e publicações seguintes
do Estado e Autoridades Federais.
Limpar os derrames prontamente e
descontamine as superficies afectadas.
Evitar os aerossois. Elimine os lixos
radioactivos de acordo com a
regulamentação da licença. As licenças
generalistas (portadores da licença NRC
483) podem eliminar os lixos sólidos
radioactivos como lixo não radioactivo
depois de remover os rótulos. Licenças
36
Especificas (Licença NRC 313) devem ter
em conta o Capitulo 10 do artigo 20, do
Código de Regulamentações Federais.
Cada Estado deve referir a legislação em
vigor aprovada para o seu território. As
licenças generalistas podem eliminar os
lixos radioactivos liquidos do tipo deste
produto para um esgoto de laboratório. Os
licenciados devem remover os rótulos dos
frascos vazios de materiais radioactivos
antes de os colocar no esgoto sólido. As
licenças especificas podem eliminar
pequenas quantidades de lixo radioactivo
deste tipo de produto para o esgoto
normal do laboratório. Ter em atenção as
regulamentações em vigor para o seu
laboratório.
Materiais fornecidos:
Preparação inicial
Tubos Revestidos com Anticorpos de
Androstenediona Directa (TAN1)
Tubos de polipropileno revestidos com
anticorpos policlonais de coelho para
androstenediona e embalados em
saquetas de fecho hermético. Conservar
refrigerado e protegido da humidade,
selar os sacos cuidadosamente após
cada abertura. Estável a 2–8°C até à data
de validade inscrita na embalagem. Cor:
laranja fluorescente.
TKAN1: 100 tubos.
125
Androstenediona Directa I (TAN2)
105 mL de androstenediona iodada, com
conservante. Estável a 2–8°C durante 30
dias depois de aberto, ou até à data de
validade inscrita no frasco.
TKAN1: 1 frasco.
Calibradores de Androstenediona
Directa (TAN3–8)
Seis frascos, rotulados de A a F, contendo
concentrações diferentes de
androstenediona numa matriz baseada
em soro humano, com conservante. O
calibrador zero A contém 5 mL, e os
restantes calibradores de B a F contêm
2 mL cada. Estável, após a abertura,
durante 30 dias a 2–8°C, ou por 6 meses
(aliquotado) a –20°C.
TKAN1: 1 conjunto.
Os calibradores diferentes de zero
representam, respectivamente, 0,15, 0,4,
1,5, 4,0 e 10 nanogramas de
androstenediona por mililitro (ng/mL); o
que equivale a 0,52, 1,4, 5,2, 14 e 35
nanomoles por litro (nmol/L). Os pontos
de calibração intermédios podem ser
obtidos misturando os calibradores nas
proporções adequadas.
Controlos de Androstenediona Directa
(TANC1–2)
2 frascos (2 mL cada) de Controlo de
Androstenediona Directa 1 e 2, contendo
concentrações diferentes de
androstenediona em soro humano
processado, com conservantes. Estável,
após a abertura, durante 30 dias a 2–8°C,
ou por 6 meses (aliquotado) a –20°C.
Consultar a bula do Controlo de
Androstenediona Directa para obter as
respectivas concentrações.
TKAN1: 1 conjunto.
Amostras hemolisadas podem indicar
tratamento incorrecto de uma amostra
antes do envio para o laboratório; portanto
os resultados devem ser interpretados
com cuidado.
Os tubos para colheita sanguínea de
diferentes fabricantes, podem originar
diferentes valores, dependendo dos
materiais e aditivos, incluíndo gel ou
barreiras fisicas, activadores do coágulo
e/ou anti coagulantes. Coat-A-Count
Androstenediona Directa não foram ainda
testados com todas as possiveis
variações originadas pelos tipos de tubos.
Consultar a secção Tipos de Amostras
Alternativas para obter detalhes sobre os
tubos que foram testados.
Volume de Amostra: 100 µL de soro ou
plasma por tubo.
Materiais necessários mas não
fornecidos
Armazenamento: 2–8°C durante 2 dias,
ou até 2 meses congelado a –20°C.
Contador gama — compatível com tubos
standard 12x75 mm
Deixar as amostras atingir a temperatura
ambiente (15–28°C) e agitar suavemente
ou por inversão. Aliquotar se necessário
para evitar repetidos
congelamentos/descongelamentos. Não
descongelar as amostras por aquecimento
em banho-maria.
Agitador Vortex
Radioimunoensaio
Tubos lisos de polipropileno de 12x75 mm
— para utilização como tubos de
Contagens Totais e NSB, disponíveis na
Siemens Healthcare Diagnostics
(Números de catálogo: PPO)
Micropipetas com pontas descartáveis:
100 µL e 1,0 mL
Dispositivo de decantação de espuma —
disponível na Siemens Healthcare
Diagnostics (Números de catálogo: FDR)
Papel milimétrico logit-log
Colheita
O paciente não necessita dieta. Não são
necessárias preparações especiais.
16
Colher sangue por punção venosa para
tubos lisos, registando a hora e data da
colheita, e separar o soro das células.
Também são adequados plasma
heparinizado e de EDTA.
Amostras ictéricas ou totalmente
contaminadas podem causar resultados
errados.
Recomenda-se o uso de uma ultra
centrífuga para clarear amostras
lipémicas.
Técnica de Radioimunoensaio
Todos os componentes devem estar à
temperatura ambiente(15–28°C) antes de
usar.
1
Tubos lisos: Rotular quatro tubos de
polipropileno (não revestidos) de
12x75 mm – T (contagens totais) e
NSB (ligações não especificas) em
duplicado.
Devido ao facto das ligações não
especificas no método de
Coat-A-Count serem geralmente
baixas os valores de NSB podem ser
omitidos sem comprometer a precisão
ou controle de qualidade.
Tubos revestidos: Rotular em duplicado
doze tubos revestidos com Anticorpos de
Androstenediona Directa com A (ligação
máxima) e com B a G, em duplicado.
Rotular tubos adicionais revestidos com
anticorpos, também em duplicado, para
controlos e amostras de paciente.
37
Calibradores
2
ng/mL
nmol/L
A (MB)
0
0
B
0,15
0,52
C
0,4
1,4
D
1,5
5,2
E
4,0
14
F
10
35
Pipetar 100 µL do calibrador zero A
para os tubos NSB e A, e 100 µL de
cada um dos restantes calibradores
diferentes de zero para os tubos
identificados como B a F. Pipetar
100 µL de cada controlo e amostra de
paciente para os tubos preparados.
Pipetar directamente para a base
dos tubos.
É boa prática usar uma pipeta de
pontas descartáveis, mudando a
ponta entre as amostras de modo a
evitar contaminação.
As amostras de paciente que se
preveja que contenham
concentrações de androstenediona
superiores à do calibrador mais
elevado (10 ng/mL) deverão ser
diluídas com o calibrador zero antes
do ensaio.
3
Adicionar 1,0 mL de Androstenediona
125
Directa I a cada tubo. Agitar no
misturador.
Adicionar o marcador I 125 no espaço
de 10 minutos após pipetar os
calibradores, controlos e amostras.
Deixar os tubos T para as contagens
(nº 6); não necessitam mais
processamento.
4
Incubar durante 2 horas à
temperatura ambiente (15–28°C).
5
Decantar vigorosamente.
Removendo todo o líquido
remanescente melhora-se bastante a
precisão. Decantar o conteúdo de
todos os tubos (à excepção dos tubos
T) usando um dispositivo de
decantação de espuma, e deixá-los
drenar durante 2 ou 3 minutos. Em
seguida, sacudir os tubos
vigorosamente contra papel
absorvente para eliminar todas as
gotas residuais.
38
6
Contar 1 minuto em contador gama.
Cálculo dos Resultados
Para obter resultados de concentrações
duma representação logit-log da curva de
calibração, deve em primeiro lugar
calcular-se para cada par de tubos a
média de NSB-contagens por minuto
corrigidas:
Contagens reais = (Média CPM) minutos (Média
NSB CPM)
Determine a ligação de cada par de tubos
como percentagem do máximo de ligação
(MB), com o NSB-contagens por minuto
corrigidas dos tubos A tidas como 100%:
Percentagem de Ligação = (Contagens reais /
Contagens MB reais) × 100
O cálculo pode ser simplificado, omitindo
a correcção para ligação não específica;
amostras dentro da gama de calibração
originam virtualmente os mesmos
resultados quando a Percentagem de
Ligação é calculada directamente da
Média de CPM.)
Usando um papel milimétrico logit-log,
represente a Percentagem de Ligação no
eixo vertical (probabilidade) contra a
Concentração no eixo horizontal
(logaritmico) para cada um dos
calibradores diferentes de zero, e
representar uma linha recta em função da
trajectória destes pontos. Resultados de
amostras desconhecidas podem então ser
lidas nessa recta por interpolação.
È boa prática verificar os resultados pela
concordância entre as réplicas, e construir
um gráfico da curva de calibração (mesmo
que os cálculos sejam efectuados por
computador) para verificação visual da
aplicabilidade da transformação usada e
como forma para detectar pontos de
calibração que se afastem. Também se
recomenda guardar estas curvas:
T = Contagens Totais (como contagens por
minuto)
%NSB = 100 × (Média Contagens NSB /
Contagens Totais)
%MB = 100 × (Contagens reais / Contagens
Totais)
E os 20, 50 e 80 porcento "intercepa,"
onde
20% = Concentração a 20 por cento de Ligação,
etc.
Note que para outras perspectivas, como
a implementação de uma logística de 4
parâmetros, também é aceitável. Ver
Dudley RA, et al. Guidelines for
immunoassay data reduction. Clin Chem
1985;31:1264-71.
Laboratórios devem considerar estes
resultados como directrizes apenas. Cada
laboratório deve estabelecer os seus
próprios valores de referência.
Exemplo de Ensaio: Apenas para
ilustração, não para calcular resultados de
outro ensaio. (Ver tabela "Example Run".)
O folículo de Graaf em crescimento
segrega androstenediona e ocorre uma
duplicação da sua produção perto de
meio do ciclo. Os espécimens colhidos
durante este período podem por isso
produzir resultados de androstenediona
inferiores ao limite superior central de
1,2
95%.
Controlo de Qualidade
Controlos (ou pools de soro) com pelo
Menos dois níveis de concentração de
androstenediona — baixo e alto — devem
ser submetidos por rotina a ensaio como
amostras desconhecidas. Os Controlos de
Androstenediona Directa incluídos no kit
deverão ser utilizados como material de
controlo de qualidade para monitorização
do desempenho do ensaio.
Os resultados dos pacientes devem
apenas ser reportados se os resultados
dos controlos para este ensaio estiverem
dentro dos critérios de aceitação
estabelecidos pelo laboratório.
È boa prática laboratorial registar para
cada ensaio o número do lote dos
componentes usados, bem como as datas
de quando foram primeiro reconstituidas
ou abertas. Recomenda-se registar os
valores diários em gráfico – como
descrito, por exemplo, in Westgard JO, et
al. A multi-rule chart for quality control.
Clin Chem 1981;27:493-501. Note que
amostras repetidas podem servir como
ferramenta adicional para monitorizar a
precisão inter-ensaio, e que pares de
controlos podem ser colocados ao longo
do ensaio para ajudar a verificar a
ausência de variação significativa.
Valores de Referência
Homens: Foi efectuado um estudo de
variação de referência com amostras de
soro utilizando o procedimento
Coat-A-Count Androstenediona Directa. O
estudo incluiu 124 homens. Os resultados
demonstraram um intervalo central de
95% de aproximadamente 0,8 a
3,0 ng/mL, com uma média de 1,8 ng/mL.
Mulheres: Num estudo com 122
mulheres, os resultados demonstraram
um intervalo central de 95% de
aproximadamente 0,5 a 3,7 ng/mL, com
uma média de 1,7 ng/mL.
Limitações
Observou-se uma variação diurna. Por
exemplo, em 11 homens saudáveis com
18 a 30 anos de idade, a concentração
média de 24 horas de androstenediona foi
de 0,93 ng/mL, com uma amplitude
circadiana igual a 42% da média. A
principal acrofase ocorreu de manhã, às
07h10m; a principal batifase ocorreu à
noite, às 23h00m; além disso, verificou-se
uma acrofase secundária às 16h35m. O
intervalo de confiança de 95% para a
13
acrofase/batifase foi de 68 minutos.
Deverá ser registada a hora da colheita
de acordo com estes dados.
Deve notar-se que a prática de exercício
pode ter um impacto significativo sobre os
níveis de androstenediona em circulação.
Deste modo, num estudo em 18 jogadores
de futebol profissional, a concentração
média de androstenediona aumentou de
uma linha basal de aproximadamente 0,9
ng/mL para 1,8 ng/mL no final do jogo,
diminuindo para 0,7 ng/mL noventa
14
minutos depois. Noutro estudo, o nível
médio de androstenediona em 20 homens
com treino físico moderado aumentou
significativamente, de uma média basal de
1,11 ng/mL para 1,41 ng/mL cinco
15
minutos após uma hora de natação.
Características do Ensaio
Ver Tabelas e Gráficos para dados
representativos do desempenho do kit
Coat-A-Coat Androstenediona Directa.
Excepto nos casos indicados em
contrário, todos os resultados
apresentados nas secções abaixo foram
obtidos com base em amostras de soro.
Os resultados encontram-se expressos
em ng/mL.
Factor de conversão:
ng/mL × 3,4916 → nmol/L
39
Calibração: 0,15 – 10 ng/mL
(0,52–35 nmol/L),
Sensibilidade Analítica: 0,04 ng/mL
(0,14 nmol/L).
Precisão Intra-Ensaio (entre ensaios)
Foram calculadas estatísticas para
amostras a partir dos resultados de 20
pares de tubos num único ensaio.
(Consulte a tabela “Precisão Intraensaio".)
Precisão Inter-ensaio (ensaio a ensaio)
Foram calculadas estatísticas para
amostras a partir dos resultados de pares
de tubos em 20 ensaios diferentes.
(Consulte a tabela “Precisão Interensaio".)
Especificidade: O anti-soro
Coat-A-Count Androstenediona Directa é
muito específico da androstenediona, com
uma reacção cruzada extremamente
reduzida relativamente a esteróides
naturais ou fármacos terapêuticos que
possam estar presentes em amostras de
paciente. (Ver tabela de "Specificity".)
Linearidade: As amostras foram
doseadas sob várias diluições. (Consulte
a tabela "Linearidade" para dados
representativos.)
Efeito fim-de-série: Nenhum até
aproximadamente 400 tubos. (Ver tabela
"Efeito fim-de-série".)
Recuperação: Foram submetidas a
ensaio amostras de 1 a 19 a que foram
adicionadas cinco soluções de
androstenediona (4, 10, 20, 40 e
100 ng/mL). (Ver tabela de "Recovery"
para dados representativos.)
Bilirrubina: Pode dar origem a valores
inferiores. (Ver a tabela “Bilirrubina”.)
Hemólise: A Presença de eritrocitos em
concentrações até 30 µL/mL não tem
efeito no resultado, dentro da precisão do
ensaio.
Lipémia: Pode interferir no ensaio. (Ver a
tabela “Lipémia”.)
Tipo de amostra alternativa: Para
determinar o efeito de amostras
alternatives, foi colhido sangue de 40
voluntários em tubos secos, com EDTA,
®
heparinizados e tubos de vacum SST da
Becton Dickinson. Todas as amostras
foram testadas através do procedimento
Coat-A-Count Androstenediona Directa.
(Heparina) = 0,95 (Soro) + 0,02 ng/mL
r = 0,997
(EDTA) = 1,02 (Soro) – 0,01 ng/mL
r = 0,997
(SST) = 1,00 (tubos simples) – 0,15 ng/mL
r = 0,996
Médias:
4,1 ng/mL (Soro)
3,9 ng/mL (Heparina)
4,2 ng/mL (EDTA)
3,9 ng/mL (SST)
Os resultados demonstraram que o soro,
e tanto o plasma de EDTA como o
heparinizado, produzem essencialmente
resultados equivalentes.
Comparação de métodos 1: Sessenta
amostras de paciente foram ensaiadas em
simultâneo com o procedimento Coat-ACount Androstenediona Directa e com o
kit Coat-A-Count Androstenediona
(método de preparação), com
concentrações de androstenediona entre
0,25 e aproximadamente 11 ng/mL. Por
regressão linear. (Ver o gráfico
“Comparação de Métodos 1”.)
(CAC Direct) =
0,81 (CAC Extraction) + 0,39 ng/mL
r = 0,952
Médias:
2,5 ng/mL (Coat-A-Count Direct)
2,6 ng/mL (Coat-A-Count Extraction)
Comparação de métodos 2: Noutro
estudo, 38 amostras de paciente foram
ensaiadas com o procedimento Coat-ACount Androstenediona Directa e com um
radioimunoensaio directo com tubos
revestidos para a androstenediona
disponível no mercado (kit A), com
concentrações de androstenediona entre
0,74 e 3,48 ng/mL. Por regressão linear.
(Ver o gráfico “Comparação de Métodos 2”.)
r = 0,860
Médias:
2,2 ng/mL (Coat-A-Count Direct)
1,6 ng/mL (Kit A)
40
Assistência Técnica
Por favor contacte o seu Distribuidor
Nacional.
O Sistema da Qualidade da Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. está registado sob a norma ISO
13485:2003.
Coat-A-Count® is a trademark of Siemens
Healthcare Diagnostics.
©2010 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. All
rights reserved.
Origin: US
Siemens Healthcare Diagnostics Inc.
Los Angeles, CA 90045 USA
Siemens Healthcare Diagnostics Ltd.
Sir William Siemens Sq.
Frimley, Camberley, UK GU16 8QD
2010-10-22
PITKAN – 11
Changes in this Edition:
cc#19759: Removed TKAN2 kit size and all
associated component sizes and radioactivity
information. In Materials Required But Not
Provided section, added FDR catalog number
for foam decanting rack and PPO catalog
number for polypropylene tubes; removed
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étiquettes des produits : / Sull'etichetta del
prodotto possono essere presenti i seguenti
simboli: / Os seguintes símbolos podem
aparecer no rótulo dos produtos:
Symbol Definition
En: In vitro diagnostic medical
device
De: Medizinisches Gerät zur
In-vitro Diagnose
Es: Dispositivo médico para
diagnóstico in vitro
Fr: Dispositif médical de
diagnostic in vitro
It: Dispositivo medico per
diagnostica in vitro
Pt: Dispositivo médico para
diagnóstico in vitro
En: Catalog Number
De: Katalog-Nummer
Es: Número de referencia
Fr: Numéro de référence
catalogue
It: Numero catalogo
Pt: Número de catálogo
En: Manufacturer
De: Hersteller
Es: Fabricante
Fr: Fabricant
It: Produttore
Pt: Fabricante
En: Authorized Representative in
the European Community
De: Autorisierte Vertretung in der
Europäischen Union
Es: Representante autorizado en
la Unión Europea
Fr: Représentant agréé pour
l’Union européenne
It: Rappresentante autorizzato
nella Comunità europea
Pt: Representante Autorizado na
Comunidade Europeia
En: CE Mark
De: CE-Kennzeichen
Es: Símbolo de la CE
Fr: Marque CE
It: Marchio CE
Pt: Marca CE
En: CE Mark with identification
number of notified body
De: CE-Kennzeichen
Identifikationsnummer der
benannten Stelle
Es: Marca de la CE con número
de identificación del organismo
notificado
Fr: Marque CE avec numéro
d’identification du corps notifié
It: Marchio CE con numero
identificativo dell'ente notificato
Pt: Marca CE, com número de
identificação do órgão notificado
41
Symbol Definition
En: Consult instructions for use
De: Bedienungshinweise
beachten
Es: Consulte las instrucciones de
uso
Fr: Consulter le mode d’emploi
It: Consultare le istruzioni per
l'uso
Pt: Consulte as instruções de
utilização
Symbol Definition
En: Lower limit of temperature
(≥2°C)
De: Mindesttemperatur (≥2°C)
Es: Temperatura maxima (≥2°C)
Fr: Limite inférieure de
température (≥2°C)
It: Limite inferiore di temperature
(≥2°C)
Pt: Limite inferior de temperatura
(≥2°C)
En: Caution! Potential Biohazard
De: Vorsicht! Biologisches
Risikomaterial
Es: ¡Precaución! Peligro
Biológico Potencial
Fr: Avertissement ! Risque
biologique potentiel
It: Attenzione! Potenziale Pericolo
Biologico
Pt: Precaução! Potenciais Riscos
Biológicos
En: Do not freeze (> 0°C)
De: Nicht einfrieren (> 0°C)
Es: No congelar (> 0°C)
Fr: Ne pas congeler (> 0°C)
It: Non congelare (> 0°C)
Pt: Não congele (> 0°C)
En: Keep away from sunlight
De: Vor Sonneneinstrahlung
schützen
Es: Mantener protegido de la luz
solar
Fr: Maintenir hors de portée de la
lumière du soleil
It: Non esporre alla luce del sole
Pt: Manter protegido da luz solar
En: Radioactive Materials
De: Radioaktives Material
Es: Materiales radiactivos
Fr: Matériaux radioactifs
It: Materiali radioattivi
Pt: Materiais Radioactivos
En: Caution
De: Vorsicht
Es: Precaución
Fr: Avertissement
It: Attenzione
Pt: Precaução
En: Temperature limitation
(2–8°C)
De: Temperaturgrenze (2–8°C)
Es: Limitación de la temperatura
(2–8°C)
Fr: Limites de température
(2–8°C)
It: Limiti di temperatura (2–8°C)
Pt: Limites de temperatura
(2–8°C)
En: Upper limit of temperature
(≤ -20°C)
De: Obere Temperaturgrenze
(≤ -20°C)
Es: Limitación superior de la
temperatura (≤ -20°C)
Fr: Limite supérieure de
température (≤ -20°C)
It: Limite superiore di temperatura
(≤ -20°C)
Pt: Limite máximo de temperatura
(≤ -20°C)
42
LOT
En: Batch code
De: Chargenbezeichnung
Es: Código de lote
Fr: Numéro de code du lot
It: Codice lotto
Pt: Código de lote
En: Contains sufficient for (n)
tests
De: Es reicht für (n) tests
Es: Contiene material para (n)
pruebas
Fr: Suffisant pour (n) tests
It: Contiene materiale sufficiente
per (n) test
Pt: Contém o suficiente para (n)
testes
2008-01
En: Date format (year-month)
De: Datumsformat (Jahr-Monat)
Es: Formato de fecha (año-mes)
Fr: Format de la date
(année-mois)
It: Formato data (anno-mese)
Pt: Formato de data (ano-mês)
En: Use by
De: Verwendbar bis
Es: Fecha de caducidad
Fr: A utiliser avant
It: Usare entro
Pt: Use até
Symbol Definition
En: Harmful
De: Gesundheitsschädlich
Es: Nocivo
Fr: Nocif
It: Nocivo
Pt: Nocivo
En: Corrosive
De: Ätzend
Es: Corrosivo
Fr: Corrosif
It: Corrosivo
Pt: Corrosivo
En: Toxic
De: Giftig
Es: Tóxico
Fr: Toxique
It: Tossico
Pt: Tóxico
En: Dangerous for the
environment
De: Umweltgefährlich
Es: Peligroso para el medio
ambiente
Fr: Dangereux pour
l'environnement
It: Pericoloso per l'ambiente
Pt: Perigoso para o ambiente
43

Direct Androstenedione

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