CD25 PE - Binding Site

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CD25 PE
Também conhecido como: Interleukin-2 Receptor alpha, IL-2Ra
Número catálogo(s): 9012-0257-120 (120 testes)
A coloração e linfócitos de sangue periférico humano
normal com CD4 FITC e Mouse IgG2b PE (esquerda) e
CD25 PE (direita).
Informação do produto
Conteúdo: CD25 PE
Condições de conservação: Guarde à
Número catálogo(s): 9012-0257-120 (120 testes)
temperatura entre 2 e 8°C. Não congele.
Clone CD25-4E3
Material sensível à luz.
Concentração: 5 uL (0,125 ug)/teste (um teste
Cuidado, contém Azida
é definido como a quantidade que irá corar
Fabricante: eBioscience, Inc., 10255 Science
1 x 10e6 células em 100 uL)
Center Drive, San Diego, CA 92121, USA
Anfitrião/Isotipo: Mouse IgG2b
Representante Autorizado: Bender
Formulação: Aquosa tampão, azida sódica ,
MedSystems GmbH, uma eBioscience
0,09%, pode conter proteína/estabilizador
Company Campus Vienna Biocenter 2 A-1030
transportadora.
Viena de Áustria
Uso pretendido
O anticorpo fluocromo monoclonal CD25-4E3
conjugado reage com o antigénio humano CD25.
O CD25 pode ser detectado em amostras humanas
biológicas usando técnicas imunológicas.
Princípios do teste
Citómetro de fluxo é uma ferramenta útil para medir
simultaneamente propriedades múltiplas físicas de
partículas individuais (tais como células). Células
passam por ficheiro único através do feixe laser.
Quando cada célula passa através do feixe laser,
o citómetro regista como a célula ou partícula espalha
a luz reflectida do laser e emite fluorescência. Usando
o protocolo de análise do citómetro de fluxo, é
possível realizar uma análise em simultâneo das
moléculas ao nível unicelular.
Descrição
Este anticorpo monoclonal CD25-4E3 reage ao CD25
humano, que também é conhecido como o receptor alpha
de baixa afinidade interleukin (IL)-2. O CD25 expressa-se
num subconjunto de células T (muitas das quais são
células reguladoras T) células T e B activadas e macrófagos.
Esta subunidade do receptor associa-se ao CD122, uma
cadeia de receptor beta IL-2, e o CD132, a cadeia gama
Documento # 30979_02_pt • Entrada emvigor: 29-07-2011
Não se destina à distribuição sem o expresso consentimento por escrito. Copyright © 2000-2010 eBioscience, Inc.
www.eBioscience.com ORDER INQUIRIES • +43 1 796 40 40-120 TECH • +43 1 796 40 40-0
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comum, para formar o receptor de elevada afinidade IL-2.
A sinalização do receptor IL-2 foi associada à proliferação
de células e sobrevivência nos linfócitos.
Recolha de espécimes e instruções de
armazenamento
Recolha assepticamente uma amostra de sangue
venoso, por venipunção num tubo de colheita de
sangue, utilizando o anticoagulante adequado
(recomendado EDTA). Mantenha as amostra à
temperatura da sala (18-25°C). Antes da utilização,
misture as amostras agitando ligeiramente.
Materias necessários, mas não fornecidos
• Tubos de teste 12x75 mm
• Tampões (eBioscience Flow Cytometry Staining
Buffer, Cat. No. 00-4222 recomendado)
• Tampão de Lise (eBioscience 1X RBC Tampão de
lise, Cat. No. 00-4333 ou eBioscience Fixação
1 passo /Solução de lise (10X),
Cat. No. 00-5333 recomendado)
• Para a coloração intracelular use o Tampão de
fixação IC e Tampão de permeabilização,
Nº. 88-8823 (citoquina intracelular ou coloração
de proteína citoplasmática) ou Conjunto de
tampão Foxp3, Cat. Nº. 00-5523 (Para coloração
de proteína nuclear). Consulte a secção dos
Melhores protocolos do sítio Web eBioscience
para os protocolos "Coloração de antigénios
intracelulares para o Citómetro de fluxo".
• Viabilidade da coloração (Viabilidade da solução
de coloração 7-AAD, Cat. Nº. 00-6993 ou Solução
de coloração de iodeto de propídio,
Cat. No. 00-6990 recomendado)
• Pipetas automatizadas
• Centrifugadora
• Misturadora vortex
• Balde com gelo ou frigorífico
• Citómetro de fluxo
Protocolo do Teste
NOTA: Para a coloração intracelular, consulte a secção
dos Melhores protocolos do sítio Web eBioscience
para os protocolos "Coloração de antigénios
intracelulares para o Citómetro de fluxo".
1. Alíquota 100 µL da amostra do teste para os tubos.
2. Adicione 5 µL do anticorpo adequado para cada tubo.
3. Incube 30-60 minutos a 2-8°C. Alternativamente,
as amostras podem ser incubadas à temperatura
ambiente no escuro entre 15-30 minutos.
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Adicione 2 ml de Tampão de Lise 1X RBC
(à temperatura ambiente) por tubo. Misture
suavemente. (Alternativamente, as amostras podem
ser incubadas com 2 mL 1-step Fix/Solução Lise.)
As amostras incubadas no escuro à temperatura
ambiente por 10 minutos. Não exceda 15 minutos
de incubação no Tampão Lise RBC.
Centrifugue as amostras a 300-400 x g durante
5 minutos à temperatura ambiente, decante/aspire o
material flutuante e lave 1 vez com 2 ml de Solução
tampão de coloração para Citometria de fluxo.
Centrifugue as amostras a 300-400 x g durante
5 minutos à temperatura ambiente,
decante/aspire o material flutuante.
Ressuspenda o precipitado com coloração em
1 mL de Solução tampão de coloração para
Citometria de fluxo e analise as amostras num
citómetro de fluxo.
Limitações
1. Para um desempenho óptimo dos anticorpos
conjugados de fluorocromo, armazene os frascos
a 2-8°C no escuro. Não congele.
2. Centrifugue o frasco do anticorpo antes de abrir
para recuperar o volume máximo.
3. Salvo quando referido no protocolo, toda a
coloração deve ser realizada no gelo ou a 2-8°C
com a mínima exposição à luz.
Características de desempenho
A consistência dos reagentes de elevada qualidade é
garantida ao testar cada lote de anticorpos monoclonais
quanto à conformidade das características de um
reagente padrão. Os dados citométricos de fluxo
representativos são incluídos quando for apropriado.
Evidência de deterioração
Para questões ou preocupações sobre o desempenho
ou qualidade dos produtos recebidos, contacte o
Suporte Técnico da eBioscience (ver abaixo).
Referências
Procedures for the Collection of Diagnostic Blood
Specimens by Venipuncture (H3-A6), 3rd Edition
publicado por National Committee for Clinical
Laboratory Standards.
Jackson AL, Matsumoto H, Janszen M, Maino V, Blidy
A, Shye S. Restricted expression of p55 interleukin 2
receptor (CD25) on normal T cells. Clin Immunol
Immunopath. 1990;54:126-133
Ng WF, Duggan PJ, Ponchel F, et al. Human
CD4+CD25+ cells: a naturally occurring population of
regulatory T cells. Blood. 2001;98:2736-2744.
Documento # 30979_02_pt • Entrada emvigor: 29-07-2011
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