color-mono

READ HIGHLIGHTED CHANGES
color-mono
Color-enhanced agglutination slide test for the
qualitative and semiquantitative detection of
infectious
mononucleosis
heterophile
antibodies in serum or plasma.
color-mono aids in the diagnosis of infectious
mononucleosis.
Summary
Infectious mononucleosis (IM) is an acute infectious disease of viral
etiology. In 1968, the etiologic agent of IM was described (1). It was called the
Epstein-Barr virus (EBV), a member of the herpes virus group.
In 1932, Paul and Bunnell (2) reported that serum samples from patients
with IM have heterophile antibodies to sheep erythrocytes. Also were
described agglutinins to red blood cells from other mammals. The proteins
responsible for this agglutination are glycoproteins from red cell membranes
called Paul-Bunnell antigen by several authors. Heterophile antibodies to
sheep erythrocytes, which are different from those present during IM, may
also be detected in sera from normal people, from individuals who have
received injections of serum, and others (2-4).
The diagnosis made on clinical history and symptomatology alone is
difficult. Numerous cases in wich IM has been misidentified with other nonrelated viral and bacterial diseases have been cited (4). For this reason,
hematologic and serologic tests are very helpful in diagnosis. Traditionally
the IM heterophile antibodies have been distinguished from other
heterophile antibodies by a “differential” absorption test (4,5) with bovine
red blood cells and guinea pig kidney tissue. In 1968, Lee et al have shown
that horse erythrocytes contribute to higher sensitivity and specificity than
do sheep erythrocytes in the IM heterophile antibodies detection (6,7). Now,
the use of chemical treated horse erythrocytes provides a simple method
with improved sensitivity for the specific detection of IM heterophile
antibodies.
Principle
The color-mono reagent is a suspension of specially treated horse red blood
cells. Added coloration of the suspension facilitates the recognition of positive
and negative reactions.
The serum or plasma being tested is mixed on a test slide with the reagent.
The appearance of dark agglutinates against a blue-green background
indicates the presence of IM. If no heterophile antibodies are present, the
horse cells remain unagglutinated against a green-brown background.
Components
REF 3000-1005.
a)
b)
c)
d)
color-mono reagent: 1 x 1.4 ml.
Color-enhanced treated horse red blood cells suspension. Contains < 0.1%
sodium azide.
Positive control: 1 x 1.0 ml.
Diluted positive human serum. Contains < 0.1% sodium azide.
Negative control: 1 x 1.0 ml.
Non reactive diluted human serum. Contains < 0.1% sodium azide.
Disposable slides: 18 units (x3).
Precautions
BIOKIT, S.A. - www.biokit.com
Can Malé s/n - 08186 Lliçà d'Amunt - Barcelona - Spain
USA: Tel. 1-800-926-3353
3800-2972
R01 04/15
24
color-mono is intended for IN VITRO diagnostic use.
Sodium azide may react with lead or copper pipes and plumbing creating
highly explosive metal azides. Flush drains with water thoroughly after
disposing of the remains of reagents.
All human source material used in the preparation of this product was found to
be negative for the presence of HIV-1/HIV-2 and HCV antibodies, as well as
for the hepatitis B surface antigen, using a method approved by the Food and
Drug Administration (USA).
1
WARNING: POTENTIALLY BIOHAZARDOUS MATERIAL.
Because no test method can offer complete assurance of the absence of
infectious agents, this product should be handled with caution (8).
Dispose all used materials in a suitable biohazardous waste container.
Hazard class
Not classified.
Hazard statements
None.
Precautionary statements
P280: Wear protective gloves/protective clothing/eye protection/face
protection.
P305+351+338: IF IN EYES rinse cautiously with water for several minutes.
Remove contact lenses, if present and easy to do. Continue rinsing.
Storage
The reagents will remain stable through the expiration date, shown on the
label, if stored between 2 and 8°C. Do not freeze.
When stored the reagents containing red cells show a complete
sedimentation. Once shaken an uniform suspension should be obtained.
Material required not provided
Normal saline (0.9% NaCl, only for semiquantitative test), automatic pipettes,
rotator, stirrers and timer.
Sample collection
Use fresh serum or plasma (EDTA). Other anticoagulants should be evaluated
before use. Samples can be stored at 2-8°C for 3 days. For longer periods,
samples should be frozen (-20°C).
PROCEDURE
Quality control: Before performing a set of determinations it is advisable to
test the reagent with each of the controls included in the kit, following the
steps outlined in the section QUALITATIVE TEST. The reaction between
the positive control and the reagent should show a clear agglutination,
different from the uniform appearance of the negative control. If these
results are not obtained, do not use the kit.
To assure proper delivery the reagent dropper must be held vertically and a
single drop allowed to fall.
QUALITATIVE TEST
-
Allow the reagents to reach room temperature (20 - 30°C).
Place 50 µl of the sample (or a drop of control) onto one circle of the
slide.
Shake the reagent vial and add one drop of reagent next to the drop of
sample.
Mix both drops with a stirrer covering the whole surface of the circle.
Rotate the slide on a rotary shaker set at 80-100 rpm or manually rock the
slide slowly and gently for ONE MINUTE. Then allow it to remain
UNDISTURBED on a flat surface for an additional one minute.
WITHOUT DISTURBING THE SLIDE, examine immediately for
agglutination and record the results.
Interpretation of the results
Dark agglutination against a blue-green background constitutes a positive
result and indicates the presence of IM heterophile antibodies. No
agglutination of the cells against a green-brown background constitutes a
negative result.
POSITIVE REACTIONS:
3+ Large clumping with clear blue-green background.
2+ Moderate clumping with blue-green background.
1+ Small clumping with green-brown background.
NEGATIVE REACTIONS:
Roughness or not visible clumping with green-brown background.
2
23
References
SEMIQUANTITATIVE TEST
1.
Henle G, Henle W and Diehl V. Relation of Burkitt’s tumor associated
Herpes-type virus to Infectious Mononucleosis. Proc Nat Acad Sci USA
59: 94-101, 1968.
2.
Paul JR and Bunnell WW. The presence of heterophile antibodies in
Infectious Mononucleosis. Am J Med Sci 183: 90-104, 1932.
There is no correlation between severity of illness and the level of IM
heterophile antibodies, but sequential titration may provide helpful information
to the clinician in following the course of the disease.
Make two-fold serial dilutions of the sample in normal saline, starting at
the 1:2 dilution. Test each dilution as described in the section
QUALITATIVE TEST.
3.
Beer P. The heterophile antibodies in Infectious Mononucleosis and after
the injection of serum. J Clin Invest 15: 591-599, 1936.
Interpretation of the results
4.
Davidson I, Stern K and Kashiwagi C. The differential test for Infectious
Mononucleosis. Amer J Clin Pathol 21: 1101-1113, 1951.
The IM heterophile antibodies titer is the highest dilution showing a positive
result.
5.
Davidsohn I. Serologic diagnosis of Infectious Mononucleosis. JAMA
108: 289-295, 1937.
Limitations of the procedure
6.
Lee CL, Davidsohn I and Slaby R. Horse agglutinins in infectious
mononucleosis. Am J Clin Path 49: 3-11, 1968.
-
7.
Lee CL, Davidsohn I and Panczyszyn O. Horse agglutinins in infectious
mononucleosis. Am J Clin Path 49: 12-18, 1968.
-
8.
Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. CDC/NIH
manual, 5th Edition, 2007.
9.
Evans AS, Niederman JC, Cenabre LC, West B and Richards VA. A
prospective evaluation of heterophile and Epstein-Barr virus-specific IgM
antiboby tests in clinical and subclinical Infectious Mononucleosis:
Specificity and sensitivity of the tests and persistence of antibody. J Infect
Dis 132: 546-554, 1975.
10. Sumaya CV and Ench Y. Epstein-Barr virus Infectious Mononucleosis in
children. II. Heterophil antibody and viral-specific responses. Pediatrics
75: 1011-1018, 1985.
11. Medical Devices Agency Evaluation Report: An evaluation of fourteen
commercial kits used to screen for the presence of infectios
mononucleosis (MDA/98/63). Medical Devices Agency Evaluation Centre.
UK National Health Service, 1998.
12. Virtanen S. Incidence of Infectious Mononucleosis antibodies in blood
donors. Acta Pathol Microbiol Immunol Scand 56: 53-56, 1962.
-
The results of the color-mono assay should be interpreted in light of the
clinical, hematological and serological information of the patient.
Occasionally detectable levels of heterophile antibodies are late in
developing in patients symptomatic for IM. If symptoms persist it is
recommended to repeat the assay in several days. Some patients may
remain persistently negative, especially children and adolescent. It has
been reported that only 80 to 90% of adults and less than 50% of young
children develop IM heterophile antibodies (9,10,11).
Detectable levels of heterophile antibodies may persist for months, and
more rarely for years, in some individuals (5,9).
The time limits prescribed in the procedure must be strictly observed.
Assay performance characteristics have not been established for
matrices other than serum and EDTA plasma.
Disturbing the slide when interpreting the results may cause agglutination
to be dispersed.
Expected values
Different studies (12) of presence of IM heterophile antibodies in blood donors
show that the incidence of the disease ranges from 0.9 to 1.7% of population.
As presence of IM heterophile antibodies indicates a relatively recent infection,
these results suggest that the true incidence of the disease is higher than the
number of diagnosed cases.
In a study performed with color-mono using 99 blood bank sera from a Center
of Barcelona, the incidence of positive results was 3%.
Performance characteristics
The sensitivity of color-mono was qualitatively tested by using 48 samples
positive for IM heterophile antibodies by a commercially available horse red
cell agglutination slide test. The results report that the relative sensitivity of
color-mono was 97.9% (95% confidence interval = 88.7 - 99.9%).
The specificity of color-mono was qualitatively tested by using 200 randomly
selected serum patient samples presumptively negative for IM heterophile
antibodies from hospital patients. The specificity of color-mono relative to the red
cell slide test was 95.8% (95% confidence interval = 91.9 - 98.2%).
To determine a possible cross reactivity color-mono was tested with samples
positive to other infections (CMV-IgM/10 samples, Toxoplasmosis-IgM/13
samples and Rheumatoid Factor/11 samples). The results of this study
indicate that color-mono did not show any interference with them.
Reproducibility studies were conducted using an in-house IM heterophile
antibody calibrator diluted from 1:1 to 1:32 in saline solution and tested by
three different operators on 5 consecutive days twice a day following the
semiquantitative procedure. The kit controls (negative and positive) were also
tested following the qualitative procedure. Accepting only one dilution of
difference between days, times and operators, the results indicated that the
color-mono semiquantitative and qualitative techniques gave 100%
reproducibility.
References
See "References" at the end of the package insert.
22
3
LEER CAMBIOS SOMBREADOS
color-mono
Test coloreado de aglutinación en portaobjetos
para la detección cualitativa y semicuantitativa
de anticuerpos heterófilos de mononucleosis
infecciosa en suero o plasma.
color-mono ayuda en el diagnóstico de
mononucleosis infecciosa.
Os estudos de reprodutibilidade foram levados a cabo utilizando um calibrador
interno de anticorpos heterófilos de MI diluído em 1:1 a 1:32 em solução
salina e submetido a testes por três técnicos diferentes em 5 dias
consecutivos, duas vezes por dia, aplicando o método semiquantitativo. Os
controles do kit (positivo e negativo) também se comprovaram por meio do
procedimento qualitativo. Os resultados, que somente aceitavam uma diluição
de diferença entre dias, horas e técnicos, indicaram que as técnicas
semiquantitativa e qualitativa do color-mono apresentam uma
reprodutibilidade de 100%.
Bibliografia
Veja "References" no fim deste folheto.
Sumario
La mononucleosis infecciosa (MI) es una enfermedad infecciosa aguda de
etiología vírica. El agente etiológico de la MI fue descrito en 1968 (1). Es un
miembro del grupo herpes virus, llamado virus de Epstein-Barr (EBV).
En 1932, Paul y Bunnell (2) observaron que los sueros de pacientes que
padecían MI contenían anticuerpos heterófilos contra hematíes de cordero.
También fueron descritas aglutininas contra eritrocitos de otros mamíferos.
Las proteínas responsables de esta aglutinación son glicoproteínas de
membrana de los glóbulos rojos denominadas antígeno de Paul-Bunnell por
diversos autores. También se pueden detectar anticuerpos heterófilos contra
eritrocitos de cordero, diferentes de los de MI, en sueros de personas sanas,
de individuos que han recibido inyecciones de suero y otros (2-4).
El diagnóstico basado solamente en la historia clínica y sintomatología es
difícil. La bibliografía cita numerosos casos en los cuales la MI ha sido
confundida con otras enfermedades víricas o bacterianas (4). Es por ello que
las pruebas hematológicas y serológicas son de gran ayuda en el diagnóstico.
Tradicionalmente los anticuerpos heterófilos de MI se han diferenciado de los
otros tipos mediante una prueba de absorción “diferencial” (4,5) con hematíes
de buey y tejido de riñón de cobayo. En 1968, Lee y col. demostraron que los
eritrocitos de caballo aportan una mayor sensibilidad y especificidad, que los
eritrocitos de cordero, en la detección de los anticuerpos heterófilos de MI
(6,7). Actualmente, la utilización de hematíes de caballo tratados
químicamente proporciona un método simple que mejora la sensibilidad en la
detección específica de anticuerpos heterófilos de MI.
Principio
El reactivo color-mono es una suspensión de eritrocitos de caballo
especialmente tratados. La coloración adicional de la suspensión facilita la
diferenciación de las reacciones positivas y negativas.
El suero o plasma a valorar se mezcla con el reactivo sobre un portaobjetos.
La aparición de agregados oscuros sobre un fondo azul-verde indica la
presencia de MI. Si en la muestra no existen anticuerpos heterófilos, los
hematíes de caballo permanecen sin aglutinar sobre un fondo verde-marrón.
Componentes
REF 3000-1005.
a)
b)
c)
d)
Reactivo color-mono: 1 x 1,4 ml.
Suspensión coloreada de hematíes de caballo tratados. Contiene < 0,1%
de azida sódica.
Control positivo: 1 x 1,0 ml.
Suero humano positivo, diluido. Contiene < 0,1% de azida sódica.
Control negativo: 1 x 1,0 ml.
Suero humano negativo, diluido. Contiene < 0,1% de azida sódica.
Portaobjetos desechables: 18 unidades (x3).
Precauciones
color-mono es sólo para el diagnóstico IN VITRO.
La azida sódica puede reaccionar con tuberías y desagües de plomo o cobre
dando lugar a azidas metálicas altamente explosivas. Al desechar los restos
de reactivos, deje correr agua abundante.
Todo el material de origen humano utilizado en la preparación de este producto
ha sido encontrado negativo a la presencia de anticuerpos de los virus
HIV-1/HIV-2 y HCV, así como a la del antígeno de superficie de la hepatitis B,
utilizando un método aprobado por la Food and Drug Administration (USA).
4
21
REAÇÕES POSITIVAS:
3+ Grumos grandes sobre um fundo claro azul esverdeado.
2+ Grumos médios sobre um fundo azul esverdeado.
1+ Grumos finos sobre um fundo verde acastanhado.
REAÇÕES NEGATIVAS:
Rugosidade ou ausência de grumos sobre um fundo
acastanhado.
ATENCIÓN: MATERIAL DE RIESGO BIOLÓGICO.
Ya que ningún método puede ofrecer la total seguridad de la ausencia de
agentes infecciosos, este producto debe manejarse con precaución (8).
Depositar todos los materiales usados en recipientes adecuados para material
biocontaminante.
verde
TESTE SEMI-QUANTITATIVO
Embora não exista uma correlação entre a gravidade da doença e o índice de
anticorpos heterófilos da MI, a titulação sequencial pode servir de ajuda para
o médico no seguimento da doença. Realizar diluições duplas seriadas da
amostra em solução salina, começando pela diluição 1:2. Testar cada diluição
tal como se indica na seção TESTE QUALITATIVO.
Interpretação dos resultados
Clase de peligro
No clasificado.
Indicaciones de peligro
Ninguna.
Consejos de prudencia
P280: Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección.
P305+351+338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Aclarar
cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de
contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir aclarando.
Conservación
O título corresponderá à diluição mais alta do soro que ainda apresente
aglutinação claramente visível.
Los reactivos permanecerán inalterados hasta la fecha de caducidad indicada
en la etiqueta, si se conservan entre 2 y 8°C. No congelar.
Los reactivos que contienen hematíes sedimentan con rapidez. Una vez
agitados deben presentar un aspecto uniforme.
Limitações do procedimento
Material necesario no incluido
-
-
Os resultados obtidos com o color-mono devem ser analisados
juntamente com as informações clínicas, hematológicas e sorológicas
do paciente.
Ocasionalmente, pacientes com sintomas da MI podem tardar em
desenvolver níveis detectáveis de anticorpos. Se os sintomas
persistirem, é recomendável repetir o exame depois de alguns dias.
Alguns pacientes podem permanecer persistentemente negativos,
especialmente crianças e adolescentes. Segundo os dados
publicados, apenas de 80 a 90% dos adultos e menos de 50% das
crianças infectadas desenvolvem anticorpos heterófilos (9,10,11).
Em certos indivíduos, podem persistir níveis detectáveis de anticorpos
heterófilos durante meses e, mais raramente, durante anos (5,9).
Respeitar rigorosamente os tempos recomendados de realização do
exame.
Não se estabeleceram as características dos resultados do teste para
matrizes não formadas por soro e plasma EDTA.
Mover a lâmina durante a interpretação dos resultados pode fazer com
que a aglutinação se disperse.
Valores previstos
Diferentes estudos (12) realizados em doadores de sangue indicam que a
presença de anticorpos heterófilos da MI varia de 0,9 a 1,7% da população.
Dado que a presença dos citados anticorpos indica uma infecção
relativamente recente, estes resultados sugerem que a incidência real da
doença pode ser maior que o número de casos diagnosticados.
Em um estudo levado a cabo com o color-mono no qual se utilizaram
99 amostras de soro de um banco de sangue de um centro de Barcelona, a
incidência de resultados positivos foi de 3%.
Características funcionais
Para a determinação da sensibilidade do reativo color-mono analisaramse 48 amostras positivas de anticorpos heterófilos da MI em comparação
com um teste comercial de hemácias de cavalo de aglutinação em
lâmina. A sensibilidade relativa obtida com o reativo color-mono foi de
97,9% (95% intervalo de confiança = 88,7 - 99,9%).
Para a determinação da especificidade do color-mono analisaram-se
200 amostras de soros de pacientes hospitalizados selecionados
aleatoriamente e supostamente negativos de anticorpos heterófilos da
MI. A especificidade obtida com o reativo color-mono em relação ao
teste de hemácias de cavalo foi de 95,8% (95% intervalo de confiança =
91,9 - 98,2%).
Para evidenciar possíveis reações cruzadas, analisaram-se amostras de
outros tipos de infecção (CMV-IgM/10 amostras, Toxoplasmose IgM/13
amostras e Artrite Reumatóide/11 amostras). Nenhuma demonstrou
reatividade em relação ao reativo color-mono.
20
Solución salina (0,9% de NaCl, sólo para el test semicuantitativo), pipetas
automáticas, agitador rotatorio, palillos mezcladores y cronómetro.
Recolección de la muestra
Usar suero fresco o plasma (EDTA). Otros anticoagulantes deben ser
comprobados antes de utilizarse. Las muestras pueden ser conservadas
durante 3 días entre 2-8°C. Si es por un período de tiempo más largo las
muestras deben ser congeladas (-20°C).
PROCEDIMIENTO
Control de calidad: Antes de realizar una serie de determinaciones es
aconsejable controlar el reactivo con cada uno de los controles incluidos en el
kit. Ambos controles deberán utilizarse siguiendo los pasos descritos para el
TEST CUALITATIVO. La reacción entre el control positivo y el reactivo debe
dar una clara aglutinación distinta de la apariencia uniforme del control
negativo. Si no se obtienen dichos resultados, no utilizar el kit.
De cara a asegurar una correcta dosificación del reactivo, el gotero debe
colocarse verticalmente y dejar caer una sola gota libremente.
TEST CUALITATIVO
-
Dejar que los reactivos alcancen la temperatura ambiente (20 - 30°C).
Dosificar 50 µl de muestra (o una gota de control) en un círculo del
portaobjetos.
Agitar el vial del reactivo y añadir una gota del reactivo junto a la gota de
muestra.
Mezclar ambas gotas con un palillo cubriendo toda la superficie del círculo.
Agitar el portaobjetos en una agitador rotatorio (80-100 rpm) o manualmente,
despacio y suavemente, durante UN MINUTO. A continuación dejarlo EN
REPOSO sobre una superficie plana durante otro minuto.
SIN AGITAR EL PORTAOBJETOS, observar inmediatamente la
aglutinación y anotar los resultados.
Interpretación de los resultados
Una aglutinación oscura sobre un fondo azul-verde es un resultado positivo e
indica la presencia de anticuerpos heterófilos de MI. La ausencia de aglutinación
sobre un fondo verde-marrón es un resultado negativo.
REACCIONES POSITIVAS:
3+ Agregados grandes sobre un fondo claro azul-verde.
2+ Agregados moderados sobre un fondo azul-verde.
1+ Agregados finos sobre un fondo verde-marrón.
REACCIONES NEGATIVAS:
Rugosidad o ausencia de agregados sobre un fondo verde-marrón.
5
TEST SEMICUANTITATIVO
Aunque no existe una correlación entre la severidad de la enfermedad y el
nivel de anticuerpos heterófilos de MI, la titulación secuencial puede ser de
ayuda para el clínico en el seguimiento de la enfermedad.
Realizar diluciones dobles seriadas de la muestra en solución salina,
empezando por la dilución 1:2. Comprobar cada dilución como está descrito
en el apartado TEST CUALITATIVO.
Interpretación de los resultados
El título de anticuerpos heterófilos de MI de la muestra es la dilución más alta
que aún presente aglutinación claramente visible.
Limitaciones del procedimiento
-
-
Los resultados de color-mono deben ser evaluados en función del resto
de información clínica, hematológica y serológica del paciente.
Ocasionalmente, pacientes con síntomas de MI pueden tardar en desarrollar
niveles detectables de anticuerpos. Si los síntomas persisten, se recomienda
repetir la prueba al cabo de unos días. Algunos pacientes pueden persistir
permanentemente negativos, especialmente niños y adolescentes. Se ha
publicado que sólo de un 80 a un 90% de los adultos y menos de un 50% de
los jóvenes desarrollan anticuerpos heterófilos (9,10,11).
En algunos individuos pueden persistir niveles detectables de anticuerpos
heterófilos durante meses y más raramente durante años (5,9).
Los límites de tiempo recomendados en el procedimiento deben
respetarse estrictamente.
No se han establecido las características de los resultados del ensayo
para matrices no formadas por suero y plasma EDTA.
Mover el portaobjetos durante la interpretación de los resultados puede
provocar que la aglutinación se disperse.
Todos os materiais de origem humana utilizados na preparação deste produto
foram testados e deram resultados negativos em relação à presença de
anticorpos contra os vírus HIV-1/HIV-2 e HCV e à do antígeno de superfície
da hepatite B, utilizando um método aprovado pela Food and Drug
Administration (USA).
ATENÇÃO: MATERIAL DE RISCO BIOLÓGICO.
Dado que nenhum método pode garantir totalmente a ausência de agentes
infecciosos, este produto deve ser manipulado com precaução (8).
Descartar todos os materiais usados em recipientes adequados para material
bio-contaminante.
Classe de perigo
Não classificado.
Advertências de perigo
Nenhuma.
Recomendações de prudência
P280: Usar luvas de proteção/vestuário de proteção/proteção ocular/proteção facial.
P305+351+338: SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar
cuidadosamente com água durante vários minutos. Se usar lentes de contato,
retire-as, se tal lhe for possível. Continuar a enxaguar.
Conservação
Os reativos permanecem estáveis até a data de validade indicada na etiqueta
se forem conservados entre 2 e 8°C. Não congelar.
Os reativos que contêm hemácias sedimentam rapidamente. Depois de
agitados, devem apresentar um aspecto homogêneo.
Material necessário não incluído
Solução salina (NaCl 0,9%, somente para o teste semi-quantitativo), pipetas
automáticas, agitador rotatório, palitos de madeira e cronômetro.
Valores previstos
Coleta da amostra
Diferentes estudios (12) realizados en donantes de sangre indican que la
presencia de anticuerpos heterófilos de MI oscila entre un 0,9 y un 1,7% de la
población. Puesto que la presencia de dichos anticuerpos indica una infección
relativamente reciente, estos resultados sugieren que la incidencia real de la
enfermedad puede ser mayor que el número de casos diagnosticados.
En un estudio llevado a cabo con color-mono en el que se utilizaron 99
muestras de suero de un banco de sangre de un centro de Barcelona, la
incidencia de resultados positivos fue del 3%.
Usar soro fresco ou plasma (EDTA). Outros anticoagulantes devem ser
avaliados antes de serem utilizados. As amostras podem ser conservadas por
3 dias entre 2 e 8°C. Para guardar por um período de tempo mais longo as
amostras devem ser congeladas (-20°C).
Características funcionales
La sensibilidad del color-mono se ensayó cualitativamente usando
48 muestras positivas de anticuerpos heterófilos de MI en comparación con un
test comercial de hematíes de caballo para aglutinación en portaobjetos. La
sensibilidad relativa de color-mono fue de un 97,9% (95% intervalo de
confianza = 88,7 - 99,9%).
La especificidad de color-mono se ensayó cualitativamente usando
200 sueros seleccionados al azar de pacientes de hospital presuntamente
negativos de anticuerpos heterófilos de MI. La especificidad de color-mono
relativa al test de hematíes de caballo fue de un 95,8% (95% intervalo de
confianza = 91,9 - 98,2%).
Con el fin de evidenciar posibles reacciones cruzadas se ensayaron muestras
de otras infecciones (CMV-IgM/10 muestras, Toxoplasmosis-IgM/13 muestras
y Artritis Reumatoide/11 muestras). Ninguna de ellas mostró ninguna
reactividad frente al reactivo color-mono.
Los estudios de reproducibilidad se llevaron a cabo utilizando un calibrador
interno de anticuerpos heterófilos de MI diluido de 1:1 a 1:32 en solución
salina y sometido a pruebas por tres operarios diferentes en 5 días
consecutivos, dos veces al día aplicando el método semicuantitativo. Los
controles del kit (positivo y negativo) también se comprobaron mediante el
procedimiento cualitativo. Los resultados, que únicamente aceptaban una
dilución de diferencia entre días, horas y operarios, indicaron que las
técnicas semicuantitativa y cualitativa de color-mono muestran una
reproducibilidad del 100%.
PROCEDIMENTO
Controle de qualidade: Antes de realizar análises em série recomenda-se
testar o reativo com cada um dos controles incluídos no kit. Para testar ambos
os controles, seguir os passos descritos para o TESTE QUALITATIVO. A
reação entre o controle positivo e o reativo deve resultar em uma clara
aglutinação, facilmente reconhecível, do aspecto homogêneo do controle
negativo. Caso não obtenha estes resultados, não utilize o kit.
Para garantir a correta dosagem do reativo, colocar o conta-gotas em posição
vertical e deixar cair apenas uma gota.
TESTE QUALITATIVO
-
-
Deixar que os reativos atinjam a temperatura ambiente (20 - 30°C).
Colocar 50 µl de amostra (ou uma gota de controle) em um círculo da
lâmina.
Agitar o frasco do reativo e pôr uma gota do reativo junto à gota de
amostra.
Misturar as duas gotas com um palito estendendo o material por toda a
superfície do círculo.
Agitar a lâmina em um agitador rotatório (80-100 rpm) ou de forma
manual (vagarosa e delicadamente) durante 1 MINUTO. Depois disto,
deixar a lamina EM REPOUSO sobre uma superfície plana durante
1 minuto mais.
SEM AGITAR A LÂMINA, observar imediatamente a aglutinação e anotar
os resultados.
Interpretação dos resultados
A existência de aglutinação escura sobre um fundo azul esverdeado indica
resultado positivo, isto é, a presença de anticorpos heterófilos da MI. A
ausência de aglutinação sobre um fundo verde acastanhado indica
resultado negativo.
Bibliografía
Ver "References" al final del folleto.
6
19
LER ALTERAÇÕES DESTACADAS
HERVORGEHOBENE ÄNDERUNGEN LESEN
color-mono
color-mono
Teste corante de aglutinação em lâmina para a
detecção qualitativa e semi-quantitativa de
anticorpos heterófilos da mononucleose
infecciosa no soro ou plasma.
O color-mono ajuda no diagnóstico da
mononucleose infecciosa.
Gefärbter Agglutinationstest auf Objektträger zur
qualitativen und semiquantitativen Bestimmung
heterophiler
Antikörper
bei
infektiöser
Mononukleose in Serum oder Plasma.
color-mono hilft bei der Diagnose der
infektiösen Mononukleose.
Zusammenfassung
Sumário
A Mononucleose Infecciosa (MI) é uma doença aguda causada pelo vírus de
Epstein-Barr (EBV). O agente etiológico da MI foi descrito em 1968 (1). Forma
parte do grupo herpes vírus, chamado vírus de Epstein-Barr (EBV).
Em 1932, Paul e Bunnell, observaram que os soros de pacientes da MI
continham anticorpos heterófilos contra hemácias de carneiro. Também foram
descritas aglutininas contra eritrócitos de outros mamíferos. As proteínas
responsáveis por esta aglutinação são glicoproteínas de membrana dos
glóbulos vermelhos, denominadas antígeno de Paul Bunnell por diversos
autores. Também se pode detectar anticorpos heterófilos contra eritrócitos de
carneiro diferentes dos da MI em soros de pessoas saudáveis, de indivíduos
que receberam injeções de soros, e outros (2-4).
Realizar um diagnóstico baseando-se exclusivamente na história clínica e
sintomatologia é uma tarefa difícil. A bibliografia cita numerosos casos nos
quais a MI foi confundida com outras doenças víróticas ou bacterianas (4).
É por isto que os exames hematológicos e serológicos são de grande ajuda
no diagnóstico. Tradicionalmente os anticorpos heterófilos da MI têm sido
distinguidos de outros tipos através de uma análise de absorção
“diferencial” (4,5) realizada com hemácias bovinas e tecido renal de cobaia.
Em 1968, Lee e col. demonstraram que os eritrócitos de cavalo oferecem
maior sensibilidade e especificidade que os eritrócitos de carneiro na
detecção dos anticorpos heterófilos da MI (6,7). Atualmente, a utilização de
hemácias de cavalo tratados quimicamente proporciona um método simples
que melhora a sensibilidade na detecção específica dos anticorpos
heterófilos da MI.
Die infektiöse Mononukleose (IM) ist eine schwere Infektionskrankheit mit
Virusätiologie. Das ätiologische Agens der IM wurde 1968 (1) beschrieben. Er
gehört zur Gruppe der Herpesviren und wird Epstein-Barr-Virus (EBV)
genannt.
Paul und Bunnell (2) beobachteten im Jahr 1932, dass das Serum von
IM-Patienten heterophile Antikörper gegen Schafserythrozyten enthielt.
Ebenso beschrieben sie Agglutinine gegen Erythrozyten anderer Säugetiere.
Die für diese Agglutination verantwortlichen Proteine sind Glykoproteine der
Erythrozytenmembranen, die von verschiedenen Autoren als Paul-BunnellAntigene
bezeichnet
werden.
Heterophile
Antikörper
gegen
Schafserythrozyten, die sich von den IM-Antikörpern unterscheiden, können
auch in Seren von gesunden Personen, von Personen, die Serumsinjektionen
erhalten haben, und anderen beobachtet werden (2-4).
Es ist schwierig eine Diagnose lediglich auf Grundlage der Anamnese und der
Symptomatologie zu erstellen. In der Literatur werden zahlreiche Fälle
erwähnt, bei denen die IM mit anderen Virus- oder Bakterienkrankheiten
verwechselt wurde (4). Daher sind die hämatologischen und serologischen
Tests von großer Hilfe bei der Diagnose. Früher wurden die heterophilen
IM-Antikörper von anderen heterophilen Antikörpern durch einen
“Differentialabsorptions-Test” (4,5) mit Rinder-Erythrozyten und Nierengewebe
von Versuchskaninchen unterschieden. 1968 wiesen Lee u. Mitarb. nach, dass
die Pferdeerythrozyten bei der Bestimmung heterophiler IM-Antikörper
sensitiver und spezifischer sind als die Schafserythrozyten (6,7). Heute verfügt
man mit der Verwendung chemisch vorbehandelter Pferdeerythrozyten über
eine einfache Methode mit verbesserter Sensitivität für die spezifische
Bestimmung heterophiler IM-Antikörper.
Princípio
Prinzip
O reativo color-mono é uma suspensão de eritrócitos de cavalo
especialmente tratados. A coloração adicional da suspensão facilita a
diferenciação das reações positivas e negativas.
Para realizar a análise, mistura-se o soro ou plasma com o reativo em uma
lâmina. O aparecimento de grumos escuros sobre um fundo azul esverdeado
indica a presença da MI. Se não existirem anticorpos heterófilos na amostra,
as hemácias de cavalo aparecerão dispersas (não aglutinadas) sobre um
fundo verde acastanhado.
Das Reagenz color-mono ist eine Suspension spezifisch vorbehandelter
Pferdeerythrozyten. Die zusätzliche Färbung der Suspension erleichtert die
Differenzierung der positiven und negativen Reaktionen.
Das zu beurteilende Serum oder Plasma wird auf einem Objektträger mit dem
Reagenz gemischt. Das Auftreten von dunklen Aggregaten auf blaugrünem
Hintergrund zeigt die Anwesenheit von IM an. Wenn die Probe keine
heterophilen Antikörper enthält, erscheinen die Pferdeerythrozyten ohne
Agglutination auf einem grünbraunen Hintergrund.
Componentes
Bestandteile
REF 3000-1005.
a)
b)
c)
d)
REF 3000-1005.
Reativo color-mono: 1 x 1,4 ml.
Suspensão corante de hemácias de cavalo tratadas. Contém < 0,1% de
azida sódica.
Controle positivo: 1 x 1,0 ml.
Soro humano positivo diluído. Contém < 0,1% de azida sódica.
Controle negativo: 1 x 1,0 ml.
Soro humano negativo diluído. Contém < 0,1% de azida sódica.
Lâminas descartáveis: 18 unidades (x3).
a)
b)
c)
d)
color-mono Reagenz: 1 x 1,4 ml.
Gefärbte Suspension vorbehandelter Pferdeerythrozyten. Enthält < 0,1%
Natriumazid.
Positive Kontrolle: 1 x 1,0 ml.
Verdünntes, positives Humanserum. Enthält < 0,1% Natriumazid.
Negative Kontrolle: 1 x 1,0 ml.
Verdünntes, negatives Humanserum. Enthält < 0,1% Natriumazid.
Einmal-Objektträger: 18 Einheiten (x3).
Precauções
Vorsichtsmaßnahmen
O reativo color-mono é exclusivo para o diagnóstico IN VITRO.
A azida sódica pode reagir com os encanamentos e ralos de chumbo ou
cobre, originando azidas metálicas altamente explosivas. Ao eliminar restos
de reativos, abra a torneira e deixar correr muita água.
color-mono ist ausschließlich für die IN VITRO-Diagnostik bestimmt.
Natriumazid kann auf Blei- oder Kupfer-Rohrleitungen und -Abflüsse
reagieren und zu hochexplosiven Metallaziden führen. Beim Entfernen der
Reagenzreste muss mit genügend Wasser nachgespült werden.
18
7
Das gesamte zur Herstellung dieses Produkts verwendete Humanmaterial ist
nach den Richtlinien der Food and Drug Administration (USA) auf die
Anwesenheit von HIV-1/HIV-2 und HCV Antikörpern sowie des
Oberflächenantigens der Hepatitis B getestet und für negativ befunden worden.
ACHTUNG: BIOLOGISCH GEFÄHRLICHES MATERIAL.
Da kein Nachweisverfahren die Abwesenheit von infektiösen Agenzien
garantieren
kann,
ist
dieses
Produkt
mit
entsprechenden
Vorsichtsmaßnahmen zu handhaben (8).
Alle benutzten Materialien sind separat in Behältern für biologische Abfälle zu
entsorgen.
TEST SEMIQUANTITATIVO
Gefahrenklasse
Nicht eingestuft.
Gefahrenhinweise
Keine.
Sicherheitshinweise
P280: Schutzhandschuhe / Schutzkleidung / Augenschutz / Gesichtsschutz tragen.
P305+351+338: BEI KONTAKT MIT DEN AUGEN: Einige Minuten lang
behutsam mit Wasser spülen. Vorhandene Kontaktlinsen nach Möglichkeit
entfernen. Weiter spülen.
Il titolo di anticorpi eterofili della MI del campione corrisponde alla diluizione
più elevata con ancora un'agglomerazione chiaramente visibile.
Pur non esistendo una correlazione tra la severità dell'infezione e il livello di
anticorpi eterofili della MI, la titolazione sequenziale può aiutare il clinico al
monitoraggio della malattia.
Realizzare doppie diluizioni seriali del campione in soluzione salina, iniziando
dalla diluizione 1:2. Verificare ogni diluizione come descritto nel punto TEST
QUALITATIVO.
Interpretazione dei risultati
Limitazioni della procedura
-
Lagerung
I risultati del test color-mono devono essere valutati considerando il
resto dei dati clinici, ematologici e sierologici del paziente.
In alcune occasioni, pazienti con i sintomi della MI possono sviluppare
livelli rilevabili di anticorpi con un certo ritardo. Se i sintomi persistono, è
consigliabile ripetere il test dopo un paio di giorni. Alcuni pazienti possono
rimanere sempre negativi, soprattutto i bambini e gli adolescenti e,
secondo quanto pubblicato, solo un 80-90% degli adulti e meno del 50%
dei ragazzi sviluppano anticorpi eterofili (9,10,11).
Livelli misurabili di anticorpi eterofili possono persistere, in alcuni
individui, mesi e, più raramente, anni (5,9).
I limiti di tempo raccomandati nella procedura vanno rispettati
rigorosamente.
Non sono state stabilite le caratteristiche dei risultati del test per matrici
non formate da siero e plasma EDTA.
Muovere il vetrino durante l’interpretazione dei risultati può far sì che
l’agglutinazione si dispersi.
Bei einer Lagerungstemperatur von 2-8°C bleiben die Reagenzien bis zum auf
dem Etikett angegebenen Verfallsdatum haltbar. Nicht einfrieren.
Die Reagenzien, die Erythrozyten enthalten, sedimentieren schnell. Nach dem
Schütteln müssen sie ein homogenes Aussehen haben.
-
Erforderliches, nicht mitgeliefertes Material
-
Normale Kochsalzlösung (0,9% NaCl, nur für die semiquantitative
Bestimmung), Automatik-Pipetten, Rotator, Rührstäbchen und Stoppuhr.
-
Probenmaterial
Valori attesi
Frisches Serum oder Plasma (EDTA) benutzen. Andere Antikoagulantien
müssen zuvor evaluiert werden. Die Proben können 3 Tage lang bei 2-8°C
gelagert werden. Bei Lagerung über 3 Tagen sollten die Proben bei (-20°C)
eingefroren werden.
Vari studi (12) su donatori di sangue indicano che gli anticorpi eterofili della
MI sono presenti nello 0,9-1,7% della popolazione. Dato che la presenza di
tali anticorpi indica un'infezione abbastanza recente, questi risultati
suggeriscono che l'effettiva incidenza della malattia potrebbe superare il
numero dei casi diagnosticati.
In uno studio realizzato con color-mono, in cui sono stati utilizzati 99
campioni di siero di una banca del sangue di un centro di Barcellona, la
percentuale di risultati positivi è stata del 3%.
DURCHFÜHRUNG
Qualitätskontrolle: Vor Durchführung der verschiedenen Bestimmungsstufen
sollte eine Überprüfung des Reagenzes mit jeder der im Kit enthaltenen
Kontrollen vorgenommen werden. Beide Kontrollen müssen entsprechend der
im Abschnitt QUALITATIVE BESTIMMUNG aufgeführten Schritte durchgeführt
werden. Die Reaktion zwischen Positiv-Kontrolle und Reagenz muss eine
klare Agglutination zeigen, die sich von dem homogenen Aussehen der
Negativ-Kontrolle unterscheidet. Andernfalls darf das Kit nicht verwendet
werden.
Um eine korrekte Dosierung des Reagenzes sicherzustellen, muss die Tropfflasche
senkrecht gehalten und ein einziger Tropfen fallengelassen werden.
QUALITATIVE BESTIMMUNG
-
Reagenzien vor Gebrauch auf Raumtemperatur bringen (20 - 30°C).
50 µl der Probe (oder einen Tropfen der Kontrolle) auf eines der
Objektträgertestfelder bringen.
Reagenzflasche schütteln und 1 Tropfen Reagenz neben den Tropfen der
Probe geben.
Beide Tropfen mit einem Stäbchen gut mischen und auf der ganzen
Testfeldoberfläche verteilen.
Objektträger leicht per Hand oder auf dem Rotator (80-100 UPM) EINE
MINUTE lang schwenken. Anschließend eine weitere Minute lang auf
einer flachen Oberfläche RUHEN LASSEN.
Danach sofort, OHNE DEN OBJEKTTRÄGER ZU SCHÜTTELN, die
Agglutination feststellen und die Ergebnisse aufschreiben.
-
Caratteristiche di funzionalità
La sensibilità del color-mono è stata testata qualitativamente mediante
48 campioni positivi di anticorpi eterofili di MI ed è stata confrontata con quella
di un test commerciale con emazie equine ad agglutinazione su vetrino.
Il color-mono ha dimostrato una sensibilità relativa del 97,9% (95% intervallo
di confidenza = 88,7 - 99,9%).
La specificità del color-mono è stata testata qualitativamente con 200 sieri
selezionati in modo aleatorio tra i pazienti ospedalieri, suppostamente negativi
per anticorpi eterofili di MI. Il test alle emazie equine ha dato una specificità del
color-mono del 95,8% (95% intervallo di confidenza = 91,9 - 98,2%).
Per ricercare possibili reazioni incrociate sono stati testati campioni di altre
infezioni (CMV-IgM/10 campioni, Toxoplasmosi-IgM/13 campioni e Artrite
Reumatoide/11 campioni) ma nessuna ha manifestato alcun tipo di reattività
verso il reattivo color-mono.
Gli studi di riproducibilità sono stati realizzati impiegando un calibratore interno
di anticorpi eterofili della MI diluito da 1:1 a 1:32 in soluzione salina e
sottoposto a test da tre diversi operatori per 5 giorni consecutivi, due volte al
giorno, applicando il metodo semiquantitativo. Anche i controlli del kit (positivo
e negativo) verranno verificati mediante il procedimento qualitativo. I risultati,
che solo accettavano una diluizione di differenza tra giorno, ora e operatore,
hanno indicato che la tecnica semiquantitativa e la tecnica qualitativa di colormono presentano una riproducibilità del 100%.
Auswertung der Ergebnisse
Bibliografia
Eine dunkle Agglutination auf blaugrünem Hintergrund ist ein positives Ergebnis und
zeigt die Anwesenheit heterophiler IM-Antikörper an. Die Abwesenheit von
Agglutination auf grünbraunem Hintergrund ist ein negatives Ergebnis.
Vedi "References" alla fine del prospetto.
8
17
ATTENZIONE: PERICOLO BIOLOGICO.
Poiché nessun metodo può garantire con totale certezza l'assenza di agenti
infettivi, questo prodotto va manipolato con precauzione (8).
Depositare tutti i materiali usati in recipienti idonei per contaminanti biologici.
POSITIVE REAKTIONEN:
3+ Große Aggregate auf hellem blaugrünem Hintergrund.
2+ Mittlere Aggregate auf blaugrünem Hintergrund.
1+ Feine Aggregate auf grünbraunem Hintergrund.
Classe di pericolo
Non classificato.
Indicazioni di pericolo
Nessuna.
Consigli di prudenza
P280: Indossare guanti/indumenti protettivi/Proteggere gli occhi/il viso.
P305+351+338: IN CASO DI CONTATTO CON GLI OCCHI: sciacquare
accuratamente per parecchi minuti. Togliere le eventuali lenti a contatto se è
agevole farlo. Continuare a sciacquare.
NEGATIVE REAKTIONEN:
Rauheit oder Abwesenheit
Hintergrund.
Conservazione
I reattivi, se conservati tra 2 e 8°C, sono stabili fino alla data di scadenza
indicata sull'etichetta. Non congelare.
I reattivi contenenti emazie sedimentano velocemente. Una volta agitati
devono presentare un aspetto uniforme.
Materiale non incluso
Soluzione salina (0,9% di NaCl, solo per test semiquantitativo), pipette
automatiche, agitatore rotante, bastoncini e cronometro.
Der Titer heterophiler IM-Antikörper der Probe entspricht der höchsten
Verdünnungsstufe, die noch eine deutlich sichtbare Agglutination vorweist.
Begrenzung der Methode
-
PROCEDURA
-
-
Lasciare che i reattivi raggiungano la temperatura ambiente (20 - 30°C).
Mettere 50 µl di campione (o una goccia di controllo) su un cerchietto del
vetrino portaoggetti.
Agitare la fiala di reattivo e aggiungerne una goccia accanto a quella del
campione.
Mescolare le due gocce con un bastoncino stendendo il composto su
tutta la superficie del cerchietto.
Agitare lentamente e dolcemente il vetrino portaoggetti in un agitatore
rotante (80-100 rpm) oppure a mano per UN MINUTO. Quindi lasciarlo A
RIPOSO su una superficie piana per un altro minuto.
SENZA
AGITARE
IL
VETRINO,
osservare
immediatamente
l'agglutinazione e annotare i risultati.
grünbraunem
Auswertung der Ergebnisse
-
-
auf
Obwohl keine Korrelation zwischen der Schwere der Krankheit und der
Titermenge heterophiler IM-Antikörper besteht, kann die sequenzielle Titration
für den Kliniker eine Hilfe bei der Untersuchung der Krankheitsentwicklung
sein.
Hierbei werden doppelte serielle Verdünnungen der Probe in Kochsalzlösung
hergestellt, wobei mit der Verdünnung 1:2 begonnen wird. Jede Verdünnung
wird, wie im Abschnitt QUALITATIVE BESTIMMUNG beschriebenen ist,
bewertet.
Usare siero fresco o plasma (EDTA). Altri anticoagulanti dovranno essere valuati
prima dell'uso. I campioni possono essere conservari a 2-8°C per non più di
3 giorni. Per tempi più lunghi i campioni devono essere congelati (-20°C).
TEST QUALITATIVO
Aggregaten
SEMIQUANTITATIVE BESTIMMUNG
Raccolta di campioni
Controllo di qualità: Prima di effettuare una serie di determinazioni è
consigliabile testare il reattivo con entrambi i controlli forniti con il kit, per l'uso
dei quali si seguirà il procedimento descritto per il TEST QUALITATIVO. La
reazione del controllo positivo con il reattivo deve mostrare una chiara
agglutinazione che si discosti dall'aspetto uniforme del controllo negativo. Se i
risultati ottenuti sono diversi, non utilizzare il kit.
Per garantire il corretto dosaggio del reattivo, tenere il contagocce in posizione
perpendicolare e lasciare cadere liberamente una sola goccia.
von
Die Ergebnisse des color-mono Tests müssen unter Berücksichtigung
aller klinischen, hämatologischen und serologischen Daten des Patienten
ausgewertet werden.
Es besteht die Möglichkeit, dass sich bestimmbare heterophile
Antikörpertiter erst verzögert in Patienten mit IM-Symptomatik entwickeln.
Falls die Symptome bestehen bleiben, sollte der Test nach einigen Tagen
wiederholt werden. Einige Patienten, vorzugsweise Kinder und
Jugendliche, zeigen durchgehend negative Ergebnisse. Es ist
beschrieben worden, dass 80 bis 90% der Erwachsenen und weniger als
50% der Kinder- und Jugendlichen die heterophilen Antikörper entwickeln
(9,10,11).
Feststellbare Titer heterophiler Antikörper können bei einigen Patienten
über Monate und in selteneren Fällen über Jahre hinweg bestehen
bleiben (5,9).
Die für den Testablauf empfohlenen Zeitangaben müssen exakt
eingehalten werden.
Die Merkmale der Testergebnisse für Grundsubstanzen, die nicht aus
Serum und EDTA-Plasma bestehen, wurden nicht festgelegt.
Das Bewegen des Objektträgers während der Interpretation der
Ergebnisse kann zum Zerstreuen der Agglutination führen.
Erwartete Werte
Verschiedene Studien (12) zur Anwesenheit heterophiler IM-Antikörper in
Blutspendern zeigen eine Krankheitsinzidenz von 0,9 bis 1,7% der
Bevölkerung. Die Anwesenheit von heterophilen Antikörpern zeigt eine relativ
frische Infektion an, was bedeutet, dass die wirkliche Inzidenz der Krankheit
höher als die Anzahl der diagnostizierten Fälle sein kann.
In einer mit color-mono durchgeführten Studie, für die 99 Serumproben einer
Blutbank von Barcelona herangezogen wurden, lag die Inzidenz der positiven
Ergebnisse bei 3%.
Interpretazione dei risultati
Charakteristika des Tests
Un'agglutinazione scura su fondo verdazzurro è un risultato positivo e indica la
presenza di anticorpi eterofili della MI. L'assenza di agglutinazione su fondo
verde-marrone è un risultato negativo.
Die Sensitivität von color-mono wurde bei 48 positiven Proben mit heterophilen IMAntikörpern im Vergleich mit einem im Handel erhältlichen PferdeerythrozytenAgglutinationstest auf Objektträger qualitativ getestet. Die relative Sensitivität von
color-mono betrug 97,9% (95%-Konfidenzintervall = 88,7 - 99,9%).
Die Spezifität von color-mono wurde bei 200 Zufallsstichproben von Seren
voraussichtlich IM-negativer Krankenhauspatienten qualitativ getestet. Die
Spezifität von color-mono im Vergleich zum Pferdeerythrozyten-Test betrug
95,8% (95%-Konfidenzintervall = 91,9 - 98,2%).
Um mögliche Kreuzreaktionen nachzuweisen, wurden Proben anderer
Infektionen (CMV-IgM/10 Proben, Toxoplasmose-IgM/13 Proben und
rheumatoide Arthritis/11 Proben) getestet. Bei keiner dieser Proben wurde
eine Reaktivität auf das Reagenz color-mono festgestellt.
REAZIONI POSITIVE:
3+ Agglutinazioni grandi su fondo chiaro verdazzurro.
2+ Agglutinazioni moderate su fondo chiaro verdazzurro.
1+ Agglutinazioni fini su fondo chiaro verdazzurro.
REAZIONI NEGATIVE:
Rugosità o assenza di agglutinazioni su fondo verde-marrone.
16
9
VEDI CAMBI RISALTATI
Die Reproduzierbarkeitsstudien wurden mit Hilfe einer internen
Kalibriersubstanz heterophiler IM-Antikörper durchgeführt, die in einer
Kochsalzlösung von 1:1 auf 1:32 verdünnt und von drei unterschiedlichen
Bedienern an 5 aufeinander folgenden Tagen zwei Mal täglich nach dem
semiquantitativen Verfahren geprüft wurde. Die (positiven und negativen)
Kontrollen des Kits wurden auch mit Hilfe des qualitativen Verfahrens
überprüft. Die Ergebnisse, für die nur eine Lösung mit einer Differenz
zwischen Tagen, Uhrzeit und Bedienern akzeptiert wurde, ergaben eine
Reproduzierbarkeit von 100% für das semiquantitative und das qualitative
Verfahren mit color-mono.
Literatur
Siehe "References" am Ende des Prospekts.
color-mono
Test di agglutinazione su vetrino che utilizza il
colore per il rilevamento qualitativo e
semiquantitativo degli anticorpi eterofili della
mononucleosi infettiva nel siero o plasma.
color-mono
aiuta
nella
diagnosi
della
mononucleosi infettiva.
Sommario
La mononucleosi infettiva (MI) è un'infezione acuta a eziologia virale il cui
agente eziologico, chiamato virus Epstein Barr (EBV) e facente parte del
gruppo herpes virus, fu descritto nel 1968.
Nel 1932, Paul e Bunnel (2) osservarono che i sieri di pazienti affetti da MI
contenevano anticorpi eterofili anti-emazie di pecora, ma si descrissero anche
agglutinine anti-eritrociti di altri mammiferi. Le proteine responsabili di questa
agglutinazione sono le glicoproteine di membrana dei globuli rossi,
denominate da alcuni autori antigene di Paul-Bunnell. Anticorpi eterofili
anti-eritrociti di pecora, distinti da quelli della MI, sono riscontrabili anche nei
sieri di individui sani, di persone che hanno ricevuto iniezioni di siero e di altri
soggetti (2-4).
È difficile emettere una diagnosi solo in base alla storia clinica e alla
sintomatologia del paziente. La bibliografia è ricca di casi in cui la MI è stata
confusa con altre malattie virali o batteriologiche (4), per cui le prove
ematologiche e sierologiche sono di grande aiuto per raggiungere la
diagnosi. Tradizionalmente, per distinguere gli anticorpi eterofili della MI
dagli altri tipi, si è utilizzato un test di assorbimento "differenziale" (4,5) con
emazie bovine e tessuto renale di cavia. Nel 1968, Lee e coll. dimostrarono
che gli eritrociti equini apportano una maggiore sensibilità e specificità
rispetto agli eritrociti di pecora nella rilevazione degli anticorpi eterofili della
MI (6,7). Oggi, l'utilizzo di emazie equine trattate chimicamente rappresenta
un metodo semplice per migliorare la sensibilità del rilevamento specifico di
anticorpi eterofili di MI.
Principio
Il reattivo color-mono è una sospensione di eritrociti equini sottoposti a uno
speciale trattamento. La colorazione supplementare della sospensione rende
più semplice distinguere le reazioni positive da quelle negative.
Il siero o il plasma da esaminare è mischiato con il reattivo su un vetrino.
La comparsa di agglutinazioni scure su sfondo verdazzurro indica la
presenza di MI. Se invece nel campione non sono presenti anticorpi
eterofili, le emazie equine appaiono su uno sfondo verde-marrone e non si
agglutinano.
Componenti
REF 3000-1005.
a)
b)
c)
d)
Reattivo color-mono: 1 x 1,4 ml.
Sospensione colorata di emazie equine trattate. Contiene < 0,1% di sodio
azide.
Controllo positivo: 1 x 1,0 ml.
Siero umano positivo, diluito. Contiene < 0,1% di sodio azide.
Controllo negativo: 1 x 1,0 ml.
Siero umano negativo, diluito. Contiene < 0,1% di sodio azide.
Vetrini monouso: 18 unità (x3).
Precauzioni
Il color-mono è unicamente per diagnosi IN VITRO.
La sodio azide può reagire a contatto con tubature e scarichi in piombo o rame
e produrre azidi metalliche altamente esplosive. Far scorrere l'acqua
abbondantemente quando si gettano i residui dei reattivi.
Tutto il materiale di origine umana utilizzato nella preparazione di questo
prodotto è risultato negativo sia per gli anticorpi dei virus HIV-1/HIV-2 e HCV
che per l'antigene di superficie dell'epatite B, seguendo un metodo approvato
dalla Food and Drug Administration (USA).
10
15
LIRE LES CHANGEMENTS SURLIGNÉS
Les études de reproductibilité ont été réalisées en utilisant un calibrateur
interne d’anticorps hétérophiles de MI dilué de 1:1 à 1:32 en solution saline et
soumis à des tests par trois opérateurs différents en 5 jours consécutifs, deux
fois par jour en appliquant la méthode semi-quantitative. Les contrôles du kit
(positif et négatif) ont également été vérifiés par la procédure qualitative. Les
résultats, n’acceptant qu’une dilution de différence entre jours, heures et
opérateurs, ont indiqué que les techniques semi-quantitative et qualitative du
color-mono présentent une reproductibilité de 100%.
Bibliographie
Voir "References" à la fin du prospectus.
color-mono
Test coloré d’agglutination sur lame pour la
détection qualitative et semiquantitative des
anticorps hétérophiles de la mononucléose
infectieuse dans le sérum ou le plasma.
Le color-mono aide au diagnostic de la
mononucléose infectieuse.
Sommaire
La mononucléose infectieuse (MI) est une maladie infectieuse aiguë
d’étiologie virale. L’agent étiologique de la MI a été décrit en 1968 (1). C’est un
membre du groupe herpès virus, appelé virus d’Epstein-Barr (EBV).
En 1932, Paul et Bunnell (2) rapportent que le sérum de patients porteurs de
la MI développe un grand nombre d’anticorps hétérophiles anti-érythrocytes de
mouton. Des agglutinines anti-globules rouges d’autres mammifères ont aussi
été décrites. Les protéines responsables de cette agglutination sont des
glycoprotéines de membrane de globules rouges appelées antigènes
Paul-Bunnell par plusieurs auteurs. . Des anticorps hétérophiles antiérythrocytes de mouton, différents de ceux de la MI, peuvent aussi être
détectés dans le sérum de personnes normales, d’individus transfusés ou
autres (2-4). Il est difficile d’établir un diagnostic en s’appuyant uniquement sur
l’histoire clinique et la symptomatologie. La bibliographie cite de nombreux cas
où la MI a été confondue avec d’autres maladies virales ou bactériennes (4).
C’est pourquoi les tests hématologiques et sérologiques sont très utiles pour
arrêter un diagnostic.
Traditionnellement, les anticorps hétérophiles de la MI se distinguent d’autres
anticorps hétérophiles par un test d’absorption “différentielle” (4,5) avec des
globules rouges bovins et du tissu rénal de cobaye. En 1968, Lee et ses
collaborateurs ont démontré que les érythrocytes de cheval apportaient une
plus grande sensibilité et une plus grande spécificité que les érythrocytes de
mouton, dans la détection des anticorps hétérophiles de la MI (6,7).
Aujourd’hui, l’utilisation d’hématies de cheval traitées chimiquement offre une
méthode simple de meilleure sensibilité pour la détection spécifique
d’anticorps hétérophiles associés à la MI.
Principe
Le réactif color-mono est une suspension d’érythrocytes de cheval
spécialement traités. La coloration additionnelle de la suspension facilite la
différenciation des réactions positives et négatives.
Le sérum ou le plasma à analyser est mélangé avec le réactif sur une lame.
L’apparition d’agrégats foncés sur un fond bleu-vert indique la présence de MI.
Si l’échantillon n’est pas porteur d’anticorps hétérophiles, les hématies de
cheval apparaissent non agglutinées sur un fond vert-marron.
Composants
REF 3000-1005.
a)
b)
c)
d)
Réactif color-mono: 1 x 1,4 ml.
Suspension colorée d’hématies de cheval traitées. Contient < 0,1%
d’azide de sodium.
Contrôle positif: 1 x 1,0 ml.
Sérum humain positif dilué. Contient < 0,1% d’azide de sodium.
Contrôle négatif: 1 x 1,0 ml.
Sérum humain négatif dilué. Contient < 0,1% d’azide de sodium.
Lames jetables: 18 unités (x3).
Précautions
color-mono est destiné à un usage diagnostique IN VITRO.
L’azide sodique peut réagir au contact de tuyauteries et de bouches
d’écoulement des eaux en plomb ou en cuivre. Cette réaction donne lieu à des
azides métalliques hautement explosifs. Lorsque vous jetez les restes de
réactifs, veuillez laisser couler l’eau abondamment.
14
11
Tout le matériel d’origine humaine utilisé dans le cadre de la préparation de ce
produit a donné des résultats négatifs quant à la présence d’anticorps aux
virus HIV-1/HIV-2 et HCV, de même qu’à celle de l’antigène de surface de
l’hépatite B. La méthode utilisée est agréée par la Food and Drug
Administration (USA).
ATTENTION: MATÉRIEL À RISQUE BIOLOGIQUE.
Compte tenu du fait qu’aucune méthode n’est capable d’offrir une garantie
absolue de l’absence d’agents infectieux, ce produit doit être manipulé avec
précaution (8).
Déposer tout le matériel utilisé dans des récipients conçus pour le matériel
bio-contaminant.
Classe de danger
Non classifié.
Mentions de danger
Aucune.
Conseils de prudence
P280 : Porter des gants de protection/des vêtements de protection/un
équipement de protection des yeux/ du visage.
P305+351+338 : EN CAS DE CONTACT AVEC LES YEUX : rincer avec précaution
à l’eau pendant plusieurs minutes. Enlever les lentilles de contact si la victime en
porte et si elles peuvent être facilement enlevées. Continuer à rincer.
RÉACTIONS POSITIVES:
3+ Grands agrégats sur un fond clair bleu-vert.
2+ Agrégats modérés sur un fond bleu-vert.
1+ Agrégats fins sur un fond vert-marron.
RÉACTIONS NÉGATIVES:
Rugosité ou absence d’agrégats sur un fond vert-marron.
TEST SEMIQUANTITATIF
Bien qu’il n’y ait pas de corrélation entre la sévérité de la maladie et le niveau
d’anticorps hétérophiles de la MI, le titrage séquentiel peut être utile au
clinicien dans le suivi de la maladie.
Préparer des dilutions doubles sériées de l’échantillon dans un solution saline,
en commençant par la dilution 1:2.
Analyser chaque dilution comme indiqué dans la section TEST QUALITATIF.
Interprétation des résultats
Le titre d’anticorps hétérophiles de la MI de l´échantillon est la dilution la
plus élevée présentant une agglutination nettement visible.
Conservation
Limites de la procédure
Les réactifs resteront stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur
l’étiquette, à condition d’être conservés à 2-8°C. Ne pas congeler.
Les réactifs qui contiennent des hématies sédimentent rapidement. Après
agitation, ils doivent présenter un aspect uniforme.
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Matériel nécessaire non fourni
Solution saline (0,9% NaCl, uniquement pour le test semiquantitatif), pipettes
automatiques, agitateur rotatif, bâtonnets et chronomètre.
Prélèvement de l’échantillon
Utiliser du sérum ou du plasma frais (EDTA). D’autres anticoagulants doivent
être évalués avant leur utilisation. Les échantillons peuvent être conservés à
2-8°C pendant 3 jours. Pour des périodes plus longues, les échantillons
doivent être congelés (-20°C).
PROCÉDURE
Contrôle de qualité: Avant de réaliser une série de déterminations, tester le
réactif avec chaque contrôle, inclus dans le coffret. Les deux contrôles seront
utilisés selon les étapes décrites dans le TEST QUALITATIF. La réaction entre
le contrôle positif et le réactif doit donner une agglutination nette différente de
l’apparence uniforme du contrôle négatif. Si ces résultats ne sont pas obtenus,
ne pas utiliser le réactif.
Pour assurer une bonne distribution, tenir le compte-gouttes de réactif en
position verticale et verser une seule goutte.
TEST QUALITATIF
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Attendre que les réactifs atteignent la température ambiante (20 - 30°C).
Déposer 50 µl de l´échantillon (ou une goutte de contrôle) sur un des
cercles de la lame.
Agiter le flacon du réactif et ajouter une goutte de réactif à côté de la
goutte d’échantillon.
Mélanger les deux gouttes avec un bâtonnet en recouvrant toute la
surface du cercle.
Agiter la lame doucement avec un léger mouvement de rotation,
manuellement ou à l’aide d’un agitateur rotatif (80-100 tr/min) pendant
1 minute. Puis laisser AU REPOS sur une surface plane pendant une
minute de plus.
SANS AGITER LA LAME, observer immédiatement l’agglutination et
noter les résultats.
Interprétation des résultats
Une agglutination foncée sur un fond bleu-vert est un résultat positif et indique
la présence d’anticorps hétérophiles de la MI. L’absence d’agglutination sur un
fond vert-marron est un résultat négatif.
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Les résultats du color-mono doivent être interprétés en accord avec le
bilan clinique, hématologique et sérologique du patient.
Occasionnellement, chez des patients symptomatiques de la MI, les
concentrations détectables d’anticorps hétérophiles apparaissent
tardivement. Si les symptômes persistent, il est recommandé de
réaliser un nouveau test quelques jours après. Certains patients ne
développent pas d’anticorps hétérophiles, particulièrement les
enfants et les adolescents. D’après la littérature, 80 à 90% des
adultes et moins de 50% des enfants développent des anticorps
hétérophiles (9,10,11).
Chez certains individus des concentrations détectables d’anticorps
hétérophiles peuvent persister pendant des mois, et plus rarement
pendant des années (5,9).
Les limites de temps recommandées dans la procédure sont à respecter
rigoureusement.
Les caractéristiques des résultats du test n’ont pas été établies pour les
matrices n’étant pas composées de sérum et de plasma EDTA.
Agiter la lame durant l’interprétation des résultats peut provoquer la
dispersion de l‘agglutination.
Valeurs attendues
Différentes études (12) sur la présence d’anticorps hétérophiles de la MI chez
les donneurs de sang ont montré que l’incidence de la maladie varie entre
0,9 et 1,7% de la population. Puisque la présence d’anticorps hétérophiles
indique une infection relativement récente, ces résultats suggèrent que
l’incidence réelle de la maladie est plus élevée que le nombre de cas
diagnostiqués.
Dans une étude réalisée avec le color-mono pour laquelle ont été utilisés
99 échantillons de sérum d'une banque de sang d'un centre de Barcelone,
l'incidence de résultats positifs a été de 3%.
Caractéristiques fonctionnelles
La sensibilité du color-mono a été testée qualitativement sur 48
échantillons porteurs d’anticorps hétérophiles de la MI, comparés à un
test commercial d’hématies de cheval pour l’agglutination sur lame. La
sensibilité relative du color-mono a été de 97,9% (95% intervalle de
confiance = 88,7 - 99,9%).
La spécificité du color-mono a été testée qualitativement sur 200 sérums
sélectionnés au hasard, prélevés sur des patients hospitalisés supposés
non-porteurs d’anticorps hétérophiles de la MI. La spécificité relative du
color-mono au test d’hématies de cheval a été de 95,8% (95% intervalle de
confiance = 91,9 - 98,2%).
Pour mettre en évidence d’éventuelles réactions croisées, l’analyse a porté
sur des échantillons d’autres infections (CMV-IgM/10 échantillons,
toxoplasmose-IgM/13 échantillons et arthrite rhumatoïde/11 échantillons).
Aucune réactivité n’a été rapportée face au réactif color-mono.
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