CAPTURA DE HÍBRIDOS E INMUNOHISTOQUÍMICA p16 Y Ki

Nancy Janette Casas Sánchez
Sandro Saúl Que Chan
María Virginia Alvarez Arquieta
Gabriel Manuel Mandujano Vera
Gabriel Juan Mandujano Alvarez
Mario Roberto Bernabe Guapillo Vargas
CÁNCER CERVICO UTERINO
Principal causa de muerte por neoplasia en mujeres de países
en vías de desarrollo
Alteración celular en el epitelio del cuello del útero
Lesiones precursoras de evolución lenta y progresiva
• displasia (leve, moderada y severa)
• cáncer in situ (circunscrito a la superficie epitelial)
• cáncer invasor (el compromiso traspasa la membrana basal)
El factor de riesgo más común es la exposición a ciertas
variedades del virus del papiloma humano (VPH)
En el 2000 (1)
En el 2000 (1)
470,606 casos nuevos
233,372 defunciones/año
16,448 casos nuevos
6,650 defunciones/año
En América
92,136 casos nuevos
37,640 defunciones/año
Tasas por cada
100,000
40.5 incidencia
17.1 mortalidad
80% América Latina
y el Caribe
1. Globocan 2000
Factores
protectores
Educación
sexual
Diagnóstico
oportuno
VPH=ITS
Promiscuidad
Actividad sexual a temprana edad
Otras ITS
Citología anormal
Pareja sexual con cáncer de cérvix o de pene
Edad
Anticonceptivos orales
Predisposición genética
VPH
Familia Papovaviridae
No envueltos
55 nm de diámetro
Cápside
Icosahédrica
72 Capsómeros (L1 y L2)
Genoma
ADN bicatenario
circular
7,900 pb
Bajo riesgo
6, 11, 40, 42,
53, 54 y 57
VPH
Alto riesgo
16, 18, 31, 35,
39, 45, 51, 52,
56 y 58
Poder oncológico
GENOMA DE VPH-16
E6
LCR
E7
L1
E1
VPH-16
7.9 Kb
E4
L2
E2
E5
RELACIÓN VPH - CaCu
El ADN de VPH es integrado
al genoma del huésped
La
integración
ocurre
destruyendo los genes E1/E2
de VPH
Los genes E6/E7 de VPH
siempre están presentes y
expresados
Cáncer
Cervicouterino
sin
VPH
Vía de la
ubiquitina
E6
p53
E6AP
E6
E2F
E7
E7
RB
E2F
X
RB
Genes del crecimiento
celular
p16
DIAGNÓSTICO
CaCu:
Citología (Papanicolau), colposcopia y
patología.
VPH:
Inmunohistoquímica, captura de
híbridos y PCR.
OBJETIVO
• Conocer
la
correlación
entre
los
métodos
de
identificación de VPH CH2 e IHQ con marcadores
p16INK4a
y
Ki-67,
en
pacientes
con
datos
clínico/colposcópicos de lesión intraepitelial escamosa
(LIE) cervical/infección por VPH.
METODOLOGÍA
METODOLOGÍA
• Biopsias Cervicales
Se incubaron anticuerpos anti p16INK4a
(1:25, Cell Marque) y Ki-67 (1:50, Bio
Sb). Sistema de detección: diaminobencidina.
Recuperación antigénica a 95ºC, por
40 minutos con Trilogy (Cell Marque).
Lesiones
histológicas
clasificadas según el
sistema “Bethesda”.
Fijadas en formaldehído al 10%,
cortadas a 3µm, previa inclusión en
parafina
RESULTADOS
RESULTADOS
No. de
m u e s t ra
Eda d
D ia g n ó s t ic o
h i s t o p a to ló g ic o
P 1 6 IN K 4 a
1
20
LBG
+ a
2
18
LBG
3
21
4
K i- 6 7
C a p tu ra d e h íb r id o s
AR
BR
+ II
7 .7 7
0 .1 8
+ b
+ I
91 7 .7 4
0 .8 2
LBG
+ a
+ I
17 4 .7 9
0 .2 7
19
LBG
+ b
+ I
17 6 8 .0 8
0 .6 0
5
24
LBG
-
+ I
3 .5 1
0 .1 9
6
35
LBG
+ a
+ I
7 .8 7
0 .1 2
7
20
LBG
+ a
+ I B a sa le s
20 5 0 .0 9
0 .9 4
8
24
CC
+ a
+ I
0 .1 0
0 .1 4
9
33
LBG
+ a
+ I
42 2 .8 5
0 .4 2
10
50
LBG
-
+ I
0 .0 9
0 .1 0
11
30
LAG
+ b
+ II
74 9 .0 6
0 .9 1
12
25
LBG
+ a
+ II
46 3 2 .9 5
13
20
C o n d ilo m a / L B G
+ a
+ I
16 1 5 .2 4
14
27
CC
-
+ I
1 .0 6
15
35
CC
-
+ I B a sa le s
0 .1 7
16
25
CC
-
+ I B a sa le s
0 .1 3
17
22
CC
-
+ I B a sa le s
3 .7 0
18
33
CC
-
+ I B a sa le s
42 2 .8 5
0 .4 2
19
29
CC
-
+ I B a sa le s
0 .1 9
0 .4 2
20
24
LAG
+ c
+ II
10 7 6 .9 5
0 .4 9
C C , C e rv icit is C ró n i ca
L B G , L es ió n d e B ajo G ra d o
L A G , L es ió n d e A lt o G ra d o
-,
+ a,
+ b,
+ c,
p 16 IN K 4 a n e g a t iv o
b a jo
m o d e ra d o
a lt o
0 .1 2
+ I B a s ale s , e n c é lu las b a s a les
+ I, b a jo
+ II, alt o
RESULTADOS
CONCLUSIÓN
• En el presente estudio se encontró correlación en la detección
de VPH por CH2 y presencia de LIE, por medio de IHQ. La CH2
mostró alta sensibilidad en detección viral. La IHQ es específica
en un alto porcentaje a presencia de lesión intraepitelial
cervical, sobre todo en casos histológicamente dudosos. Ambos
estudios son de gran utilidad como herramientas diagnósticas y
se complementan para determinar el nivel de progresión de la
infección por VPH.
¡ Gracias
por su
atención !