potencialidade analítica de hplc-fluorescência para

POTENCIALIDADE ANALÍTICA DE HPLC-FLUORESCÊNCIA PARA INVESTIGAÇÃO
DE PTERIDINAS EM INDIVÍDUOS COM ADENOCARCINOMA GÁSTRICO
Ana Carolina de Souza*
[email protected]
1
(PG),
Ana
Valéria
Colnaghi
1
Labi Tiselius, Dpto. de Química Analítica, Instituto de Química, UNICAMP;
Química, UNICAMP
1,2
Siomionato
2
(PQ).
INCTBio, Instituto de
Palavras Chave: Biomarcadores, Câncer, HPLC, Pteridinas.
Introdução
Sua mortalidade por adenocarcinoma gástrico (GA) é elevada, devido ao diagnóstico
1
tardio em lesões muito avançadas. Métodos não invasivos com alta sensibilidade e
especificidade seriam de grande ajuda no diagnóstico e acompanhamento desta doença. As
pteridinas são provenientes do metabolismo de algumas vitaminas e vêm sendo estudadas como
2
biomarcadores para diversas patologias de base de câncer. Este trabalho objetiva quantificar
pteridinas em urina de indivíduos sadios e doentes com GA por HPLC.
Resultados e Discussão
Para realizar as separações por HPLC-fluorescência em fase reversa uma fase móvel
fraca foi utilizada para obter melhor separação. A fase móvel foi composta por tampão Tris-HCl
-1
15 mmol L em dois pHs diferentes (6,1 e 6,4), utilizando modo de eluição por gradiente.
Mantendo as mesmas condições de análise e trocando as colunas observou-se que somente foi
possível resolver os picos utilizando a coluna XDB-C18 (Figura 1a).
0.30
(a)
(b)
Coluna C18 (250 x 4,6 mm)
Coluna XDB-C18 (150 x 4,6 mm)
Coluna de UPLC C18 (50 x 4,6 mm)
80
60
40
Coluna C18 (250 x 4,6 mm)
Coluna XDB-C18 (150 x 4,6 mm)
Coluna de UPLC C18 (50 x 4,6 mm)
0.25
Absorbância
Unidade de Fluorescência
250
240
230
220
0.04
0.03
0.02
20
0.01
0
0.00
1.0
1.5
2.0
2.5
8
10
12
14
0
2
Tempo (minutos)
4
6
8
10
Tempo (minutos)
Figura 1. Cromatogramas obtidos a partir de uma mistura de creatinina, pterina, biopterina e
isoxantopterina, com diferentes colunas, usando (a) detecção por fluorescência (λex/λem 272/445
nm); (b) detecção por absorção de radiação UV (λab 230 nm).
O cromatograma da creatinina analisada com uma coluna C18 (250 mm) apresenta um
pico muito largo comparado com os outros dois cromatogramas (Figura 1b), mostrando, ser
pouco eficiente para esta análise 755, 9.916 e 4.829 para as colunas C18 (250 mm), XDB-C18
(150 mm) e UPLC C18 (50 mm) respectivamente.
Conclusões
Os parâmetros que mais influenciaram a separação dos analitos por HPLC foi o pH,
composição da fase móvel e natureza da fase estacionária. A melhor resolução foi encontrada
para a fase móvel constituída de tampão tris-HCl pH 6,4-6,7, em uma coluna XDB-C18. O
método apresenta excelente detectabilidade (LOQ ao redor de 1 ppb) o que mostra sua
potencialidade para análise de pteridinas.
Agradecimentos
Ao técnico Ricardo Pereira, CAPES, CNPQ e FAPESP (proc. nº 2008/11195-9)
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Souza, F. O.; Antunes, L. C. M.; Santos, L. H. R. - ABCD, arq. bras. cir. dig. 2011, 24, 74.
Amira, N.; Mourah, S.; Rozet, F.O.; Teillac, P.; Fiet, J.; Soliman, H. - Int. J. Cancer 2002, 101, 293.
2