AMILASE - GT Laboratorio

AMILASE Liquid Plus
FINALIDADE
Para a determinação de atividade da Amilase (1,4-alfa-D-glicose
glicanohidrolase EC 3.2.1.1.) no soro, plasma ou orina.
Método Cinético CNPG3
SIGNIFICADO CLÍNICO
Os níveis de Amilase podem variar em diversas doenças; portanto a determinação da atividade de amilase no soro e urina é
normalmente um teste aceito para o diagnóstico de pancreatite
agudas. Os níveis de amilase na urina nas pancreatite agudas
permanecem elevados por períodos mais longos do que no soro.
Por isso a determinação da taxa de amilase e depuração de creatinina é importante seguindo o curso da doença.
PRINCÍPIO DO ENSAIO
A enzima alfa amilase da amostra hidrolisa o substrato 2-cloro-4nitrofenil-alfa-D-maltotriósido(CNPG3),com formação de2-cloro4-nitrofenol,2-cloro-4-nitrofenil-alfa-D-maltósido (CNPG2), maltotriose (G3) e glicose.
A velocidade de formação do 2-cloro-4-nitrofenol, medida a 405
nm, e proporcional a atividade da alfa-amilase na amostra.
REAGENTES FORNECIDOS
CODIGO 31550 (50 ml): 1 x 40 ml R1 + 1 x 10 ml R2
CODIGO 31510 (100 ml): 2 x 40 ml R1 + 2 x 10 ml R2
CODIGO 31610 (100 ml): 1 x 80 ml R1 + 1 x 20 ml R2
Composição dos reagentes fornecidos
R1: MES pH = 6.0 0.125 mmol/l
Cloruro de sodio 0.4375 mmol/l
Acetato de calcio 7.5 mmol/l
Tiocianato de potasio 1.125 mmol/l
R2: CNPG3 14 mmol/l
Conservação e estabilidade dos reagentes
Conservar em refrigerador entre 2-8 ºC. Estável até a data de
vencimento marcada no rótulo.
Sinais de instabilidade ou deterioração
Turbidez e sedimento nos reagentes indicam deterioro.
Cuidados e precauções
Este kit é destinado somente para uso diagnóstico in vitro. A
caixa e os frascos neste produto não podem ser reutilizados.
Eles devem ser descartados como resíduos perigosos de acordo
com a legislação vigente. O pessoal que manipula-los, deve ser
devidamente treinado para a manipulação e eliminação pela instituição ou pelo laboratório que usa-lo.
REAGENTE DE TRABALHO
Preparação
Códigos 31550, 31510 y 31610: Agregue o conteúdo de um
frasco de R2 num frasco de R1 e misture.
Alternativamente, misture 4 volumes de R1 com 1 volume de R2
num balão limpo e seco. Anote a fecha de preparação no rótulo.
Composição do Reagente de Trabalho
MES ..........................................................pH = 6.0 100 mmol/l
Cloreto de sódio ......................................................350 mmol/l
Acetato de cálcio ......................................................6.0 mmol/l
Tiocianato de potássio.............................................900 mmol/l
CNPG3.....................................................................2.8 mmol/l
Conservação e estabilidade do Reagente de Trabalho
Refrigerado (2-8 º C) bem tapado e a o abrigo da luz: 30 dias.
A poluição com suor ou saliva deve ser especialmente evitada.
Sinais de instabilidade ou deterioração do Reagente de trabalho
Leituras de branco de reagente contra água destilada superiores
a 0.500 D.O. indicam deterioro dos reagentes.
MATERIAIS NECESSÁRIOS MAIS NÃO FORNECIDOS
1. Espectrofotômetro termostatizado.
2. Cubetas de leitura.
3. Pipetas e micropipetas.
4. Água destilada.
COLETA E OBTENÇÃO DA AMOSTRA
AMOSTRA
Substancias interferentes
Hemoglobina superior a 500 mg/dl.
Lipemia superior a 3500 mg/dl de triglicérides.
Bilirrubina superior a 35 mg/dl.
Heparina superior a 200 U/ml.
Anticoagulantes contendo EDTA y citrato.
As amostras devem ser límpidas, livres de contaminação e de
pH neutro.
Condições de conservação
Suero ou Plasma
Refrigerador (2-8°C)…………….............………...estável 15 días
Temp. Amb. (20-25°C)……………..............……...estável 5 días
Urina (pH neutro)
Refrigerador (2-8°C)………………..............……..estável 10 días
Eliminação
Todos os espécimes devem ser considerados como potencialmente infecciosos, assim como o material em contato com eles.
As boas práticas laboratoriais e regulamentos locais deverão ser
observados para prosseguir com sua eliminação. Um método
sugerido e a autoclave a 121º C durante 1 hora. Os líquidos
devem ser eliminados em 5% hipoclorito de sódio, deixando a
inativação proceder durante 1 hora.
PROCEDIMENTO DO ENSAIO
Condições da Reação:
Comprimento de onda: 405 nm
Temperatura de reação: 25ºC, 30ºC ó 37ºC
Procedimento:
Agregue em uma cubeta de espectrofotômetro a amostra pré
misturada com o Reagente de Trabalho de acordo com o seguinte esquema:
25ºC/30ºC
37ºC
Reagente de Trabalho
1.0 ml
1.0 ml
Amostra
50 µl
20 µl
Registre a leitura inicial e dispare simultaneamente o cronômetro. Repita as leituras exatamente 1, 2 e 3 minutos depois.
s
CALCULOS
1- Calcule a média das diferencias de leituras obtidas ( A/min).
2- Actividad alfa-amilasa:
BIBLIOGRAFIA
1. Kaufman, R. and TieztN. Clin Chem. 26:846 (1980).
2. Young, D. Clin Chem. 21-5: 246 (1975)
U/l = A/min x factor
Factor a emplear:
25/30 ºC: 1628
37 ºC: 3954
INFORMAÇÃO AOS CLIENTES
Garantia
SISTEMA ANALITICO
1. Faixa dinâmica: amostras com atividade maior de 2000 U/l,
deveram repetir se diluídas em solução fisiológica. O resultado
deverá multiplicar se pela diluição da amostra.
2. Sensibilidade: 3 U/l.
3. Precição
Intraensaio
AMOSTRA
1
2
3
MEDIA
84,2
408,6
1542
S.D. U/l ±
2,5
6,2
42.3
C.V. % ±
3,0
1,5
2.74
Interensaio
AMOSTRA
1
2
3
MEDIA
83,1
415,7
1389
S.D. U/l ±
3,7
11,4
41,2
C.V. % ±
4,4
2,7
2,97
VALORES DE REFERÊNCIA
Soro ou plasma: até 125 U/l (37ºC)
Urina: até 700 U/l (37ºC)
CONTROLE DE QUALIDADE
As boas práticas de laboratório recomendam processar amostras
normais e anormais a diário. Recomenda-se o uso de Soro Controle Qualiset Nívels 1 e 2 GT Lab (códigos 602105 e 602205).
Cada laboratório deverá desenvolver o seu próprio controle interno de qualidade e ações corretivas se exceder os limites de
tolerância aceitáveis.
NOTAS:
1. Adaptações para analisadores automáticos estão disponíveis
a pedido e em www.gtlab.com.ar .
2. Altas atividades de amilase estão presentes na saliva e suor.
Extremo cuidado é recomendado para evitar a contaminação
das amostras e do material de laboratório.
3. Os factores foram calculados com base na absortividade
molar do 2-cloro-4-nitrofenol. Este parâmetro varia com o pH,
comprimento de onda e temperatura. As condições do ensaio
devem ser estritamente respeitadas.
APREZENTAÇAO
CODIGO 31550 (50 ml): 1 x 40 ml R1 + 1 x 10 ml R2
CODIGO 31510 (100 ml): 2 x 40 ml R1 + 2 x 10 ml R2
CODIGO 31610 (100 ml): 1 x 80 ml R1 + 1 x 20 ml R2
GT Laboratório S.R.L. fabrica e comercializa reagentes para diagnóstico in vitro sob
Boas Práticas de Fabricação (Good Manufacturing Practices) certificadas de acordo
com O.M.S./W.H.O. Technical Report Series 908/2003, C.E.E. Res. 91/536 e A.N.M.A.T.
Disp. Nº 3623/1997, ISO 9001:2008 e ISO 13485:2003. Os termos e as condições da
qualidade são absolutos dentro das responsabilidades que correspondem a
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