TÍTULO Influência de agentes dessensibilizantes remineralizados à
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TÍTULO Influência de agentes dessensibilizantes remineralizados à
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE FACULDADE DE ODONTOLOGIA PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ODONTOLOGIA Narjara Condurú Fernandes da Silva INFLUÊNCIA DE AGENTES DESSENSIBILIZANTES REMINERALIZADORES À BASE DE CÁLCIO NA RESISTÊNCIA DE UNIÃO À DENTINA. Belém – Pará 2012 UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE FACULDADE DE ODONTOLOGIA PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ODONTOLOGIA Narjara Condurú Fernandes da Silva INFLUÊNCIA DE AGENTES DESSENSIBILIZANTES REMINERALIZADORES À BASE DE CÁLCIO NA RESISTÊNCIA DE UNIÃO À DENTINA. Dissertação apresentada à Universidade Federal do Pará, como pré-requisito para a obtenção do Título de Mestre em Odontologia sob orientação do Prof. Dr. Sandro Cordeiro Loretto. Belém – Pará 2012 Dados Internacionais de Catalogação-na-Publicação (CIP) Sistema de Bibliotecas da UFPA ____________________________________________________________ Silva, Narjara Condurú Fernandes da, 1983Influência de agentes dessensibilizantes remineralizadores à base de cálcio na resistência de união à dentina. / Narjara Condurú Fernandes da Silva. - 2012. Orientador: Sandro Cordeiro Loretto. Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Pará, Instituto de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Belém,2012. 1. Dentística. 2. Dentina. 3. Polpa dentária. I. Título. CDD 22. ed. 617.675 ____________________________________________________________ DEDICATÓRIA A Deus, Por minha vida e por tudo que consegui alcançar até aqui, por tornar possível a realização de muitos sonhos e pela força que surgia como mágica nos momentos mais difíceis. Aos meus pais, Vesper e Francesca, Por terem sido sempre, e de fato, verdadeiros PAIS, presentes em todos os momentos da minha vida. Pelo amor incondicional, pela mão incansável sempre estendida e pelos exemplos que os fizeram tornar o espelho de vida que escolhi para mim. Ao meu noivo, Cristiano, Por todo amor, pela presença nos momentos tristes e felizes, por sonhar comigo e nunca desistir. Pela compreensão nos muitos momentos que precisei estar ausente ao longo desses dois anos. Aos meus irmãos, Vesper Neto (in memorian), anjo que por nós passou, que faz com que quem ficou tente a toda hora se esmerar, pra quem está olhando lá de cima possa sempre se orgulhar. Breno, com seu alto-astral e alegria contagiantes, sempre disposto a me ajudar nos momentos difíceis. Gabriela, eterno exemplo de superação, sempre me mostrando que o limite só existe dentro de nós. AGRADECIMENTOS Ao Prof. Sandro Loretto, por ter exercido incansavelmente o papel de me orientar neste trabalho, pela tranquilidade e paciência em todos os momentos que senti dificuldade e medo diante do “novo”. Por ter “segurado em minhas mãos” e ajudado nos momentos que sozinha seria incapaz de seguir nesse caminho. Por toda sua dedicação ao nosso trabalho, e por todas as vezes que precisou abdicar de sua família, doando seu tempo para que nosso trabalho pudesse se materializar ao longo desses dois anos. Ao Prof. Mário Honorato, por sua dedicação ao nosso Programa de PósGraduação e esforços em fazê-lo crescer, pelas dicas em nosso trabalho e por toda compreensão no momento que precisei. À prof. Mariseth Andrade, do Departamento de Estatística da Santa Casa de Misericórdia do Pará, por toda sua atenção à nossa estatística. Ao professor Armando Chermont e ao seu irmão Afonso Chermont, por terem sido tão solícitos em contribuírem para a obtenção dos dentes bovinos utilizados em nosso estudo. Ao prof. David Normando, pelo conselho que me fez decidir por participar da seleção do Mestrado, e pela postura profissional sempre tão dedicada e correta ao longo dos anos que o conheço, que serviram e servem como exemplo para mim. À professora Sissy Machado, pelos conselhos e apoio que muito contribuíram à época da fase de seleção do Mestrado. À amiga Thalita Tartari, companheira de mestrado e de laboratório, pessoa especial que conheci durante o programa, capaz de tornar mais divertidos e leves até os momentos mais complicados da execução desse trabalho, sempre disposta a me ajudar em vários momentos que precisei, e à amiga Larissa Macêdo, companheira do laboratório de dentística pré-clínica, com seu jeito sempre alegre e positivo de ver a vida e de encarar os problemas de forma leve, vocês vão comigo em meu coração. À Thamea, Larissa, Hellen Santos, Esther e Nayara, pelo apoio, paciência e contribuições diversas. Aos professores Elizabeth Rodrigues e Fábio Molfetta, do Departamento de Química da Universidade Federal do Pará, que contribuíram para a escolha correta de materiais utilizados em nosso trabalho. À minha madrinha Ise e tio Zé Almir, pelos milhares de conselhos de grande utilidade desde o início até as últimas fases desse projeto. À minha vó Cleide, pela eterna confiança em mim depositada e pela torcida incansável durante toda minha caminhada profissional. À amiga Carol Feio, pelos muitos conselhos, pelos ouvidos sempre abertos aos meus desabafos, por sua participação na minha vida durante todo o mestrado e desde que a conheci. À amiga Éllida, amiga de pequena e companheira de profissão, pelo ombro amigo sempre prestes a atender minhas lamúrias e reclamações, pela certeza de saber que tenho sempre com quem contar. Aos amigos de mestrado, Etiane, Adriana, Leida, Joyce, Camila, Thiago e todos os outros companheiros de sala, pelas vários bate-papos e por proporcionarem vários momentos divertidos que tornaram essa caminhada mais leve. Aos funcionários da secretaria do mestrado, Antelmo e Edna, e a todos os funcionários da faculdade pela dedicação e auxílio, tornando possível essa jornada. Especialmente, ao Antelmo que várias vezes precisei contar e esteve disposto a me ajudar quando precisei. RESUMO Objetivo: avaliar a influência de agentes dessensibilizantes e remineralizadores à base de cálcio na resistência da união adesiva à dentina promovida por diferentes sistemas adesivos. Materiais e método: Noventa e nove (99) dentes incisivos bovinos hígidos foram utilizados, sendo noventa (90) aleatoriamente divididos em nove (9) grupos (n=10), de acordo com o agente dessensibilizante (sem dessensibilizante, Desensibilize Nano-P (FGM) e Colgate Sensitive Pró-Alívio (Colgate-Palmolive)) e o sistema adesivo utilizado (Adper Single Bond 2 (3M Espe), Adper Easy One (3M Espe) e Clearfil SE Bond (Kuraray)), e os demais (9) processados para avaliação em microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os dentes foram seccionados no limite coronoradicular, tiveram suas coroas incluídas em matrizes de PVC, e suas superfícies dentinárias expostas e planificadas com o auxílio de lixas de carbeto de silício (nº180, 400 e 600), sob refrigeração. Em seguida, todos os grupos foram expostos à solução de EDTA 17% para desobliteração dos túbulos dentinários, e submetidos ao protocolo de uso dos agentes dessensibilizantes, de acordo com as recomendações dos fabricantes, com exceção dos grupos controle. Após esta etapa, os corpos-de-prova foram hibridizados com os sistemas adesivos correspondentes, e cilindros de resina composta foram confeccionados com o auxílio de uma matriz metálica bipartida. Os corpos-de-prova foram então armazenados em água destilada (37ºC), por 24 horas, até a realização do teste de cisalhamento. Para avaliação ao MEV, fragmentos dentinários de 4x4x2mm foram obtidos, submetidos ao EDTA 17%, e tratados com os agentes dessensibilizantes. A obliteração dos túbulos dentinários foi observada em cortes transversais e longitudinais. Resultados: Ambos os dessensibilizantes promoveram uma obliteração parcial dos túbulos dentinários expostos. A maior e menor média de resistência (MPa) foram obtidas com Adper Single Bond 2, sendo a maior com o uso prévio do Colgate Sensitive Pró-alívio (4,78), e a menor com o uso prévio do Desensibilize Nano-P (1,44). A comparação dos grupos (ANOVA 2-way) (5%) não demonstrou diferenças significativas para o fator sistema adesivo e para interação entre este e o fator agente dessensibilizante. Entretanto, o fator agente dessensibilizante mostrou-se altamente significante (p=0,0000). Comparações pareadas (teste t-Student) mostraram diferenças significativas entre o Colgate Sensitive Pró-Alívio e os grupos controle e Desensibilize NanoP, quando do uso do sistema Adper Single Bond 2. Com o sistema Adper Easy One, se observou diferença entre os grupos Desensibilize Nano-P e Colgate Sensitive Pró-Alívio. Não houve diferenças significativas com o sistema Clearfil SE Bond. Os padrões de fratura foram avaliados em lupa estereoscópica (40X), predominando o padrão misto. Conclusões: A interferência do uso prévio de dessensibilizantes dentinários na resistência de união é dependente do tipo e mecanismo de ação do agente dessensibilizante e sistema adesivo utilizados. Palavras-chave: Dentina; sensibilidade da dentina; agentes dessensibilizantes dentinários; adesivos dentinários. ABSTRACT Objective: evaluate the influence of calcium-based desensitizing and remineralizing agents on dentin shear bond strength promoted by different adhesive systems. Materials e method: Ninety nine (99) sound incisive bovine teeth were randomly divided into nine (9) groups (n=10), according to desensitizing agent (DA) (no DA, Desensibilize Nano-P (FGM) and Colgate Sensitive Pro-Relief (Colgate-Palmolive)) and adhesive system used (Adper Single Bond 2 (3M Espe), Adper Easy One (3M Espe) e Clearfil SE Bond (Kuraray)). Other nine (9) teeth were processed to scanning electron microscopy (SEM). Teeth were sectioned at coronal-radicular junction, had crowns included in a PVC matrix, and the dentin surfaces gridded and polished with silicon carbide abrasive papers (180, 400 and 600), under refrigeration. All groups were exposed to 17%EDTA solution to open dentinal tubules, and submitted to DA according to manufacturer’s instructions, with exception to control groups (no DA application). After, specimens were bonded and composite resin cylinders built on dentin surfaces. Then, specimens were stored in distilled water (37ºC), 24 hours, until performing shear bond strength test. For evaluation under SEM, 4x4x2mm dentin fragments were obtained, submitted to 17%EDTA, and treated with DA. Results: Both DA promoted partial occlusion of exposed dentinal tubules. Higher and lower mean values (MPa) were associated to Adper Single Bond 2, with previous use of Colgate Sensitive Pro-Relief (4,78), and Desensibilize Nano-P (1,44), respectively. The comparison of groups (ANOVA 2-way) (5%) shows no significant differences to the adhesive system factor, besides the interaction with DA factor. However, DA factor was highly significant (p=0,0000). Paired comparisons (t-Student test) showed significant differences between Colgate Sensitive Pro-Relief and control, and Desensibilize Nano-P groups, when using Adper Single Bond 2. Using Adper Easy One, statistical differences were observed between Desensibilize Nano-P and Colgate Sensitive Pro-Relief groups. No significant differences were obtained with Clearfil SE Bond. Debonding patterns were evaluated (40X), predominating the mixed one. Conclusion: Interference of DA previous use on dentin bonding strength was dependent to type and action mechanism of DA and adhesive system used. Key-words: Dentin; dentin sensitivity; dentin desensitizing agents; dentin adhesive systems. LISTA DE QUADROS E TABELAS - QUADROS Quadro 1 - Materiais (fabricantes), classificação, composição e lote dos materiais utilizados no estudo................. ..................51 Quadro 2 - Descrição dos grupos experimentais, de acordo com a utilização do agente dessensibilizante, tipo de agente dessensibilizante (princípio ativo), e sistema adesivo utilizado......................................... ..................57 Quadro 3 - Período (ciclo) de aplicação dos agentes dessensibilizantes.....................................................................57 Quadro 4 - Descrição do modo de aplicação dos sistemas adesivos utilizados................................................... ..................61 - TABELAS Table 1 - Materials (manufacturers), type, and batch numbers……………………………………………..... …….….31 Table 2 - Experimental groups, according to desensitizing agents, their main components and adhesive systems……………………………………………….. ….…….31 Table 3 - Schedule of the application of desensitizing ... agents……………………………………………………………..32 Table 4 - Shear Bond strength. Mean and Standarddeviation………………………………………………,,…………33 Table 5 - Two-Way ANOVA applied to the SBS results (MPa)…………………………………………………..…………..33 Table 6 - SBS means (MPa) for adhesive systems x …..........34 desensitizing agents………………………………. Tabela 1 - Média e Desvio-Padrão da resistência ao cisalhamento dos grupos experimentais..................................67 Tabela 2 - Análise de variância para os valores médios da resistência ao cisalhamento (MPa).......................... ..................68 Tabela 3 - Média da resistência ao cisalhamento (MPa) do sistema adesivo Adper Single Bond 2 (3M Espe) em relação aos agentes dessensibilizantes..............................68 Tabela 4 - Média da resistência ao cisalhamento (MPa) do sistema adesivo Adper Easy One (3M Espe) em relação aos agentes dessensibilizantes....................................69 Tabela 5 - Média da resistência ao cisalhamento (MPa) do sistema adesivo Clearfil SE Bond (Kuraray) em relação aos agentes dessensibilizantes....................................69 LISTA DE FIGURAS Figure 1 - Colgate Sensitive Pro-Relief ® (transverse section): Most tubules are totally obliterated, and some have their lumen partially closed. The granular layer on the dentin surface may be caused by silica crystals and carbonate……………………………………………….…………………….36 Figure 2 - Colgate Sensitive Pro-Relief ® (longitudinal section): The depth of tubular obliteration is shown……………….………. …………….37 Figure 3 - Desensibilize Nano-P® (transverse section): Partial sealing of dentinal tubules is apparent, and some are completely open. A compact and unevenly distributed layer is evident on the dentin surface, possible due to nanostructured hydroxyapatite particles………………….………………………………….38 Figure 4 - Desensibilize Nano-P® (longitudinal section): The depth of tubule obliteration is shown……………………………… …………….39 Figura 1 - A – Colgate Sensitive Pró-Alívio; B – Desensibilize NanoP; C – Filtek Z350 XT; D – Adper Single Bond 2; E – Adper Easy One; F – Clearfil SE Bond; G – Saliva Artificial....................................................................................................52 Figura 2 - Após profilaxia com pedra-pomes, os dentes tiveram suas raízes seccionadas, com auxílio de disco diamantado dupla face em baixa rotação, na região do colo dentário.... ....................54 Figura 3 - A – Câmara pulpar obliterada com cera; B – Face vestibular da coroa dentária pressionada contra lâmina de cera nº7; C – Posicionamento de matriz de PVC sobre a coroa; D e E – Manipulação e versão de R.A.A.Q. no interior da matriz de PVC; F – Espécime após inclusão...... ....................54 Figura 4 - A – Espécime após inclusão; B – Desgaste e planificação da superfície vestibular em esmalte; C – Exposição do substrato dentinário.................................................................................55 Figura 5 - A – Solução de EDTA 17%; B e C – Aplicação da solução de EDTA 17% durante 60 segundos; D – Lavagem com água destilada por igual período.............................................................56 Figura 6 - A e B – Com auxílio de um microbrush, Desensibilize Nano-P era levado à superfície dentinária; C – Com um disco de feltro era friccionado durante 10 segundos; D – Permanecendo em repouso por mais 5 minutos sobre a superfície dentinária; E – Em seguida, o excesso de produto era removido, sem enxágue, com uma pelota de algodão umedecido.................................................................................58 Figura 7 - A e B – Colgate Sensitive Pró-Alívio era levado, com auxílio de taça de borracha, diretamente à superfície dentinária e friccionado durante 03 segundos, em seguida estes procedimentos eram repetidos; D – O excesso de produto era removido, sem enxágue, com uma pelota de algodão umedecido.................................................................................60 Figura 8 - Delimitação da área a ser hibridizada, com auxílio de disco de papel adesivo............................................................................61 Figura 9 - Aplicação de Adper Single Bond 2: A – Condicionamento da superfície dentinária com ácido fosfórico 37%; B – Lavagem abundante; C – Remoção do excesso de umidade com papel absorvente; D – Aplicação de Adper Single Bond 2; E – Fotopolimerização................................. ....................62 Figura 10 - Aplicação de Adper Easy One: A – Aplicação de Adper Easy One na superfície dentinária; B – Fotopolimerização. ....................62 Figura 11 - Aplicação de Clearfil SE Bond: A – Aplicação do Primer; B – Aplicação do Bond; C – Fotopolimerização...................... ....................62 Figura 12 - Os corpos-de-provas eram acoplados individualmente em uma matriz metálica bipartida..........................................................63 Figura 13 - Confecção dos cilindros de resina composta: A, B e C – Filtek Z350 XT era inserida, através de dois incrementos, polimerizados individualmente durante 20 segundos; D, E e F – Cilindro de resina composta confeccionado e em posição....................................................................................................64 Figura 14 - A e B – Corpo-de-prova acoplado à máquina universal de ensaio Kratos; C e D – Detalhe da fita matriz metálica acoplada ao cilindro de resina composta para realização do teste de resistência ao cisalhamento.............................. ....................65 Figura 15 - Túbulos dentinários expostos, com a preservação das dentinas inter e peritubular, após a utilização de solução de EDTA 17% durante 1 minuto.......................................... ....................71 Figura 16 - Obliteração tubular resultante da aplicação de Colgate Sensitive Pró-Alívio® na superfície dentinária (corte transversal).......................................................................... ....................72 Figura 17 - Profundidade de obliteração tubular obtida proveniente da aplicação de Colgate Sensitive Pró-Alívio® (corte longitudinal).............................................................................................72 Figura 18 - Obliteração tubular resultante da aplicação de Desensibilize Nano-P® na superfície dentinária (corte transversal).......................................................................... ....................73 Figura 19 - Profundidade de obliteração tubular obtida proveniente da aplicação de Desensibilize Nano-P® (corte longitudinal)..... ....................73 SUMÁRIO 1. ARTIGO....................................................................................................................15 1.1. TITLE PAGE..............................................................................................16 1.2. SUMMARY.................................................................................................17 1.3. INTRODUCTION........................................................................................18 1.4. MATERIAL AND METHODS.....................................................................19 1.5. RESULTS...................................................................................................21 1.6. DISCUSSION.............................................................................................22 1.7. SUMMARY (IN PORTUGUESE)...............................................................26 1.8. ACKNOWLEDGEMENTS..........................................................................27 1.9. REFERENCES...........................................................................................28 1.10. TABLES....................................................................................................31 1.11. LEGENDS TO THE FIGURES.................................................................35 1.12. FIGURES..................................................................................................36 1.13. NORMAS PARA PUBLICAÇÃO.............................................................40 2. DISSERTAÇÃO........................................................................................................46 2.1. INTRODUÇÃO...........................................................................................47 2.2. OBJETIVOS...............................................................................................50 2.2.1 OBJETIVO GERAL......................................................................50 2.2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS........................................................50 2.3. MATERIAL E MÉTODO.............................................................................51 2.4. RESULTADOS...........................................................................................67 2.5. DISCUSSÃO...............................................................................................74 2.5.1 DA METODOLOGIA....................................................................74 2.5.2. DOS RESULTADOS....................................................................79 2.6. CONCLUSÕES...........................................................................................89 2.7. REFERÊNCIAS..........................................................................................90 2.8. ANEXO.......................................................................................................96 15 1. Artigo 16 INFLUENCE OF CALCIUM-BASED REMINERALIZING AND DESENSITIZING AGENTS ON DENTIN BOND STRENGTH Short Title: Desensitizing agents on dentin bond strength Narjara Conduru Fernandes da Silva1, Igor Studart Medeiros2, Mario Honorato Silva e Souza Junior3, Sandro Cordeiro Loretto3. 1 Post graduation Program. Federal University of Para, School of Dentistry, Belem, Para, Brazil. 2 Biomaterials Department, University of Sao Paulo, School of Dentistry, Sao Paulo, Sao Paulo, Brazil. 3 Operative Dentistry Department, Federal University of Para, Belem, Para, Brazil. Corresponding Author: Sandro Cordeiro Loretto Av. Conselheiro Furtado, n° 2312, Torre Oasis, apto.401. Cremacao CEP: 66040-100 Belem – Para Fone: 55 91 8122-3477 E-mail: [email protected] 17 SUMMARY This study assessed the effect of calcium-based desensitizing agents (DA) on immediate bond strength to dentin. Ninety bovine incisors were divided into 9 groups (n = 10) according to the desensitizing treatment and adhesive system used. The DA conditions investigated were Desensibilize Nano-P (FGM), Colgate Sensitive Pro-Relief (ColgatePalmolive), and a negative control. The adhesive systems investigated were Adper Single-Bond/3M ESPE (ASB2), Adper Easy One/3M ESPE (AEO), and Clearfil SE Bond/Kuraray (CSEB). An additional 9 teeth were prepared for Scanning Electron Microscopy (SEM). In the experimental groups, the dentin surfaces were exposed to 17% EDTA and DAs. The adhesive systems and the composite resin (Z-350XT/3M ESPE) were then transferred to the dentin surfaces, which were subsequently stored in distilled water at 37 oC for 24 h. Shear bond strength was then determined. Higher bond strength was observed for the combination of ASB2 and Colgate Pro-Relief (4.8MPa), and that of ASB2 and Desensibilize Nano-P (1.4MPa) exhibited lower bond strength. The DA factor was highly significant (p < 0.0001) in a 2-way ANOVA. Student’s t-test detected significant differences between DAs and the control group when ASB2 was employed, and between the 2 desensitizing agents when AEO was used. The 3 CSEB groups did not differ significantly from each other. A mixed fracture pattern was predominant. The interference of previous application of DAs on dentin bond strength was dependent on the mechanism of action of the DA, and the adhesive system used. Key-words: dentin, dentin hypersensitivity, dentin desensitizing agents, dental adhesives. 18 INTRODUCTION Dentin hypersensitivity (DH) is normally reported as a short and sharp pain, due to exposed dentin subjected to thermal, evaporative, tactile, osmotic, or chemical stimuli, not related to any other dental pathology. Approximately 57% of the population, most ranging in age from 20 to 40 years, may report such symptoms. Several treatment strategies have been proposed, most of which have occlusive or neural effects (1,2). Recently, various biological approaches have been proposed to treat DH. Substances capable of reacting with body fluids including saliva and forming mineral deposits on affected dentin, are an example (3,4). One such professional paste for DH treatment (Colgate Sensitive Pro-Relief, Colgate-Palmolive, Sao Paulo, SP, Brazil) is based on 8% arginine, bicarbonate, and calcium carbonate (Pro-Argin technology™) and leads to in situ mineral deposit formation. Clinical studies have demonstrated the effectiveness of this paste with regard to the relief of DH symptoms (5,6). A different product known as Desensibilize Nano-P (FGM, Joinville, SC, Brazil) has also been launched in the dental market (4,7,8), which is based on nanohydroxyapatite. Restoration of non-carious cervical lesions of previously treated teeth with desensitizing agents (DA) is not uncommon; however, in these situations, the adhesion procedures can be compromised (9,11). The objective of this study was to compare the influence of previous application of products based on 8% arginine/calcium carbonate and nanohydroxyapatite on bond strength to dentin by using different adhesive approaches. 19 MATERIALS AND METHODS The materials used are shown in Table 1. The research protocol was approved by the Animal Ethics Committee of the Para State University (UEPA), under registration number 39/11. Ninety-nine bovine incisors were used in this study. After extraction, the incisors were cleaned, disinfected in 0.1% tymol solution, and stored in distilled water. The roots of 90 teeth were sectioned and the crowns embedded in acrylic resin in PVC rings. The buccal surfaces were ground flat with 180 SiC paper under water cooling until dentin exposition. Finer SiC paper (400 and 600) was then used to smooth the surfaces. The dentin surfaces were conditioned with 17% EDTA (Formula e Acao, Sao Paulo, SP, Brazil) for 60 s, then rinsed for 60 s with distilled water to open the dentin tubules to simulate a DH condition. Ninety teeth were divided into 9 groups (n = 10) according to the desensitizing agent and adhesive system used (Table 2). Each DA was applied according to the manufacturer’s instructions, as described in Table 3. The adhesive procedures were also conducted in accordance with the manufacturer’s instructions. Next, a Z-350XT composite resin cylinder (3M ESPE, Sumare, SP, Brazil) measuring 3 mm × 5 mm was transferred to the treated surfaces, and cured for 20 s using an Ultra-Blue D-2000 (DMC, Sao Carlos, SP, Brazil) at 900mW/cm2. The samples were stored in distilled water for 24 h before testing. The samples were subjected to shear bond strength (SBS) testing in a universal testing machine (Kratos Equipamentos LTDA, Cotia, SP, Brazil) using a 5-mm wide metal belt with a crosshead speed of 0.5 mm/min. The data recorded were analyzed by 2-way ANOVA and Student’s t-tests, and p < 0.05 was deemed to indicate statistical significance. The fractured samples were then observed under 40× magnification using a stereomicroscope to determine the fracture patterns. Nine dentin fragments measuring 4 × 4 × 2 mm were separated into 3 groups (n = 3), which were then treated with either 17% EDTA solution or one of the DAs used in the study. Two samples from each group were used for surface observations, while the remaining sample in each group was split into 2 and used to evaluate the depth of dentin tubule obliteration. The fragments were then mounted on metal stubs using carbon tape 20 and gold coated for observation via a LEO 1430 SEM (LEO Zeiss, Cambridge, England, UK) under 1000× and 1500× magnifications. 21 RESULTS The mean shear bond strength for each experimental group is shown in Table 4. Two-way ANOVA was used for inter-group comparisons (Table 5). Student’s t-test was utilized for comparison of each bond system and DA investigated (Table 6). Fifty-two samples (57.7%) exhibited an adhesive/cohesive failure pattern. Figures 3, 4, 5 and 6 depict various aspects of the reactions caused by the different DAs used either on the surface or within the dentin tubules. 22 DISCUSSION Numerous studies have evaluated bond strength to dentin after DA treatments, in particular those containing oxalate and glutaraldehyde, by using etch-and-rinse and selfetching systems (9-14). With regard to oxalate treatment, the results are not clear (15), but are evidently influenced by whether the application was performed prior to the acid etching (9,11), or after the dentin conditioning (9,12,13). Indeed, incompatibility between certain DAs and bonding systems may compromise the quality of adhesion (10). Recently, biological approaches to the treatment of dentin hypersensitivity (DH) have been investigated on the basis of a postulation that the ideal procedure should be based on natural processes such as the spontaneous obliteration of open dentin tubules. Theoretically, this would be possible by using materials capable of reacting with body fluids such as saliva, thus leading to mineral deposition on affected dentin, forming a “new substrate” resistant to mechanical and chemical challenges (3,4,16-18). However, little information is available regarding the application of biomimetic DAs prior to the application of bonding systems, and the resultant strength of bonding to dentin. Canares et al. (19) showed that prior use of Colgate Sensitive Pro-Relief desensitizing toothpaste did not interfere with adhesion to dentin as compared to a pumice-based control treatment. In fact, a discrete increase in bond strength was observed. Therefore, it was concluded that normal bonding procedures can be routinely performed in patients who regularly use this type of DA. Similar results were evident in the present study, in which Colgate Sensitive ProRelief professional (“in-office”) paste was used in association with Adper Single Bond (3M ESPE) (ASB2). Significantly higher bond strength to dentin was observed (Table 6). Comparable results between the in-office paste and at-home toothpaste can be expected, owing to them having the same composition (8% arginine and bicarbonate) and reaction mechanism (17). In the control groups in the present study, DH was simulated via application of a 17% EDTA solution for 1 min, which removed the smear layer and plugs. This procedure presumably also increased the permeability of the dentin, which may have influenced the bond strength, particularly when the etch-and-rinse ASB2 system was 23 used (2.1 MPa) (Table 4). The etching procedure may have further increased the permeability of the EDTA treated dentin, and facilitated dentinal fluid movement, which may have resulted in poor hybrid layer formation (12). Importantly, the moist adhesive technique was used for ASB2. Therefore, the total amount of water (moist technique + increased permeability) may have resulted in a very challenging substrate regarding hybrid-layer formation and the resultant low bond strength values to dentin that were observed (15). Treatment with Colgate Sensitive Pro-Relief obliterated the exposed dentinal tubules (Figures 1 and 2), resulting in a reduction in dentin permeability, which may have contributed to the significantly higher bond strength values observed when etchand-rinse ASB2 was used. In the SEM images, compaction and partial obliteration was evident. Additionally, reduction of the tubule lumens was seen in some cases. These results are in accordance with studies reported by Sauro et al. (8,20). A study by Petrou et al. (17) showed compaction and complete obliteration of the dentinal tubules. The higher number of applications of DA in that study may have contributed to the difference in micro morphological findings between that and the present study. The etch-and-rinse strategy results in increased dentin permeability (15). Indeed, in all groups, EDTA was used to simulate hypersensitive dentin, which may have increased more the permeability and moisture movement. For both self-etching systems, higher bond strengths were observed in the control groups than those seen in the etchand-rinse ASB2 group. The self-etching approach does not employ phosphoric acid as a conditioning agent, consequently, for SE strategy, dentin permeability was solely affected by the EDTA treatment. The SBS observed for etch-and-rinse (2.1MPa) specimens in the control group were lower than those observed for all-in-one SE (2.4 MPa) and two-step SE system (3.2 MPa) (Table 4). Despite the small difference in SBS, the presence of a final hydrophobic coat, present in the two-step self-etching adhesives, may have influenced the difference between the two SE adhesives due to the protection against moisture. All-in-one self-etching system is more sensitive to this variation compared to two-step self-etching adhesives (self-etching primers) (21). Although not statistically significant, prior application of Colgate Sensitive ProRelief increased bond strength to dentin for both self-etching systems (AEO and 24 CSEB). Again, such increases may be partially related to the reduction of dentin permeability caused by the use of the DAs investigated. The use of a desensitizer containing 8% arginine + bicarbonate and calcium carbonate can provoke an in situ reaction that forms a calcium rich layer on the dentin surface (2,16-18,22). An important monomer in this scenario is 10-MDP, present in the CSEB system used in this study, which can chemically react with hydroxyapatite (23,24). Therefore, the increase in bond strength values for self-etching systems may be partially explained by a chemical reaction between this monomer and the newly formed mineralized layer after the use of the DA Colgate Pro-Relief. Another strategy to treat DH is based on the remineralizing properties of bioactive products containing calcium. Desensibilize Nano-P (FGM), an in-office crystalline calcium phosphate paste, is representative of this category of desensitizer. Studies evaluating the capacity of bioactive products containing hydroxyapatite for remineralizing, desensitizing, and reducing the permeability of dentin have been published and show promising results (7,25). However, in the literature, information regarding the influence of the use of desensitizers prior to the application of bonding systems is not available. In this study, the SEM images showed partial obliteration of the exposed tubules, despite the fact that the samples were stored in artificial saliva between DA applications. In contrast, a study conducted by Shetty et al. (25) showed that a similar material resulted in total sealing of the dentinal tubules. There was a reduction in the bond strength values for the groups in which Desensibilize Nano-P was used, regardless of the adhesive system employed. Such reductions may be associated with high dentin permeability because of the inability of this DA to promote even and complete sealing of the exposed dentin tubules. This result was evident when ASB2 and AEO were used (Table 6). They yielded bond strengths that differed significantly from those evident when Colgate Sensitive Pro-Relief was used, and were lower than those of the control groups, although not significantly. The etch-and-rinse ASB2 system raises dentin permeability owing to the phosphoric acid conditioning associated with the moist technique (12,15). With regard to the self- 25 etching AEO system, the explanation may be related to the absence of a hydrophobic layer (21). High dentin permeability was evidently not the only reason for the results obtained using Desensibilize Nano-P. As shown in Table 4, the control groups demonstrated higher bond strength values even without the use of an occluding product. Thus, the greater thickness of the coat, associated with discrete penetration of the Desensibilize Nano-P inside the dentin tubules, may also explain the observed results. Thus, one may hypothesize that the diameter or even the geometric shape of the hydroxyapatite particles in the Desensibilize Nano-P paste are not compatible with the task of penetrating inside the exposed dentin tubules. Indeed, the coat formed on the dentin surface may have acted as a physical barrier preventing adequate contact between the adhesive system and the dentin substrate, resulting in reduced bond strength values (15). Possibly, such qualitative characteristics after the use of Desensibilize Nano-P paste were dependent on the technique utilized, which was that recommended by the manufacturer. In the present in vitro study, the time used for prophylaxis (10 s), the time that the DA remained undisturbed (5 min), and the number of applications (3) may not have been sufficient to accomplish a fully formed coat on the dentin substrate, or adequate reduction of dentin permeability. Lastly, the influence of using biomimetic treatments for DH on the process of adhesion to dentin was verified. This influence was particularly apparent when the etchand-rinse ASB2 and self-etching AEO were used. On the other hand, when the two-step self-etching system CSEB was used, no adverse effect on bond strength was observed, regardless of the DA used. Partial dentin tubule obliteration was observed for both the DAs investigated, via SEM. 26 RESUMO Este estudo avaliou a influência de agentes dessensibilizantes (AD) à base de cálcio na resistência da união adesiva imediata à dentina. Noventa incisivos bovinos foram divididos em 9 grupos (n = 10), de acordo com o tratamento dessensibilizante e o sistema adesivo utilizado. Os tratamentos dessensibilizantes investigados foram Desensibilize Nano-P (FGM), Colgate Sensitive Pró-Alívio (Colgate-Palmolive) e um grupo controle negativo. Os sistemas adesivos investigados foram Adper Single Bond 2/3M ESPE (ASB2), Adper Easy One/3M ESPE (AEO) e Clearfil SE Bond/Kuraray (CSEB). Um adicional de 9 dentes foi preparado para microscopia eletrônica de varredura. Nos grupos experimentais, as superfícies dentinárias foram expostas a EDTA 17% e submetidas aos AD. Após a hibridização, cilindros de resina composta (Z350XT/3M ESPE) foram transferidos para as superfícies dentinárias e, subsequentemente armazenados em água destilada a 37ºC por 24 h. A resistência de união adesiva ao cisalhamento foi então determinada. A maior média de resistência foi observada a partir da combinação de ASB2 e Colgate Pró-Alívio (4.8 MPa), enquanto a menor média de resistência foi exibida quando ASB2 e Desensibilize Nano-P (1.4 MPa) foram utilizados juntos. A ANOVA 2-way mostrou ser o fator AD altamente significante (p < 0.0001). O teste t-Student detectou diferenças significantes entre os grupos AD e controle quando ASB2 foi empregado, e entre os 2 grupos AD quando AEO foi empregado. Os 3 grupos CSEB não mostraram diferenças significantes entre si. O padrão de fratura do tipo misto foi predominante. A interferência do uso prévio de AD na resistência de união à dentina foi dependente do tipo e mecanismo de ação do AD e sistema adesivo utilizado. 27 ACKNOWLEDGMENTS The authors wish to express their thanks to Ms. Mariseth Andrade for her help with statistical analyses. 28 REFERENCES 1. Bamise CT, Esan TA. Mechanisms and treatment approaches of dentin hypersensitivity: a literature review. Oral Health Prev Dent 2011;9:353-367. 2. Li Y. Innovation for combating dentin hypersensitivity: current state of the art. Compend Contin Educ Dent 2012;33:10-16. 3. Markowitz K, Pashley DH. Discovering new treatments for sensitive teeth: the long path from biology to therapy. J Oral Rehabil 2008;35:300-315. 4. Sauro S, Thompson I, Watson TF. Effects of common dental materials used in preventive or operative dentistry on dentin permeability and remineralization. Oper Dent 2011;36:222-230. 5. Hamlin D, Williams KP, Delgado E, Zhang YP, DeVizio W, Mateo LR. 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Experimental groups, according to desensitizing agents, their main components and adhesive systems. Group Desensitizing agent (main component) Adhesive System G1 None Adper Single Bond 2 G2 None Adper Easy One G3 None Clearfil SE Bond G4 Desensibilize Nano-P (nanomeric calcium phosphate) Adper Single Bond 2 32 Desensibilize Nano-P (nanomeric calcium G5 Adper Easy One phosphate) Desensibilize Nano-P (nanomeric calcium G6 Clearfil SE Bond phosphate) Colgate Sensitive Pro-Relief (8% arginine, G7 Adper Single Bond 2 calcium carbonate) Colgate Sensitive Pro-Relief (8% arginine, G8 Adper Easy One calcium carbonate) Colgate Sensitive Pro-Relief (8% arginine, G9 Clearfil SE Bond calcium carbonate) Table 3. Schedule of the application of desensitizing agents. Day 0 Day Day Day 1 2 3 Day 4 Day Day Day 5 6 7 Day 8 1st 2nd 3rd application* application* application* AS AS AS AS AS *Except for control groups (G1, G2, and G3). AS: Artificial saliva (37ºC). AS AS AS AS Day 9 Day 10 Adhesive Mechanical procedures testing 33 Table 4. Shear Bond strength. Mean and Standard-deviation. Mean Adhesive system Group Desensitizing agents G1 No G2 Standard-deviation (MPa) (MPa) Adper Single Bond 2 2.1 ±1.55 No Adper Easy One 2.4 ±1.89 G3 No Clearfil SE Bond 3.2 ±1.06 G4 Desensibilize Nano-P Adper Single Bond 2 1.4 ±1.14 G5 Desensibilize Nano-P Adper Easy One 1.5 ±1.31 G6 Desensibilize Nano-P Clearfil SE Bond 2.4 ±1.33 G7 Colgate Sensitive Pro-Relief Adper Single Bond 2 4.8 ±1.58 G8 Colgate Sensitive Pro-Relief Adper Easy One 3.4 ±1.59 G9 Colgate Sensitive Pro-Relief Clearfil SE Bond 3.6 ±1.30 Table 5. Two-Way ANOVA applied to the SBS results (MPa). Variation Source FD SS SM F p Adhesive Systems 2 59,269 29,634 14,357 0.2427 Desensitizing Agents 2 709,329 354,664 171,823 < 0.0001* Adhesive x Desensitizing. 4 171,232 42,808 20,739 0.0908 Error 81 1,671,947 20,641 * Significant (p ≤ 0.05) 34 Table 6. SBS means (MPa) for adhesive systems x desensitizing agents. Adhesive Systems Desensitizing Agents None Desensibilize Nano-P 2.1 1.4 None Colgate S. Pro-Relief 2.1 4.8 Desensibilize Nano-P Colgate S. Pro-Relief 1.4 4.8 None Desensibilize Nano-P 2.4 1.5 None Colgate S. Pro-Relief 2.4 3.4 Desensibilize Nano-P Colgate S. Pro-Relief 1.5 3.4 None Desensibilize Nano-P 3.2 2.4 None Colgate S. Pro-Relief 3.2 3.6 Desensibilize Nano-P Colgate S. Pro-Relief 2.4 3.6 Adper Single Bond 2 Adper Single Bond 2 Adper Single Bond 2 Adper Easy One Adper Easy One Adper Easy One Clearfil SE Bond Clearfil SE Bond Clearfil SE Bond * Significant (p ≤ 0.05) ns – Non-significant T p 1,063 ns 4,208 0.0001* 5,272 < 0.0001* 1,425 ns 1,584 ns 3,008 0.0036* 1,288 ns 0,625 ns 1,913 ns 35 LEGENDS TO THE FIGURES Figure 1. Colgate Sensitive Pro-Relief® (transverse section): Most tubules are totally obliterated, and some have their lumen partially closed. The granular layer on the dentin surface may be caused by silica crystals and carbonate. Figure 2. Colgate Sensitive Pro-Relief® (longitudinal section): The depth of tubular obliteration is shown. Figure 3. Desensibilize Nano-P® (transverse section): Partial sealing of dentinal tubules is apparent, and some are completely open. A compact and unevenly distributed layer is evident on the dentin surface, possible due to nanostructured hydroxyapatite particles. Figure 4. Desensibilize Nano-P® (longitudinal section): The depth of tubule obliteration is shown. 36 Figure 1. 37 Figure 2. 38 Figure 3. 39 Figure 4. 40 NORMAS PARA PUBLICAÇÃO (BRAZILIAN DENTAL JOURNAL) INSTRUÇÕES AOS AUTORES Escopo e política Forma e preparação de manuscritos Envio de manuscritos ISSN 0103-6440 versão impressa ISSN 1806-4760 versão online Escopo e política O Brazilian Dental Journal publica artigos completos, comunicações rápidas e relatos de casos relacionados a assuntos de Odontologia ou disciplinas correlatas. Serão considerados para publicação apenas artigos originais. Na submissão de um manuscrito, os autores devem informar em carta de encaminhamento que o material não foi publicado anteriormente e não está sendo considerado para publicação em outro periódico, quer seja no formato impresso ou eletrônico. ENDEREÇO PARA SUBMISSÃO: Brazilian Dental Journal Fundação Odontológica de Ribeirão Preto Av. do Café, s/n 14040-904 Ribeirão Preto, SP, Brasil Fax: +55-16-633-0999 Emails: [email protected] e [email protected] SERÃO CONSIDRADOS APENAS TRABALHOS REDIGIDOS EM INGLÊS. Autores cuja língua nativa não seja o Inglês, devem ter seus manuscritos revisados por profissionais proficientes na Língua Inglesa. Os trabalhos aceitos para publicação serão submetidos à Revisão Técnica, que compreende revisão lingüística, revisão das normas técnicas e adequação ao padrão de publicação do periódico. O custo da Revisão Técnica será repassado aos autores. A submissão de um manuscrito ao BDJ implica na aceitação prévia desta condição. A decisão de aceitação para publicação é de responsabilidade dos Editores e baseia-se nas recomendações do corpo editorial e/ou revisores "ad hoc". Os manuscritos que não forem considerados aptos para publicação não serão devolvidos, mas os autores receberão um e-mail justificando a decisão. Os conceitos emitidos nos trabalhos publicados no BDJ são de responsabilidade exclusiva dos autores, não refletindo 41 obrigatoriamente a opinião do corpo editorial. Forma e preparação de manuscritos AS NORMAS DESCRITAS A SEGUIR DEVERÃO SER CRITERIOSAMENTE SEGUIDAS. GERAL Submeter 1 (uma) cópia impressa FRENTE E VERSO do manuscrito, composto pelo texto, tabelas, legendas das figuras e figuras (fotografias, micrografias, desenhos esquemáticos, gráficos e imagens geradas em computador, etc). As figuras podem ser impressas em papel comum, com impressão de boa qualidade. O trabalho impresso deve ser acompanhado de um CD-ROM contendo: - o arquivo do manuscrito em Word idêntico ao texto impresso. - os arquivos digitais das figuras (quando houver) salvos em TIFF. O manuscrito deve ser impresso frente e verso em papel de boa qualidade, usando fonte Times New Roman 12, espaço entrelinhas de 1,5 e margens de 2,5 cm em todos os lados. NÃO UTILIZAR negrito, marcas d'água ou outros recursos para tornar o texto visualmente atrativo. As páginas devem ser numeradas seqüencialmente, começando na página de rosto. Trabalhos completos devem estar divididos sequencialmente conforme os itens abaixo: 1. Página de Rosto 2. Summary e Key Words 3. Introdução, Material e Métodos, Resultados e Discussão 4. Resumo em Português (obrigatório apenas para os autores nacionais) 5. Agradecimentos (se houver) 6. Referências 7. Tabelas 8. Legendas das figuras 9. Figuras Todos os títulos dos capítulos (Introdução, Material e Métodos, etc) em letras maiúsculas e sem negrito. Resultados e Discussão NÃO podem ser apresentados conjuntamente. 42 Comunicações rápidas e relatos de casos devem ser divididos em itens apropriados. Produtos, equipamentos e materiais: na primeira citação mencionar o nome do fabricante e o local de fabricação completo (cidade, estado e país). Nas demais citações, incluir apenas o nome do fabricante. Todas as abreviações devem ter sua descrição por extenso, entre parênteses, na primeira vez em que são mencionadas. PÁGINA DE ROSTO A primeira página deve conter: título do trabalho, título resumido (short title) com no máximo 40 caracteres, nome dos autores (máximo 6), Departamento, Faculdade e/ou Universidade/Instituição a que pertencem (incluindo cidade, estado e país). NÃO INCLUIRtitulação (DDS, MSc, PhD etc) e/ou cargos dos autores (Professor, Aluno de PósGraduação, etc). Incluir o nome e endereço completo do autor para correspondência (informar e-mail, telefone e fax). SUMMARY A segunda página deve conter o Summary (resumo em Inglês; máximo 250 palavras), em redação contínua, descrevendo o objetivo, material e métodos, resultados e conclusões. Não dividir em tópicos e não citar referências. Abaixo do Summary deve ser incluída uma lista de Key Words (5 no máximo), em letras minúsculas, separadas por vírgulas. INTRODUÇÃO Breve descrição dos objetivos do estudo, apresentando somente as referências pertinentes. Não deve ser feita uma extensa revisão da literatura existente. As hipóteses do trabalho devem ser claramente apresentadas. MATERIAL E MÉTODOS A metodologia, bem como os materiais, técnicas e equipamentos utilizados devem ser apresentados de forma detalhada. Indicar os testes estatísticos utilizados neste capítulo. 43 RESULTADOS Apresentar os resultados em uma seqüência lógica no texto, tabelas e figuras, enfatizando as informações importantes. Os dados das tabelas e figuras não devem ser repetidos no texto. Tabelas e figuras devem trazer informações distintas ou complementares entre si. Os dados estatísticos devem ser descritos neste capítulo. DISCUSSÃO Resumir os fatos encontrados sem repetir em detalhes os dados fornecidos nos Resultados. Comparar as observações do trabalho com as de outros estudos relevantes, indicando as implicações dos achados e suas limitações. Citar outros estudos pertinentes. Apresentar as conclusões no final deste capítulo. Preferencialmente, as conclusões devem ser dispostas de forma corrida, isto é, evitar citá-las em tópicos. RESUMO (em Português) - Somente para autores nacionais O resumo em Português deve ser IDÊNTICO ao resumo em Inglês (Summary). OBS: NÃO COLOCARtítulo e palavras-chave em Português. AGRADECIMENTOS O Apoio financeiro de agências governamentais deve ser mencionado. Agradecimentos a auxílio técnico e assistência de colaboradores podem ser feitos neste capítulo. REFERÊNCIAS As referências devem ser apresentadas de acordo com o estilo do Brazilian Dental Journal. É recomendado aos autores consultar números recentes do BDJ para se familiarizar com a forma de citação das referências. As referências devem ser numeradas por ordem de aparecimento no texto e citadas entre parênteses, sem espaço entre os números: (1), (3,5,8), (1015). NÃO USAR SOBRESCRITO. Para artigos com dois autores deve-se citar os dois nomes sempre que o artigo for referido. Ex: "According to Santos and Silva (1)...". Para artigos com três ou mais autores, citar apenas o 44 primeiro autor, seguido de "et al.". Ex: "Pécora et al. (2) reported that..." Na lista de referências, os nomes de TODOS OS AUTORES de cada artigo devem ser relacionados. Para trabalhos com 7 ou mais autores, os 6 primeiros autores devem ser listados seguido de "et al." A lista de referências deve ser digitada no final do manuscrito, em seqüência numérica. Citar NO MÁXIMO 25 referências. A citação de abstracts e livros, bem como de artigos publicados em revistas não indexadas deve ser evitada, a menos que seja absolutamente necessário. Não citar referências em Português. Os títulos dos periódicos devem estar abreviados de acordo com o Dental Index. O estilo e pontuação das referências devem seguir o formato indicado abaixo: Periódico 1. Lea SC, Landini G, Walmsley AD. A novel method for the evaluation of powered toothbrush oscillation characteristics. Am J Dent 2004;17:307-309. Livro 2. Shafer WG, Hine MK, Levy BM. A textbook of oral pathology. 4th ed. Philadelphia: WB Saunders; 1983. Capítulo de Livro 3. Walton RE, Rotstein I. Bleaching discolored teeth: internal and external. In: Principles and Practice of Endodontics. Walton RE (Editor). 2nd ed. Philadelphia: WB Saunders; 1996. p 385-400. TABELAS As tabelas com seus respectivos títulos devem ser inseridas após o texto, numeradas com algarismos arábicos; NÃO UTILIZAR linhas verticais, negrito e letras maiúsculas (exceto as iniciais). O título de cada tabela deve ser colocado na parte superior. Cada tabela deve conter toda a informação necessária, de modo a ser compreendida independentemente do texto. FIGURAS NÃO SERÃO ACEITAS FIGURAS INSERIDAS EM ARQUIVOS ORIGINADOS EM EDITORES DE TEXTO COMO O WORD E NEM FIGURAS EM POWER POINT; Os arquivos digitais das imagens devem ser gerados em Photoshop, Corel ou outro software similar, com extensão TIFF e resolução mínima de 300 dpi. Apenas figuras em PRETO E BRANCOsão 45 publicadas. Salvar as figuras no CD-ROM. Letras e marcas de identificação devem ser claras e definidas. Áreas críticas de radiografias e fotomicrografias devem estar isoladas e/ou demarcadas. Partes separadas de uma mesma figura devem ser legendadas com letras maiúsculas (A, B, C, etc). Figuras simples e pranchas de figuras devem ter largura mínima de 8 cm e 16 cm, respectivamente. As legendas das figuras devem ser numeradas com algarismos arábicos e apresentadas em uma página separada, após a lista de referências (ou após as tabelas, quando houver). Envio de manuscritos CHECAR OS ITENS ABAIXO ANTES DE ENVIAR O MANUSCRITO À REVISTA 1. Carta de submissão. 2. 1 (uma) cópia impressa do manuscrito (incluindo tabelas e legendas) juntamente com 1 (uma) cópia impressa de cada figura (quando houver) em papel comum de boa qualidade. 3. CD-ROM contendo: - o arquivo do manuscrito em Word (texto, tabelas, legendas das figuras e figuras). - os arquivos digitais das figuras em preto e branco, salvas em TIFF, com resolução mínima de 300 dpi. 4. No manuscrito, observar: - identificação dos autores somente na página de rosto. - texto digitado em fonte Times New Roman 12, espaço entrelinhas de 1,5 e margem de 2,5 cm em todos os lados. - tabelas, legendas e figuras ao final do texto. 46 2. Dissertação 47 2.1. INTRODUÇÂO A hipersensibilidade dentinária (HD) é uma condição clínica relativamente comum, caracterizada por dor aguda e curta decorrente da exposição de dentina, em resposta a uma variedade de estímulos, tais como, térmico, evaporativo, táctil, osmótico ou químico, a qual não pode ser atribuída a qualquer outra forma de defeito ou doença dental.1 Estudos relatam prevalência de até 57% da população, acometendo com maior frequência indivíduos entre 20 e 40 anos de idade.2-6 A teoria da hidrodinâmica, proposta por Brännström7 em 1963, continua sendo a mais aceita pela comunidade científica para explicar o mecanismo pelo qual a HD ocorre. Segundo esta teoria, mudanças de pressão nos fluidos dentinários aconteceriam sob a ação de certos estímulos externos, permitindo a movimentação destes e a transmissão aos processos odontoblásticos, ativando os mecanoreceptores nas terminações nervosas intratubulares e/ou na superfície pulpar, causando a sensação de dor.2-6,8-12 Independente do(s) fator(es) etiológico(s) causadores da HD, duas específicas alterações nos elementos dentais devem estar presentes: a exposição de dentina, através da perda de esmalte e/ou recessão gengival, com perda de cemento; e a abertura e desobstrução do sistema de túbulos dentinários, permitindo a ativação do mecanismo hidrodinâmico por estímulos apropriados.3-4,11,13 Várias são as modalidades de tratamento propostas, e mesmo todas tendo se mostrado efetivas em maior ou menor escala,2 ainda não é possível identificar um regime terapêutico superior, ou seja, um agente ideal ou padrãoouro no tratamento da HD. Basicamente, as diversas substâncias utilizadas agem através de ação oclusiva, obliterando os túbulos dentinários, ou de ação neural, despolarizando as membranas das fibras nervosas, bloqueando a ação axônica e a passagem do estímulo nervoso.4 A aplicação de substâncias tópicas dentro do consultório odontológico é uma medida comumente utilizada no controle desta condição, tendo sido 48 proposta uma série de agentes dessensibilizantes para este fim. Dentre as mais frequentemente utilizadas e estudadas encontram-se aquelas à base de fluoretos e oxalatos.2,4,14 Entretanto, considerando-se abordagens biológicas para o tratamento da HD, foi proposto que o ideal seria mimetizar os processos dessensibilizantes naturais levando, desta forma, a uma oclusão espontânea dos túbulos dentinários abertos através do uso de materiais que apresentassem a capacidade de reagir com os fluidos corporais e/ou saliva, permitindo a deposição de mineral.8,15 Creme dental e pasta de aplicação profissional a base de arginina a 8%, bicarbonato e carbonato de cálcio representam produtos que induzem a formação mineral natural in situ como forma de tratamento da HD. A arginina, um aminoácido encontrado naturalmente na saliva, reduziria significativamente a sensibilidade dentinária de maneira oclusiva ao se unir ionicamente à dentina. A arginina e o carbonato de cálcio, carregados positivamente em pH fisiológico, se ligam à dentina, carregada negativamente, formando uma camada rica em cálcio na superfície dentinária e no interior dos túbulos dentinários, promovendo assim o selamento da dentina. Observa-se ainda que a oclusão obtida nos túbulos dentinários é resistente à desafios ácidos subsequentes. Esta tecnologia é denominada de Pro-ArginTM, sendo comercializada com o nome de Colgate Sensitive Pró-Alívio®.6,9,16-17 Estudos clínicos têm demonstrado a efetividade dos produtos à base de arginina a 8% / carbonato de cálcio no alívio dos sintomas da HD.18-26 Ainda dentro da filosofia remineralizadora de tratamento da HD, produtos bioativos a base de hidroxiapatita e fosfatos de cálcio vêm sendo disponibilizados no mercado odontológico.15,27-30 Tais produtos, frequentemente organizados na forma de nanohidroxiapatita, agem de maneira oclusiva penetrando e interagindo com a dentina, promovendo o selamento dos túbulos dentinários, e liberando íons cálcio e fosfato à superfície desmineralizada do dente. Além disso, apresentam uma ação neural pela presença de nitrato de potássio nas formulações, além do flúor que potencializa 49 a ação dessensibilizante.28,31 No Brasil, a FGM disponibiliza uma pasta de uso profissional contendo fosfato de cálcio nanométrico, comercializada com o nome de Desensibilize Nano-P. Contudo, sabe-se que nos casos de HD, em algumas situações, pode ser necessária uma abordagem mais invasiva, com utilização de materiais restauradores, quando terapêuticas conservadoras não foram bem sucedidas, ou mesmo na presença de considerável perda de volume de estrutura dental, como em lesões cervicais não cariosas.2-3 Entretanto, observa-se que a aplicação prévia de agentes dessensibilizantes pode, em algumas situações, influenciar negativamente a resistência de união adesiva à dentina.32-35 Logo, sabendo-se que o sucesso dos procedimentos restauradores adesivos é dependente das características e tratamentos prévios dispensados ao substrato dentinário, e que a HD é uma realidade frequente na sociedade moderna, a possibilidade que ambas têm de acometerem pacientes em comum, em épocas não distintas, representa uma situação rotineira na clínica odontológica. Sendo assim, torna-se relevante avaliar a influência da utilização prévia de novos agentes dessensibilizantes com propriedades remineralizadoras na resistência de união à dentina, promovida por sistemas adesivos de diferentes estratégias de união e de pHs distintos. 50 2.2. OBJETIVOS 2.2.1. Objetivo Geral: Avaliar a influência de dessensibilizantes de uso profissional à base de arginina e carbonato de cálcio, e nanohidroxiapatita (fosfato de cálcio nanométrico), na resistência da união à dentina promovida por diferentes sistemas adesivos, de estratégias de união e pHs distintos. 2.2.2. Objetivos Específicos: Mensurar a resistência da união adesiva à dentina, previamente condicionada com EDTA 17% (túbulos dentinários abertos), proporcionada pelos sistemas Adper Single Bond 2 (3M Espe) (convencional), Adper Easy One (3M Espe) e Clearfil SE Bond (Kuraray) (autocondicionantes); Mensurar a resistência da união adesiva à dentina, previamente condicionada com EDTA 17%, e tratada com os agentes dessensibilizantes de uso profissional Desensibilize Nano-P (FGM) ou Colgate Sensitive Pró-Alívio (Colgate-Palmolive), proporcionada pelos sistemas Adper Single Bond 2 (3M Espe) (convencional), Adper Easy One (3M Espe) e Clearfil SE Bond (Kuraray) (autocondicionantes); Classificar os padrões de fratura obtidos nos diferentes grupos testados em adesivo, coesivo e misto; Correlacionar estatisticamente os diferentes grupos estudados; 51 2.3. MATERIAL E MÉTODO Tipo de estudo: Foi realizado um estudo do tipo experimental em laboratório (in vitro) (ensaio mecânico – teste de cisalhamento). Materiais: Os materiais utilizados no presente estudo estão listados no Quadro 1, contendo nome comercial (fabricante), classificação e composição. (Figura 1) Quadro 1 – Materiais (fabricantes), classificação, composição e lote dos materiais utilizados no estudo. Material (Fabricante) Classificação Composição Nº lote Colgate Sensitive PróAlívio (ColgatePalmolive) Agente dessensibilizante de uso profissional Arginina 8%, sílica hidratada, carbonato de cálcio, glicerina, água, bicarbonato, aroma, carboximetilcelulose sódica, sacarina sódica, azul 1 (CI 42090). 0193 Desensibilize Nano-P (FGM) Agente dessensibilizante de uso profissional Fosfato de Cálcio nanométrico, fluoreto de Sódio, Nitrato de Potássio, água destilada, espessante, tensoativo, umectante, aroma, adoçante e conservante. 101210 Filtek Z350 XT (3M Espe) Resina composta nanoparticulada Bis-GMA, UDMA, TEGDMA, Bis-EMA, sílica e zircônia. N306670BR Sistema adesivo convencional de 2 passos BISGMA, HEMA, copolímero de ácidos poliacrílico e polialcenóico, fotoiniciador, água, etanol, dimetacrilatos. N263397BR Adper Single Bond 2 (3M Espe) pH≈4.3 Adper Easy One (3M Espe) pH≈2.3 Clearfil SE Bond (Kuraray) pH≈2.0 Saliva artificial (Farmácia Fórmula) Componente Autocondicionante: ésteres fosfatados de metacrilato. Sistema adesivo autocondicionante de 1 passo Sistema adesivo autocondicionante de 2 passos - Componente Adesivo: copolímeros do VitrebondTM, nanopartículas de carga, etanol, dimetacrilatos, HEMA, água, iniciadores. Primer: 10-Metacriloiloxidecil dihidrogênio fosfato (10-MDP), 2-hidroxietilmetacrilato (HEMA), dimetacrilato hidrofílico, diCanforoquinona, N-dietanol-p-toluidina, água. 435964 051489 Adesivo: 10-MDP, bis-GMA, HEMA, dimetacrilato hidrofóbico, diCanforoquinona, N-dietanol-p-toluidina, sílica coloidal silanizada. Cloreto de potássio, cloreto de sódio, cloreto de magnésio, cloreto de cálcio, hipofosfato de potássio, nipagin, nipazol, carboxi-metil-celulose sódica, sorbitol a 70% - 52 Figura 1 - A – Colgate Sensitive Pró-Alívio; B – Desensibilize Nano-P; C – Filtek Z350 XT; D – Adper Single Bond 2; E – Adper Easy One; F – Clearfil SE Bond; G – Saliva Artificial. Método: Obtenção e armazenamento dos dentes: Após aprovação em Comitê de Ética no Uso de Animais (Parecer Nº 39/11), 126 (cento e vinte e seis) dentes incisivos bovinos hígidos foram obtidos em matadouro do município de Belém (PA), sob o consentimento 53 explícito e documentado do responsável do estabelecimento, os mesmos foram lavados em água corrente e armazenados em solução desinfetante de timol 0,1% pelo período de uma semana. Após o período de desinfecção, foram submetidos à profilaxia com pedra-pomes e água, sendo em seguida analisados em lupa estereoscópica, com aumento de 40X, para detectar a presença de trincas e/ou fraturas, o que eliminaria o espécime da amostra (critério de exclusão). Após desinfecção e profilaxia, foram armazenados em água destilada, não excedendo 06 (seis) meses de armazenamento (ISO/TS 11405: 2003)36, até a confecção dos corpos-de-prova. Estudo piloto: Com o objetivo de validar a metodologia aplicada nesta pesquisa experimental, um estudo piloto foi empregado utilizando 27 (vinte e sete) dentes (n=3), respeitando os mesmos critérios utilizados na divisão dos grupos do estudo experimental. Após o ajuste e calibração de todas as etapas metodológicas da pesquisa, confirmou-se a viabilidade de reprodução dos testes, validando o ensaio. Confecção dos corpos-de-prova: Os dentes tiveram as raízes seccionadas na altura do colo dentário, com o auxílio de disco diamantado de dupla face (KG Sorensen, Cotia, Brasil) montado em peça de mão, em baixa rotação, sob refrigeração. (Figura 2) As coroas remanescentes tiveram suas câmaras pulpares obliteradas com cera e sua face vestibular ligeiramente pressionada sobre uma lâmina de cera nº7. Matrizes pré-confeccionadas de tubos de PVC, com 3cm de altura e 2,5cm de diâmetro, foram posicionadas sobre os dentes pressionados na lâmina de cera. Em seguida, resina acrílica quimicamente ativada – R.A.A.Q. - foi manipulada e vertida dentro das matrizes de PVC, tendo sido estas matrizes mantidas em água fria até a completa polimerização da resina acrílica. (Figura 3) 54 Figura 2 - Após profilaxia com pedra-pomes, os dentes tiveram suas raízes seccionadas, com auxílio de disco diamantado dupla face em baixa rotação, na região do colo dentário. Figura 3 - A – Câmara pulpar obliterada com cera; B – Face vestibular da coroa dentária pressionada contra lâmina de cera nº7; C – Posicionamento de matriz de PVC sobre a coroa; D e E – Manipulação e versão de R.A.A.Q. no interior da matriz de PVC; F – Espécime após inclusão. Após inclusão, todos os corpos-de-prova tiveram suas superfícies vestibulares em esmalte planificadas e desgastadas até a exposição do substrato dentinário, caracterizado por uma área central de dentina medindo aproximadamente 5mm de diâmetro. (Figura 4) O desgaste foi realizado com o auxílio de lixas de carbeto de silício de granulação decrescente (nº 180, 400, 55 600), em politriz horizontal (Aropol-E – Arotec, Cotia, SP, Brasil), sob refrigeração. Figura 4 - A – Espécime após inclusão; B – Desgaste e planificação da superfície vestibular em esmalte; C – Exposição do substrato dentinário. Em seguida, todos os corpos-de-prova foram visualizados em lupa estereoscópica, com aumento de 40X, para confirmar a exposição do tecido dentinário, bem como a integridade das amostras. Desobliteração dos túbulos dentinários (simulação da dentina hipersensensível) Previamente à exposição aos agentes dessensibilizantes, os corpos-deprova foram submetidos a um processo de condicionamento prévio, a fim de remover possíveis materiais oclusivos dos túbulos dentinários e simular a condição de dentina hipersensível. Para tanto, foram expostos à solução de EDTA 17% (Fórmula e Ação, São Paulo, Brasil), por um período de 60 (sessenta) segundos, seguidos de lavagem com água destilada por igual período. (Figura 5) 56 Figura 5 - A – Solução de EDTA 17%; B e C – Aplicação da solução de EDTA 17% durante 60 segundos; D – Lavagem com água destilada por igual período. Divisão dos grupos: O total de 90 (noventa) dentes foi dividido em 09 (nove) grupos (n=10), de acordo com a aplicação de agente dessensibilizante, tipo de agente dessensibilizante, e sistema adesivo, conforme quadro a seguir (Quadro 2). O restante dos dentes (9) foi levado ao microscópio eletrônico de varredura para observação da ação obliterante dos agentes utilizados. 57 Quadro 2 – Descrição dos grupos experimentais, de acordo com a utilização do agente dessensibilizante, tipo de agente dessensibilizante (princípio ativo), e sistema adesivo utilizado. Grupo Agente Dessensibilizante Agente dessensibilizante (princípio ativo) Sistema adesivo G1 Não - Adper Single Bond 2 G2 Não - Adper Easy One G3 Não - Clearfil SE Bond G4 Sim Desensibilize Nano-P (fosfato de cálcio nanométrico) Adper Single Bond 2 G5 Sim Desensibilize Nano-P (fosfato de cálcio nanométrico) Adper Easy One G6 Sim Desensibilize Nano-P (fosfato de cálcio nanométrico) Clearfil SE Bond G7 Sim Colgate Sensitive Pro-Alívio (arginina 8%, carbonato de cálcio) Adper Single Bond 2 G8 Sim Colgate Sensitive Pro-Alívio (arginina 8%, carbonato de cálcio) Adper Easy One G9 Sim Colgate Sensitive Pro-Alívio (arginina 8%, carbonato de cálcio) Clearfil SE Bond Aplicação dos agentes dessensibilizantes: Os grupos G1, G2 e G3 foram designados como controles, e não receberam quaisquer agentes dessensibilizantes, permanecendo armazenados em saliva artificial (renovada diariamente) durante todo o período (ciclo) de utilização dos dessensibilizantes (09 dias). Os demais grupos foram submetidos à aplicação destes agentes, seguindo-se as recomendações dos respectivos fabricantes, conforme descrito abaixo (Quadro 3). Quadro 3 – Período (ciclo) de aplicação dos agentes dessensibilizantes Dia 0 1ª DSB* S.A. Dia 1 S.A. Dia 2 S.A. Dia 3 S.A. Dia 4 2ª DSB* Dia 5 S.A. Dia 6 S.A. S.A. Dia 7 S.A. Dia 8 Dia 9 Dia 10 3ª DSB* Confecção cilindros de resina composta Ensaio Mecânico S.A. * Com exceção dos grupos controle. DSB: Aplicação agente dessensibilizante. S.A.: Solução de Saliva Artificial a 37º C. Desensibilize Nano-P (FGM, Joinville, Brasil): Com auxílio de um pincel descartável tipo microbrush, Desensibilize Nano-P foi aplicado na superfície dentinária, sendo friccionado com disco de feltro em baixa rotação durante 10 segundos. O dessensibilizante permanecia 58 em repouso por mais 5 minutos sobre a superfície dental, seguido de remoção do excesso do produto com pelota de algodão levemente umedecida, sem enxágüe. (Figura 6) O corpo-de-prova retornava à solução de saliva artificial (37°C) após aplicação do produto, procedendo-se no 4° e 8° dias após o tratamento inicial, os mesmos passos operatórios descritos acima, perfazendo um total de 03 (três) aplicações do produto. Figura 6 - A e B – Com auxílio de um microbrush, Desensibilize Nano-P era levado à superfície dentinária; C – Com um disco de feltro era friccionado durante 10 segundos; D – 59 Permanecendo em repouso por mais 5 minutos sobre a superfície dentinária; E – Em seguida, o excesso de produto era removido, sem enxágue, com uma pelota de algodão umedecido. Colgate Sensitive Pró-Alívio (Colgate-Palmolive, São Paulo, Brasil): Colgate Sensitive Pró-Alívio foi levado em uma taça de borracha à superfície dentinária, e aplicado em baixa rotação, sem exercer pressão, durante 03 (três) segundos. O procedimento era repetido em seguida, tomando-se o cuidado de ter sempre quantidade de pasta suficiente para que não houvesse o aquecimento da superfície dentária. Após aplicação, era realizada a remoção do excesso do produto com pelota de algodão levemente umedecida, sem enxágue. (Figura 7) O corpo-de-prova retornava à solução de saliva artificial (37°C) após aplicação do produto, procedendo-se no 4° e 8° dias após o tratamento inicial, os mesmos passos operatórios descritos acima, perfazendo um total de 03 (três) aplicações do produto. 60 Figura 7 - A e B – Colgate Sensitive Pró-Alívio era levado, com auxílio de taça de borracha, diretamente à superfície dentinária e friccionado durante 03 segundos, em seguida estes procedimentos eram repetidos; D – O excesso de produto era removido, sem enxágue, com uma pelota de algodão umedecido. Procedimentos de união adesiva e confecção dos cilindros de resina composta Os procedimentos adesivos foram realizados seguindo-se as recomendações dos respectivos fabricantes, conforme descrito no Quadro 4. Inicialmente, todos os grupos tiveram a área disponível para a adesão dos cilindros de resina delimitada com o emprego de um disco de papel adesivo, contendo orifício central de 3mm de diâmetro, posicionado sobre a superfície de dentina. (Figuras 8, 9, 10 e 11) 61 Quadro 4 - Descrição do modo de aplicação dos sistemas adesivos utilizados. Marca comercial (fabricante) Adper SingleBond 2 (3M ESPE) Adper Easy One (3M ESPE) Clearfil SE Bond (Kuraray) Instruções de uso* Condicionamento da superfície com ácido fosfórico 37% por 15 segundos, seguido de lavagem abundante por 30 segundos, remoção do excesso de umidade com papel absorvente. Aplicação ativa por 15 segundos de duas camadas consecutivas de adesivo, evaporação do solvente com suave jato de ar por 5 segundos, seguido de polimerização por 10 segundos. Aplicar e agitar o adesivo na superfície dentinária durante 20 segundos, secar com suave jato de ar por 5 segundos com e fotopolimerizar por 10 segundos. Aplicar o Primer durante 20 segundos, sem enxague, seguido de secagem com suave jato de ar. Na sequência aplicação do Bond, seguido de secagem com suave jato de ar e fotopolimerização por 10 segundos. Figura 8 - Delimitação da área a ser hibridizada, com auxílio de disco de papel adesivo. 62 Figura 9 - Aplicação de Adper Single Bond 2: A – Condicionamento da superfície dentinária com ácido fosfórico 37%; B – Lavagem abundante; C – Remoção do excesso de umidade com papel absorvente; D – Aplicação de Adper Single Bond 2; E – Fotopolimerização. Figura 10 - Aplicação de Adper Easy One: A – Aplicação de Adper Easy One na superfície dentinária; B – Fotopolimerização. Figura 11 - Aplicação de Clearfil SE Bond: A – Aplicação do Primer; B – Aplicação do Bond; C – Fotopolimerização. 63 Após a hibridização dentinária, os corpos-de-prova foram individualmente fixados a uma matriz metálica bipartida, que formava um orifício central de 5mm de altura por 3 mm de diâmetro, o qual coincidia com a área delimitada pela fita adesiva. (Figura 12) Sobre a área hibridizada, cilindros de resina composta Filtek Z350 XT (cor A2B) (3M Espe, Sumaré, Brasil), foram confeccionados através de 02 (dois) incrementos, fotopolimerizados individualmente por 20 (vinte) segundos pelo aparelho Ultra Blue D-2000 (DMC, São Carlos, Brasil), com intensidade luminosa de 900mW/cm2. (Figura 13) Figura 12 - Os corpos-de-provas eram acoplados individualmente em uma matriz metálica bipartida. 64 Figura 13 - Confecção dos cilindros de resina composta: A, B e C – Filtek Z350 XT era inserida, através de dois incrementos, polimerizados individualmente durante 20 segundos; D, E e F – Cilindro de resina composta confeccionado e em posição. Teste de resistência ao cisalhamento Previamente à realização do ensaio mecânico, os corpos-de-prova foram mantidos em água destilada (37ºC), por 24 horas. Após este período, foram acoplados individualmente à máquina universal de ensaio Kratos (Kratos Equipamentos Ltda, Cotia, Brasil) e submetidos à força de cisalhamento, com 65 célula de carga de 500kgF, através do emprego de fita matriz metálica de 5mm de largura, com velocidade de ensaio de 0,5mm/min. (Figura 14) Figura 14 - A e B – Corpo-de-prova acoplado à máquina universal de ensaio Kratos; C e D – Detalhe da fita matriz metálica acoplada ao cilindro de resina composta para realização do teste de resistência ao cisalhamento. 66 Concluída a etapa do ensaio mecânico, os corpos-de-prova foram levados à lupa estereoscópica, com aumento de 40X, para a observação dos padrões de fratura, os quais foram classificados em adesivo, coesivo na resina composta, coesivo em dentina, coesivo na camada adesiva e misto. Após a compilação dos dados, estes foram submetidos à análise de variância (Anova 2-way) e ao teste t-Student ao nível de significância de 5%. Microscopia eletrônica de varredura (MEV) Com a finalidade de analisar qualitativamente a ação do EDTA 17% na superfície dentinária, bem como a obliteração tubular promovida pelos agentes dessensibilizantes testados, 09 (nove) espécimes foram utilizados, sendo 03 (três) para cada uma das condições (EDTA 17% somente, EDTA 17% + Desensibilize Nano-P®, EDTA 17% + Colgate Sensitive Pró-Alívio®). Os dentes foram inicialmente tratados da mesma maneira quanto à separação coronoradicular, e exposição e planificação da superfície dentinária com lixas de granulação decrescente. Em seguida, fragmentos dentinários com dimensões de 4x4x2mm foram obtidos com auxílio de cortadeira metalográfica (Isomet Low Speed Saw – Buehler, Illinois, USA). Objetivando-se avaliar longitudinalmente a obliteração tubular proporcionada pelos agentes dessensibilizantes, 01 (um) espécime de cada grupo foi clivado ao meio, obtendo-se duas amostras para observação da profundidade de oclusão dos túbulos dentinários. Os corpos-de-prova foram fixados em stubs metálicos com fita adesiva carbonada, e metalizados através de uma cobertura com ouro de 24 quilates 99,99%, sob pressão 0,5 mbar, sendo em seguida mensurados em microscópio eletrônico de varredura LEO 1430 (Leo Zeiss, Cambridge, England), no laboratório de microscopia eletrônica (LABMEV) do Centro de Geociências da Universidade Federal do Pará, com o aumentos de 1000 e 1500x. 67 2.4. RESULTADOS Resistência da união adesiva ao cisalhamento Os valores da média e desvio-padrão da resistência ao cisalhamento de cada grupo experimental estão descritos na tabela 1. Para a comparação entre grupos foi utilizada a análise de variância (ANOVA 2-way), não se observando diferença significativa para o fator sistema adesivo (Adper Single Bond 2, Adper Easy One e Clearfil SE Bond), bem como para a interação entre os fatores sistema adesivo e agente dessensibilizante. Entretanto, o fator agente dessensibilizante (Não, Desensibilize Nano-P e Colgate Sensitive Pró-Alívio) mostrou-se altamente significativo (p=0,0000) (tabela 2). Tabela 1. Média e Desvio-Padrão da resistência ao cisalhamento dos grupos experimentais. Grupo Agente dessensibilizante Sistema adesivo Média (MPa) Desvio-Padrão (MPa) G1 Não Adper Single Bond 2 2,12 ±1,55 G2 Não Adper Easy One 2,40 ±1,89 G3 Não Clearfil SE Bond 3,20 ±1,06 G4 Desensibilize Nano-P Adper Single Bond 2 1,44 ±1,14 G5 Desensibilize Nano-P Adper Easy One 1,50 ±1,31 G6 Desensibilize Nano-P Clearfil SE Bond 2,39 ±1,33 G7 Colgate Sensitive Pró-Alívio Adper Single Bond 2 4,78 ±1,58 G8 Colgate Sensitive Pró-Alívio Adper Easy One 3,41 ±1,59 G9 Colgate Sensitive Pró-Alívio Clearfil SE Bond 3,60 ±1,30 68 Tabela 2. Análise de variância para os valores médios da resistência ao cisalhamento (MPa). Fonte de Variação GL SQ QM F P Sistema adesivo 2 59,269 29,634 14,357 0,2427 Agente dessensibilizante 2 709,329 354,664 171,823 0,0000* Sist. adesivo X Ag. dessens. 4 171,232 42,808 20,739 0,0908 Erro 81 1,671,947 20,641 Teste ANOVA two-way (2 critérios) *Significativo ao nível de 5% Nas tabelas 3, 4 e 5 se comparam, através do teste t-Student (5%), os valores médios de resistência ao cisalhamento (MPa) dos sistemas adesivos testados em função dos diferentes agentes dessensibilizantes. Tabela 3. Média da resistência ao cisalhamento (MPa) do sistema adesivo Adper Single Bond 2 (3M Espe) em relação aos agentes dessensibilizantes. Sistema adesivo Agente dessensibilizante Não Desensibilize Nano-P 2,12 1,44 Não Colgate S. Pró-Alívio 2,12 4,78 Desensibilize Nano-P Colgate S. Pró-Alívio 1,44 4,78 Adper Single Bond 2 Adper Single Bond 2 Adper Single Bond 2 t p 1,063 ns 4,208 0,0001* 5,272 0,0000* *Significativo ao nível de 5% ns – Não significativo Na tabela 3, se observam duas diferenças significativas nas comparações pareadas: entre G1 e G7, e entre G4 e G7. Percebe-se que o grupo do agente dessensibilizante Colgate Sensitive Pró-Alívio (G7) aumentou significativamente a resistência ao cisalhamento em comparação a G1 e G4. Ainda, o uso agente dessensibilizante Desensibilize Nano-P reduziu os valores de resistência ao cisalhamento. 69 Tabela 4. Média da resistência ao cisalhamento (MPa) do sistema adesivo Adper Easy One (3M Espe) em relação aos agentes dessensibilizantes. Sistema adesivo Adper Easy One Adper Easy One Adper Easy One Agente dessensibilizante Não Desensibilize Nano-P 2,40 1,50 Não Colgate S. Pró-Alívio 2,40 3,41 Desensibilize Nano-P Colgate S. Pró-Alívio 1,50 3,41 t p 1,425 ns 1,584 ns 3,008 0,0036* *Significativo ao nível de 5% ns – Não significativo Na tabela 4, se observa uma diferença significativa nas comparações pareadas entre G5 e G8, com o agente dessensibilizante Colgate Sensitive Pró-Alívio aumentando significativamente a resistência ao cisalhamento. Novamente, o uso do agente dessensibilizante Nano-P reduziu os valores de resistência ao cisalhamento. Tabela 5. Média da resistência ao cisalhamento (MPa) do sistema adesivo Clearfil SE Bond (Kuraray) em relação aos agentes dessensibilizantes. Sistema adesivo Clearfil SE Bond Clearfil SE Bond Clearfil SE Bond Agente dessensibilizante Não Desensibilize Nano-P 3,20 2,39 Não Colgate S. Pró-Alívio 3,20 3,60 Desensibilize Nano-P Colgate S. Pró-Alívio 2,39 3,60 t p 1,288 ns 0,625 ns 1,913 ns *Significativo ao nível de 5% ns – Não significativo Na tabela 5, não se observam diferenças significativas nas comparações pareadas. Entretanto, percebe-se que numericamente (ainda que não significativo) o agente dessensibilizante Colgate Sensitive Pró-Alívio (G9) aumentou a resistência a resistência ao cisalhamento em relação a G3 e G6, ao passo que, novamente, o uso do agente dessensibilizante Desensibilize Nano-P (G6) reduziu os valores de resistência ao cisalhamento em relação a G3 e G9. 70 Padrões de fratura Em relação ao total de padrões de fratura observados, 52 corpos-deprova (57,77%) foram classificados como mista (interface adesiva / camada do adesivo), 27 (30%) como adesiva, 09 (10%) como coesiva na camada adesiva, 01 (1,11%) coesiva em dentina, e 01 (1,11%) coesiva na resina composta, com maior percentual de fraturas mistas associadas aos gupos G1, G7 e G9 (80%), e de fraturas adesivas à G4 (70%). Microscopia eletrônica de varredura As imagens obtidas em microscopia eletrônica de varredura (MEV), com aumento de 1500X, mostraram que foi possível a abertura dos túbulos dentinários e remoção dos plugs de lama dentinária localizados na embocadura destes após aplicação do EDTA 17% por 01 minuto. Ainda, o emprego do ácido nesta concentração e tempo não produziu erosão da superfície dentinária, observado pela regularidade das dentinas inter e peritubular (Figura 15). Figura 15 - Túbulos dentinários expostos, com a preservação das dentinas inter e peritubular, após a utilização de solução de EDTA 17% durante 1 minuto. 71 O emprego da pasta profissional dessensibilizante Colgate Sensitive Pró-Alívio® foi capaz de promover o selamento da maioria dos túbulos dentinários expostos, observando-se também, em alguns, a redução do lúmen tubular pelo selamento parcial. Verificou-se ainda a deposição de camada granulosa na superfície dentinária, possivelmente representada por cristais de sílica e carbonato de cálcio (Figura 16). Obliteração tubular de até 8,576µm foi observada, em corte longitudinal, após a aplicação da pasta dessensibilizante Colgate Sensitive Pró-Alívio® (Figura 17). ® Figura 16 - Obliteração tubular resultante da aplicação de Colgate Sensitive Pró-Alívio na superfície dentinária (corte transversal). 72 Figura 17 - Profundidade de obliteração tubular obtida proveniente da aplicação de Colgate Sensitive Pró-Alívio® (corte longitudinal). A aplicação da pasta profissional dessensibilizante Desensibilize Nano® P foi capaz de promover um selamento parcial dos túbulos dentinários expostos, observando-se também, em alguns, a redução do lúmen tubular, e a manutenção da exposição em outros. Verificou-se ainda a deposição de uma camada compacta e irregularmente distribuída na superfície dentinária, possivelmente representada por partículas nanoestruturadas de hidroxiapatita (Figura 18). Obliteração tubular de até 5,049µm foi observada, em corte longitudinal, após a aplicação da pasta dessensibilizante Desensibilize NanoP® (Figura 19). 73 ® Figura 18 - Obliteração tubular resultante da aplicação de Desensibilize Nano-P na superfície dentinária (corte transversal). Figura 19 - Profundidade de obliteração tubular obtida proveniente da aplicação de ® Desensibilize Nano-P (corte longitudinal). 74 2.5. DISCUSSÃO 2.5.1. Discussão da metodologia De acordo com Blinkhorn et al.37 existem dois métodos básicos de pesquisa: o qualitativo e o quantitativo. Tradicionalmente, as pesquisas desenvolvidas na área da saúde lançam mão do método quantitativo, que por sua vez é derivado da filosofia positivista, centrada na objetividade da ciência. A busca de explicações objetivas para os fenômenos tem levado a uma ênfase nos dados numéricos, que constituem a base da pesquisa quantitativa.38 Dentro do espectro dos estudos quantitativos encontram-se as investigações experimentais em laboratório, que realizam seus experimentos, na grande maioria dos casos, em animais. Dessa forma, o laboratório é considerado o local ideal para a realização de estudos experimentais, pois permite um controle rigoroso da situação, possibilitando maior precisão em todas suas etapas. Logo, este tipo de investigação permite a redução do grau de subjetividade na aferição dos dados e proporciona parâmetros para comparação dos resultados.38 Esta modalidade de pesquisa é a mais frequentemente empregada para os estudos com sistemas adesivos. Sua opção encontra suporte principalmente na maior brevidade de execução dos estudos e possibilidade de controle das etapas envolvidas. As pesquisas clínicas, ainda que de grande valor científico, esbarram em obstáculos como o maior tempo necessário para realização dos estudos, aspectos associados à ética, custos, além das dificuldades no controle dos pacientes. Entretanto, ressalta-se que estas duas modalidades de avaliação de materiais odontológicos são complementares, com a laboratorial devendo preceder a clínica. Sendo assim, os testes laboratoriais utilizados para quantificar a resistência de uniões adesivas obtidas nos tecidos duros do dente (esmalte e dentina) são o cisalhamento, a tração e, mais recentemente, a microtração e o microcisalhamento.39-40 Estes testes segundo Retief41, ainda que incapazes de simular a complexidade de forças a que estão sujeitas as restaurações no meio 75 bucal, podem ser considerados válidos em seus propósitos, entretanto sem a possibilidade de extrapolar seus resultados para condições clínicas. O ensaio de resistência ao cisalhamento, realizado no presente estudo, foi designado devido sua comprovada realização em pesquisas afins,42-43 bem como por sua facilidade de execução e possibilidade de fornecer respostas às hipóteses testadas nesta pesquisa. Apesar da norma ISO / TS 11405: 200336 recomendar a utilização de dentes permanentes humanos, a disponibilidade de aquisição destes, bem como aspectos relacionados a questões éticas, tem dificultado seu emprego nos testes de resistência adesiva. Sendo assim, dentes bovinos têm sido avaliados e satisfatoriamente utilizados para esta finalidade, possuindo respaldo na literatura científica pertinente ao assunto.41,44-49 Dessa forma, esta pesquisa utilizou dentes incisivos bovinos íntegros, num total de 126 (cento e vinte e seis). Destaca-se ainda que foram excluídos elementos que apresentassem falhas estruturais no esmalte, como trincas e fraturas, o que poderia acarretar variações no preparo dos espécimes e, portanto, interferências nos resultados. A avaliação da condição estrutural do esmalte, previamente à realização do experimento, foi realizada em lupa estereoscópica com 40X de aumento. Ademais, durante a confecção dos corpos-de-prova, a superfície vestibular dos espécimes foi desgastada e planificada até a exposição do tecido dentinário, utilizando-se para tanto lixas de carbeto de silício de granulação decrescente em politriz horizontal. Tal desgaste foi realizado mantendo-se uma padronização em relação à área de dentina exposta (abertura de “janela de dentina” de aproximadamente 5mm de diâmetro), visto esta ser diretamente relacionada à profundidade dentinária, e que por sua vez pode interferir nos valores de resistência de união obtidos.50-51 Quanto aos materiais utilizados neste estudo, apesar de serem vários os agentes e técnicas atualmente disponíveis para o tratamento da HD, as propostas terapêuticas mais modernas se baseiam em abordagens biológicas como forma de minimizar, ou mesmo eliminar, os sintomas relacionados a esta condição patológica,8,52 Assim, ambos os agentes dessensibilizantes utilizados neste estudo possuem mecanismos de ação, ainda que diferentes entre si, 76 baseados na simulação de mecanismos fisiológicos de reparação dos tecidos dentários. Por outro lado, mesmo que estudos demonstrem a eficácia destes novos agentes no controle da HD,20,22,29,53 poucas informações estão disponíveis quanto ao uso destes agentes previamente aos procedimentos restauradores adesivos, e quais as consequências que podem advir desta intercessão. Ainda, com o intuito de simular a condição de túbulos dentinários abertos inerente à dentina hipersensível, procedeu-se a aplicação do EDTA 17% pela habilidade deste agente em promover a desobliteraração tubular sem, no entanto, provocar alterações significativas à estrutura dentinária quando utilizado por um período de 60 segundos.54 Com relação às aplicações dos agentes dessensibilizantes utilizados neste estudo, o protocolo totalizando 03 ciclos (sessões) de aplicação foi adotado em decorrência de ambos os fabricantes afirmarem ser esta quantidade suficiente para a obtenção do efeito dessensibilizante. Portanto, a persistência dos sintomas da HD já seria indicativa da necessidade de instituição de um tratamento mais invasivo para solucionar o problema, como a realização dos procedimentos restauradores adesivos.55 Decorridos os dias de tratamento dessensibilizante para os espécimes dos grupos experimentais, e de armazenamento em saliva artificial para os espécimes dos grupos controle, procedeu-se o preparo das superfícies de dentina para a realização da união adesiva. O primeiro passo, correspondente a delimitação da área adesiva, obedeceu ao preconizado por Retief41, e recomendado pela norma ISO / TS 11405: 2003,36 através do emprego de uma fita adesiva, contendo um orifício central de 3mm de diâmetro, sobre a superfície de dentina. A delimitação prévia da área adesiva foi fundamental, já que a restrição desta é a única forma de garantir que a área a ser testada será de fato restrita à circunferência do cilindro de resina composta, do contrário, como consequência, poderia não apenas a área de interesse ser testada, mas também as porções irregulares (excessos) que eventualmente poderiam ocorrer quando no momento de confecção dos cilindros, incorrendo em falsa interpretação dos resultados relativos à resistência da união adesiva avaliada.56 77 Quanto aos sistemas adesivos utilizados, a Odontologia Restauradora contemporânea tem mostrado uma tendência de simplificação dos procedimentos de união. Este motivo justificou a escolha do adesivo Adper Single Bond 2 (convencional de dois passos clínicos) como representante dos sistemas de condicionamento ácido total. Quanto à escolha dos adesivos autocondicionantes, foram utilizados sistemas de dois tipos de estratégia: 1 passo e 2 passos clínicos, ambos considerados “suaves” em sua agressividade (pH≈2.0), tendo em vista que estes têm se mostrado mais eficientes em relação aos sistemas mais acídicos quanto a sua estabilidade adesiva a longo prazo.5759 Além disso, sistemas autocondicionantes “suaves” apresentam natureza adesiva de origem dupla, seja mediada pelo embricamento micro-mecânico inerente à própria formação da camada híbrida, seja pelo mecanismo de adesão química (iônica) ao substrato dentinário, muito semelhante àquele que ocorre quando da utilização de cimentos de ionômero de vidro.59 O modo de aplicação dos sistemas adesivos utilizados neste estudo seguiu, rigorosamente, as recomendações dos respectivos fabricantes, visto esta não ser uma variável considerada no desenho experimental da pesquisa. Para a confecção dos cilindros de resina composta foi utilizada uma matriz desenvolvida por Loretto e colaboradores 60. Esta matriz, ainda que diferente da proposta pela norma ISO / TS 11405: 200336, propiciou o manuseio do corpo de prova sem haver geração de nenhum tipo de tensão, como cisalhamento, curvatura ou rotação, que pudesse interferir nos resultados do estudo. A opção por este aparato foi respaldada em sua maior simplicidade de confecção e na possibilidade de livre movimentação da matriz bipartida sobre a superfície de dentina delimitada pela fita adesiva. Esta livre movimentação é de fundamental importância, pois permitiu o perfeito ajuste do orifício central da matriz com aquele obtido com o emprego da fita adesiva, garantindo assim que parte do cilindro de resina composta não fosse construído sobre a fita, fato este que comprometeria os resultados finais. A inserção da resina composta na matriz bipartida obedeceu à técnica incremental recomendada pelo fabricante da mesma. Este recomenda a inserção de incrementos de no máximo 2,5mm de espessura, sendo, neste 78 estudo, utilizados dois (2) incrementos de 2,5mm, que corresponderam, desta forma, a altura da matriz (5mm). Após a confecção de todos os corpos de prova, estes foram armazenados seguindo-se as recomendações do teste tipo 1 da norma ISO / TS 11405: 2003,36 que prevê o armazenamento em água, por 24 horas, a uma temperatura de 37°C, antes da realização do teste de resistência ao cisalhamento. Outra questão metodológica deste estudo que merece ser pontuada diz respeito ao teste mecânico escolhido. Nesse sentido, ainda que o cisalhamento represente um dos ensaios mais utilizados na avaliação laboratorial de resistência das interfaces adesivas,61 críticas foram direcionadas quanto ao desenho do ensaio, visto permitir que a carga cisalhante seja facilmente transformada em forças de curvamento e clivagem, gerando a distribuição não uniforme de tensão ao longo da interface adesiva e, portanto, comprometendo os resultados obtidos quanto a fiel avaliação da resistência na área de união.6264 Estas observações críticas são frequentemente encontradas quando da utilização do teste de cisalhamento com emprego de cinzel. Assim, considerando-se estas limitações, optou-se pela realização do ensaio mecânico com a fita metálica, uma vez que esta permitiria, mais fielmente, o deslizamento (cisalhamento) entre as superfícies de esmalte e resina composta,65-66 exibindo em sua maioria fraturas na camada adesiva, conforme evidenciado neste trabalho. É lícito realçar ainda que, os baixos valores numéricos de resistência de união encontrados, são característicos do teste de cisalhamento realizado com a fita metálica e, caso precisem ser comparados com estudos similares que tenham usado outra ponta ativa durante o ensaio (p.ex. cinzel), deve-se ter a cautela na elaboração de pensamentos conclusivos sobre o desempenho de um determinado material.65 79 2.5.2. Discussão dos Resultados A hipersensibilidade dentinária (HD), popularmente conhecida como sensibilidade dental, está entre as queixas mais frequentes relatadas por pacientes que procuram tratamento odontológico. É caracterizada como uma dor aguda e curta decorrente da exposição de dentina, em resposta a uma variedade de estímulos, tais como, térmico, evaporativo, táctil, osmótico ou químico, e que não pode ser atribuída a qualquer outra forma de defeito ou doença dental.1 Estudos relatam prevalência de até 57% da população, com máxima ocorrência em indivíduos entre 20 e 40 anos.1-3,5-6,9 Diversas modalidades de tratamento têm sido propostas para o manejo da HD. Dentre estas, considerando-se a teoria da hidrodinâmica, a eliminação ou minimização do movimento dos fluidos tubulares através do selamento da dentina exposta desponta como uma alternativa frequentemente adotada. Nesta abordagem, os agentes dessensibilizantes podem simplesmente agir por efeito mecânico oclusivo, como os vernizes ou selantes, ou ainda promovendo a remineralização e/ou selamento tubular, prevenindo uma desmineralização subsequente, ou depositando minerais no interior dos túbulos dentinários. Dentre estes produtos podem-se destacar os compostos a base de estrôncio, de flúor, os oxalatos, além das recentes terapias remineralizadoras baseadas no cálcio.4-6,9-11 Entretanto, dentro das abordagens terapêuticas da HD, uma terapia mais invasiva pode se fazer necessária quando estratégias conservadoras não foram bem sucedidas, ou ainda na presença de considerável perda de volume da estrutura dental, como nas lesões cervicais não cariosas, direcionando a conduta clínica para a realização de procedimentos restauradores.2-3,55 Neste instante, não raro, pode-se observar a intercessão de um tratamento prévio da HD, baseado no selamento dos túbulos dentinários e redução da permeabilidade tecidual, com a realização de procedimentos restauradores adesivos em dentina, notadamente um substrato complexo ao processo de união. 80 Nesse sentido, diversos estudos têm avaliado os efeitos do prétratamento da dentina com agentes dessensibilizantes oclusivos, em especial produtos a base de oxalatos ou glutaraldeído, nas características da união adesiva promovida por sistemas convencionais e autocondicionantes.24,32-35,6771 Considerando-se o emprego dos oxalatos previamente a realização do condicionamento ácido, como tratamento oclusivo e não invasivo da HD, se observa a redução dos valores de resistência de união. Tal fato pode ser explicado pela formação dos cristais de oxalato de cálcio na estrutura dentinária que, apesar de reduzirem a permeabilidade tecidual, favorável ao processo de união, interferem na infiltração dos monômeros e comprometem a hibridização.32,34 Contrariamente, quando agentes dessensibilizantes de ação oclusiva são empregados após o condicionamento ácido, estes representam uma alternativa capaz de minimizar a degradação hidrolítica da camada híbrida, causada pela permeabilidade aos fluidos dentinários, contribuindo assim para o aumento da longevidade das restaurações estéticas.69 Quando aplicado sobre a dentina condicionada pelo ácido fosfórico, íons oxalato se difundem para o interior dos túbulos dentinários e reagem com íons cálcio. A formação de cristais insolúveis de oxalato de cálcio ocorre, portanto, em zona mais profunda, bloqueando temporariamente a passagem de fluido intratubular, e não comprometendo a difusão do agente de união.32,69-70 Entretanto, a incompatibilidade entre os agentes dessensibilizantes e sistemas adesivos pode interferir no procedimento de união.33 Assim, percebe-se que o emprego de agentes dessensibilizantes a base de oxalatos previamente aos procedimentos de união adesiva apresenta resultados conflitantes na literatura,72 bem como a própria eficácia destes na conduta terapêutica da HD.73 Recentemente, abordagens biológicas para o tratamento da HD foram preconizadas, propondo-se que o ideal seria mimetizar os processos dessensibilizantes naturais pela oclusão espontânea dos túbulos dentinários 81 abertos. Isto seria possível através do uso de materiais que apresentassem a capacidade de reagir com os fluidos corporais e/ou saliva, e que levassem a deposição de mineral na dentina hipersensível, sendo este “novo” substrato mais resistente a desafios mecânicos e químicos.8,10,15-17,74, Dentre estas abordagens biológicas, fundamentadas na ação remineralizadora de produtos a base de cálcio, encontra-se a arginina 8% + bicarbonato / carbonato de cálcio (tecnologia Pro-ArginTM), conforme utilizado no presente estudo. Podem ser citados ainda o fosfato de cálcio amorfo (ACP), o fosfato de cálcio amorfo estabilizado pelo fosfopeptídeo da caseína (CPPACP), o fosfosilicato de cálcio e sódio (NovaminTM), etc.6,10,15,17 O mecanismo de ação da tecnologia Pro-ArginTM, espelhado no papel que a saliva exerce naturalmente na redução da HD, fundamenta-se na alta solubilidade do componente arginina 8% + bicarbonato que circunda, ou é circundado, pelas partículas pouco solúveis do carbonato de cálcio, e que pelas qualidades adesivas desta composição, forma uma camada oclusiva similar a plugs, que não somente preenche, mas também adere às paredes dos túbulos dentinários. Ainda, em razão da sua alcalinidade, o composto arginina 8% + bicarbonato / carbonato de cálcio também reage com os íons cálcio e fosfato do fluido dentinário, permitindo a manutenção química da adesão dos plugs às paredes dentinárias adjacentes.6,9,10,16,17,52 Diversos estudos têm avaliado os efeitos da arginina 8% + bicarbonato / carbonato de cálcio na permeabilidade dentinária, comprovando-se a redução na condutância hidráulica tecidual e a resistência à desafios ácidos, minimizando efetivamente a movimentação dos fluidos dentinários e, portanto, a sensibilidade dental.12,16,30,75-76 Contudo, pouca informação está disponível sobre os efeitos da aplicação prévia de dessensibilizantes a base de arginina 8% + bicarbonato / carbonato de cálcio na resistência da união adesiva aos substratos dentais, em especial à dentina. Recentemente, Canares e colaboradores43 evidenciaram que o uso do creme dental dessensibilizante Colgate Sensitive Pró-Alívio® não interferiu na resistência da união adesiva à dentina em comparação ao grupo controle (pedra-pomes), observando-se, inclusive, aumento nos valores de resistência. 82 Os autores concluíram que os profissionais podem obter ótimos resultados de união à dentina em pacientes que estejam em tratamento da HD com o uso deste creme dental. Resultado semelhante pôde ser observado no presente estudo, onde o uso prévio da pasta profissional Colgate Sensitive Pró-Alívio® elevou os valores de resistência de união à dentina, embora se evidenciando significância apenas com o sistema adesivo convencional Adper Single Bond 2 (3M Espe) (ASB2). De fato, a analogia entre os resultados da pasta profissional e do creme dental pode ser feita com base no mesmo mecanismo de ação da arginina 8% + bicarbonato / carbonato de cálcio em ambas as estratégias.16 No presente estudo, os grupos controle (sem aplicação de agente dessensibilizante) compreenderam a simulação de uma dentina hipersensível, sem a presença de smear layer e com túbulos dentinários abertos, o que foi obtido com o emprego do EDTA 17% por um minuto.54 Tal fato aumentou a permeabilidade do tecido dentinário e influenciou, especialmente, a resistência de união do sistema adesivo convencional ASB2, observado pela menor média de resistência de união (2,12 MPa). Deve-se considerar ainda que para a união adesiva com o sistema supracitado (ASB2), o condicionamento com ácido fosfórico 37% foi realizado, o que elevou ainda mais a permeabilidade da dentina previamente tratada com o EDTA 17% (dentina hipersensível simulada). Tal condição favorece a exagerada movimentação dos fluidos dentinários, e dificulta a formação adequada da camada híbrida.69 Ademais, a técnica de adesão úmida foi utilizada com sistema ASB2, pela manutenção de parte do conteúdo de umidade após a lavagem do condicionador ácido. Assim, a fração de água remanescente na superfície dentinária, somada a elevada permeabilidade tecidual, representam um significativo desafio ao processo de união, o que pode influenciar a qualidade da interface adesiva e reduzir os valores de resistência de união à dentina.72,77 Positivamente, o pré-tratamento da dentina simuladamente hipersensível com a pasta profissional Colgate Sensitive Pró-Alívio® possibilitou o selamento 83 dos túbulos dentinários expostos e, por conseguinte, uma redução na permeabilidade dentinária, contribuindo para a obtenção de valores significativamente maiores de resistência de união à dentina quando do emprego do sistema convencional ASB2. De fato, através das imagens obtidas em microscopia eletrônica de varredura (MEV), observou-se uma obliteração significativa, mas não total dos túbulos dentinários expostos, sendo possível também identificar uma redução do lúmen destes túbulos em alguns casos. Estes resultados estão de acordo com os estudos de Sauro, Watson, Thompson12 e Sauro, Watson, Thompson30, e contrários ao estudo de Petrou e colaboradores 16, onde a totalidade dos túbulos dentinários expostos mostrou-se obliterado. O menor número de aplicações do produto (três aplicações) no presente estudo pode justificar estes achados micromorfológicos. Além disso, a estratégia de ação dos sistemas adesivos convencionais resulta em maior permeabilidade dentinária quando comparada aos autocondicionantes.72,78 A presença da lama dentinária representa uma condição comum à estratégia de ação dos sistemas autocondicionantes, evidenciando que tais agentes atuam, frequentemente, em condições de permeabilidade dentinária reduzida. Contudo, no presente estudo, todos os grupos foram previamente tratados com EDTA 17%, removendo-se a camada de smear layer, aumentando-se a permeabilidade tecidual e, portanto, a movimentação de fluidos dentinários. Sistemas adesivos autocondicionantes de um passo clínico (all-in-one) são mais susceptíveis a esta movimentação, quando comparados aos sistemas de dois passos clínicos (self-etching primers), uma vez que os últimos contemplam a aplicação de uma camada resinosa hidrofóbica.79 Tal afirmação pôde ser verificada em nosso estudo, onde os sistemas Adper Easy One (3M Espe) (AEO), e Clearfil SE Bond (Kuraray) (CSEB), resultaram em maiores valores de resistência de união já nos grupos controle (2,40 MPa e 3,20 MPa, respectivamente) em relação ao adesivo convencional 84 (ASB2), uma vez que estes agentes autocondicionantes não preconizam o uso prévio de ácido fosfórico como etapa do processo de adesão à dentina. Ainda, mesmo que não significativamente, o emprego prévio da pasta profissional Colgate Sensitive Pró-Alívio® elevou os valores de resistência de união à dentina de ambos os sistemas autocondicionantes (AEO e CSEB). Novamente pode-se creditar tal resultado, pelo menos em parte, a redução da permeabilidade dentinária causada pelo uso do referido dessensibilizante. Além disso, sabe-se que o uso do dessensibilizante a base de arginina 8% + bicarbonato / carbonato de cálcio é capaz de induzir a formação mineral in situ, formando uma camada rica em cálcio na superfície dentinária.6,9-10,16-17 Neste contexto, destaca-se a importância da possível interação química entre os monômeros funcionais, presentes nos sistemas adesivos, com os substratos dentais.80-81 A forma pela qual os ácidos (ou monômeros acídicos, como nos sistemas autocondicionantes) interagem com os tecidos mineralizados é principalmente determinada pelo valor de pKa (constante de acidez), ao invés de exclusivamente pelo pH, através de um conceito conhecido como adesãodescalcificação (conceito AD).24,59,82-83 Dessa forma, sistemas adesivos autocondicionantes suaves (como os utilizados no presente estudo) desmineralizam o tecido dentinário apenas parcialmente, permitindo a manutenção de quantidade significativa de cristais de hidroxiapatita, e a possibilidade de interação química dos monômeros ácidos com a dentina subjacente.57,59,81 Monômeros funcionais específicos, como o 10-MDP presente no sistema adesivo CSEB utilizado em nosso estudo, comprovadamente se unem quimicamente ao cálcio da hidroxiapatita.59,81-83 Logo, é possível atribuir, ainda que parcialmente, o aumento nos valores de resistência de união dos sistemas autocondicionantes à possível interação química entre os monômeros funcionais destes e a camada mineralizada formada sobre o tecido dentinário pelo agente dessensibilizante Colgate Sensitive Pró-Alívio®. 85 Outra estratégia recentemente adotada para o tratamento da HD, também fundamentada nas propriedades remineralizadoras de produtos bioativos a base de cálcio, é a utilização de pasta profissional de fosfato de cálcio organizado na forma cristalina de hidroxiapatita, comercializada no Brasil com o nome de Desensibilize Nano-P® (FGM).84 Segundo informações do fabricante, a pasta profissional Desensibilize Nano-P® apresenta características químicas e estruturais semelhantes à hidroxiapatita natural. Os nanofosfatos de cálcio apresentam uma maior bioatividade em função do tamanho de suas partículas e por sua morfologia, aumentando sua área superficial, capacidade de hidratação e molhabilidade, e solubilidade, permitindo que liberem íons cálcio e fosfato ao meio bucal nas concentrações e velocidades adequadas. O produto age por efeito químico pela presença do flúor, que inibe a atividade cariogênica bacteriana, previne a desmineralização e potencializa a dessensibilização; pela presença do nitrato de potássio, que potencializa a despolarização das fibras nervosas, e por efeito físico, pela penetração da hidroxiapatita nanométrica nos túbulos dentinários.84 Diversos estudos têm avaliado os efeitos remineralizadores, dessensibilizantes e redutores da permeabilidade dentinária de produtos bioativos a base de hidroxiapatita ou similares (carbonatoapatita), com resultados mostrando-se satisfatórios e promissores.27,29,53,85 Entretanto, novamente, a literatura não dispõe de informações sobre a influência da prévia utilização de tais produtos, empregados na terapia para HD, nas características adesivas dos substratos dentais, dentre estas a resistência de união. As imagens obtidas por MEV mostram que emprego da pasta Desensibilize Nano-P® foi capaz de promover um selamento apenas parcial dos túbulos dentinários expostos, ainda que as superfícies dentinárias tenham sido expostas à saliva artificial entre as sessões de aplicação do produto. Tal resultado diverge dos achados de Shetty, Kohad e Yeltiwar53, que utilizando produto similar de uso profissional a base de hidroxiapatita, observaram um selamento completo dos túbulos dentinários expostos. 86 Ainda, os grupos testados apresentaram redução nos valores de resistência de união após a aplicação da pasta Desensibilize Nano-P® para todos os sistemas adesivos utilizados. Tais reduções podem ser atribuídas também à permanência de elevada permeabilidade dentinária, visto que o produto não foi capaz de promover um selamento uniforme dos túbulos dentinários expostos. Nesse sentido, os sistemas adesivos convencionais de dois passos clínicos, e os autocondicionantes de um passo (all-in-one), comportam-se como os mais susceptíveis à permeabilidade dentinária elevada. O primeiro por proporcionar um aumento ainda mais pronunciado da permeabilidade pelo emprego do condicionador ácido (ácido fosfórico), e agir através da técnica de adesão úmida.69,72,77 Ainda, assim como o segundo, por não dispor da aplicação de uma camada resinosa hidrofóbica.79 Tal resultado pôde ser verificado com os sistemas adesivos ASB2 e AEO, que apresentaram os menores valores de resistência de união, não sendo significativos em relação aos grupos controle, mas diferindo do dessensibilizante Colgate Sensitive Pró-Alívio®. O primeiro por proporcionar um aumento ainda mais pronunciado da permeabilidade pelo emprego do condicionador ácido (ácido fosfórico), e agir através da técnica de adesão úmida.69,72,77 E, assim como o segundo, por não dispor da aplicação de uma camada resinosa hidrofóbica.79 Entretanto, a manutenção de elevada permeabilidade parece não ser a única justificativa para os resultados dos grupos que utilizaram a pasta Desensibilize Nano-P®, uma vez que os grupos controle apresentaram maiores valores de resistência de união mesmo sem o emprego de nenhum produto com capacidade obliterante. Logo, a maior espessura da camada formada sobre a superfície dentinária, e a discreta penetração da pasta Desensibilize Nano-P® nos túbulos expostos (5,049µm), em relação ao dessensibilizante Colgate Sensitive PróAlívio®, pode explicar também os resultados obtidos. 87 Diversas metodologias foram propostas para sintetizar a hidroxiapatita nanoparticulada, ou nanocristais desta, como: precipitação química úmida, síntese sol-gel, co-preciptação, síntese hidrotérmica, síntese mecano-química, etc., através dos quais nanocristais de variados formatos e tamanhos podem ser obtidos.86 Para infiltrar os túbulos dentinários e aliviar os sintomas da HD, pós de hidroxiapatita foram obtidos por síntese hidrotérmica, com partículas similares a agulhas, de 20 a 40nm de diâmetro, e 100 a 160nm de comprimento. Contudo, observou-se que estes cristais ainda eram maiores que o diâmetro dos túbulos dentinários, necessitando-se, portanto, de partículas mais equiaxiais e esféricas para promover a penetração nestes túbulos.87 Desse modo, pode-se admitir que o diâmetro, ou mesmo o arranjo estrutural, das partículas de hidroxiapatita da pasta Desensibilize Nano-P® foi insuficiente para promover uma penetração adequada nos túbulos dentinários expostos, comprometendo assim a redução esperada da permeabilidade tecidual. Por fim, ainda que o fabricante destaque o pequeno diâmetro e a morfologia favorável destas partículas, não faz referências dimensionais às mesmas. Adversamente, portanto, a pasta dessensibilizante pode permitir a formação de uma espessa camada apenas sobreposta ao tecido dentinário, que atuaria como uma barreira física à apropriada infiltração dos diferentes sistemas adesivos, reduzindo os valores de resistência de união à dentina.72,77 Possivelmente, tais características qualitativas demonstradas pela pasta Desensibilize Nano-P® foram dependentes também do modo de aplicação do produto, que seguiu as recomendações sugeridas pelo fabricante. Neste estudo in vitro, o tempo de profilaxia profissional (10s), de repouso do agente na superfície de dentina (5min), e o número de “sessões” de dessensibilização (03), não propiciaram a obliteração total dos túbulos expostos, a formação de uma camada uniforme sobre o tecido dentinário e, provavelmente, a necessária redução da permeabilidade. 88 Em síntese, é valido ratificar que os resultados ora obtidos são dependentes das limitações inerentes ao estudo laboratorial, e que embora se buscando aproximar as condições testadas da situação in vivo, a complexidade da cavidade bucal e seus efeitos não podem ser completamente simulados. Entretanto, foi possível observar que as alternativas contemporâneas de tratamento da HD testadas, baseadas em abordagens biomiméticas frente aos substratos dentais, podem influenciar a resistência de união à dentina prétratada por estes dessensibilizantes, proporcionada por sistemas adesivos de diferentes composições e estratégias de ação. 89 2.6. CONCLUSÕES Dentro das limitações deste estudo in vitro, foi possível concluir que: O agente dessensibilizante Desensibilize Nano-P® reduziu os valores de resistência de união à dentina para todos os sistemas adesivos testados, independente da estratégia de união destes; O agente dessensibilizante Colgate Sensitive Pró-Alívio® elevou os valores de resistência de união à dentina para todos os sistemas adesivos testados, independente da estratégia de união destes; O sistema adesivo convencional Adper Single Bond 2® mostrou-se mais susceptível a prévia aplicação dos agentes dessensibilizantes, em relação à resistência de união à dentina; Os agentes dessensibilizantes Desensibilize Nano-P® e Colgate Sensitive Pró-Alívio® promoveram uma obliteração parcial dos túbulos dentinários expostos. 90 2.7. REFERÊNCIAS 1. Canadian Advisory Board on Dentin Hypersensitivity. Consensus-based recommendations for the diagnosis and management of dentin hypersensitivity. 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J Oral Invest, 3(1): 4-9, 2014 - ISSN 2238-510X DOI: 10.18256/2238-510X/j.oralinvestigations.v3n1p4-9
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