Projecto de Mestrado em Bioquímica (2º Ciclo)

Projecto de Mestrado em Bioquímica
(2º Ciclo)
Ano lectivo 2013/2014
Título:
Identificação de alterações no proteoma de uma estirpe industrial mutante, Saccharomyces
cerevisiae PYCC 5334, capaz de consumo simultâneo de glucose e maltose
Resumo:
A levedura Saccharomyces cerevisiae estirpe PYCC 5334 adquiriu, por radiação UV, uma mutação
de carácter dominante que lhe dá a capacidade de metabolizar simultaneamente glucose e um
outro açúcar, a maltose. Contrariamente ao verificado por outros autores, os nossos resultados
mostram que este fenótipo de desrepressão de PYCC 5334 não é causado pela diminuição do
transporte e da taxa de consumo de glucose. De facto, embora a mutação em PYCC 5334 afecte a
regulação dos transportadores de glucose, a desrepressão não é justificada por um fluxo
insuficiente da mesma, pois quando um dos transportadores de glucose (HXT1p) foi sobreexpresso em PYCC 5334, a capacidade de transporte de glucose foi recuperada, igualando a da
estirpe parental, mas mantendo-se, ainda assim, o fenótipo desreprimido.
Dadas as características únicas deste mutante, será de extrema utilidade identificar o gene
alterado, tanto para a elucidação das vias de sinalização da glucose, como para abrir caminhos
para a engenharia metabólica de leveduras que levem ao melhoramento do seu desempenho
fermentativo em processos industriais. Neste projecto, através da análise comparativa por
electroforese bi-dimensional (2DE) dos proteomas das estirpes selvagem e do mutante, pretendese identificar quais as proteínas que têm a sua expressão alterada como resultado da mutação.
Tarefas:
1- Cultura das estirpes de levedura nas condições a estudar e preparação dos respectivos
extractos celulares.
2- Análise comparativa dos perfis proteicos associados ao mutante e à estirpe parental por
electroforese bidimensional.
3- Comparação dos mapas 2D com as bases de dados existentes para S. cerevisiae.
4- Identificação dos biomarcadores de resposta biológica pela técnica peptide mass fingerprint.
Orientação:
- Prof. Dra. Madalena Salema-Oom (Dept. Ciências da Vida, FCT/UNL | Instituto Superior de
Saúde Egas Moniz; email: [email protected]);
- Prof. Dra. Gabriela Almeida (Dept. Química, FCT/UNL) | Instituto Superior de Saúde Egas
Moniz, email: [email protected]).
Instituições:
- FCT/UNL, Quinta da Torre, Monte Caparica;
- Instituto Superior de Saúde Egas Moniz, Quinta da Granja, Monte Caparica.