3-Obtenção de animais e plantas OGMs

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO
PÓLO AVANÇADO DE XERÉM
GRADUAÇÃO EM BIOTECNOLOGIA
CURSO MELH. GEN. E OGMs (XBT353)
TURMA 2015/2
Obtenção de plantas e
animais transgênicos
Prof. Dr. Silas Pessini Rodrigues
Rio de Janeiro,
24 de novembro de 2015
Microinjeção em protoplasto de batata
Microagulha que injeta DNA
Faz uma leve sucção que segura a célula
Biolística
Agrobactéria tumenfaciens na superfície de uma
célula vegetal
Mecanismo de
transformação de
células vegetais
por agrobactéria
1) A bactéria percebe um fenol
liberados pela planta
2) O produto de genes Vir atuam
tanto percebendo o fenol, como
atuando na transferência do TDNA
3) VIP-1 é fosforilada e ativa a
expressão de genes de defesa,
que são reprimidos por VirF
4) VirF também remove proteínas
associadas ao T-DNA, permitindo
a sua inserão no genoma.
Tumor vegetal induzido por agrobactéria
Sequência de uso de agrobactéria para
transformação de plantas
Pedaços de tecidos foliares expostos à agrobactéria
Infiltração de tecidos de planta com agrobactéria
Nature Protocols 9 1010–102 (2014)
Biolística: transformação de células por “tiros” de
partículas de ouro impregnadas com plasmídeo
http://www.thepeoplesvoice.org/
Seleção de células modificadas
Meio contendo kanamicina  antibiótico que mata células vegetais
http://www.plantmethods.com/content/1/1/6/figure/F6
Regeneração da planta á partir das células transformadas
http://btc.nchu.edu.tw/myweb3/SP3-2.htm
Como se faz uma mosca transgênica?
Embrião de Drosophila < 1h após fecundação
calda
cabeça
Embrião
http://www.morgellonsuk.org.uk/micromyiasis.htm
Como se faz uma mosca transgênica?
Etapa 1: Coleta de embriões de Drosophila
Placa com ágar + suco de maçã + levedura
= local de deposição de ovos de mosca
http://morpho13.wikispaces.com/Hufnagel+Project
Como se faz uma mosca transgênica?
Etapa 2: deposição dos embriões na lâmica de microscópio
http://www.sutter.com/MICROINJECTION/xenoworks.html
Como se faz uma mosca transgênica?
Etapa 2: deposição dos embriões na lâmica de microscópio
Como se faz uma mosca transgênica?
Etapa 3: microinjeção de DNA recombinante
Como o DNA
recombinante chega
efetivamente no
cromossomo?
Como se faz uma mosca transgênica?
Elementos transponíveis (ET) fazem parte do DNA
recombinante utilizado na transformação de moscas
ETs: segmentos de
DNA que se movem
para diferentes
locais em
cromossomos
Como se faz uma mosca transgênica?
Elementos transponíveis (ET) fazem parte do DNA
recombinante utilizado na transformação de moscas
Molécula de plasmídeo recombinante (vetor)
ET
ET
O plasmídeo entre em contato com os cromossomos
Como se faz uma mosca transgênica?
Etapa 4: Seleção de moscas modificadas
Como se faz uma mosca transgênica?
Etapa 4: Seleção de moscas modificadas
Olho vermelho = mosca transgênica
http://dkphoto.photoshelter.com/image/I0000K13pHvohsik
Exemplos de outros organismos transgênicos superiores
Peixe zebra transgênico
Nature Protocols 6, 229–241 (2011) doi:10.1038/nprot.2010.170
Exemplos de outros organismos transgênicos superiores
Geração de primatas não-humanos transgênicos
Nature 459, 523-527 (28 May 2009) | doi:10.1038/nature08090