boletin latinoamericano y del caribe de plantas medicinales y

boletin latinoamericano y del caribe de plantas medicinales y

BLACPMA Vol. 3 Nº 4 Julio de 2004
Editor: José Luis Martínez (Chile)
66
BOLETIN LATINOAMERICANO Y DEL CARIBE
DE
PLANTAS MEDICINALES Y AROMATICAS
Desde el Río Grande a la Patagonia
Incluyendo el Caribe de habla española, inglesa y francesa
AUSPICIADO POR
SOCIEDAD LATINOAMERICANA DE FITOQUÍMICA
Periodicidad cada dos meses - Editado en Santiago de Chile
Volumen 3 Nº 4 Páginas 66 – 79 Julio de 2004
Editado sólo para distribución por vía electrónica
ISSN 0717 7917
Editores
José L. Martínez (Santiago, Chile)
Jorge Rodríguez (La Habana, Cuba)
Supervisora de Edición
Patricia Landázuri (Armenia, Colombia)
Co-editores
Arnaldo Bandoni (Buenos Aires, Argentina)
Maria Engracia Medina (Managua, Nicaragua)
Francisco Morón (La Habana, Cuba)
Patrick Moyna (Montevideo, Uruguay)
Consejo Editorial
Christian Agyare (Ghana) – Jorge Alonso (Argentina) – Elsa Anselmi (España)
Pastor Arenas (Argentina) – Elizabeth Barrera (Chile) – Henry Yesid Bernal (Colombia)
Armando Cáceres (Guatemala) – Bruce Cassels (Chile) – Geoffrey Cordell (USA)
Marco Dehesa (Ecuador) – Carla Delporte (Chile) – Luis Doreste (Venezuela)
Angela Duque Villegas (Colombia) – Norman R. Farnsworth (USA) – Mildred García (Costa Rica)
Gabino Garrido (Cuba) – Martha Gatusso (Argentina) – Mahabir Gupta (Panamá)
Alberto Hernández (Cuba) – Peter Houghton (Inglaterra) – Ana Ladio (Argentina)
Vicente Martínez (Guatemala) – Ernesto Medina (Nicaragua) – Pedro Melillo de Magalhaes (Brasil)
Jordi Molgó (Francia) – Miguel Morales (Chile) – Mahendra Rai (India)
Elsa Rengifo (Perú) – Alicia Rodríguez (Cuba) – Carles Roersch (Rep. Dom.)
Marcela Samarotto (Chile) – Aurelio San Martin (Chile) – José San Martin (Chile)
Nikolai Sharapin (Brasil) – Marco Schwartz (Chile) – Mauricio Venegas (Chile)
Carlos Vicente (Argentina) – Roger Villalobos (Costa Rica) – Rita Zeichen (Argentina)
Gustavo Zúñiga (Chile)
Presidente de la Sociedad Latinoamericana de Fitoquímica
(2002 – 2005) Dra. Virginia Martino (Argentina)
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Editor: José Luis Martínez (Chile)
67
INDICE
Objetivos del Boletín
Notas del Editor
Editorial
Artículos
Dr. P. A. SÁ PEIXOTO NETO y colab. de Brasil
Dra. TIBISAY PERNÍA y colab. de Venezuela
Recomendamos
Eventos
Correspondencia
Página
67
68
68
69
73
76
77
78
OBJETIVOS DEL BOLETÍN
Estimular a los grupos de trabajo existentes en Latinoamérica, sean
investigadores, productores, funcionarios o simplemente interesados en las
plantas medicinales y aromáticas, poniendo a su disposición este Boletín para la
difusión y la divulgación de sus investigaciones y de las actividades que en
general desarrollen en torno a plantas.
Ser una herramienta de difusión para la Sociedad Latinoamericana de Fitoquímica
principalmente y de otras sociedades y agrupaciones que se sientan
representados por este Boletín.
Constituir un nexo entre los profesionales de habla hispana, francesa, portuguesa
e inglesa de la región, relacionados con el tema central del Boletín.
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Editor: José Luis Martínez (Chile)
NOTAS DEL EDITOR
Nuevamente con Uds., deseo agradecer a cada
uno de Uds. Sus generosos mensajes hacia mi
persona y en espacial a Rafael Ocampo de Costa
Rica por su cariñoso mensaje.
También deseo agradecer la confianza de
Marlene Porto de Cuba, y la generosidad de Olga
Lock de Perú, y a todos los miembros del Jardín
Botánico de Río De Janeiro, Brasil.
Una vez más agradecer la confianza de Nikolai
Sharapin de Brasil por mantenerme como punto
focal de RIPROFITO. La amistad brindada por
Ronald Chaves de Costa Rica.
También deseo brindar la más cordial bienvenida
al equipo del Comité Editorial a José San Martín
de la Universidad de Talca, Chile y al Ing.
Agrónomo Vicente Martínez de la Universidad de
San Carlos, Guatemala.
EDITORIAL1
Me he permitido escribir la editorial en esta
oportunidad para comentar el reciente curso
internacional
“PRIMER
CURSO
DE
PRODUCCION Y CONTROL DE CALIDAD DE
FITOFARMACOS DEL CONOSUR”, dentro del
marco del Subprograma X de CYTED y
RIPROFITO. El cual se realizó con completo éxito
en la Universidad de Valparaíso, Chile.
En primer lugar agradecer a Armando Cáceres
anterior coordinador de RIPROFITO y al actual
coordinador Nikolai Sharapin como así mismo a
Mahabir Gupta por la confianza de haber
permitido traer el curso a Chile. El evento en su
inauguración contó con la participación del Dr.
Juan Riquelme, Rector de la Universidad y la
Decano Dra. Patricia Acuña.
Agradezco la confianza de muchas instituciones
en creer en nuestras posturas y haber enviado
profesores y estudiantes al curso, pues asistieron
además de Chile, de Perú, Colombia, Venezuela,
Cuba, Uruguay y Argentina. Entre los profesores,
no hubo que lamentar la ausencia de ninguno,
solo el atraso de parte de la Dra. Teresita Alfaro
de Cuba, quien por problemas de visa en La
Habana llego un dia después. También deseo
hacer notar que la elección de quien cerró el
curso fue lo más acertado, me refiero al Dr.
Antonio Bianchi de Italia. Además los alumnos
1
José Luis Martínez, Editor de BLACPMA,
Presidente del Comité Organizador del “PRIMER
CURSO DE PRODUCCION Y CONTROL DE
CALIDAD DE FITOFARMACOS DEL CONOSUR”
68
eligieron el último día al mejor profesor, y de
acuerdo a las votaciones fue elegido el Dr. Nikolai
Sharapin.
Deseo también manifestar mis agradecimientos a
los dueños de casa, el Dr. Raul Vinet y la Dra.
Eva Flores, por sus esfuerzos y gentileza para
con todos los invitados y participantes.
Por otro lado, agradecer a todas las instituciones
que nos entregaron su apoyo incondicional,
CYTED, RIPROFITO, CONICYT, CANALAB
(Cámara Nacional de Laboratorios), FIA
(Fundación para la Innovación Agraria – Chile),
CIDEM (Centro de Investigación y desarrollo de
Medicamentos) de La Habana - Cuba, a la
Revista de Fitoterapia de España y al Laboratorio
de Ximena Polanco.
Agradecer a la Dra. Virginia Martino por haber
permitido
apoyar
con
la
Sociedad
Latinoamericana de Fotoquímica a este evento.
También deseo agradecer a la Dra. Silvia
Debenedetti de la Universidad Nacional de la
Plata y muy especialmente a la Dra. Marlene
Porto, Directora del CIDEM de La Habana, por
todo su apoyo en esta actividad.
Finalmente agradecer a los profesores que
asistieron a este curso, Pedro Melillo de
Magalhaes (Campinas, Brasil), Nikolai Sharapin
(Niteroi, Brasil, Etile Spegazzini (La Plata,
Argentina), Vicente Martínez (Guatemala),
Teresita Alfaro (Cuba), Antonio BIanchi (Italia) y
de Chile, Ligia Morend, Marisol Berti, Hermine
Vogel, Leonora Mendoza, María Eugenia Letelier,
Ximena Polanco, Jacqueline Ruz, Sergio Mora,
Marco Delpiano, Eva Flores, Leonora Mendoza,
Roberto Parada, esperando no haber olvidado a
nadie.
A los estudiantes en especial a Carmen Viturro,
Michel Delens (si bien no asistió, confió en
nosotros en enviarnos un estudiante), a la Dra.
Gabriela de Battisti de Misiones quien también
nos envió una estudiante), y a todos quien
asistieron. GRACIAS.
Si dais la impresión de necesitar cualquier
cosa, no os dirán nada; para hacer fortuna, es
preciso aparentar ser rico.
Alejandro Dumas
No sabrás todo lo que valgo hasta que no
pueda ser junto a ti todo lo que soy.
Gregorio Marañón
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ARTICULOS
com nutrientes e com menor competição com
outros microrganismos.
MICRORGANISMOS ENDOFÍTICOS EM
PLANTAS: STATUS ATUAL E PERSPECTIVAS
PEDRO ACCIOLY SÁ PEIXOTO NETO
2
JOÃO LÚCIO DE AZEVEDO
3
LUIZ CARLOS CAETANO
2
Recibido: 7 de Noviembre de 2003
Recibido Corregido: 20 de Enero de 2004
Aceptado: 6 de Febrero de 2004
Resumo: Microrganismos endofíticos habitam o
interior das plantas, onde recebem alimento e
promovem proteção. Sua presença em plantas
medicinais tem sido detectada e sua importância
na produção de metabólitos secundários bioativos
tem despertado o interesse para a sua aplicação
biotecnológica.
Palavras chaves: endofíticos, plantas medicinais,
metabólitos secundários.
Abstract: Endophytic microorganisms live inside of
plants, where they receive food and give
protection to their hosts. Its presence has been
detected and its importance on the production of
bioactive secondary metabolites has attracted
interest on their biotechnological applications.
Key words: endophytics, medicinal plants,
secondary metabolites.
INTRODUCCION
Evolutivamente as plantas vêm desenvolvendo
complexos mecanismos adaptativos, muitos
destes somente possíveis, graças às interações
com os microrganismos. Destes microrganismos
destacam-se os endofíticos que, em pelo menos
uma fase do seu ciclo de vida, habitam o interior
de tecidos vegetais, sem causar dano aparente
aos mesmos. Eles são geralmente fungos e
bactérias que desempenham funções importantes
no processo de adaptação da planta com o meio.
Embora possam ser confundidos com patógenos
latentes, estudos têm demonstrado que em
muitos casos existe uma importante interação
simbiótica com o hospedeiro, a qual envolve a
produção de compostos que diminuem a
herbivoria sobre os tecidos vegetais ou conferem
resistência a fitopatógenos, além da produção de
fitoreguladores
que
podem
aumentar
o
desenvolvimento vegetal, entre outros. Por outro
lado, os endófitos encontram na planta um habitat
2
Doutorando CPGQB, bolsista CNPq
Dept. de Genética/Lab. de Genética de
Microrganismos da ESALQ/USP.
3
Dept. de Química/Lab. de Biotecnologia Vegetal
e Fitoterapia da UFAL
Email: [email protected]
2
Os endofíticos podem ser encontrados nas folhas,
ramos, raízes e até mesmo nas sementes,
maneira pela qual são transmitidos planta a
planta. Sua penetração nos vegetais dá-se por
aberturas naturais ou artificiais, tais como:
estômatos, ferimentos causados por instrumentos
agrícolas,
microferimentos
nas
raízes
ocasionados pelo atrito destas com as partículas
do solo, etc., disseminando de maneira sistêmica
ou restrita a diversas partes da planta, habitando
de forma ativa o apoplasto, vasos condutores e
em alguns casos pode ocorrer colonização
intracelular (1). A existência de endófitos em
plantas medicinais tem sido constatada em
inúmeras espécies, estando muitas vezes
envolvidos em complexas relações de síntese,
acúmulo
e
degradação
de
metabólitos
secundários de interesse econômico.
Ocorrência de endofíticos
Um grande número de espécies de endófitos
pode ser isolado dos tecidos saudáveis de uma
única planta (2). Alguns fatores interferem
qualitativa e quantitativamente na biodiversidade
da microbióta dos endofíticos. Destacam-se, a
idade da planta, do tecido ou órgão da planta,
além do tempo gasto até serem submetidas ao
isolamento dos endófitos. A presença de
endófitos já foi constatada em inúmeras plantas
medicinais de interesse econômico, entre elas
Taxus (teixo-do-pacífico) (2), Artemisia (3),
copaíba (4) e eucalipto (5). A localização e a
forma de colonização destes endofíticos nas
plantas hospedeiras podem ser determinadas
utilizando métodos citoquímicos e microscopia
eletrônica, possibilitando melhor compreensão
destes processos (6). As espécies de
Cladosporium e Aureobasidium, freqüentemente
isoladas de plantas de clima temperado, são
raras em plantas tropicais (7). Mais estudos com
plantas tropicais possibilitarão uma melhor
compreensão dos mecanismos simbióticos
envolvidos, e um melhor aproveitamento do seu
potencial biotecnológico, principalmente com
relação
ao
metabolismo
secundário
de
importantes espécies medicinais abundantes e/ou
ameaçadas de extinção. De plantas medicinais
nativas do Brasil, temos conseguido isolar com
relativa facilidade fungos do gênero Pestalotiopsis
de
Pithecolobium
avaremotemo
Mart.
(Leguminosae), o barbatimão, ameaçado de
extinção, cujas cascas apresentam amplo
espectro
antimicrobiano
contra
linhagens
multiresistentes (8). Da sua cultura de tecidos foi
possível isolar um Cladosporium sp. (9). De
Euphorbia milli var. Hislopii, cujo látex apresenta
alta atividade moluscicida frente a Biomphalaria
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glabrata, há a predominância de espécies do
gênero Colletotrichum (dado não publicado), já
reportado como produtor de antibióticos em
Artemisia annua (3) e Dicksonia sellowiana
(Presl.) Hook. planta ameaçada de extinção,
utilizada na medicina tradicional brasileira por sua
ação hemostática, com um grande número de
espécies dos gêneros Fusarium, Alternaria e
Arthrobotrys, este último conhecido como agente
controlador
de
nematóides
(dados
não
publicados).
Em cultura de tecidos de plantas medicinais o
surgimento de microrganismos endofíticos, é
freqüente. Temos verificado a presença de
endofíticos nas culturas de E. milli var. Hislopii, P.
avaremotemo (Cladosporium sp.), Caesalpinia
pyramidalis e Borreria verticillata (L.) Mey (9, 10).
METABOLISMO SECUNDÁRIO E INTERAÇÃO
PLANTA/MICROBIOTA
Estudos realizados por Stierle et al. (2)
despertaram, mais ainda o interesse na
microbiota endofítica relacionada com plantas
medicinais, uma vez que os mesmos
conseguiram comprovar que um fungo endofítico
o Taxomyces andreane de Taxus brevifolia Nutt.
(Taxaceae), é capaz de produzir o complexo
diterpenóide, Taxol, utilizado no combate de
vários tipos de câncer, e já movimentou mais de
nove bilhões de dólares (11). Em trabalhos
posteriores comprovou-se que outros gêneros de
fungos endofíticos de outras espécies de plantas
também são capazes de produzirem taxol e
outros compostos de importância biológica
(Tabela 1).
Estas descobertas são notadamente importantes
do ponto de vista biotecnológico e ecológico, pois
até então a única fonte de Taxol era a extração
das cascas da planta, onde eram necessários
cascas de mais de 1000 árvores, cada uma com
100 anos de idade, para se obter um 1 kg de
Taxol, fato que quase levou a extinção desta
importante planta medicinal (20).
Trabalhos
realizados em Catharanthus roseus G. Don.
(Apocynaceae) demonstraram que a produção de
Tricosetina, composto ativo contra bactérias
Gram-positivas, somente é possível quando há
um co-cultivo de calos desta planta com fungos
da espécie Trichoderma harzianum (21).
PERSPECTIVAS BIOTECNOLÓGICAS
Apesar de todo o impacto inicial da descoberta da
produção de Taxol por um fungo endofítico,
muitos consideram-no ainda como um mero
artefato, idéia que foi refutada por trabalhos
posteriores e por várias patentes relacionadas à
70
produção de Taxol por endofíticos concedidas
aos pesquisadores pelo Dep. de patentes dos
EUA sob os nº 5.322.779 em 21 de jun/1994,
6.329.193 de 11 de dez/2001, além de outros
trabalhos que demonstraram que outros fungos
endofíticos isolados de plantas do gênero Taxus
também tem a capacidade de produzir taxol e do
fungo Stegolerium kukenani endofítico da espécie
tropical Stegolepsis guianensis, uma rubiacea
nativa de Roraima (Brasil) e Venezuela (16).
Estes trabalhos fornecem subsídios que indicam
haver convergência na produção de certos
metabólitos secundários, independentemente do
grupo filogenético, abrindo novas perspectivas
para estudos de similaridade dos genes
envolvidos na rota principal de formação do
Taxol,
podendo
demonstrar
se
ocorreu
transferência de genes da planta para o fungo ou
vice-versa (2), ou até mesmo sugerir rotas
biossintéticas alternativas para o Taxol.
Os relatos de isolamento de endófitos em cultura
de tecidos de plantas medicinais tropicais é ainda
escasso; isto se deve provavelmente por que
muitos ainda os consideram como meros
“contaminantes” do meio e não como elementos
associados, importantes para a produção de
metabólitos secundários de interesse, atuando
seja por uma atividade do tipo eliciadora ou como
provedores de precursores ou do próprio
composto bioativo.
Tendo em vista a grande biodiversidade vegetal
de clima tropical em países da América Latina,
estima-se que cada espécie vegetal possua
microrganismos
endofíticos
ainda
não
classificados
e,
portanto
apresentando
diversidades genéticas capazes de prover
compostos estruturalmente diversificados e de
bioatividades pouco conhecidas, gerando um
potencial de aplicação para a produção em escala
de compostos de alto valor agregado e um novo
campo de estudo, no que se refere às interações
desses metabólitos, com o ecossistema Nesse
sentido, trabalhos recentes têm demonstrado que
estes endófitos podem ser utilizados também
como vetores para a introdução de características
de interesse biotecnológico na planta. Assim,
fungos e bactérias endofíticas poderiam ser
alterados geneticamente e, expressando genes
de interesse, serem utilizados para o controle de
fitopatógenos, promoção de crescimento vegetal
e síntese de vitaminas, aminoácidos e vacinas no
interior da planta hospedeira, colaborando assim
para aumentar os níveis de produtividade das
plantas medicinais e de outras culturas de
interesse estratégico para os países da América
Latina.
BLACPMA Vol. 3 Nº 4 Julio de 2004
Editor: José Luis Martínez (Chile)
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71
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BLACPMA Vol. 3 Nº 4 Julio de 2004
Editor: José Luis Martínez (Chile)
72
Tabela 1. Endofíticos isolados de plantas medicinais de diversas partes do planeta.
Origem
EUA (2)
Composto
Atividade
Biológica
Taxol
Anticancerígeno
Taxus spp.
Criptocina
Antifúngico
Taxus baccata
Leucinostatina
Taxus wallachiana
Ác Citônico A e B
Pestalotiopsis
microspora
Paecilomyces sp.
Aspergillus clavatus
Penicillium sp.
Terminalia morobensis
Isopestacina
Anticâncer e
antifúngico
Inibidor de
protease
Antimicótico e
antioxidante
Streptomyces sp.
Kennedia nigriscans
Endofítico
Planta Medicinal
Hospedeira
Taxomyces
Taxus brevifolia
andreanae
China*
Pericona sp.
Austrália* Pestalotiopsis guepinii
Australia*
Xylaria sp.
Austrália*
Penicillium sp.
Alemanha*
Pestalotiopsis sp.
Hungria*
Pestalotiopsis sp.
Nepal*
Pestalotiopsis
microspora
Pestalotiopsis
heterocornis
Venezuela Stegolerium kukenani
(13)
China*
Cryptosporiopsis cf.
quercina
Inglaterra
Acremonium sp.
(14)
China (15)
Cytonaema sp.
Nova
Guiné (16)
China (17)
Brasil (18)
Austrália
(19)
Patagônia
(20)
Gliocladium sp.
Torreya grandifolia
Wollemia nobilis
Wollemia nobilis
Wollemia nobilis
Taxus baccata
Torreya grandifolia
Taxus wallachiana
Stegolepsis guianensis
Taxus mairei
Torreya grandis
Melia azedarach
Eucryphia cordifolia
Brefeldina A
Meroterpenes
Citotóxico
-
Cacadumicina
Antimicrobiano
Anuleno
Antimicrobiano
FRASES
Solo ánimos enteramente bárbaros son insensibles a los atractivos del amor
Juan Barclavo
Nuestros odios también desean el sonido del conocimiento de nuestro corazón
K. J.
La tormenta hace que el roble eche raíces más profundas
George Herbert
Cuando oscurece el hombre ve las estrellas
Ralph Waldo Emerson
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Editor: José Luis Martínez (Chile
ACTIVIDAD ANTI-INFLAMATORIA DE LA
HIALURONIDASA POR LOS POLIFENOLES EN LA
FRUTA DE LA FRESA (Fragaria vesca L.)
3
TIBISAY PERNÍA, GRECIA M. CORAO ,
LILIANA ARAUJO
Recibido: 14 de Mayo de 2003
Recibido Corregido: 28 de Julio de 2003
Aceptado: 11 de Febrero de 2004
Hyaluronidase anti-inflammatory activity from the
polyphenols in the fruit of strawberry ( fragaria vesca
l. ).
ABSTRACT: This research shows the results the
anti-inflammatory effect of strawberry (Fragaria vesca
L.) is related to the antioxidant property of their
polyphenols. Chromatographic separation in silicagel
column of aqueous extraction of the fruit strawberry
was done. The fractions were labelled using paper
chromatography to identify the polyphenols present in
the berries of this plant. The anti-inflammatory activity
was evaluated by the inhibition of hyaluronidase
enzyme. Fractions activity was compared with
aspirin, which is a non-steroidal anti-inflammotory
drug that inhibe the enzyme. The hyaluroridase is
related to the inflammatory process. We found that
fraction F1 and F5 inhibit the enzyme hyaluronidase.
RESUMEN: En este trabajo se exponen los
resultados obtenidos al estudiar el efecto antiinflamatorio de la Fresa (Fragaria vesca L.) el cual
esta relacionado con las propiedades antioxidantes
de sus polifenoles. Los extractos acuosos de la fruta
de fresa fueron separados por columnas
cromatografícas en silicagel. Las fracciones fueron
reconocidas mediante cromatografía de papel con el
objeto de identificar los polifenoles presentes en los
frutos de la planta. La actividad anti-inflamatoria fue
evaluada por la inhibición de la enzima hialuronidasa.
Las fracciones activas fueron comparadas con la
aspirina, la cual es una droga antiinflamatoria no
esteroidea que inhibe la enzima. La hialuronidasa
esta relacionada con procesos antiinflamatorios.
Nosotros encontramos que las fracciones 1 y 5,
inhibe la enzima hialuronidasa.
INTRODUCCIÓN
3
Grupo de Investigación en Cultivos Celulares,
Laboratorio de Bioquímica. Facultad de Farmacia
Universidad de los Andes. [email protected]
Apartado postal 5101. Mérida, Venezuela.
Correspondencia: Dra. Grecia Méndez de Corao,
Laboratorio de Bioquímica. Facultad de Farmacia
Universidad de los Andes. [email protected]
Apartado postal 5101. Mérida, Venezuela.
La Fragaria vesca L. es una planta perteneciente a la
familia Rosaceae de unos 40 cm de alto con hojas
radicales trifoliares, flores blancas en ramillete al
extremo del tallo, su fruto es una baya, globulosa,
carnosa, roja y comestible (1), ha sido empleada por
su efecto diurético, antiinflamatorio y antioxidante por
lo que es importante en la función del cerebro,
contiene gran cantidad de
taninos, que se
encuentran en el rizoma, en el fruto y en la raíz de
la planta (2).
La
enzima
hialuronidasa
hidroliza
el
mucopolisacárido ácido hialurónico rompiendo la
unión glucosaminidica entre el carbono 1 de la
fracción glucosamina y el carbono 4 del ácido
hialurónico, ésta enzima acelera la diseminación
subcutáneas de sustancias particuladas y de
soluciones debido a la despolimerización del ácido
hialurónico. Esto determina una mayor área de
distribución de las drogas en los espacios tisulares y
favorece su absorción, también es importante su
capacidad de afectar la permeabilidad de
membranas tisulares, lo cual pudiera guardar
relación con la fertilización y la invasión bacteriana (3
y 4). El ácido hialurónico es un mucupolisacarido que
esta relacionado con la permeabilidad del sistema
vascular responsable de los procesos alérgicos e
inflamatorios (5). La inflamación es una respuesta
que puede ocurrir en cualquier tejido que
experimenta daño, ésta ayuda a prevenir que se
propague la infección (6). Tales reacciones que
ocurren en el organismo son simplemente los
resultados de una lesión provocada por un agente
físico-químico-infeccioso, la causa lesiva provocada,
como reacción del organismo, se debe a la liberación
de sustancias que son definidas como mediadoras
de la Flogosis: Bradiquinina, Prostaglandinas,
Histamina y Serotonina (7). Estas sustancias se
encuentran dentro de las células y son liberadas
sólo por efecto de una lesión, produciendo diversas
reacciones, entre las cuales predomina el aumento
de la permeabilidad de los vasos sanguíneos y su
dilatación (8). La inhibición de la enzima
hialuronidasa representa un método confiable y
preciso, donde se evita el sacrificio de animales para
su experimentación.
Gracias a que esta planta es fácilmente identificable
por sus características externas el hombre puede
recurrir a ellas para mejorar su salud, debido a que
son económicas, efectivas, de fácil manejo, de uso
popular y fuente histórica de principios activos con
actividad biológica (2). De allí la escogencia de la
fruta conocida comúnmente como fresa (Fragaria
vesca L.) para nuestro estudio, dicha fruta contiene
principios activos tales como: polifenoles, terpenos,
ácidos grasos y proteínas, las cuales presentan
propiedades terapéuticas (1 y 9). Se ha demostrado
BLACPMA Vol. 3 Nº 4 Julio de 2004
Editor: José Luis Martínez (Chile)
que la actividad antioxidante y anti-inflamatoria esta
íntimamente relacionada con los polifenoles
presentes en las frutas (10 y 11).
En ensayos espectrofotómetricos empleados para
determinar los efectos de los flavonoides (ácido
tánico, kaempferol, quercetina, y epigenina) en la
función del esperma de mono, sugirieren que los
flavonoides inhiben la hialuronidasa extraída de la
esperma. El ácido tánico y epigenina presentaron el
más bajo efectos inhibitorios que el kaempferol y
quercetina y una relación lineal significativa. Estos
resultados indican que los flavonoides son
herramientas útiles para evaluar la relación existente
entre la hialuronidasa y la función del esperma de
mono, la cual puede ser empleada en el control de la
fertilidad (12).
En este estudio nos propusimos investigar la
capacidad anti-inflamatoria que contienen los
polifenoles presentes el la Fragaria vesca L.
inhibiendo la enzima hialuronidasa.
MATERIALES Y METODOS.
Preparación del extracto de los frutos: Se
recolectaron 500 g del fruto de la fresa madura,
estos se licuaron por 1 min, con 50 ml de metanol,
luego se filtró a través de una gasa esterilizada.
Dicho extracto se empleo para obtener las diferentes
fracciones, que posteriormente fueron identificadas
empleando técnicas cromatografícas.
Separación mediante cromatografía de columna: El
extracto obtenido se mezcló con 100g de silicagel
(medio para columna, Merck) el cual fue empacado
en una columna cromatografíca de vidrio de 37 cm
de largo por 3 cm de diámetro usando metanol para
equilíbrala. La columna se eluyó con una mezcla de
polaridad creciente de metanol-agua, de las cuales
se obtuvieron 75 fracciones en total, dichas
fracciones se concentraron, sobre la base de sus Rf,
a presión reducida en un rota vapor a 45ºC.
74
Actividad Inhibitoria: Para demostrar la actividad
inhibitoria se empleo el siguiente procedimiento (14):
Hialuronato
de
potasio,
p-dimetil-aminobenzaldehido, y la enzima hialuronidasa (Sigma
Chemical Co). La actividad de la hialuronidasa fue
determinada por espectrofotometría de absorción
midiendo la cantidad
de
N-acetilglucosamina
producida por hialuronato de potasio. La enzima
hialuronidasa (0.4 unidades) fue activada por
incubación añadiéndole CaCl2 2.5 mL en buffer de
acetato 0.1M a pH 3.5 a 37° C por 20 min. El control
se preparó agregando buffer acetato en lugar de la
fracción. La reacción de la enzima se detuvo por la
adición de 0.1 ml de NaOH 0.4N y 0.1 ml de borato
de potasio 0.4 M, seguido de calentamiento en baño
de agua hirviendo por 3 min. Se agregó 3 ml de pdimetilaminobenzaldehido 67 mM a la mezcla
anterior, y se incubó a 37 ºC por 20 min. El control y
las fracciones fueron sometidos a una densidad
óptica(OD) de 585 nm y se compararon con el ácido
acetilsalicílico (aspirina) o control positivo. La OD585
del control fue 0.053 ± 0.013.
Los resultados fueron promedio de cinco
determinaciones por medio de ± SE y se analizaron
por T de Student. El efecto inhibitorio de las
fracciones sobre la hialuronidasa se calculó como
sigue: % de inhibición = [(DO585 control –DO585
muestra )/ OD585 control] x100.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Tabla 1: Resultados obtenidos de la extracción de
polifenoles presentes en extractos acuosos de la fruta de la
fresa (Fragaria vesca L.) con sus respectivos Rf, prueba
para detectar la presencia de polifenoles y pH.
Cromatografía de papel
(Rf X 100) y reveladores
M4
UV
UV
FeCl3
BA
W
AcOH
6%
BAW
Cromatografía de papel: Se le realizó cromatografía
de papel a cada una de las muestras recogidas para
ΦASA
obtener el registro de valores Rf en diferentes
C5
solventes, tales como Butanol-ácido acético-agua
*E C6
45
99
(BAW) en proporción de 4:1:5 y ácido acético al 6%
**1
21
95
v/v en agua, como revelador se uso cloruro férrico al
**2
18
92
2% (13) y UV.
**3
16
83
**4
14
70
Prueba de detección de Polifenoles con Cloruro **5
10
84
Férrico: Se mezcló una gota de cloruro férrico diluido
al 2% en metanol con una gota de cada una de las
fracciones obtenidas. La positividad se manifiesta
con la aparición de una coloración que varia de azul 4 Muestra
5
a negro.
Control
6
Extracto Crudo
•Polifenole
s
FeCl Prueb pH
a
3
AcO FeCl3
H
6%
86
95
45
88
+
+
+
+
+
+
3,2
3,4
3,5
3,5
3,5
3,7
%I
17
0
3,7
18,9
-111,3
0
-3,7
17
BLACPMA Vol. 3 Nº 4 Julio de 2004
Editor: José Luis Martínez (Chile)
75
Clave: *Extracto crudo; **Fracciones; ΦAspirina;
•Prueba para polifenoles = FeCl3 al 2 % p/v en
metanol; Solventes de corrida = BAW (butanol: ácido
acético: agua; 4:1:5), AcOH6% (Acido acético en
agua al 6 % v/v); Detección = UV (Luz ultravioleta),
Spray FeCl3 (FeCl3 al 2 % p/v en metanol).
La tabla 1 resume los resultados obtenidos de la
extracción de los polifenoles presentes en los
extractos acuosos de la Fresa (Fragaria vesca L.).
Dicha tabla nos muestra el recorrido del extracto
crudo y de las cinco fracciones en los solventes
empleados; se obtuvieron setenta y cinco fracciones,
de las cuales se recolectaron cinco fracciones de
acuerdo a la similitud que presentaban los Rf
obtenidos en la cromatografía de papel. Se les midió
el pH a cada una de las fracciones resultando el pH
ácido, también se le realizo una prueba para
identificar la presencia de polifenoles.
Figura 1: Porcentajes obtenidos sobre la Inhibición
de la Hialuronidasa.
-100
-150
(1) Albornoz
A.. (1997). Medicina tradicional
herbaria, Ed. Instituto Farmacoterapico Latino S.A.,
Caracas, Venezuela 429-430pp.
F5
F4
F3
F2
(3) Gennaro A. (1998). Rémington farmacia, Ed.
Médica Panamericana. Argentina 1924p.
F1
EXTRACTO CRUDO
-50
CONTROL
0
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
(2) Fount Q. (1962). Plantas medicinales, Ed. Labor.
Barcelona, España 320-322pp.
50
ASA
% DE INHIBICION
INHIBICION DE LA ENZIMA
HIALURONIDASA (OD585)
libres como: superóxidos, radicales hidroxilos y
peróxinitrilos (16), así como la inhibición de una gran
variedad de enzimas que incluyen ciclooxigenasa,
mieloperóxidasas, NADPH oxidasa y xantino
oxidasa, las cuales cumplen un papel esencial en la
respuesta inflamatoria (15). En vista de que la
inhibición fue solo observado por algunas fracciones,
las cuales mostraron un gran recorrido en ácido
acético, pero poco en BAW, revenado así su
naturaleza polar y de bajo peso molecular y que
además,
la
actividad
anti-inflamatoria
fue
independiente del pH, se podría inferir que los
polifenoles de la fresa, posiblemente flavonoides,
actúan de manera selectiva sobre las proteínas
produciendo posiblemente su hidrólisis o su
aglutinamiento de cualquier forma se traduciría en la
inactivación de la misma.
MUESTRA
En la figura 1 se muestran los resultados obtenidos
de la actividad inhibitoria que presenta el extracto
crudo y cada una de las fracciones, sobre la enzima
hialuronidasa, empleando como patrón la aspirina
(ASA), la cual es un anti-inflamatorio no esteroideo.
Observamos que la fracción 1, inhibe la enzima en
un 1,9% por encima de la aspirina, la fracción 5 tiene
igual poder anti-inflamatorio que la de aspirina
(17%).
CONCLUSIÓN
Las fracciones 1 y 5 de la Fresa (Fragaria vesca L.),
así como el extracto crudo presentaron acción
inhibitoria sobre la enzima hialuronidasa, igual o
superior a la aspirina, la inhibición de esta enzima,
implica una respuesta anti-inflamatoria. La actividad
anti-inflamatoria y antioxidante de los polifenoles
pareciera estar relacionado con los flavonoides,
polifenoles de
bajo
peso molecular (15),
posiblemente por sus propiedad de barrer radicales
(4) Staunton E, Todd W and Mason H, Bruggen P.
(1969). Bioquímica médica, Ed. Interamericana.
Mexico.. 361-364.
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Tannis on Hialuronidase Activation and on
Degranulation from Mesentery Mast Cells. Chem.
Pharm. Bull. 33: 5079-5081.
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Interamericana. México 156-158pp.
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Madrid. México 96-110pp.
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Ed. Interamericana. México 409p.
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España 97p.
(10) May J.M y Ghosh S. (1998). Inmunology Today.
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Antioxidant activity and biologic properties of a
procyanidin-rich extract from pine (Pinus maritime)
bark, pycnogerol. Free Radic Biol Med. 704-724.
BLACPMA Vol. 3 Nº 4 Julio de 2004
Editor: José Luis Martínez (Chile)
76
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su importancia. Facultad de Agronomía, UCV.
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+2
tannins on Ca
activated hyaluronidase. Planta
medica. 59: 381-382.
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reactive oxygen species and the protective effects of
flavonoids. Fundam Clin Pharmacol 12: 249-255.
FRASES
Mientras la magna espuma de Isla Negra,
La sal azúl, el sol en las olas te mojan,
Yo miro los trabajos de la avispa
Empañada en la miel de su universo
RECOMENDAMOS
BLACPMA
www.blacpma.cl
ASOCIACIÓN DE FITOMEDICINA DE ARGENTINA
www.plantasmedicinales.org
RED BOSQUE
www.prodar.org/redbosque
INTERNACIONAL SOCIETY OF
ETHNOPHARMACOLOGY
http://www.ethnopharmacology.org
REVISTA DE FITOTERAPIA DE ESPAñA
http://www.fitoterapia.net
BOLETÍN PROCASUR
http://www.procasur.org
CUMBRES AUSTRALES
http://www.cumbresaustrales.cl/
PABLO NERUDA
(De Cien Sonetos de Amos)
(Homenaje a los 100 años de su natalicio)
La historia engrandece a una nación
Bernardo O”Higgins
Ninguno ama a su patria porque es grande, sino
porque es suya
SOCIEDAD ITALIANA DE FITOTERAPIA
www.sifit.org
SOCIEDAD ARGENTINA DE FITOTERAPIA
www.saf.org.ar
Anónimo
¿Antes que llegara el hombre blanco, como
llamaban a América los indios?
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Pobre México, tan lejos de Dios y tan cerca de
Estados Unidos
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http://www.biodiversidadla.org
SOCIEDAD ESPAÑOLA DE FITOTERAPIA (SEFIT)
http://www.fitoterapia.net/sefit/sefit.htm
AVES DE NICARAGUA
www.avesnicaragua.org
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Editor: José Luis Martínez (Chile)
MASTER DE FITOTERAPIA DE LA UNIVERSIDAD
DE BARCELONA VIRTUAL (A DISTANCIA)
http://www.imicromat.com/fitot/index.htm
+++++
EVENTOS
VIII SIMPOSIO ARGENTINO Y XI SIMPOSIO
LATINOAMERICANO DE FARMACOBOTÁNICA
2 al 06-de Agosto de 2004
Buenos Aires, Argentina
Sede: Facultad de Farmacia y Bioquímica
Universidad de Buenos Aires
Junín 956 (1113) Buenos Aires
ARGENTINA
E-mail: [email protected]
DIPLOMADO UNIVERSITARIO DE VERANO EN
HERBOLARIA Y OTRAS TERAPIAS
ALTERNATIVAS (18a. generación)
26 de julio al 6 de agosto – 2004
Jardín Botánico Universitario
Tlaxcala, Tlax. México
Informaciones
Miguel Angel Gutierrez
E-mail: [email protected]
2ND INTERNATIONAL JOINT SYMPOSIUM
IOCD-CYTED:
CHEMISTRY, BIOLOGICAL AND
PHARMACOLOGICAL PROPERTIES OF
MEDICINAL PLANTS OF THE AMERICAS.
15-18 de agosto de 2004
Sao Pedro (Brasil)
Informaciones
[email protected]
[email protected]
V CURSO IBEROAMERICANO DE TECNOLOGIA
FITOFARMACÊUTICA
9 al 20 de Agosto – 2004
Niteroi – Río de Janeiro – Brasil
Informaciones
Dr. Nikolai Sharapin
E-mail: [email protected]
SEMINÁRIO NACIONAL DE PLANTAS
MEDICINAIS E FITOTERÁPICOS
28-30 de agosto – 2004
Brasilia – Brasil
Organizado por el Ministerio de Sanidad de Brasil
Información: [email protected]
77
3RD INTERNATIONAL ETHNOBOTANY
SYMPOSIO
16-18 de Septiembre
Portoalegre, Brazil.
http://www.costarricense.cr/pagina/PLANTAMED
II CONGRESO INTERNACIONAL DE
FARMACOLOGIA Y TERAPEUTICA
V CONGRESO NACIONAL DE LA SOCIEDAD
CUBANA DE FARMACOLOGIA
II TALLER NACIONAL DE FARMACOVIGILANCIA
12- 15 de Octubre del 2004
Escuela Latinoamericana de Medicina (ELAM)
Ciudad Habana, Cuba
Contactos
Tel: 537-217822, 217925, 271 5067
Fax: 537-336471
E-Mail: [email protected]
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XIV CONGRESO CIENTIFICO
INSTITUTO NACIONAL DE CIENCIAS
AGRÍCOLAS
9 al 12 de Noviembre de 2003
San José de las Lajas
La Habana – Cuba
www.inca.edu.cu
II ENCUENTRO MESOAMERICANO Y DEL
CARIBE DE AGRICULTORES
EXPERIMENTADORES
Y TÉCNICOS EN PRODUCCIÓN ORGÁNICA
La Habana, Cuba,
29 de noviembre al 3 de diciembre del 2004
www.inca.edu.cu
Jorge A. Arzuaga ([email protected])
María E. Dominí ([email protected])
Aquel que sabe adular sabe también calumniar
Napoleón Bonaparte
BLACPMA Vol. 3 Nº 4 Julio de 2004
Editor: José Luis Martínez (Chile)
CORRESPONDENCIA
Desde Tucumán, Argentina
Estimado José Luis: Felicitaciones por este nuevo
Boletín. Cordiales saludos de María Elena
Mendiondo, Universidad Nacional de Tucumán (29
de Abril. E-mail: [email protected]
Desde Lima, Perú
Estimado José Luis, una vez mas agradeciéndote el
envío del Boletín. Es admirable el empeño y esfuerzo
que hacen en conjunto. Desde Lima un fuerte abrazo
y los mejores deseos. Mark Hein, Peruvian Heritage
S.A.C. (3 de Mayo), E-mail: [email protected]
Desde Nuevo León, México
Estimado José Luis Martínez, gracias por enviarme
el BLACPMA Volumen 3 Nº 3, me parece muy
interesante, no solo por los artículos que se publican,
sino también por la información de eventos y la
sección de "recomendaciones", que en particular me
fue de gran ayuda. Me gustaría, de ser posible
obtener los volúmenes anteriores. Gracias y
felicidades! Dra. Rosalba Ramírez, Departamento de
Farmacología y Toxicología, Facultad de Medicina,
UANL,
México
(3
de
Mayo),
E-mail:
[email protected]
Desde La Plata, Argentina
Gracias por el envío, José Luis, Excelente, como de
costumbre.Cordiales
saludos,
Nestor
Caffini,
Universidad Nacional de La Plata (3 de Mayo), Email: [email protected]
Desde Chubut, Argentina
Estimado José Luis: Gracias por el envío. Agradezco
además que hayas publicado nuestra humilde
contribución. Seguiremos en contacto, Un abrazo
desde Esquel, Chubut, Patagonia Argentina. Silvia B.
González, Universidad de la Patagonia (4 de Mayo).
E-mail: [email protected]
Desde Lima, Perú
Estimado José Luis: Acuso el recibo del ultimo
ejemplar del BLACMA y asimismo recibe mis
sinceras felicitaciones por su amplia difusión e
interesante contenido, un abrazo a ti, Elena Li (4 de
Mayo), E-mail: [email protected]
78
Laboratorio Vitaplant
[email protected]
(5
de
Mayo),
E-mail:
Desde Santiago, Chile
Estimado José Luis: Deseo darte las gracias por la
gentileza de enviarme BLACPMA, sus últimos
números.
Además
expreso
mis
sinceros
agradecimientos por resaltar dentro de los eventos
principales el Curso Internacional de Postgrado
"Neuropsicología Clínica Avanzada" que estamos
dictando. Creo que este curso se está realizando
dentro
de
un
marco
de
verdadero
interés y progreso dentro de la Farmacología Clínica
de actualidad. Me despido con un gran saludo y con
la cordialidad de siempre, Roberto Gallardo,
Universidad de Chile (7 de Mayo)
E-mail: [email protected]
Desde Managua, Nicaragua:
Hola! José Luis, te agradezco que siempre nos
mantengás informados tanto del BLACPMA, como de
los eventos. Maria Engracia Medina, TRAMIL-GEF (7
de Mayo). E-mail: [email protected]
Desde Amravati, India:
My dear Friend, Thanks for sending the BLACPMA
Vol.3 Nº 3. You are doing a very good job.
Congratulations. Mahendra Rai, Amravati University
(9 de Mayo). E-mail: [email protected]
Desde Lima, Perú:
Estimado José Luis: Te agradezco nuevamente el
envío de la última publicación y te hago saber que lo
he reenviado a varios colegas quienes han mostrado
su interés por ella. Muchas felicitaciones y
felicidades, Olga Lock Pontificia Universidad Católica
del Perú (10 de Mayo), E-mail: [email protected]
Desde Yucatán, México:
Estimado José Luis, de nuevo te reitero mi reconocimiento, al igual que al resto del equipo, que hace
posible el proyecto del BLACPMA. Larga vida y un
gran abrazo. Martha Méndez, Centro de Investigación Científica de Yucatán (11 de Mayo). E-mail:
[email protected]
Desde Illinois, Estados Unidos
José
Luis
Martínez,
Editor
BLACPMA:
Gracias de nuevo por el Boletín 3/3. Felicitaciones
por su gran y persistente trabajo en informarnos del
progreso de estudios de plantas medicinales. Le
apoyo en su trabajo. Con cordiales saludos. Djaja
Desde Mérida, Venezuela
Doel Soejarto, Illinois University (11 de Mayo). EEstimado José Luis gracias y felicitaciones por el Nº mail: [email protected]
3 de BLACPMA. El articulo del Dr. Rufus Akomolafe
en Nigeria, validando una planta local, Cassia Desde Covilhã, Portugal:
podocarpa versus Cassia acutifolia, es un buen Acuso el recibo de vuestro Boletín que leo con
ejemplo en pro del estudio de nuestra flora mucho interés y en el cual encontramos informacioautoctona. Saludos desde Venezuela, Luis Doreste, nes muy importantes, un saludo, Prof. Jesús M.
BLACPMA Vol. 3 Nº 4 Julio de 2004
Editor: José Luis Martínez (Chile)
79
López Rodilla, Universidade da Beira Interior (11 de
Mayo), E-mail: [email protected]
Desde Bolivia:
Estimado José Luis: Muchas gracias por realizar el
envío de la revista, el cual recibimos con mucha
atención. Un cordial saludo, Gloria Saavedra,
Universidad Mayor de San Simón (11 de Mayo).
E-mail: [email protected]
Un optimista ve una oportunidad en toda
calamidad; un pesimista ve una calamidad en
toda oportunidad.
Winston Churchill
La mujer tiene sólo un camino para superar al
hopmbre: ser cada día más mujer
Angel Ganivet
Quiero ser el hermano del hombre blanco,
Desde Buenos Aires, Argentina:
No su hermano político
Estimado José Luis, Acuso recibo del BLACMA
Martín Luther King
Vol3N°3. Ya mismo lo voy a leer......... Gracias por
todo lo que hacen por nosotros........ Rita Zeichen,
A una madre se la quiere siempre con igual
ANMAT (14 de mayo)
cariño; y a cualquier edad se es niño cuando una
E-mail: [email protected]
madre se muere
José María Pemán
Han acusado recibo entre otros: Miguel Angel
Gutierrez (México), María Eugenia Letelier (Chile),
Thereza C. M. De Lima (Brasil), Sergio Mora (Chile), No progresas mejorando lo que ya esta hecho,
Francesca Faini (Chile), Silvia Erazo (Chile), Meter Sino esforzándote por lograr lo que aún queda
Houghton (Inglaterra), Celso Cerda (Chile), José María por hacer.
Barbosa (Brasil), María Eugenia Bruzzone (Chile), Cecilia
Khalil Gibran
Mosso (Chile), Glauco Morales (Chile), Pedro Melillo de
Magalhaes (Brasil), Mariana Meckes (México), Mario Me gustaría emplear toda mi vida en viajar,
Baraldi (Italia), Patrick Moyna (Uruguay), Luis Musalem Si alguien pudiera prestarme después otra vida
(Chile), Rubén Malizia (Argentina), Mélica Muñoz para pasármela en casa.
(Chile), Grecia Mendez (Venezuela), Ana Ladio
William Hazlitt
(Argentina), Gabriela de Battista (Argentina), Amarilda
Luque (Colombia), Claudio Ladrido (Chile), Francesco de
Simona (Italia), Daniel Lorenzo (Uruguay), Alberto El amor es la mas fuerte de las pasiones, porque
Jiménez (Bolivia), Anibal Amat (Argentina), Mildred ataca al mismo tiempo a la cabeza, al cuerpo y al
Garcia (Costa Rica), Igor Lemus (Chile), Patricia corazón
Voltaire
Landázuri (Colombia), Bruce Cassels (Chile), Hugo
Barrera (México), Rita Zeichen (Argentina), Nilka Torres
(Japón), Emir Valencia (Chile), Katia Velásquez (Chile), Una multa es un impuesto por hacer las cosas
Carlos Vicente (Argentina), Claudio Nuñez (Chile), Carles mal. Un impuesto es una multa por hacer las
Roersch (Rep. Dominicana), Ana Molina (Argentina), cosas bien.
Anónimo
Ximena Polanco (Chile), Mirta Parada (Chile), Arnaldo
Bandoni (Argentina), María Medina (Nicaragua).
La vida es como una leyenda: no que sea larga,
sino que sea bien narrada, es lo que importa
FRASES
Séneca
Quien solo busca el aplauso de los demás,
Pone su felicidad en manos ajenas
Oliver Goldsmith
Dios no viene cuando lo llamas, pero siempre
llega a tiempo
Anónimo
Sé generoso con el dinero: es reemplazable.
Gasta tu tiempo sabiamente: no lo es
Charley Reese
La belleza complace a los ojos;
La dulzura encadena el alma
Vivimos bajo el mismo cielo,
Pero no tenemos el mismo horizonte
Konrad Adenauer
La razón y el amor son eternos enemigos
Pierre Corneille
El que pide con timidez invita a negar
Séneca
FIN
Voltaire