Protocolo - Universidade dos Açores

MEDIÇÃO
RIGOROSA
DE
VOLUMES
–
COMO
UTILIZAR
UMA
MICROPIPETA
Para medir rigorosamente volumes pequenos, recorre-se ao uso de micropipetas. Para
além do rigor na medição dos volumes, as micropipetas utilizam pontas descartáveis, o
que também é importante para ter a certeza de que não vamos misturar resíduos ao que
estamos a medir.
Mas as micropipetas só medem volumes correctos quando são bem utilizadas. A sua
utilização correcta é indispensável quer para que se mantenham em bom estado (são
muito caras), quer para ter a certeza de que estamos a medir o volume certo.
No laboratório de Bioquímica da Universidade dos Açores temos micropipetas de duas
marcas: Gilson e Boeco. Na Fig. 1 pode ver o seu aspecto:
Fig. 1. Uma micropipeta Pipetman, da marca Gilson (à esquerda) e outra da marca Boeco (à direita).
Para pipetar correctamente, o procedimento é o seguinte:
1. Escolher a micropipeta certa. Pode parecer simples, mas é um erro frequente nos
alunos quando não estão habituados. Para saber os volumes que se pode pipetar com
cada uma, tem que (i) identificar a micropipeta e (ii) saber quais os volumes que
pode medir com ela.
Para (i) identificar uma micropipeta, veja qual é a marca (para além das imagens da
Fig.1, está escrito na micropipeta). A seguir, repare no modelo: na marca Gilson, o
1
número que está no topo da micropipeta (no botão onde se carrega) refere-se ao volume
máximo, em µL, que pode pipetar com ela (e ao modelo, por exemplo, se tem um “20” é
uma “P20”, se tiver um 1000 é uma P1000); na marca Boeco é mais fácil: a gama de
volumes que se pode medir com cada micropipeta está escrita de lado.
Agora veja as tabelas seguintes, retiradas da informação dos fabricantes destas
micropipetas:
Tabela 1. Gama de volumes permitidos para as micropipetas Pipetman da marca Gilson.
Tabela 2. Gama de volumes permitidos para as micropipetas da marca Boeco.
2. Marcar o volume na micropipeta, rodando o seleccionador de volume (é diferente nas
duas marcas). Nas Gilson é uma “roda” preta, nas Boeco é a parte superior do êmbolo
onde se carrega, a amarelo.
O volume está indicado num visor: nas Gilson, lê-se de cima para baixo, numa Boeco,
da esquerda para a direita:
1
2
5
Numa Gilson P20, este visor indicaria 12,5 µL. Se fosse numa P200, seriam
125,0 µL, e numa P5000 1250 µL (ou seja, 1,25 mL).
Numa Boeco, seria assim:
1 2 5
2
Que micropipeta escolheria para pipetar com maior precisão os volumes seguintes:
Volume a medir (mL)
Volume a medir (µL)
Modelo Gilson (P-?)
Marque na escala
Modelo Boeco (?-?)
Marque na escala
0.100
0.025
4.00
0.002
3
0.45
0.200
0.50
4
3. Coloque a ponta na micropipeta (tem de escolher a ponta certa)! Pressione o êmbolo até à 1ª
posição (Fig. 2) e mergulhe no líquido a pipetar.
4. Aspire de modo controlado (se for demasiado rápido, poderão entrar bolhas de ar e a quantidade
medida pode estar errada).
5. Pressione o êmbolo até á 2ª posição (Fig. 2) para expelir todo o líquido.
Fig 2. Posições do êmbolo da micropipeta: à esquerda, 1ª posição, para aspirar o líquido. À direita, a 2ª posição, para
expelir o líquido. Para a 2ª posição é preciso carregar com mais força.
4. Se vai pipetar outro líquido diferente ou sujou a ponta da micropipeta, pode eliminá-la usando o
ejector de pontas (atenção, a P5000 não tem):
5
AGORA VAMOS EXPERIMENTAR:
Micropipeta
Vol. medido de
cada vez
Nº de vezes que
pipetou
Volume que
devia obter
Volume obtido
6