HDL COLESTEROL PP rev 04

HDL COLESTEROL
1. FINALIDADE
Reagente precipitante para determinação de HDL colesterol no soro ou
plasma.
2.INTRODUÇÃO
O Colesterol é um esteróide sintetizado a partir da acetil CoA e atua como
intermediário metabólico para outros esteróides, ácidos biliares e vitamina
D. A concentração do colesterol total no sor o tem sido associada ao
metabolismo e moléstias coronarianas. O colesterol é transportado por
três lipoproteínas, lipoproteína de alt a densidade (HDL Colesterol),
lipoproteína de baixa densidade (LDL Colesterol) e lipoproteína de muito
baixa densidade (VLDL Colesterol).
3. IMPORTÂNCIA CLÍNICA
A determinação do colesterol ligado às lipoproteínas de alta densidade
(HDL) constitui uma prova diagnóstica de muita utilidade para o
estabelecimento de fatores de risco de doenças coronarianas. Sabe-se que
o colesterol ligado a lipoproteínas de alta densidade não é acumulado nas
paredes arteriais, logo, quanto maior for a sua concentração sangüínea,
menor será o risco da ocorrência de doenças coronarianas obstrutivas. Para
se estabelecer a taxa de risco correta e exata, outros elementos clínicos e
laboratoriais devem ser avaliados em conjunto.
4. AMOSTRA
a- Preparo do paciente
O paciente deve ser orientado a manter um jejum de 12h antes da coleta.
b- Tipos de amostra
- Soro: amostra de escolha , recém-obtido e não hemolisado, separado do
coágulo o mais rapidamente possível após sua coleta.
- Plasma: pode ser usado o plasma com heparina ou EDTA . Plasmas
fluoretados e oxalatados não devem ser usados pois induzem a valores
artificialmente baixos quando em contato com o reagente de cor para
doseamento do colesterol.
c- Critérios de rejeição
Rejeitar amostras hemolisadas ou que apresentem sinais de contaminação
microbiana.
d- Armazenamento e estabilidade
O HDL colesterol presente na amostra mantém-se estável até 24 horas em
temperatura ambiente e em geladeira (2-8 oC) até 3 semanas não
devendo ser congelado (0 oC ou abaixo) .
e- Precauções e cuidados especiais
-As amostras visivelmente lipêmicas (leitosas ou turvas) ou com triglicérides
> 400 mg/dL deverão ser diluídas em partes iguais de solução fisiológica
(NaCl 0,85%) e após esta diluição, serem submetidas ao processo de
precipitação, e o resultado assim obtido deverá ser multiplicado por 2;
- Todas as amostras devem ser manipuladas com extrema cautela, pois
podem veicular diversas doenças infecto-contagiosas (hepatite, SIDA etc.).
Seu descarte deve ser feito preferencialmente após sua autoclavação
devendo-se evitar sua eliminação diretamente no meio ambiente. Igual
cuidado se recomenda no descarte de outros materiais como ponteiras
plásticas, agulhas e seringas.
vencimento expressa em rótulo, desde que isentos de contaminação
química ou microbiana.
e- Precauções e cuidados especiais
- Os reagentes não devem ser congelados bem como expostos à luz direta.
- Os reagentes destinam-se ao uso in vitro, logo, deve-se evitar seu contato
com a pele, olhos e mucosas.
6. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS NECESSÁRIOS (porém não fornecidos)
- Espectrofotômetro , fotocolorímetro ou equipamento automático;
- Banho-Maria;
- Cronômetro;
- Conjunto para determinação de colesterol total;
- Centrifugador;
- Pipetas graduadas;
- Micropipetador.
7. PROCEDIMENTO TÉCNICO (para equipamentos manuais e semiautomáticos)
- Transferir para um tubo de hemólise (12x75 mm) uma alíquota de 0,5 mL
de amostra, acrescentar 0,05 mL de HDL reagente de precipitação agitando
a seguir por 10 segundos em um vórtex;
- Centrifugar a 3500 rpm por 10 minutos, de forma a obter um sobrenadante
de aspecto límpido;
- A partir deste ponto, usa-se o sobrenadante límpido para a reação de cor
conforme segue:
BRANCO
PADRÃO TESTE
Reagente Colesterol Enz Color
1,0 mL
1,0 mL
1,0 mL
Padrão HDL colesterol
0,05 mL
Sobrenadante
0,05 mL
Misturar suavemente e incubar em banho-maria a 37 oC por 10 minutos.
Ler a absorbância dos tubos Padrão e Teste acertando o zero com o Branco.
A cor desenvolvida é estável por 30 minutos.
- Precauções e cuidados especiais
- Para maior detalhamento técnico sobre a reação de cor, recomenda-se a
leitura do procedimento de uso (bula) que acompanha o kit para
doseamento do colesterol total;
- Amostras com altos valores de colesterol total e baixos valores de HDL
colesterol, podem apresentar flutuação do precipitado, devendo ser
diluídas como exposto no ítem amostra;
- Caso o sobrenadante mantenha-se turvo ou a temperatura ambiente
ultrapasse 25 oC, colocar o tubo em banho de água gelada (2-5oC) por 15
minutos e repetir a centrifugação;
- Caso a solução padrão sofra contaminação com água (resíduos de pipeta
etc.) terá sua concentração alterada pela formação de peróxidos;
- Amostras com taxa de triglicérides superior a 400 mg/dL devem ser diluídas
em solução salina (NaCl 0,85%) e esta diluição deverá ser precipitada e
analisada. O resultado será multiplicado pelo fator de diluição.
8. CÁLCULOS
Para se determinar a concentração de HDL colesterol na amostra
analisada, usar a seguinte fórmula:
HDL colesterol em mg/dL =
Absorbância do sobrenadante X 50 x 1,1
Absorbância do padrão HDL col.
5. CARACTERÍSTICAS GERAIS DO PRODUTO
a- Princípio
A separação do HDL colesterol é baseada na seletividade dos íons
fosfotungstato e magnésio que atuam precipitando todas as lipoproteínas
exceto a fração HDL. Após centrifugação, o HDL colesterol contido no
sobrenadante é determinado pelo mesmo método usado para o colesterol
total.
b- Reagentes
- HDL reagente de precipitação: Ácido fosfotúngstico 4%, NaOH 1M
combinados com MgCl2 e agente surfactante.
- Padrão de HDL colesterol: Solução padrão contendo 50 mg/dL de
colesterol em etilenoglicol monometiléter e ativadores.
Aonde: 50 é a concentração do padrão em mg/dL e 1,1 o fator de
diluição (amostra+precipitante).
Pode-se alternativamente recorrer ao uso do fator de calibração para se
determinar a concentração de colesterol na amostra analisada, porém, é
recomendável a aferição ao menos diária deste fator por meio de padrão ou
calibrador (neste caso usar a fórmula acima descrita substituindo a
concentração do padrão pela do calibrador).Como o padrão ou calibrador
não são diluídos, para efeito de cálculo considera-se o seu próprio valor
sem multiplicar por 1,1.
50
Fator =
Absorbância do padrão HDL colesterol
HDL colesterol em mg/dL = Absorbância do teste x fator
c- Armazenamento e estabilidade
Todos os componentes do conjunto se mantém estáveis por até 72h em
temperatura ambiente para fins de transporte. No laboratório devem ser
mantidos em geladeira (2-8 oC), aonde permanecem estáveis até a data de
9. RESULTADOS
- Unidade utilizada: mg/dL
- Valores de referência
Pacientes com valores de HDL colesterol superiores a 55 mg/dL são
enquadrados na categoria de baixo risco, ao passo que, na faixa entre 35 e
55 mg/dL risco médio, e abaixo de 35 mg/dL como alto risco em termos de
doenças coronarianas. Pode-se estabelecer uma relação entre o colesterol
total e o HDL colesterol que conduza ao cálculo de uma taxa de risco,
conforme a fórmula abaixo:
Taxa de Risco =
Colesterol total em mg/dL
HDL colesterol em mg/dL
Através da taxa de risco calculada se estabelece o risco real para doenças
coronarianas:
RISCO
BAIXO
MÉDIO
ALTO
MUITO ALTO
HOMEM
3,43
4,97
9,55
23,39
MULHER
3,27
4,44
7,05
11,05
10. LIMITES DO MÉTODO
- Limite de diluição
A presente metodologia apresenta linearidade até se atingir uma
concentração de 125 mg/dL de HDL colesterol na amostra analisada. Acima
deste limite, a amostra deve ser diluída em solução fisiológica (NaCl 0,85%)
e novamente analisada , devendo o resultado obtido ser multiplicado pelo
fator de diluição.
- Interferentes
Ler o ítem referente aos interferentes de reação na dosagem do colesterol
total. Recomenda-se a leitura dos textos de Tietz e Young para maiores
informações.
11. CONTROLE DA QUALIDADE
- Materiais necessários
Amostras de controle originárias de pool de soros preparados pelo próprio
laboratório e/ou controles de origem comercial, mapas e gráficos de
controle.
- Periodicidade
Ao iniciar o trabalho com um novo lote de reagentes recomenda-se avaliar os
mesmos quanto a precisão e exatidão. Durante a execução da rotina,
recomenda-se avaliar uma amostra de controle em paralelo com cada
bateria de testes.
- Interpretação e avaliação
Como o objetivo do controle de qualidade é garantir que os resultados
liberados sejam compatíveis com a realidade do paciente, o laboratório deve
definir quais são os parâmetros de controle adotados bem como as medidas
para possíveis ações corretivas.
expressa em rótulo. Os certificados de análise de cada lote podem ser
solicitados junto ao SAC - Serviço de Assessoria ao Cliente, bem como em
caso de dúvidas ou quaisquer problemas de origem técnica, através do
telefone 0800-410027. Quaisquer problemas que inviabilizem uma boa
resposta do produto, que tenham ocorrido comprovadamente por falha da
Laborclin serão resolvidos sem ônus ao cliente conforme o disposto em lei.
14. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Liebermann, C., Ber, Deutsch Chem, 18, 1803 1885.
2. Burchard, H., Chem, Zentralb, 61, 21 1890.
3. Zlatkis, A., Zak, B. and Boyle, A. N., J. Lab. Clin. Med., 41, 486 1953.
4. Flegg, H. M. Ann. Clin. biochem. 10, 79 1973.
5. Richmond, W., Scand J. Clin. Lab. Invest., 29, Suppl. 26, abstr. 3,25
1972.
6. Richmond, W., Clin. Chem., 19,1350 1973.
7. Allain, C.C., Poon, L. S., Chan, C. S. G., Richmond, W., and Fu, P. C., Clin.
Chem., 20, 470 1974.
8. Tarbutton, P. N. and Gunter, C. R., Clin. Chem., 20, 724 1974.
9. Burstein, M., and Scholnick, H. R., “Adv. Lipid Res.” 11:67 1973.
10. Castelli, W. P., et al: “Circulation”, Supplement, 11:51 and 52 1975.
11. Castelli, W.P., and Levitas I.M.: “Current Prescribing”, 6:39 1977.
12. Gordon, T., et al: “Am. J. Med.”, 62:707 1977.
13. Quality Control Data Files Laborclin - Produtos para Laboratórios Ltda.
14. Lopes-Virella, M.F., est al: “Clin. Chem.”, 23:2 1977.
15. Bulletin, Serum Cholesterol Levels of Adults, Nati Center for Health
Statistics, Series II, Nº 22, p. 1, March, 1967 (Wash., D.C.).
16. Roy A. V.: Personal Comunication 1984.
17. Wright, I. S.: “JAMA” 236:261 1976.
18. Keys, A. et al, Clin Chem. 1, 24 1955.
19. Stulb, S., et al, Am. J. Clin. Nutr., 16, 238 1965.
20. Kabara, J., at al, Anal. Chem., 33, 305 1961.
21. Young, D. S. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory
Tests. 2nd edition AACC Press, 1997.
22. Young, D. S. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4th edition
AACC Press, 1995.
23. Tietz, N. W. Clinical Guide to Laboratory Tests. 3rd edition. Ed. Saunders,
1995.
24. National Cholesterol Education Program: Report of the expert panel on
blood cholesterol levels in children and adolescents. Pediatrics, 89: 529584, 1992
25. The Expert Panel: Report of the National Cholesterol Education Program
Expert Panel on detection , evaluation and treatment of high blood
cholesterol in adults. Arch. Int. Med., 148: 36-39, 1988.
15. INFORMAÇÕES COMPLEMENTARES
Os protocolos de programação para equipamentos automáticos podem ser
solicitados ao SAC.
16. REGISTRO NO MINISTÉRIO DA SAÚDE: 100.970.10115
17. APRESENTAÇÃO
Kit contendo 10 mL de precipitante para HDL-Colesterol e um frasco de
solução padrão.
12. ESTATÍSTICAS DO MÉTODO
A precisão foi estabelecida através do doseamento de duas amostras de
soro controle, 5 vezes ao dia durante 4 dias, obtendo-se os seguintes
resultados:
Soro 1 (média 23,7 mg/dL): desvio padrão 1,22 mg/dL (C.V. 4,5%)
Soro 2 (média 58,5 mg/dL): desvio padrão 1,95 mg/dL (C.V. 2,33%)
A exatidão foi determinada pela análise de regressão linear de 45 amostras
de soro com faixa de variação entre 18 e 68 mg/dL contra um método
proveniente de outro fabricante, obtendo-se um coeficiente de correlação
0,993 e a seguinte fórmula:
HDL colesterol Bio Diagnóstica = 0,997 x Valor do outro método + 0,32
13. GARANTIA DA QUALIDADE
A Laborclin obedece o disposto na Lei 8.078/90 - Código de Defesa do
Consumidor. Para que o produto apresente seu melhor desempenho, é
necessário :
- que o usuário conheça e siga rigorosamente o presente procedimento
técnico;
- que os materiais estejam sendo armazenados em condições adequadas;
- que os equipamentos e demais acessórios necessários estejam em boas
condições de uso , manutenção e limpeza;
Antes de ser liberado para venda, cada lote do produto é submetido a testes
específicos, que são repetidos periodicamente até a data de vencimento
Dúvidas, sugestões
e/ou reclamações
ligue para o nosso:
LB 170118- Rev. 04 - 07/04
Laborclin produtos para laboratórios ltda.
R. Cassemiro de Abreu, 521 Pinhais/PR - CEP. 83.321-210
CNPJ: 76.619.113/0001-31 - Insc.Est.: 13700129-26
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