5ª aula PL_P Saúde_BH 1_Biol Celular

Psicologia e Saúde
Unidade curricular: Biologia Humana I
5ª aula PL
MICROMETRIA
Objectivos:
1) Determinação do coeficiente micrométrico para as obj. de 4x, 10x, 40x e 100x.
2) Medição do lado de um quadrado de uma grelha de microscopia electrónica.
3) Resolução de problemas de micrometria.
4) Resolução de problemas em que se pretende a determinação de áreas e superfícies celulares.
Micrometria: Capítulo da microscopia que possibilita determinar as dimensões de peças ou
microorganismos de tamanho mínimo, fazendo a medição em micra (μm).
Micrómetro objectivo: É uma régua graduada com 1 mm e dividida em 100 partes iguais, que se
coloca na platina:
1 mm = 1000 μm --------------------- 100 div.
x --------------------- 1 div.
Logo, cada divisão do micrómetro objectivo vale 10 μm.
Ocular micrométrica: É uma ocular na qual está gravada uma escala arbitrária (micrómetro
ocular) com traços paralelos e intervalos iguais.
Calibrar a ocular micrométrica: Determinar o valor de cada intervalo da ocular micrométrica.
Coeficiente micrométrico: É o valor em micra de cada divisão do micrómetro ocular para um
determinado sistema ocular-objectivo. Coeficiente micrométrico é
sinónimo de valor micrométrico da objectiva.
Determinação dos coeficientes micrométricos:
1. Coloque em posição a objectiva de 4x.
2. Depois de iluminar o microscópio, coloque o micrómetro objectivo na platina e substitua uma
das oculares pela ocular micrométrica.
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3. A escala do micrómetro objectivo constitui o objecto a observar. A escala do micrómetro ocular
e a imagem do micrómetro objectivo encontram-se no mesmo plano de focagem, surgindo
sobrepostas na imagem.
4. Rode a ocular micrométrica até que as duas escalas fiquem em paralelo, com os zeros para o
mesmo lado.
5. Faça coincidir os zeros das duas escalas exactamente (Fig. 8).
Fig. 8 - Os micrómetros ocular e objectivo.
6. Exceptuando os zeros, procure três pontos de intersecção perfeita (permite fazer-se uma média
diminuindo assim o grau de erro) entre as duas escalas e anote esses valores.
7. Determine o coeficiente micrométrico.
8. Repita o mesmo para as objectivas de 10x e de 40x.
Exemplo: Para uma determinada objectiva, se a 19 divisões da ocular micrométrica correspondem
30 divisões do micrómetro objectivo, qual o valor do coeficiente micrométrico?
19 div. oc. micr. --------------------- 30 div. micr. ob. x 10 μm
1 div. “
x = 15,80 μm
--------------------- x
Resp.: Cada intervalo do micrómetro da ocular mede 15,80 μm.
Medição de um objecto:
Conhecido este valor – coeficiente micrométrico – quando se pretende medir qualquer objecto
usando aquela objectiva, bastará substituir o micrómetro objectivo pela preparação que contém o
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objecto em causa e contam-se as divisões da ocular micrométrica nas quais está compreendido o
objecto. Multiplica-se o número de divisões pelo valor de cada divisão.
Exemlo: Se o objecto ocupar 20 divisões multiplica-se por 15,80 μm, logo:
20 divisões x 15,8 μm = 316 μm
Resp.: 316 μm será o valor real do objecto em questão.
Problemas de micrometria:
1º Problema: Para determinado sistema ocular-objectiva, 20 divisões da ocular micrométrica
correspondem a 6 divisões do micrómetro objectivo. Qual é o valor do coeficiente micrométrico?
20 div. oc. micr. -------------------------- 6 div. micr. obj. x 10 μm = 60 μm
1 div. oc. micr. ------------------------- x = 60 / 20 = 3 μm
Resp.: O valor do coeficiente micrométrico é de 3 μm.
2º Problema: O coeficiente micrométrico de determinado sistema ocular-objectiva é de 20 μm e o
comprimento de uma peça é de 100 μm.
a) Quantas divisões ocupa a peça?
Comprimento da peça = nº de div. x coef. micr.
100 μm = y x 20 μm
y = 100 / 20 = 5 divisões.
Resp.: A peça ocupa 5 divisões.
b) Qual o comprimento dessa mesma peça quando o coeficiente micrométrico é de 10 μm e a peça
ocupa 10 divisões do micrómetro ocular?
Resp.: 100 μm pois, se a peça é a mesma, tem de medir o mesmo.
c) Se o valor do coeficiente micrométrico da alínea a) é maior do que o da alínea b), a qual dos
dois corresponde uma maior ampliação da objectiva?
Resp.: O da alínea b) uma vez que à medida que a ampliação aumenta, o coeficiente micrométrico
da objectiva diminui.
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3º Problema: Um objecto ocupa no micrómetro ocular 40 divisões e o valor do coef. micrométrico é
igual a 2,3 μm. Qual será o número de divisões ocupadas por esse mesmo objecto no micrómetro
ocular se o coef. micrométrico for de 23 μm?
Comp. da peça = 40 x 2,3 = 92 μm
Coef. micr. = Comp. da peça / nº de divisões
23 = 92 / x
x = 4 divisões
Resp.: O nº de divisões ocupadas será 4.
Câmara clara:
É um dispositivo que se adapta ao
microscópio para desenhar, sendo
constituído por um sistema de dois
espelhos planos ou dois prismas de
reflexão total (Fig. 9). Este dispositivo
projecta
no
plano
da
imagem
intermediária, uma imagem real e
direita da folha de desenho e da ponta
do lápis.
Fig. 9 - A
câmara clara.
Um observador, olhando através da ocular do microscópio, vê simultaneamente a preparação
microscópica e as imagens dos pontos de um plano exterior ao microscópio. Através da câmara
clara pode-se determinar o valor real de um objecto desenhado com ampliação conhecida.
Exemplo: a ampliação do desenho, para determinado sistema ocular-objectiva, é de 1000x, e o
desenho do objecto mede 5 mm (5.000 μm). Qual é a medida real do objecto?
L = 5.000 μm / 1000
L = 5 μm
Resp.: A medida real do objecto é 5 μm.
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Problema: Desenhou-se um objecto com a câmara clara, usando-se uma ampliação de 600x. Se o
tamanho real do objecto desenhado é de 18 μm, qual é o tamanho do seu desenho em mm?
Determinação de áreas e superfícies celulares
Para determinar as dimensões (por ex. diâmetros, comprimentos, etc.) e áreas reais de certos
organelos a partir de fotografias tiradas ao ME, utilizam-se dois métodos, um que faz uso de uma
ocular graduada (escala micrométrica ocular) e outro que usa o método da quadrícula.
1. Escala micrométrica ocular
Este método serve para se determinarem diâmetros, comprimentos, etc., empregando uma ocular
graduada em mm.
Conta-se o número de divisões que o organelo ocupa e entra-se em linha de conta com a ampliação
da respectiva fotografia.
Exemplo: Suponhamos que a ampliação final na fotografia é de 15.000 e que o organelo nesta
fotografia apresenta um comprimento de 12 mm. Neste caso, o comprimento real será
L = 12.000 μm / 15.000
L = 0,8 μm
2. Método da quadrícula
Este processo utiliza-se para determinar as áreas dos organelos. Tem de se determinar a área de
cada quadrado que constitui a quadrícula, de acordo com a ampliação da fotografia que contém o
organelo cuja área pretendemos saber. Consideremos uma fotografia com uma ampliação de 15.000
e uma quadrícula cujo lado do quadrado mede 5 mm.
L = 5.000 μm / 15.000
L = 5 / 15 = 0,33 μm (lado do quadrado em relação a esta fotografia
logo, a área de cada quadrado da quadrícula será:
A = 0,33μm x 0,33 μm = 0,109 μm2
Seguidamente, sobrepõe-se a quadrícula ao organelo de modo a que a esquadria periférica se ajuste
em dois dos lados aos bordos do organelo, conta-se o nº de quadrados que ele ocupa e multiplica-se
este número pela área do respectivo quadrado.
A (organelo) = nº de quadrados x 0,109 μm2 = Y μm2
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Problemas:
1) Considere a quadrícula da Fig. 10 e meça a área do nucléolo (Nc) (círculo irregular inscrito na
quadrícula), sabendo que o desenho corresponde a um aumento de 15.000x:
Nº de intercepções (esquinas dos quadrados) dentro do Nc = 20
A (Nc) = 20 x 0,109 μm2 = 2,18 μm2
Resp.: A área do nucléolo é 2,18 μm2.
2) Determine agora a área do núcleo (Nu).
Sobrepondo a quadrícula ao organelo, verificamos que o núcleo (Nu) ocupa 192 quadrados.
Como a área de cada um é de 0,109 μm2 logo,
A (Nu) =192 x 0,109 μm2 = 20,93 μm2
Resp.: A área do núcleo é 20,93 μm2.
3) A mitocôndria (Mi) representada sofreu uma
ampliação de 50.000 x. Qual a área deste
organelo?
Fig. 10 – Microfotografia de uma mitocôndria.
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