URÉIA ENZ COLOR rev 05.cdr

URÉIA ENZ COLOR
1. FINALIDADE
Teste enzimático colorimétrico para o determinação da uréia em fluidos
biológicos.
destilada ou deionizada com condutividade inferior a 0,5 µS/cm . O reagente
Uréia Enz Color, após reconstituído é estável em geladeira por até 10 dias.
2. INTRODUÇÃO
A uréia é o principal produto do catabolismo proteico, formada a partir do
metabolismo do radical amino proveniente dos aminoácidos. Por meio da uréia,
o organismo evita a circulação do nitrogênio na forma de amônia ou outros
compostos tóxicos.
Preparo e conservação do Reagente de Cor
Dissolver cada frasco contendo o reagente de cor com 250 mL de água
deionizada (com condutividade inferior a 0,5 mS/cm) indicada em rótulo,
homogeneizando suavemente até sua completa dissolução. O reagente de cor
após reconstituído deve ser armazenado em frasco plástico opaco e limpo, em
geladeira, mantendo-se nesta condição estável por até 24 meses contados à
partir de seu preparo.
3. IMPORTÂNCIA CLÍNICA
O doseamento da uréia, ao lado da creatinina constitui um dos principais meios
de avaliação da função renal, uma vez que a uréia é excretada principalmente
através da urina, após sua filtração pelos rins. A elevação dos valores
sangüíneos da uréia pode se verificar após a ingestão de proteínas, nefrite
aguda ou crônica, obstrução intestinal, obstrução urinária, pneumonia,
intoxicação por metais, síndrome de Addison, choque cirúrgico e moléstias
cardíacas. A diminuição da taxa de uréia sangüínea pode ser devida a uma dieta
pobre em proteínas, obstrução hepatocelular aguda ou durante a gestação.
4. AMOSTRA
a- Preparo do paciente
Instruir o paciente a manter um jejum de 8-12h que antecedem a coleta, bem
como evitar a ingestão excessiva de alimentos proteicos pelo menos no dia
anterior a prova.
b- Tipos de amostra
-Soro: recém-obtido , não hemolisado, separado o mais rapidamente possível
do coágulo após a coleta;
- Plasma: com heparina ou EDTA pode ser usado alternativamente desde que o
anticoagulante seja isento de amônia. O fluoreto tende a inibir a urease
promovendo resultados baixos para a uréia doseada;
- Urina: Coletar a urina em recipiente limpo e anotar a duração da coleta em
horas. Se for urina de 24 horas, adicionar 15g de ácido bórico. Diluir a urina
1:10 com água destilada ou deionizada e usar esta diluição para o doseamento,
multiplicando o resultado obtido por 10.
c- Armazenamento e estabilidade
As amostras devem ser mantidas em geladeira (2-8 oC) ou congeladas se
necessário. No soro ou plasma a uréia é estável por 24h em temperatura
ambiente, alguns dias em geladeira (2-8 oC) e 6 meses em freezer (-20 oC).
d- Critérios de rejeição
Recusar plasma obtido com anticoagulante a base de fluoretos, amostras que
se apresentem hemolisadas ou com sinais de contaminação microbiana.
e-Precauções e cuidados especiais
Todas as amostras devem ser manipuladas com extrema cautela, pois podem
veicular diversas doenças infecto-contagiosas (hepatite, SIDA etc.). Seu
descarte deve ser feito preferencialmente após sua autoclavação devendo-se
evitar sua eliminação diretamente no meio ambiente. Igual cuidado se
recomenda no descarte de outros materiais como ponteiras plásticas, agulhas e
seringas.
5. INFORMAÇÕES GERAIS SOBRE O PRODUTO
a- Princípio de Técnica
Uréia + H2O
amônia + gás carbônico (reação catalisada pela urease)
Amônia + salicilato + hipoclorito
2,2-dicarboxi-indofenol.
A concentração de 2,2-dicarboxi-indofenol determinada a 600 nm é
proporcional à quantidade de uréia presente na amostra.
b- Reagentes
- Reagente Uréia Enz Color (após reconstituído): Urease 6000 U/L, Salicilato de
Sódio 60,0 mmol/L, Nitroprussiato de Sódio 3,2 mmol/L , tampão e
estabilizador .
- Reagente de cor (após reconstituído): Hipoclorito de sódio 6 mmol/L, hidróxido
de sódio 130 mmol/L.
- Padrão de Uréia: Solução padrão contendo 60 mg/dL de uréia (equivalente a
28 mg/dL de nitrogênio ureico). Em equipamentos automáticos, recomendase o uso de calibradores com matriz proteica.
Preparo e conservação do Reagente de Trabalho
Dissolver cada frasco contendo Uréia Enz Color em pó com 50 mL de água
d- Armazenamento e estabilidade
Todos os componentes do conjunto podem permanecer até 72h em
temperatura ambiente para fins de transporte. No laboratório devem ser
mantidos em geladeira, condição na qual se mantém estáveis até a data de
validade expressa no rótulo. A estabilidade dos reagentes após preparados
condiciona-se às condições de armazenamento e isenção de contaminações
químicas ou biológicas.
e- Precauções e cuidados especiais
- Os reagentes não devem ser congelados bem como expostos à luz direta.
Quando utilizado em equipamentos de automação, a transferência do reagente
para os recipientes do equipamento deve ser feita cuidadosamente de forma a
evitar possíveis contaminações que venham a interferir em sua performance;
- O uso de água impura acarreta na perda da eficácia dos reagentes (decréscimo
de sua atividade);
- Os reagentes destinam-se ao uso in vitro, devendo-se evitar seu contato com a
pele, olhos e mucosas.
6. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS NÃO FORNECIDOS (porém necessários)
- Espectrofotômetro ou fotocolorímetro ;
- Banho- maria;
- Cronômetro;
- Pipetas graduadas;
- Micropipetador;
- Água destilada ou deionizada com condutividade inferior a 0,5 µS/cm;
- Frasco plástico limpo e opaco para o reagente de cor.
7. PROCEDIMENTO TÉCNICO (para equipamentos manuais e semiautomáticos)
- ajustar o comprimento de onda do equipamento para 600 nm (580-680
nm)
- identificar 3 tubos como B (branco), P (padrão) e T (teste) e proceder como
indicado abaixo:
- todos os reagentes e padrões deverão estar em temperatura ambiente
antes de sua utilização.
Branco Padrão Teste
Reagente Uréia Enz Color
1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
Padrão
0,01 mL Amostra
0,01 mL
Homogeneizar e incubar em Banho-Maria a 37 oC durante 5 minutos
Reagente de Cor diluído
1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
Homogeneizar suavemente e manter a incubação a 37 oC por mais 5
minutos.
Ajustar o zero do aparelho com o branco e determinar as absorbâncias do
padrão e teste. A cor é estável por 60 minutos (protegidos os tubos da luz).
Recomenda-se a determinação do padrão para cada série de análises
efetuadas.
8. CÁLCULOS
Uréia [mg/dL] = Absorbância do teste X 60
Absorbância do padrão
Caso o laboratório deseje, é possível trabalhar com o fator de calibração.
Neste caso, a recomendação é a de que o fator seja aferido com um padrão
ou calibrador pelo menos uma vez ao dia.
60
Fator =
Absorbância do padrão
Uréia [mg/dL] = Absorbância do teste x fator
Cálculo da uréia urinária
Uréia urinária [g/24h]=
Uréia urinária em mg/dL x 10 x 0,01 x Volume total coletado
Aonde: 0,01 converte mg/dL em g/L e 10 é o fator de diluição da amostra.
Clearence (depuração) de uréia
a- Medir o volume de urina coletada e transformar em mL por minuto,
dividindo volume em mL pelo número de horas de coleta multiplicado por
60;
b- Determinar a uréia no soro e na urina;
c- Calcular o clearence usando a fórmula abaixo:
Clearence de uréia [mL/min] =
Uréia urinária em mg/dL
Uréia no soro em mg/dL
X Volume urinário em mL/min
9. RESULTADOS
- Unidade utilizada: mg/dL.
- Valores de referência
Soro ou plasma: 10-52 mg/dL (6-22 mg/dL em Nitrogênio);
Urina: 10-20 g/24h.
- Limites de alarme propostos
Acima de 214 mg/dL.
- Transformação de mg/dL de uréia em mg/dL de nitrogênio (BUN Blood Urea Nitrogen)
Multiplicar o valor da uréia em mg/dL por 0,467.
10. LIMITAÇÕES DO MÉTODO
- Limite de diluição
A reação é linear até 180 mg/dL, em concentrações superiores, a amostra deve
ser diluída em solução fisiológica (NaCl 0,85 %) e doseada novamente, tendo
seu resultado multiplicado pelo fator de diluição (exemplo: amostra diluída a
1:10 deve ter seu resultado multiplicado por 10).
- Interferentes
A presente metodologia está sujeita a alguns fatores que podem eventualmente
interferir nos resultados obtidos. Entre tais fatores encontra-se a contaminação
do meio de reação por amônia presente no ambiente, que eleva os resultados
(uso de produtos a base de sais de amônio quaternário ou similares),
contaminação do reagente Uréia Enz Color (a urease é muito sensível a vários
contaminantes). Amostras lipêmicas não são recomendadas bem como plasma
coletado com fluoreto. Recomenda-se a leitura dos textos especializados de
Tietz e Young para maiores informações.
- Exatidão: A análise de regressão linear de 40 amostras de soro na faixa entre
8,4 e 105 mg/dL, comparando-se a metodologia Laborclin com um método de
referência, o coeficiente de correlação obtido foi 0,997, e a seguinte fórmula:
Y(LB)= 1,012 x mét. referência x (-0,3)
14. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Tobacco, A. et al.Clinical Chemestry, 25, 336, 1979.
2. Burtis, C.A., Ashwood, E.R. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 4th edition,
W.B.Saunders Co., P.543-548, 1996.
3. Henry, R.J. Clinical Chemestry Principles and Technics, Harper and Row
Publishers, Inc., N.Y., 268, 1968.
4.Young, D.S. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests.
2nd edition. AACC Press. pp. 3-82 a 3-89, 4-49 a 4-62, 1997.
5.Young, D.S. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4th edition. AACC
Press. 1995.
6. Young, D.S. Et al. Clinical Chemestry 21, 371D, 1975.
7. Widman, F.K., Goodale’s Clinical Interpretation of Laboratory Tests, F.A.
Davis Co., Philadelphia, 96. 1969.
8. Arquivos de Controle de Qualidade - LABORCLIN Produtos para
Laboratórios Ltda.
9. Moura, R.A. et al. Técnicas de Laboratório, São Paulo, Ed. Atheneu, 3a
Edição, 1992.
15. INFORMAÇÕES COMPLEMENTARES
Os protocolos de programação para equipamentos automáticos podem ser
requisitados junto ao SAC.
16. APRESENTAÇÃO
- Reagente Uréia Enz Color : 5 frascos para 50 mL após reconstituição
- Padrão de Uréia: um frasco contendo 5 mL de solução padrão
- Reagente de cor de Uréia concentrado: um frasco ocntendo 7,2 mL do
reagente de cor concentrado
11. CONTROLE DA QUALIDADE
- Materiais necessários
Amostras de controle originárias de pool de soros preparados pelo próprio
laboratório e/ou controles de origem comercial, mapas e gráficos de controle.
- Periodicidade
Ao iniciar o trabalho com um novo lote de reagentes recomenda-se avaliar os
mesmos quanto a precisão e exatidão. Durante a execução da rotina,
recomenda-se avaliar uma amostra de controle em paralelo com cada bateria
de testes.
- Interpretação e avaliação
Como o objetivo do controle de qualidade é garantir que os resultados liberados
sejam compatíveis com a realidade do paciente, o laboratório deve definir quais
são os parâmetros de controle adotados bem como as medidas para possíveis
ações corretivas.
12. GARANTIA DA QUALIDADE
A Laborclin obedece o disposto na Lei 8.078/90 - Código de Defesa do
Consumidor. Para que o produto apresente seu melhor desempenho, é
necessário :
- que o usuário conheça e siga rigorosamente o presente procedimento técnico;
- que os materiais estejam sendo armazenados nas condições especificadas;
- que os equipamentos e demais acessórios necessários estejam em boas
condições de uso , manutenção e limpeza.
Antes de ser liberado para venda, cada lote do produto é submetido a testes
específicos, que são repetidos periodicamente até a data de vencimento
expressa em rótulo. Os certificados de análise de cada lote podem ser
solicitados junto ao SAC - Serviço de Assessoria ao Cliente, bem como em caso
de dúvidas ou quaisquer problemas de origem técnica, através do telefone
0800-410027. Quaisquer problemas que inviabilizem uma boa resposta do
produto, que tenham ocorrido comprovadamente por falha da Laborclin serão
resolvidos sem ônus ao cliente, conforme o disposto em lei.
13 ESTATÍSTICAS DO MÉTODO
- Precisão: Analisando-se duas amostras de soro 7 vezes por dia durante 3 dias
obtiveram-se coeficientes de variação entre 3,5 e 2,1% para valores médios
respectivos de 10,8 e 67,0 mg/dL;
Dúvidas, sugestões
e/ou reclamações
ligue para o nosso:
LB 170121 - Rev. 05 - 06/04
Laborclin produtos para laboratórios ltda.
R. Cassemiro de Abreu, 521 Pinhais/PR - CEP. 83.321-210
CNPJ: 76.619.113/0001-31 - Insc.Est.: 13700129-26
Responsável Técnico: Elisa H. Uemura CRF-PR 4311
www.laborclin.com.br
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