PerCP-Konjugate für Durchflusszytometrie

Spezialisiert auf Sekundärantikörper und Konjugate
PerCP-Konjugate für Durchflusszytometrie
PerCP ist ein von Dinoflagellaten isolierter fluoreszierender Peridinin-Chlorophyll-Protein-Komplex. Wir bieten
die Form an, die in Dinophyceae sp. mit einem Molekulargewicht von rund 35,5 kDa vorkommt. Der Komplex
weist ein breites Anregungsspektrum mit einem Spitzenwert bei 472 nm und einen langen Stokes-Shift mit
einem Emissionsspitzenwert bei 677 nm auf (Abbildung 1).
Abbildung 1. Relative Form und Position der Spektren im Spitzenwertbereich der
Anregung (blau) und Abstrahlung (lila) für PerCP, das mit einem affinitätsgereinigten
Sekundärantikörper von Jackson lmmunoResearch konjugiert wurde. Es sollten
keine quantitativen Vergleiche angestellt werden, da die Peakhöhen normalisiert
wurden. Die Spektren wurden mit einem Spektrofluorometersystem der Reihe M von
Photon Technology lnternational, lnc. erhalten.
Abbildung 2. Menschliche periphere Lymphozyten wurden entweder direkt mit
PerCP-konjugiertem Anti-CD3 (orange) von BioLegend oder indirekt mit Biotinkonjugiertem Anti-CD3 (B-D Pharmingen) und PerCP-Streptavidin entweder von
Jackson ImmunoResearch (blau), BioLegend (lila) oder B-D Pharmingen (rot)
angefärbt. Für einen weiteren Vergleich wurden die Zellen mit unkonjugiertem AntiCD3 (B-D Pharmingen) und PerCP-konjugiertem Sekundärantikörper von Jackson
Immuno-Research (grün) angefärbt. Die angefärbten Zellen wurden in einem
Doppellser-FACSCalibur-Durchflusszytometer (Becton Dickinson) analysiert.
PerCP-Konjugate
von
stark
adsorbierten
Sekundärantikörpern werden angeboten, um
unkonjugierte Primärantikörper zu markieren, und
PerCP-Streptavidin wird angeboten, um biotinylierte
Primär- und Sekundärantikörper zu markieren
(Abbildungen 2 und 3). Mit den Produkten sind zwei
praktische Markierungsprotokolle möglich.
Im Vergleich mit einem in einem Schritt PerCPkonjugierten Primärantikörper (Abbildung 2) wird ungefähr
das gleiche Fluoreszenzniveau mit einem Verfahren in zwei
Schritten erhalten, bei dem ein biotinylierter
Primärantikörper und PerCP-konjugiertes Streptavidin
verwendet wird. Durch die Verwendung eines
unkonjugierten Primärantikörpers und eines PerCPkonjugierten
Sekundärantikörpers
wird
ein
durchgehendes, leicht höheres Signal erzielt. Obwohl
Verfahren in drei Schritten für die Durchflusszytometrie
normalerweise unerwünscht sind, kann eine etwas höhere
Verstärkung mit einem unkonjugierten Primärantikörper,
einem biotinylierten Sekundärantikörper und PerCPkonjugiertem Streptavidin erzielt werden (Abbildung 3).
Tel: +44 (0)1638 782616
Abbildung 3. Menschliche periphere Lymphozyten wurden mit einem
unkonjugierten Anti-CD3 (B-D Pharmingen) und einem PerCP-konjugierten
Sekundärantikörper von Jackson ImmunoResearch (grün) oder mit Biotinkonjugiertem Anti-CD3 (B-D Pharmingen) und PerCP-Streptavidin von Jackson
ImmunoResearch (blau) angefärbt. Für einen weiteren Vergleich wurden die Zellen
mit unkonjugiertem Anti-CD3 (B-D Pharmingen), einem biotinylierten
Sekundärantikörper und PerCP-Streptavidin von Jackson ImmunoResearch
angefärbt (rot). Die angefärbten Zellen wurden in einem Doppellser-FACSCaliburDurchflusszytometer (Becton Dickinson) analysiert.
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Fax: +44 (0)1638 668462 Email:[email protected]
PerCP-Konjugate können allein oder mit Alexa Fluor® 488 (oder FITC) und R-PE für Ein- bis Drei-FarbenAnalysen mit einem Durchflusszytometer mit einem einzigen Laser verwendet werden, wobei das Zytometer
ausgestattet ist mit einem Argonlaser, der bei 488 nm abstrahlt. Bis zu Vier-Farben-Analysen mit geringem
Ausgleich werden leicht erzielt durch die Ergänzung von APC-konjugierten Antikörpern mit einer Anregung
bei 633 oder 635 nm, die durch ein Doppellaser-Durchflusszytometer erfolgt (Abbildung 4).
Abbildung 4. Anregungsspektren (links) für PerCP-(blau)-, Alexa Fluor® 488/FITC-(grün)-, R-PE-(rot)- und APC-(braun)-konjugierten Sekundärantikörpern von Jackson
ImmunoResearch. Abstrahlungsspektren (rechts) für Alexa Fluor® 488/FITC-(grün)-, R-PE-(pink)-, APC-(braun)- und PerCP-(lila)-konjugierte Sekundärantikörper von Jackson
ImmunoResearch. Es sollten keine quantitativen Vergleiche angestellt werden, da die Peakhöhen normalisiert wurden. Alle Spektren wurden mit einem
Spektrofluorometersystem der Reihe M von Photon Technology lnternational, lnc. erhalten.
UKAS-Zertifizierung gemäß BS EN ISO 9001:2008 unter der Zertifikatsnummer 12017/1.
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