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Niedersachsen, Sachsen-Anhalt,Thüringen, Bremen REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ RE Plasmareduzierte Thrombozytenkonzentrate aus gepoolten Buffy Coats R1 Ausgabe 3 2004 PD Dr. H. Mohr Einleitung Blutspenden werden nicht direkt und Gerinnungsfaktorkonzentraten. transfundiert. Sie werden vielmehr in Erythrozytenkonzentrate sind „das“ eine Reihe von Komponenten aufge- Blutpräparat per se. Aus praktisch je- trennt, die jeweils für sich oder auch der Blutspende entsteht ein EK. Blutbeutel in Kombination therapeutisch einge- Zentrifuge Auftrennung setzt werden können. Der erste Schritt Aus den isolierten Buffy Coats dieser Komponententrennung besteht (sie enthalten neben den erwähnten in der Zentrifugation der Spende. Leukozyten und Thrombozyten noch Das Blut wird dabei in drei Fraktio- restliche Erythrozyten sowie Plasma) nen separiert (Abbildung 1 und 2): werden Thrombozytenkonzentrate (TK) hergestellt. Sie werden zur Be- Erythrozyten Plasma handlung von Blutungen eingesetzt, 1. das überstehende Plasma, die auf einem Thrombozytenmangel beruhen, ferner zur Blutungsprophy- 2. die absedimentierten Erythrozyten Buffy Coat 4 x und Leukozyten Thrombozyten aus weißen Blutzellen (Leukozyten) und Thrombozyten, der sogenannte Buffy Coat. Zentrifuge Leukozyten Erythrozyten Plasma wird als therapeutisches Frischplasma eingesetzt, ist aber auch Ausgangsmaterial für die Herstellung von weiter aufgereinigten Präparaten, Leukozyten Filter z. B. von Albumin, Immunglobulinen Abbildung 2: Thrombozyten oder Umsatzstörungen (1,2). 3. eine dazwischen liegende Schicht Pool Thrombozyten Plasma laxe bei thrombozytären Bildungs- Schema der Herstellung von Thrombozytenkonzentraten aus Blutspenden bzw. Pools von 4 Buffy Coats Abbildung 1: Auftrennung einer Blutspende durch Zentrifugation in Plasma (oben), Erythrozyten (unten) und dem dazwischenliegenden Buffy Coat Niedersachsen, Sachsen-Anhalt,Thüringen, Bremen REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ RE R2 Beim DRK-BSD NSTOB wurden zwischen 200 und 350 ml besitzen; der durch der pH-Wert des TK stabilisiert im Jahr 2003 etwa 15.000 TK (herge- Gehalt an Thrombozyten soll zwi- wird, der ansonsten während der Ausgabe 3 2004 stellt aus Pools von je 4 Buffy Coats) an die Kliniken abgegeben. Für das Jahr 11 schen 2,4 und 3,6 x 10 liegen, der an 6 Restleukozyten unter 10 pro Einheit. Lagerung in den sauren Bereich absinken würde, da beim Thrombo- 2004 wird eine Steigerung des Ab- zytenstoffwechsel auch Milchsäure satzes von um ca. 10-20 % erwartet. TK entsteht. Ein niedriger pH-Wert führt sind also ein wichtiges Präparat mit bei den Thrombozyten zu Funktions- noch zunehmender Bedeutung. Herstellung von TK aus Buffy Coat-Pools Lagerung von TK einbußen (5,6). TK müssen bei einer Temperatur von Es wäre aber aus zwei Gründen ca. 22° C gelagert und dabei leicht besser, wenn das Plasma wenigstens bewegt werden, damit die Thrombo- teilweise durch ein anderes Lager- zyten sich nicht absetzen und dabei medium ersetzt werden würde: aggregieren. Das Folienmaterial der Beim bisherigen Herstellungsver- Lagerbeutel ist gasdurchlässig. Somit fahren für TK, das beim DRK-BSD kann der für den Stoffwechsel der NSTOB etabliert ist (Abbildung 2), Thrombozyten benötigte Sauerstoff sion von TK sind relativ häufig auf werden 4 blutgruppengleiche Buffy ins Innere und das beim Stoffwechsel bioaktive Plasmabestandteile zurück- Coats in einem Kunststoffbeutel zu- entstehende Kohlendioxid nach außen zuführen, z. B. auf Allo-Antikörper sammengegeben (gepoolt) und unter gelangen. Auch für diesen Gasaus- (7,8). Sie ließen sich zumindesten etwas anderen Bedingungen als zuvor tausch ist es wichtig, dass die TK verringern. die Blutspenden zentrifugiert. Wie- während der Lagerung bewegt wer- derum sedimentieren die Erythro- den (3,4). 1. Nebenwirkungen infolge der Transfu- 2. Das Plasma stünde für andere zyten und die Leukozyten; die Throm- Zwecke, z. B. für die Herstellung von bozyten verbleiben hingegen diesmal Faktorenkonzentraten zur Verfügung. im überstehenden Plasma. Diese Schicht stellt das TK dar. Es wird in Plasmareduzierte TK Es gibt mittlerweile eine Reihe von einen speziellen Lagerbeutel überführt und dabei durch einen Filter Beim derzeitigen TK-Präparat sind kommerziell erhältlichen Lagermedi- geleitet, der restliche Leukozyten ent- die Thrombozyten im Plasma sus- en für TK. Sie enthalten in der Regel fernt. pendiert, das im Grunde genommen Kochsalz sowie anorganische und or- auch ein ideales Lagermedium ist: es ganische Pufferbestandteile (Phos- Laut der „Leitlinien zur Therapie mit enthält die benötigten Nährstoffe (z. B. phat, Citrat, Acetat) zur Stabilisierung Blutkomponenten und Plasmaderiva- Glukose) sowie Salze und sonstige des pH-Wertes während der Lagerung ten“ der Bundesärztekammer sollen Komponenten, die die Lagerfähigkeit (siehe oben). Citrat und Acetat werden TK, die aus Pools von Buffy Coats her- gewährleisten. Es besitzt auch eine zusätzlich anstelle der im Plasma ent- gestellt worden sind, ein Volumen nennenswerte Pufferkapazität, wo- haltenen Glukose von den Thrombo- EGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGI Tag nach Herstellung* Thrombozytenzahl pro Einheit x10 -11 pH-Wert 2 2,97 ± 0,37 7,25 ± 0,02 86,2 ± 3,5 82,8 ± 3,1 verbessern. Um diese zu gewährleis- 7 2,98 ± 0,37 7,29 ± 0,04 67,0 ± 7,7 34,5 ± 8,4 ten, ist auch eine gewisse Menge an 9 2,88 ± 0,37 7,24 ± 0,06 55,7 ± 11,5 25,3 ± 5,9 Kalium- und Magnesiumionen, die die Lagerstabilität der Thrombozyten restlichem Plasma (ca. 30 %) im TK erforderlich (7-12). Für das neu entwickelte plasmareduzierte TK-Prä- R3 * Tag 0: Tag der Blutspende ** Collagenkonzentration (µg/ml) Tabelle 2: Ergebnisse der Untersuchungen zur Lagerstabilität von plasmareduzierten TK. Angegeben sind die Mittelwerte (±Standardabweichungen) von Messungen an 6 Präparaten Einige der Medien enthalten noch Collageninduzierte Aggregation (%) 100** 50** parat des DRK-BSD NSTOB wird PAS-IIIM als Lagermedium benutzt 1. Da das TK weniger Plasma enthalten (Tabelle 1). chungen zur Lagerstabilität belegen soll, ist das Volumen der Buffy Coats allerdings, dass funktionelle und sons- geringer: ca. 60 anstatt ca. 100 ml. tige Eigenschaften der Thrombozy- Die Menge an Thrombozyten pro ten über einen Zeitraum von bis zu 9 Buffy Coat ist hingegen unverändert. Tagen weitgehend erhalten bleiben Konzentration (mM) Natriumchlorid 69 Kaliumchlorid 5 2. Wie bisher werden 4 Buffy Coats und damit die Laufzeit ohne weiteres Magnesiumchlorid 3 gepoolt. Dem Pool wird zusätzlich verlängert werden könnte, z. B. auf 7 Trinatriumcitrat 10 noch die benötigte Menge an PAS- Tage. Dem steht derzeit aber noch Natriumacetat 30 IIIM (250 ml) zugefügt. eine entsprechende Richtlinie entge- Dinatriumphosphat 26 (Tabelle 2), so dass die Lagerdauer gen. Sie legt 5 Tage als Laufzeit fest Tabelle 1: Zusammensetzung des Thrombozytenlagerungsmediums PAS-IIIM pH-Wert: 7,2 Herstellung und Lagerung von plasmareduzierten TK 3. Die Zentrifugationsbedingungen sind und zwar hauptsächlich wegen des der Gegebenheit angepasst, dass die bakteriellen Risikos, das während der Plasmakonzentrationen im Buffy Lagerung immer größer wird, weil Coat-Pool geringer geworden sind. sich viele Bakterien in TK bei 22° C Da sich hierdurch die Viskosität und gut vermehren können. Es gibt mitt- die Dichte der flüssigen Phase ändert, lerweile Bestrebungen, routinemäßig wird bei geringer Drehzahl für kürze- bei allen TK kurz nach der Herstellung re Zeit zentrifugiert. einen Sterilitätstest durchzuführen bzw. den Herstellungsgang um einen Schritt zur Inaktivierung von Bakteri- Wie bisher wird das TK nach der en und anderen Pathogenen zu ergän- In folgenden Details unterscheidet Zentrifugation über einen Leukozy- zen (13,14). Ist eine dieser Optionen sich der Herstellungsgang für das tenentfernungsfilter in einen Lager- erst einmal realisiert, steht einer Ver- neue Produkt von dem des bisherigen beutel geleitet und dann bei ca. 22° C längerung der Laufzeit für die TK Präparats: für bis zu 5 Tage gelagert. Untersu- nichts mehr im Wege. Ausgabe 3 2004 zyten als Energiequelle verwertet. Niedersachsen, Sachsen-Anhalt,Thüringen, Bremen REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ REGIO-NEWS ++ RE R4 Literatur Ausgabe 3 2004 1. Högman, C.F., L. Eriksson, and 6. Baker, J.M., D.J. Candy, and R.J. Hawker, 13. de Korte, D., J.H. Marcelis, and A.M. J. Kristensen, Leukocyte-depleted Influences of pH on human platelet Soeterboek, Determination of the platelets prepared from pooled buffy metabolism. 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