in vitro

Transcrição

in vitro

PROGRAMA COOPERATIVO
PARA EL
DESARROLLO TECNOLÓGICO AGROPECUARIO
DEL
Subprograma Biotecnología
Proyecto "Desarrollo de la Capacidad Regional para la Producción de
Plantas de Alta Calidad Genético-Sanitaria"
CALIDAD GENETICA y
SANITARIA
Un instrumento para la competitividad de
la cadena agroindustrial
Coordinador: Ing. Daniel Pagliano
Montevideo, Uruguay
Mayo, 1999
ARGENTINA - BOLIVIA - BRASIL - CHILE - PARAGUAY - URUGUAY
Instituto Interamericano de
Cooperación para la Agricultura
CONO SUR
1ª Edición: Mayo 1999
Quedan reservados todos los derechos de la presente edición. Este libro no se
podrá reproducir total o parcialmente sin expreso consentimiento del PROCISUR.
Pagliano, Daniel coord.
Calidad genética y sanitaria: un instrumento para la competitividad de la cadena
agroindustrial / Coord. Daniel Pagliano. -- Montevideo : IICA-PROCISUR, 1999.
100 p.
ISBN 92-9039-400 5
/BIOTECNOLOGIA VEGETAL/ /GENETICA/ /MANUAL/ /CONTROL DE CALIDAD/
/CERTIFICACION DE PLANTAS/ /PROTECCION DE LAS PLANTAS/ /AGROINDUSTRIA/
/COMPETITIVIDAD
AGRIS F30
CDD 581.15
Las ideas y planteamientos contenidos en este documento son propios de los autores
y no representan necesariamente el criterio de las instituciones integrantes del PROCISUR.
El Proyecto Desarrollo de la Capacidad Regional
para la Producción de Plantas de Alta Calidad
Genético-Sanitaria, se ejecutó en el marco del
Subprograma Biotecnología del PROCISUR, durante el
período 24/02/95 al 24/02/99, contando con el
financiamiento del Banco Interamericano de
Desarrollo (BID).
INDICE
Prólogo, por Daniel Pagliano ...............................................................
i
Capítulo I. Biotecnología y Agricultura
Novos desenvolvimentos na biotecnología vegetal por A.C. Torres
y J. Amauri Buso ...............................................................................
3
Potencial, demandas e modalidades para a produção de plantas de
alta qualidade genética e sanitária por J. A. Peters ..........................
13
Capítulo II. Calidad Sanitaria
Aspectos técnicos de la producción de materiales de sanidad
controlada por S.F. Nome .................................................................
21
Capítulo III. Calidad Genética
Disponibilidade de técnicas moleculares para la identificação varietal
por S.C. Kothe Milach ....................................................................... 31
Identificación genética de frutales de propagación agámica:
El caso de las vides en Chile por P. Hinrichsen ...............................
39
Capítulo IV. Certificación de materiales vegetales
La certificación de plantas como instrumento de calidad
por J. Borde y A. Fossali...................................................................
49
Certificación de variedades: la visión de UPOV por Y. Jadue .........
53
Situación actual sobre la identificación y certificación de
variedades en Bolivia por C. L. Villarroel Vogt ..............................
61
Capítulo V. Organización
La calidad genético sanitaria como instrumento de la
cadena agroindustrial por D. Pagliano .............................................
67
Anexo. Estándar. Certificación de materiales de propagación. Cítricos
Introducción por D. Pagliano
P RÓLOGO
E
n el Taller sobre Cultivos de Tejidos Vegetales in vitro, organizado
por el Subprograma Biotecnología de PROCISUR en la ciudad de
Asunción del 4 al 6 de octubre de 1993, los Institutos de
Investigación de la región, acordaron como línea prioritaria el desarrollo de
acciones que tiendan a hacer disponibles plantas de las especies de
propagación agámica con alta calidad genético sanitaria así como también
definir los criterios que componen esta calidad.
En todos los países existen iniciativas tendientes a mejorar la capacidad y
la competitividad de los productores. Hay procesos de reconversión
productiva, de diversificación o distintos incentivos, pero, sin embargo, uno
de los insumos estratégicos como lo son las plantas que se usan en la
siembra no siempre están disponibles en forma suficiente o no hay
garantías de calidad de las mismas.
En este sentido, PROCISUR presentó al Banco Interamericano de Desarrollo (BID) una iniciativa que fue apoyada y que desde 1996 ha realizado
actividades en los seis países del Cono Sur. Estas actividades incluyeron
cursos, desarrollo de investigación y productos como kits de diagnóstico,
seminarios internacionales y otras (http://www.procisur.org).
El proyecto contribuyó a incrementar la oferta de plantas, vinculó a los
participantes de la cadena de calidad, desarrolló tecnología de diagnóstico,
estableció colecciones de referencia y capacitó a recursos humanos.
Daniel Pagliano*
INIA Las Brujas, Uruguay
* Líder del Proyecto
“Desarrollo de la Capacidad Regional
pra la Producción de Plantas de Alta
Calidad Genético-Sanitaria”
Algunos de los aspectos relevados en este proyecto se presentan en esta
publicación, pero, sin perjuicio de esto, es de nuestro interés subrayar
algunos temas que han sido identificados como importantes en términos de
oportunidades:
1. La región aún es deficitaria en plantas de alta calidad que son utilizadas
en la siembra o instalación de cultivos de propagación agámica.
Cuando se analiza la evolución de los distintos rubros hay una
permanente señal de que es necesario aumentar la producción y las
referencias para evaluar la calidad de las mismas.
ii
PROLOGO
2. Todos los países a través de sus instituciones y empresas se
encuentran abocados a mejorar sus capacidades para la producción y
el uso de plantas. Hay una masa crítica importante y una necesidad de
establecer alianzas, interacciones y proyectos conjuntos.
3. El nivel de la investigación y desarrollo no es homogéneo entre zonas
de la región, pero sí es de buen nivel y llega en algunos casos a la
excelencia medida en el ámbito internacional. Esto significa que hay
capacidad regional para la innovación y la investigación.
4. Existe un creciente relacionamiento y por tanto de conocimiento, entre
los integrantes de la cadena de producción de plantas de calidad. Esto
se observa tanto al nivel de la producción física como también en las
Instituciones que se encargan del control de la calidad. La necesidad
de armonizar la visión a nivel regional fue señalada como una
oportunidad para construir sistemas de alcance regional.
5. Los esquemas de propiedad intelectual en los países son similares o
compatibles, por lo que rápidamente se alcanzarían acuerdos en este
tema.
En definitiva existe una producción intensiva en aumento, alta demanda de
plantas comerciales y baja disponibilidad de materiales. La demanda así
como las tecnologías de producción y evaluación de la calidad están
disponibles, por lo que existe una oportunidad para el desarrollo.
Los problemas detectados incluyen falta de coordinación, escasa difusión
de los avances y disponibilidades ya existentes, escasos materiales iniciales
de referencia para iniciar la cadena, escasos estándares de producción y
evaluación de calidad, y desconfianzas entre institutos y productores.
Los conceptos señalados como de proyección al futuro incluirían:
1. La necesidad de capacitación de las interfases en la cadena de calidad.
Esto quiere decir que el usuario que recibe el producto del eslabón
anterior, debe saber exactamente cómo continuar la calidad para poder
pasarla al usuario siguiente. Para poder recibir y dar una calidad, debe
haber una capacidad, que permita mantener la misma y detectar las
posibles desviaciones.
2. El fortalecimiento de la cadena es uno de los aspectos principales. A
través de mecanismos de participación y de organización, la región
puede encontrar una mejora importante en la capacidad de producción
de plantas y así contribuir eficientemente a las iniciativas de producción
de los distintos rubros.
3. La transferencia horizontal y vertical del conocimiento es una de las
herramientas más importantes en este sistema. En todos los países hay
iii
D. PAGLIANO
una experiencia acumulada de alto valor y por tanto deberían mejorarse
los canales que permitan que la misma pueda compartirse.
4. Se debe incrementar el desarrollo de tecnología necesaria para evaluar
la calidad. A través de actividades de investigación y en acuerdo con la
cadena de calidad, se debe fortalecer la información técnica necesaria
para el proceso y los estándares.
Por lo expuesto, las condiciones son propicias para establecer las cadenas
de calidad en los países, como también avanzar para que las cadenas se
conviertan en una Red de Calidad Regional en una visión de sistema. La
Real Academia Española expresa que un “sistema” es un “conjunto de
cosas que ordenadamente relacionadas entre sí contribuyen a un
determinado objeto”. Un sistema regional para la producción de plantas
puede ser un elemento importante que contribuya a las políticas nacionales
de incentivo a la producción y las regionales de integración.
Los nuevos paradigmas exigen una visión compartida. No se avanzaría si
existen compartimentos estancos, no relacionados y sin evaluación. A
través de modelos donde el planeamiento entre los participantes se
convierta en herramienta, podremos dar los pasos inteligentes necesarios
para que la producción de la región sea más competitiva.
Quiero por último expresar mi gratitud a la Comisión Directiva del
PROCISUR, a todos los colegas Enlaces Nacionales –ellos tienen el
mérito!-, a todos los asesores que participaron, a la Secretaría Ejecutiva del
PROCISUR –un grupo excelente–, a mis compañeros de la Unidad de
Biotecnología y a todos aquellos que de una u otra forma hicieron realidad
este proyecto.
“LA CASUALIDAD SÓLO
FAVORECE A LOS ESPÍRITUS
PREPARADOS.”
Luis Pasteur
CAPÍTULO I
BIOTECNOLOGÍA Y
AGRICULTURA
NOVOS
DESENVOLVIMENTOS NA
BIOTECNOLOGÍA VEGETAL
Os avanços na biotecnologia se baseiam em descobertas que
ocorreram nos últimos 40 anos (Quadro 1). Na década de cinqüenta,
Miller et al. (1955, 1956) descobriram a cinetina (primeira
citocinina). O isolamento e a caracterização desse composto
Quadro 1. Retrospectiva dos principais eventos na área de cultura de
tecidos de plantas.
Años
1902
1904
1922
1925
1934
1952
1955
1955
1958
1960
1960
1962
1962
1972
1973
Antonio Carlos Torres*
Investigador responsable de
Biotecnología
José Amauri Buso*
Director Científico
*EMBRAPA Hortaliças, Brasil
1974
1983
1985
1994
Eventos
Haberlandt foi o pioneiro da cultura de tecidos, baseando-se na
teoria da totipotencialidade das células de plantas.
Hanning cultivou de embriões de várias espécies de crucíferas.
Knudson obteve plantas de orquídeas in vitro via cultura de
embriões .
Laibach recuperou híbridos do cruzamento entre Linum austriacum
x L. perene via cultura de embrião.
White desenvolveu a técnica de cultura de raízes.
More & Martin pela primeira vez obtiveram dália livre de vírus.
Morel & Martin obtiveram batata livre de vírus.
56 Miller et al. demonstraram o controle químico da organogênese
in vitro pelo balanço entre auxina e citocinina.
Steward et al. e Reinert et al., independentemente, desenvolveram
a técnica de embriogênese somática.
Morel obteve plantas de orquídeas livre de vírus, via cultura de
ápices caulinares. Assim, iniciou-se a aplicação comercial dessa
técnica.
Cocking obteve protoplastos utilizando enzimas de degradação da
parede celular.
Murashige & Skoog desenvolveram a formulação salina do meio
MS.
Kanta et al. Obtiveram as primeiras plantas pela técnica da
polinização in vitro.
Murashige et al. desenvolveram a técnica de microenxertia em
citrus.
Expressão da insulina humana em E. coli.
Zaenen et al. e Larebek et al., independentemente, demonstraram
que o plasmídeo Ti de Agrobacterium tumefaciens era o princípio
indutor de tumor em planta.
Foram obtidos os primeiros Kits de diagnóstico.
Horsch et al. obtiveram plantas transgênicas de fumo via
transformação genética de explantes de discos foliares.
Comercialização de plantas transgênicas.
4
NOVOS DESENVOLVIMENTOS NA BIOTECNOLOGIA VEGETAL
possibilitaram a substituição de misturas complexas do meio nutritivo,
como o leite de coco, por substâncias simples que promoviam a divisão
celular. Foi demonstrado que a diferenciação de parte aérea, raíz e calo
era regulada pelo balanço auxina/citocinina. Concentrações
relativamente elevadas de auxinas favorecem a formação de raizes,
enquanto que a relação inversa induz a regeneração de parte aérea
(Miller et al., 1955; Skoog & Miller 1957). Esse resultado serviu de
base para trabalhos subseqüentes em laboratórios de todo o mundo no
desenvolvimento das técnicas de propagação em larga escala de
material in vitro. Em 1960, quando Morel utilizou a cultura de ápices
caulinares para recuperar plantas de orquídea livre de vírus, iniciou-se
a aplicação comercial dessa técnica com a produção de plantas de alta
qualidade fitossanitária. Hoje, a manipulação de células, tecidos e
órgãos de plantas in vitro tornou-se uma realidade na produção de
haplóides, na obtenção de variantes somaclonais, na recuperação de
híbridos interespecíficos de cruzamentos incompatíveis, na produção de
substâncias farmacológicas, no uso de biorreatores e na regeneração
de células transformadas de espécies de interesse agronômico.
Em 1973, a engenharia genética iniciou-se com a expressão da insulina
humana em E. coli. Nesse curto período essa tecnologia evoluiu
rapidamente, possibilitando o isolamento e clonagem de genes, a
transferência e expressão de genes entre espécies incompatíveis e a
engenharia de proteínas para otimização de suas funções.
Diversas técnicas de biologia molecular estão hoje disponíveis para a
detecção de variabilidade genética em seqüências de DNA, permitindo
a obtenção de um número ilimitado de marcadores moleculares
cobrindo todo o genoma do organismo. Estas técnicas podem ser
usadas na determinação da qualidade genética de genótipos
micropropagados, bem como na indexação de materiais provenientes
da cultura de tecidos.
Esses avanços são conseqüências de alocações de recursos
financeiros de dezenas de bilhões de dólares, principalmente, da
iniciativa privada pelos países desenvolvidos. Tais investimentos
propiciaram o estabelecimento de centenas de companhias particulares
e governamentais, especializadas no desenvolvimento e utilização de
um conjunto de técnicas avançadas de biologia celular e molecular,
visando aplicação na agroindústria, saúde humana e agropecuária.
No Brasil, a partir do final da década de setenta, o governo também
investiu pesados recursos para formação de massa crítica no setor
biotecnológico e hoje, há mais de uma centena da laboratórios
governamentais e alguns da iniciativa privada que atuam nessa área.
5
A.C. TORRES y J. AMAURI BUSO
RECUPERAÇÃO DE
PLANTAS LIVRES DE VÍRUS
Limasset et al. (1949) observaram que plantas de fumo infectadas com
TMV possuíam, na parte aérea, um gradiente de concentração
decrescente desse vírus em direção ao ápice, sendo, na maioria dos
casos, nula no ápice. Esses conhecimentos foram utilizados por Morel &
Martin (1952) para produzirem plantas de dália livres de vírus. Desde
então a cultura de ápices caulinares tem sido empregada para produzir
plantas com alta qualidade fitossanitária, em todo o mundo.
Na EMBRAPA Hortaliças, plantas de alho livre de vírus apresentaram
aumento de produtividade de massa seca dos bulbos de até 120% e
excelente desenvolvimento vegetativo durante o ciclo da cultura, quando
comparadas com plantas infectadas. Batata-semente pré-básica com
alta qualidade fitossanitária também tem sido produzida, desde o inicio da
década de oitenta.
Essa metodologia continua em franca expansão, nos países do Cone Sul,
pelos excelentes resultados no aumento da produtividade nas culturas da
batata, alho, batata-doce, cana de açúcar, ornamentais e frutíferas.
MICROPROPAGAÇÃO E
MULTIPLICAÇÃO EM
LARGA ESCALA
A micropropagação é a propagação vegetativa in vitro. Essa é a
aplicação mais empregada da cultura de tecidos. Foi usado pela primeira
vez por Morel (1960) para multiplicar orquídeas via cultura de ápices
caulinares e regeneração de protocormos que davam origem a novas
plantas. A sucessiva divisão desses protocormos acelera a propagação
de orquídeas. A multiplicação rápida de genótipos de interesse mediante
as técnicas de cultura in vitro, em âmbito comercial, foi uma das linhas
de maior desenvolvimento em todo o mundo. Os laboratórios comerciais
surgiram agregados aos viveiros como demanda das próprias companhias
produtoras de mudas.
No caso do Brasil, o país conta com mais de vinte laboratórios comerciais
que se destinam a micropropagação de hortaliças (batata e alho),
fruteiras (principalmente, morango, banana e abacaxi), espécies florestais
(eucalipto), cana de açúcar e ornamentais.
Em Cuba, 15 biofábricas então em franca expansão e cujo potencial
alcança 60 milhões de vitroplantas. Em 1997, a produção planificada foi
de 39,7 milhões, dos quais 27 milhões correspondiam a banana, 11,2
milhões a cana de açucar, 0,5 milhões a ornamentais, e o restante com
abacaxi, manga e inhame.
Com relação ao controle da qualidade genética desses materiais
provenientes da cultura in vitro pouco tem sido feito. Não há ainda
aplicação prática dos conhecimentos de genética molecular nesse
segmento, embora alguns laboratórios começaram a se preocupar sobre
essa necessidade.
6
QUEBRA DE BARREIRA DE
INCOMPATIBILIDADE
A introdução de genes de interesse em espécies cultivadas, muitas vezes, é
limitada em virtude de barreiras que podem ocorrer antes da fertilização
(barreiras pré-zigóticas) ou após a fertilização (barreiras pós-zigóticas)
(Zenkteler, 1990).
As barreiras pré-zigóticas de ocorrência mais freqüentes são: a) inabilidade
de os grãos de pólen germinarem em estigmas não compatíveis; b)
crescimento lento do tubo polínico, não alcançando o óvulo em tempo hábil;
c) estilete demasiado longo; d) abscisão precoce da flor antes de o tubo
polínico alcançar o óvulo; e) não ocorrer fusão dos gametas masculino e
feminino, mesmo estando eles próximos (Kanta, 1960; Kanta &
Maheshwari, 1963; Maheshwari & Kanta, 1964; Bhojwani & Razdan,
1983). No caso das barreiras pós-zigóticas, a fertilização pode ocorrer, mas
o embrião híbrido aborta antes da maturidade por causa da degeneração,
ou do desenvolvimento anormal do endosperma (Shivanna, 1982; Bhojwani
& Razdan, 1983).
Dentre os métodos utilizados para transpor as barreiras da fertilização,
incluem-se: pulverizar o estigma com produtos químicos; dissolver a
cutícula com cutinase; fazer polinização precoce no estádio de botão floral;
seccionar uma porção do estilete e polinizar a parte exposta deste; aplicar
substâncias reguladoras de crescimento na base da flor, para prevenir
abscisão desta (Maheshwari & Kanta, 1964); tratar o estilete com calor
(Lewis, 1942); usar mistura de pólen na polinização (Laterrot, 1983);
irradiar o pistilo com raios X ou ultravioleta (Arasu, 1968a, b); polinizar
dentro do ovário (Kanta, 1960; Maheshwari & Kanta, 1964); e aplicar um
potencial elétrico entre o pólen e o estigma durante a polinização (Roggen
et al., 1972).
Métodos recentes, que incluem a polinização e fertilização in vitro e a
fusão de protoplastos, estão sendo usados na recuperação de híbridos
raros, que apresentam mecanismos de incompatibilidade sexual impedindo
a hibridação natural entre espécies. A polinização in vitro envolve a cultura
de óvulos isolados, ou juntamente com a placenta, nos quais são
depositados os grãos de pólen, em germinação ou não. Essa íntima
associação elimina as barreiras de incompatibilidade que, porventura,
estejam no estigma, estilete ou ovário. Os gametas masculino e feminino
combinam-se para produzir o zigoto (Higgins & Petolino, 1988). A
aplicabilidade dessa técnica depende do desenvolvimento do zigoto, desde a
fertilização até a maturidade (Collins et al., 1984).
VARIAÇÃO SOMACLONAL
Células não meristemáticas podem ter sua identidade genética alterada. A
regeneração de plantas dessas células podem produzir variantes, diferentes
do genótipo original. Caso essa modificação seja transmitida via sexual,
essa característica constitui uma variação somaclonal. Essa variação
também pode ser induzida in vitro pela inclusão de reguladores de
7
crescimento no meio de cultura. A variação somaclonal é indesejável na
micropropagação, produção de haplóide, embriogênese somática e
transformação genética de plantas. A variação somaclonal em
características fenotípicas tem sido observada em Saintpaulia (2-10%),
Dianthus (0,8%), Dracaena (10%) e Chrysanthemum (60%) (Jain & De
Klerk, 1998). Somaclones apresentando diferenças quantitativas tem sido
obtido em tomate (Evans & Sharp, 1986), alface ( Engler & Grogan, 1984),
plantas ornamentais (duração da vida útil ou no número de flores por
planta) (Jain & De Klerk, 1998), entre outras. Em plantas de propagação
assexual, por exemplo o alho, essa metodologia pode ser utilizada para
aumentar a base genética do material (Illg, 1990). Os exemplos de
genótipos superiores advindo do uso dessa técnica são restritos.
TRANSFORMAÇÃO
GENÉTICA DE PLANTAS
Na última década uma gama de métodos e estratégias para transferência
de genes para células de plantas foram publicados (microlaser,
microinjeção, macroinjeção, aplicação direta de DNA) com pouco sucesso.
Recentemente, Zilberstein et al. (1994) obtiveram trigo transgênico
aplicando DNA diretamente no estigma, demonstrando a herança do gene
introduzido em gerações subseqüentes. Se esses resultados forem
reproduzíveis esse método será o mais simples e barato para a
transformação de plantas (Siemens & Schieder, 1996).
Em geral, a transferência de genes mediante Agrobacterium e/ou via
biolística continuam as técnicas universalmente usadas na produção de
plantas transgênicas. Com esses métodos pode-se introduzir DNA na
célula, mas o processo de integração do DNA exógeno é ao acaso. O
silenciamento de genes e a interação entre diferentes transgenes resulta
em padrões não esperado de expressão dos genes introduzidos. Várias
transformações independentes com uma construção específica são
necessárias para a obtenção de uma planta transgênica com um padrão de
expressão desejável.
Em 1994, o tomate FLAVR SAVR da Calgene foi o primeiro produto
oriundo da engenharia genética de plantas a ser comercializado nos EUA.
Desde então, houve uma expansão nesta área e até junho de 1996, 15 de
um total de 21 produtos de plantas transgênicas estão nos mercados da
América do Norte, China, Reino Unido (Quadro 2).
Na América Latina, nos últimos 5 anos ocorreu um aumento considerável
do número de laboratórios com pesquisas em plantas transgênicas como
pode ser observado na reunião da REDBIO de 1998, em Cuba. Nessa área
foram apresentados trabalhos de transformação de plantas dos países:
Argentina (batata, girassol, Lupinus, trigo), Brasil (alface, amendoim,
batata, cana de açúcar, eucalipto, fumo), Chile (batata, pimentão,),
Colômbia (arroz, mandioca), Costa Rica (arroz, milho), Cuba (arroz,
banana, batata, batata-doce, café, cana de açúcar, fumo, mamão), México
(milho), Peru (batata), Trindade (cacao, Anturium), Venezuela (batata) e
Uruguai (batata).
8
Quadro 2. Desregulamentação de produtos transgênicos. (Adaptado de Redenbaugh, 1997).
1994
1996
1998 – 1999 possíveis
Estados Unidos
Canada
Estados Unidos
Calgene, tomate FLAVR SAVR
AgrEvo, milho tolerante ao
China
Monsanto, batata Bt
herbicida glufosinate
Fumo, resistência a vírus
Inglaterra
Canada
Tomate, resistência a vírus
Zeneca, pasta tomate baixo PG
Monsanto, canola tolerante ao
Europa
herbicida glyphosate
1995
AVEBE, batata com modificação no
Europa
Estados Unidos
teor de amido
AgrEvo, milho tolerante ao
Asgrow, abóbora com resistência a
Monsanto, soja tolerante ao
herbicida glufosinate
vírus
Ciba-gleigy, milho Bt
Calgene, algodão BXN
Argentina
Mogen, rapeseed baixo fitato
Calgene, canola com maior teor de
Monsanto, canola tolerante ao
ácido laurico
herbicida glyphosate.
PGS, canola tolerante ao
DNAP, tomate com gene que
codifica para a ACC sintase
1997
herbicida glufosinato
Canada
Argentina
Japão
AgrEvo, canola tolerante ao
Monsanto, milho e algodão com
Ciba-Gleigy, milho com gene Bt
herbicida glufosinato
gene Bt
México
Monsanto, algodão tolerante ao
ghyphosate
Australia
Monsanto, algodão com tolerància
Florigene, plantas de violeta e
ao bromoximil
cravo com maior período pós-
1996
colheita
Estados Unidos
Ciba-Geigy & Micogen, milho Bt
1998
Monsanto, milho Bt, batata Bt,
Brasil*
Pioner, milho, Egg white avidin
gene
*
Brasil: Até 12 de dezembro de 1998, foram solicitadas a CTNBio 299 liberações planejadas de OGM
9
Como se observa vários países têm em comum pesquisas com
transformação de plantas de batata visando resistência a vírus, fungos e
bactérias. No Brasil, plantas de batata “Achat” com resistência a PVY
foram desenvolvidas em trabalho de parceria entre o EMBRAPA
Hortaliças, CENARGEN, Universidade Federal de Pelotas e INGEBI.
Essas plantas têm mantido o padrão de resistência em casa de vegetação,
em todos os testes, por inoculação mecânica com o vírus. Para que o
resultado desse trabalho chegue ao mercado, muitos estudos ainda
necessitam ser realizados. O primeiro é a confirmação, em condições de
campo, do nível de resistência obtido em casa de vegetação. Assim, caso
essas plantas apresentem, em campo, a reação de resistência observada
em casa de vegetação, mantendo ao mesmo tempo as características
agronômicas da cultivar Achat, a EMBRAPA e seus parceiros terão
desenvolvido um produto de interesse para os bataticultores (Torres et al.,
1999).
LITERATURA CITADA E
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POTENCIAL, DEMANDAS E
MODALIDADES PARA A PRODUÇÃO
DE PLANTAS DE ALTA QUALIDADE
GENÉTICA E SANITÁRIA
A biotecnologia moderna pode ter diferentes conotações e estas
dependem da tecnologia do país na qual esta sendo empregada. No
Brasil, visando englobar diferentes campos da ciência e tecnologia, a
biotecnologia foi definida como a utilização de técnicas de biologia
molecular e celular visando a manipulação de organismos superiores,
microrganismos e produtos de sua atividade metabólica, para aplicação na
agropecuária e agroindústria. De todas as técnicas biotecnológicas, a
cultura de células e tecidos de plantas é a que tem, efetivamente,
produzido uma resposta positiva à nível de produtor, colocando a
disposição dos mesmos plantas com maior capacidade produtiva e/ou
qualidade. Tal fato deve-se a utilização da técnica da cultura de
meristemas, que acoplada à micropropagação, possibilita a eliminação de
doenças e a multiplicação rápida de clones ou plantas selecionadas.
José Antonio Peters
Pro-Rector de la Universidade
Federal de Pelotas, Brasil
No Brasil, a biotecnologia começou a ser utilizada com mais intensidade
na década de setenta, quando da instalação dos primeiros laboratórios de
micropropagação nas Universidades e Institutos de Pesquisa. De 1980 a
1989, surgiram grandes laboratórios (multinacionais), que pretendiam
suprir o mercado agrícola com plantas com alta qualidade genética e
sanitária. No entanto, a instabilidade da economia brasileira, impossibilitou
tal objetivo, vindo as mesmas a fecharem suas portas, devido,
principalmente, aos altos investimentos em infraestrutura e mão de obra.
De 1990 até a época atual, formaram-se inúmeras empresas de pequeno
ou médio porte, especializadas em algumas espécies vegetais, com
pequena infraestrutura e baixa mão de obra. Paralelamente às empresas
privadas, os laboratórios de cultura de tecidos de plantas se multiplicaram
nas Universidades e Empresas Públicas de Pesquisa (ex.: EMBRAPA,
no ambito Federal e Instituições Estaduais). Outro aspecto a salientar é
que as técnicas utilizadas também mudaram, passando do nível celular,
nos primeiros vinte anos, para o nível celular e molecular, na última
década. O primeiro programa de Biotecnologia, no Brasil, foi elaborado
pela Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA), em
1988.
A potencialidade para produtos biotecnológicos, no Brasil, é enorme,
devido as características agrícolas e extensão do país e do número
14
POTENCIAL, DEMANDAS E MODALIDADES PARA A PRODUÇÃO DE PLANTAS DE
ALTA QUALIDADE GENETICA E SANITARIA
expressivo da população brasileira. Só para a exploração de fruteiras de
clima temperado dispõe de mais de 2.000.000 ha, possibilitando o plantio de
diferentes espécies, como macieira, pereira, ameixeira, pessegueiro,
morangueiro, kiwi, amora-preta, videira, mirtilo (blueberry), através do
emprego de variedades adaptadas às condições climáticas (máximo de
900 horas de frio, igual ou inferior a 7,2ºC). Isto sem contar a área
disponível para o plantio de espécies tropicais ou sub-tropocais, como
banana, abacaxi, citros e nativas lenhosas. Além das espécies citadas
acima, a biotecnolgia pode contribuir expressivamente para o aumento da
produtividade de olerícolas, ornamentais e florestais, através da eliminação
de viroses, bactérias, fungos e doenças de raízes ou da multiplicação
rápida de novas variedades ou clones. No entanto, atualmente, o Brasil
importa mais de 70.000 t de frutas temperadas (noz, pêra, ameixa, maçã,
cereja, framboesa, etc), representando um gasto de 150 milhões de
US$ anuais.
Da área plantada com morangueiro (cerca de 1300 ha), em 90% da mesma
são utilizadas plantas micropropagadas ou multiplicadas a partir destas
(Quadro 1), possibilitando uma produtividade média de 500 g/planta, 400%
superior a obtida em algumas variedades, antes da utilização de técnicas
biotecnológicas para a produção de plantas matrizes (madres). Embora o
preço de uma planta matriz, obtida através da cultura de meristemas, seja
mais elevado, os produtores de fruta, obtém um retorno financeiro 23%
superior ao conseguido com a utilização de plantas infectadas.
A cultura da macieira, no Brasil, teve seu maior desenvolvimento a partir
da década de 1970, passando de 5.600, em 1976, para 25.327 ha cultivadas,
em 1990, sendo que a produção elevou-se de 38.900 t, em 1979, para
373.133 t, em 1990. Atualmente a área plantada e a produção com esta
fruteira são, respectivamente, de 27.572 ha e 570.000 t, representando 80%
do consumo interno (Quadro 1). O aumento da participação da maçã
produzida internamente, no consumo da população brasileira, representou
um economia de divisas de 300 milhões de US$ nos últimos quinze anos.
Além disso, as exportações brasileiras já alcançam 12.085 t. A cultura da
macieira, atualmente, visa o aumento da produtividade, necessitando,
anualmente, de cerca de 2.000.000 de plantas novas, sendo a maioria
utilizadas para a reposição em pomares velhos. A biotecnologia pode ser
utilizada para a obtenção de variedades de porta-enxerto e copas, isentas
de doenças, diminuindo a importação das mesmas.
As mesmas considerações podem ser estendidas para outras fruteiras de
clima temperado, como pereira, ameixeira e videira. No caso específico da
pereira, o aumento da área plantada está alicerçada na utilização de
variedades copa mais adaptadas ao clima e, principalmente, de porta
enxertos de origem asiática, como Pyrus calleryana, A maioria dos
laboratórios de micropropagação detém toda a tecnologia de multiplicação
destes porta-enxertos, eliminando a necessidade de importação dos
mesmos. Em ameixeira, a doença causada pela bactéria Xillella fastidiosa
15
J. A. PETERS
Quadro 1.
Potencialidades para produtos
biotecnológicos de algumas
espécies vegetais, no Brasil.
⇒ Morangueiro
Área Plantada: 1.300 hectares
Necessidade de plantas/ano: 78.000.000
Necessidades de plantas matrizes/ano: 250.000 – 300.000
⇒ Macieira
Área plantada: 27.572 hectares
Produção: 570.000 t
Necessidades de plantas/ano: 2.000.000
Importação: 25.000-35.000 porta enxertos/ano
⇒ Pereira
Produção: 30.000 t
Consumo interno: 280.000 t/ano
Aumento da área plantada: Utilização de Pyrus Calleryana
⇒ Ameixeira
Produção: 9.500 ton
Importação de fruta: 25.000 t
Problemas da cultura: Xilella fastidiosa
Xanthomonas pruni
⇒ Batata
Produção: 2.321.128 t (1 bilhão dolares)
Área plantada no RS: 56.000 hectares
Área plantada com batata-semente: 20%
Importação de sementes: 90.000 caixas de 30 kg
_______________________________________________________
praticamente dizimou com os pomares desta fruteira. A cultura de
meristemas, acoplada à micropropagação tem possibilitado a eliminação
desta e outras doenças que causam sérios danos a esta espécie. Em
videira, 90% do vinhedos apresentam-se viróticos, representando uma
diminuição de 60% na produção. A cultura de meristemas, tem possibilitado
não só a eliminação de doenças como também a multiplicação massal de
variedades de porta enxertos e copas.
16
Os pomares localizados do Estado de São Paulo representam 87% da
citricultura brasileira, contribuindo com um faturamento de exportação
anual de 1,5 bilhão de US$, principalmente em suco concentrado e
subprodutos como pectina, farelo e óleo. Pomares de citros ocupam uma
área de 940,3 mil hectares, 230 milhões de plantas e 23.000 produtores.
Embora as condições edafo-climáticas favoreçam a cultura dos citros em
várias regiões do Brasil, a produtividade média é ainda extremamente
baixa, quando comparada com outros países (2,0 caixas/planta/ano, contra
6,0 na Flórida, a principal região competidora do Brasil). O aumento de
produção nos últimos anos deve-se essencialmente ao aumento de novas
áreas de plantio. Atualmente, a taxa anual de plantios novos está em torno
de 8 milhões de plantas/ano. Mais que expansão de área de plantio, esses
números refletem a reposição em áreas de replantio, como aquelas
afetadas por declínio, clorose variegada, gomose, entre vários outros
problemas que afetam a produtividade do pomar. Um dos elementos mais
importantes da cadeira produtiva dos citros é a produção de borbulhas,
sementes e mudas (plantas matrizes), que pode ser incrementada pela
utilização de técnica de microenxertia.
A batata (Solanum tuberosum L.) é uma das principais hortaliças em área
cultivada no Brasil (181.832 ha), detendo também expressivo volume de
produção (2,3 milhões de t), com um rendimento médio de 17 t/ha e
movimentando cerca de 1 bilhão de US$. Por Estado, Minas Gerais,
Distrito Federal e São Paulo têm produtividade média em torno de 23 t/ha,
enquanto os estados de Santa Catarina, Paraiba e Rio Grande do Sul
apresentam médias menores que 11 t/ha. As principais cultivares plantadas,
no Brasil, são Bintje, Baronesa, Achat, Baraka e Monalisa.
O Estado do Rio Grande do Sul, embora ocupe o primeiro lugar em área
plantada (51.856 ha), apresenta uma produtividade baixa (cerca de 7.000
kg/ha). Vários fatores contribuem para que isto ocorra, como o uso de
variedades suscetíveis a moléstias, principalmente viroses e bactérias, o uso
inadequado de técnicas agronômicas e a não adoção de tecnologias
modernas. O Rio Grande do Sul é o único estado brasileiro que não importa
tubérculos sementes, utilizando variedades produzidas nos Centros de
Pesquisa. Mesmo assim, o valor das sementes certificadas destas
variedades é responsável por mais de 50% do custo de produção.
A cultivar Baronesa é a mais plantada no Sul do Brasil, com cerca de
35.000 ha. Esta variedade foi liberada em 1952, sendo produzida pelo
CPACT/EMBRAPA, e possui tubérculos de película rosa e polpa creme. É
uma cultivar rústica, com alta estabilidade de produção em diferentes
condições agro-climáticas, mas que apresenta suscetibilidade as principais
viroses, como PLRV, PVY e PVX, que podem representar uma redução
de 50% na produção total de tubérculos comerciáveis. A área plantada
com batata-semente, no Estado do Rio Grande do Sul, representa apenas
20% da área total. Assim, a obtenção de matrizes livres das principais
viroses para os programas de certificação de sementes básica e certificada
17
J. A. PETERS
dos Estados brasileiros, é uma das principais atividades dos laboratórios de
micropropagação. Através deste processo, a partir de 6.000 plantas
matrizes podem ser obtidos 24.000 tubérculos pré-básicos. Cada 3.500
tubérculos pré-básicos possibilita a obtenção de 30 t de sementes básicas
ou 130 t de sementes certificadas, no período de dois anos e meio
(considerando dois plantios anuais).
No entanto, existem vários problemas relacionados à micropropagação,
quando o objetivo é a obtenção de plantas matrizes com alta qualidade
genética e sanitária. Entre estes podemos citar: disponibilidade de matrizes,
padrões das plantas micropropagadas aptas à comercialização, testes de
indexação e de pureza, variação somaclonal e, finalmente a desconfiança
dos produtores em relação a este tipo de plantas. Estes problemas tornamse maiores, quando objetivamos a comercialização de plantas
micropropagadas entre os países do MERCOSUL ou do âmbito do
PROCISUR. Deve-se então determinar que doenças são realmente
importantes em cada país e quais os seus graus de injurias ou prejuízos
sobre a produtividade das espécies que serão comercializadas. Além disso,
deve-se estabelecer quais testes de indexação e de pureza que devem ser
realizados nas plantas, que comprovem efetivamente a sua qualidade
sanitária e pureza genética.
No Brasil, as principais frutíferas de clima temperado e olerícolas, são
atacadas por diferentes agentes patogênicos, alguns dos quais causam
sérios danos às plantas afetando consequentemente a produção. Para
algumas destas espécies, existem testes de indexação, que são usados
rotineiramente nos laboratórios comerciais ( Quadro 2). Em macieira, o
vírus da mancha clorótica da macieira (ACLSV) foi encontrado em 45%
das plantas de um lote de 116 amostras, enquanto que o vírus do
Quadro 2.
Principais doenças e testes de
indexação para algumas espécies
de importância econômica no
Brasil
Espécie
Morangueiro
Agentes patogênicos
Complexo de vírus
Testes de indexação
Plantas indicadoras (Fragaria vesca)
Macieira
Apple chlorotic leaf spot virus
Apple stem grooving virus
Sorologia (ELISA) e Plantas
indicadoras
Pereira
Apple chlorotic leaf spot virus
----------------------
Ameixeira
Xilella fastidiosa
Xanthomonas pruni
Sorologia (ELISA)
----------------------
Pessegueiro
Prunus necrotic ring spot virus
Prunus dwarf virus
-------------------------------------------
PVS; PVX; PVY; PLRV; PVA
Sorologia (ELISA e LATEX
SENSIBILIZADO)
Garlic common latent virus
Leek yellow stripe virus
Onion yellow dwarf virus
Sorologia (ELISA)
Sorologia (ELISA)
Sorologia (ELISA)
Batata
Alho
18
acanalamento do lenho (ASGV) apareceu em 70% das plantas indexadas.
O CPACT/EMBRAPA, localizado no Sul do Brasil, desenvolveu tecnologia
para detectar estes vírus através do teste de ELISA.
Outro aspecto importante para a comercialização de plantas
micropropagadas é a determinação da identidade genética do material
vegetal. Atualmente, as tecnologias de marcadores moleculares
possibilitam a análise e a detecção das diferenças ou identidades entre
indivíduos ao nível de DNA. Os marcadores moleculares, como os
descritores morfológicos, nada mais são do que uma nova categoria de
descritores, com a diferença fundamental de que possuem um poder de
resolução significativamente superior, pois permitem analisar o DNA de um
indivíduo. Dentre os principais marcadores genéticos utilizados na análise
genética de plantas, temos: isoenzimas, RFLP (Restriction Fragment
Length Polymorphism); RAPD (Random Amplified polymorphic DNA),
AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism e microsatélites. Estes
mesmos marcadores moleculares podem, também, ser utilizados para
verificar possíveis variações somaclonais nos materiais micropropagados.
No Brasil, a utilização destas técnicas moleculares, no processo de
micropropagação, é ainda muito pequeno, estando restrita aos Institutos
de Pesquisa.
Conforme pode ser observado, muito deve ser realizado no âmbito dos
países do PROCISUR, visando a utilização plena e segura de plantas
micropropagadas.
LITERATURA
CONSULTADA
BITTENCOURT, C.; REIFSHNEIDER, F.J.B.; MAGALHÃES, J.R.; FURUMOTO, O.;
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Ruy de Araújo Caldas et al., Brasília: CNPq, 275p.
CAPÍTULO II
CALIDAD SANITARIA
ASPECTOS
TÉCNICOS DE LA
PRODUCCIÓN DE MATERIALES DE
SANIDAD CONTROLADA
Si uno analiza las etapas que debe enfrentar al comenzar un trabajo de
propagación genético sanitario, sin duda tiene que enfrentarse con la
selección del material inicial, su procesamiento y la verificación final del
estado sanitario.
ETAPAS CRITICAS EN EL
CONTROL SANITARIO
• Selección del material inicial
• Constatación del estado sanitario inicial
• Liberación de patógenos
• Cultivo in vitro
• Verificación del estado sanitario
Selección del material inicial
presentado por S.F. Nome,
Director del Instituto de
Fitopatología Fisiología
Vegetal (IFFIVE), Instituto
Nacional de Tecnología
Agropecuaria, Argentina.
En base a trabajos de
Dra. Vilma Conci; Biól. Pablo
Lunello; Biól. Ana Canavelli e
Ing. Agr. Eva Cafrune
Una buena selección del material inicial condiciona el éxito del programa
de producción de plantas con control genético y sanitario. Cuando la
iniciativa parte de fitopatólogos, este último punto suele ser prioritario y
sucede a la inversa cuando el que lo inicia es un fitotecnista. Obviamente lo
ideal es el trabajo en equipo y aplicar criterios equilibrados: elegir las
mejores plantas del tipo genético deseado y de mayor productividad, con el
mejor estándar de sanidad posible.
La calidad genética puede ser constatada por descriptores o por medios
moleculares y la sanitaria por la variedad de métodos de diagnóstico
aplicables a distintas especies. En ajo, por ejemplo, actualmente sólo
trabajamos con material seleccionado por los especialistas en los cultivos
respectivos en base a descripciones registradas que consignan peso y
diámetro del bulbo, número de bulbillos/bulbo, color, forma de la planta,
número de hojas fértiles, número de hojas por planta, peso de bulbillos,
días a madurez, rendimientos, etc.
22
ASPECTOS TECNICOS DE LA PRODUCCION DE MATERIALES DE SANIDAD CONTROLADA
Constatación del estado sanitario inicial
Al verificar la sanidad del material inicial se suelen cometer errores que se
agravan con el avance de las tareas de multiplicación. La definicion de
patógenos a excluir, los métodos de detección a emplear y el tipo de tejido
y época para la toma de muestras, son de capital importancia. Si tenemos la
certeza que la planta inicial está libre de los patógenos determinados, nos
ahorramos las etapas mas costosas de todo el procedimiento y podemos
proceder a su multiplicación.
Emplearé el ejemplo de ajo y batata para demostrar su importancia.
Ajo
En ajo consideramos los siguientes virus: onion yellow dwarf(OYDV),
leak yellow stripe (LYSV), carnation latent virus de ajo (CLV), un virus no
asignado transmitido por ácaros (GAR VA), y garlic yellow streak (GYSV)
La concentración de virus varía según la época y el virus. La concentración
relativa (valores de absorbencia de la muestra enferma sobre el promedio
de 6 testigos sanos más 2 desvíos estándar) permite comparaciones de
mediciones en diferentes épocas y laboratorios. Así por ejemplo, en ajo
Blanco, OYDV puede ser verificado durante todo el año, pero con mayor
seguridad en octubre. CLV da valores bajos durante todo el año. En ajo
Colorado la situación es semejante pero el pico de máxima se da en
Octubre (Figuras 1 y 2).
Figura 1.
Curvas de concentración de virus en ajo
Blanco según época
S.F. NOME
23
Figura 2. Curvas de
concentración de virus en ajo
Colorado según época.
Asimismo, si consideramos el tipo de hoja que se toma como muestra
(apical, media o basal), observamos diferencias en concentración de virus
según posición de la hoja y cultivar. Como ejemplo se muestra en Figura 3
los resultados en ajo Blanco.
Figura 3.
Curvas de
concentración por tipo
de tejido en ajo
Blanco.
24
Cuando se intenta propagar material con control sanitario, es de interés
saber si en ajo, el análisis de un diente es representativo de la cabeza
entera. Al respecto hemos podido observar que, en plantas crónicamente
infectadas, un diente es representativo del estado sanitario de toda la
cabeza de ajo. En infecciones del año los resultados son erráticos. Además,
los dientes internos concentran más a todos los virus probados.
Batata
En batata la concentración de virus es muy variable según el tipo de tejido
y la época de muestreo. En general ninguna muestra aislada (hojas del
extremo medio o base de las guías) garantiza en forma aislada un 100% de
efectividad en el diagnóstico. En la Figura 4 se observa que los valores más
altos corresponden a muestras del ápice y que se acentúan al llegar a la
madurez de la planta.
La concentración en raíces tuberosas (camotes) es baja después de la
cosecha, pero se acentúa notablemente después de 180 días, en la etapa
previa al almácigo, de modo que ése sería el momento indicado para
detectar virus y constatar la sanidad del material a emplear como
propágulos (Figura 4).
Figura 4.
Porcentaje de detección de
SFMV en batata a través
de la prueba ELISA según
diferentes posiciones de
muestreo
25
S.F. NOME
Liberación de patógenos
Si determinamos que las plantas que vamos a emplear para propagar están
infectadas y no podemos conseguir sanas de otra fuente (o es más difícil
hacerlo que seguir los pasos posteriores), la termoterapia y el cultivo de
meristemas, separadamente o en combinación, son las técnicas más
empleadas para iniciar el proceso de liberacion de patógenos.
Los principales inconvenientes de la termoterapia son la extrema
sensibilidad de algunas especies al tratamiento y el incremento de
contaminaciones cuando va seguida de cultivo in vitro.
La respuesta a termoterapia varía en ajo según cultivar y el virus
considerado. Los ensayos que se están realizando muestran un
comportamiento extraño, que en algunos casos se traduce en una
disminución inicial de la concentración de virus medida en hojas, seguida
de un posterior aumento (Figura. 4). En base a ellos se están recomendando
tiempos de termoterapia para distintos cultivares (Figura 5 y 6 ). Los
resultados comparativos de la sanidad de los meristemas obtenidos de las
mismas plantas aún no están terminados, ellos permitirán afinar
adecuadamente estas recomendaciones.
Figura 5.
Tiempos recomendados de
termoterapia a 37 º C en
diversos Cvs. de ajo
26
Concentración relativa de OYDV en el cv. Castaño, a los 0, 15, 30, 45 y 60 días de tratamiento
Concentración relativa de OYDV en el cv. Colorado
Precoz, a los 0, 15, 30, 45 y 60 días de tratamiento
Concentración relativa de LYSV en el cv. Castaño, a los 0, 15, 30, 45 y 60 días de tratamiento
Concentración relativa de LYSV en el cv. Colorado
Concentración relativa de GarV-A en el cv. Colorado
Figura 6. Concentración de OYDV , LYSV y GarV-A en brotes de dientes sometidos a
termoterapia ( 37 º C) de algunos cultivares de ajo.
27
S.F. NOME
Cultivo in vitro
Las técnicas de cultivo in vitro, en buena parte están descriptas para la
mayoría de las especies cultivadas de propagación agámica, no así para
cultivares. A pesar de ello es ampliamente conocido que los métodos
descriptos deben ser ajustados a las condiciones de cada laboratorio y eso
lleva tiempo y gastos que no siempre son reconocidos por los organismos
que otorgan subsidios. Otro aspecto importante son las contaminaciones
iniciales que obligan en algunos casos a tratamientos previos a las plantas
iniciadoras (bactericidas, fungicidas sistémicos)
Verificación del estado sanitario
Los métodos de detección empleados en IFFIVE para los diversos cultivos
en estudio ( ajo, batata, tomate, frutales de carozo, papa, etc.) incluyen:
✓
Plantas indicadoras
✓
ELISA (DAS ELISA, NC ELISA, PTA ELISA)
✓
PCR
✓
ISEM
Es importante que la verificación de la condición sanitaria de la planta que
va a iniciar una progenie sea constatada rigurosamente por diversos
métodos. Así por ejemplo, en ajo las plantas que han sido tratadas por
termoterapia seguida de cultivo de meristema son revisadas por ELISA, las
que dan valores positivos son descartadas y las negativas son nuevamente
analizadas por inmunomicroscopía electrónica (ISEM con decoración).
ELISA por si solo no es un método suficientemente sensible para detectar
virus en plantas in vitro de ajo. En cambio ISEM es ideal pues no tiene
falsos positivos, pero es engorroso y caro de aplicar.
La descendencia de las plantas negativas mantenidas en condiciones que
prevengan las contaminaciones, es muestreada periódicamente y si se
constatan infecciones en alguna línea, es eliminada por completo.
En camote, el ejemplo que se esquematiza a continuación funcionó con
gran éxito durante varios años. Consistía en entregar un número de plantas
libres de virus a grupos asociados de agricultores, quienes se encargaban de
hacer multiplicaciones sucesivas, primero en jaulas anti-áfidos y luego a
campo en regiones aisladas de contaminaciones (Figura 7).
Posteriormente no fue necesaria su aplicación, dada la alta tolerancia al
virus prevalente en la región, del cultivar Morada INTA. Cabe destacar que
en Córdoba los productores de camote son de mediana a gran magnitud, es
decir plantan superficies de 5 a 200 ha.
28
Figura 7. Esquema de producción de plantas de camote libres de virus en la región de Jesús
María, Córdoba.
CAPÍTULO III
CALIDAD GENÉTICA
DISPONIBILIDADE
DE TÉCNICAS
MOLECULARES PARA A
IDENTIFICAÇÃO VARIETAL
INTRODUÇÃO
O interesse pela caracterização de variedades tem aumentado
significativamente no mundo inteiro nas últimas décadas. O motivo
principal para isso tem sido a crescente necessidade de proteção de
variedades comerciais em mercados econômicos cada vez mais
competitivos.
Tradicionalmente os melhoristas têm utilizado descritores morfológicos
para o registro e lançamento de nova variedade. Ainda que a identificação
de variedades feita desta forma continue sendo predominante e importante,
as limitações deste tipo de descritor têm gerado a necessidade de busca de
outras alternativas. No primeiro momento surgiram os descritores de
proteína que, em culturas como o trigo, têm sido de grande utilidade. Mais
recentemente, os descritores de DNA, baseados no genótipo do indivíduo,
têm recebido maior atenção, especialmente pelo seu potencial de distinção
de genótipos morfologicamente similares e geneticamente aparentados. O
termo “fingerprinting” ou impressão digital tem sido utilizado para
descrever o padrão molecular de um genótipo.
O objetivo desse trabalho é o de revisar os princípios básicos, as
potencialidades e as limitações do uso de marcadores moleculares na
identificação de variedades, comparando-os com outros tipos de
descritores.
TIPOS DE DESCRITORES
Sandra Cristina Kothe Milach
PhD., Professora Departamento
de Plantas de Lavoura, Fac.
Agronomía, Universidade
Federal do Rio Grande do Sul,
Porto Alegre, RS, Brasil
Os três principais tipos de descritores hoje disponíveis ao melhoramento de
plantas são: os morfológicos, os de proteínas e enzimas, e os de DNA.Os
descritores morfológicos são ainda hoje o “cartão de apresentação” de uma
nova variedade. Estes têm tido papel fundamental na divulgação das
características agronômicas de novos materiais genéticos e podem
influenciar decisivamente na escolha de variedades por parte de
agricultores e outros interessados. Quando se trata da distinguibilidade
exigida pela lei de proteção de variedades, contudo, os descritores
morfológicos apresentam limitações, especialmente na distinção de
genótipos elites, aparentados. Em culturas de base genética estreita, eles
32
DISPONIBILIDADE DE TECNICAS MOLECULARES PARA A IDENTIFICAÇÃO VARIETAL
podem muitas vezes não distinguir adequadamente variedades comerciais
(Smith & Smith, 1992). Além disso, características morfológicas são
baseadas no fenótipo de indivíduos e esse é o resultado do genótipo em
interação com o ambiente onde se encontra (Falconer, 1960). Devido aos
efeitos da interação genótipo x ambiente, é certamente difícil comparar
variedades com dados morfológicos obtidos de ambientes (locais e anos)
distintos. Os melhoristas têm buscado contornar este problema através do
uso de variedades testemunhas nos diferentes ambientes. Em muitos casos,
contudo, esse procedimento não é suficiente para que a caracterização de
um genótipo possa considerá-lo distinto (Higgins et al., 1988).
Descritores baseados em proteínas e enzimas passaram a ser efetivamente
utilizados em caracterização de variedades na década de 70. O uso desses
representou um avanço para o melhoramento de plantas, não apenas na
caracterização de variedades, mas também porque possibilitou a obtenção
de estimativas de distância genética entre genótipos e, assim, o acesso à
variabilidade existente. Smith & Smith (1992) apresentam uma extensa
lista de trabalhos de caracterização de variedades feitos com base nesses
descritores, e o maior número esta registrado para as culturas do trigo e
milho.
Dez anos após os primeiros trabalhos com descritores de proteínas e
enzimas, surgiram os de DNA, com capacidade de detectar variação
genética adicional. O avanço principal que essas técnicas trazem é a
possibilidade de acessar diretamente o genótipo de um indivíduo, evitando,
assim, a expressão do fenótipo e a influência do ambiente sobre este.
Também, enquanto os descritores de proteína amostram apenas as regiões
ativas na expressão gênica, os de DNA permitem uma ampla amostragem
do genoma de um indivíduo. Mutações que ocorrem em regiões não
codificadoras de genes podem ser identificadas com análise de DNA, mas
não com a análise morfológica ou de proteínas. O fato de haver um
número quase ilimitado de descritores de DNA disponíveis e esses
possibilitarem o amplo acesso da variabilidade genética em diversas
espécies vegetais, faz dessa uma classe de descritores de crescente
importância para caracterização de variedades.
MARCADORES
MOLECULARES NA
IDENTIFICAÇÃO DE
VARIEDADES
Várias técnicas que permitem revelar variabilidade a nível de DNA estão
disponíveis. Características de DNA que diferenciam dois ou mais
indivíduos e são herdadas geneticamente são conhecidas como marcadores
moleculares.
Os principais tipos de marcadores moleculares podem ser classificados em
dois grupos, conforme a metodologia utilizada para identificá-los:
hibridização ou amplificação de DNA. Entre os identificados por
hibridização estão os marcadores RFLP (“Restriction Fragment Length
Polymorphism”) e Minissatélites ou locos VNTR (“Variable Number of
Tandem Repeats”). Já aqueles revelados por amplificação incluem os
S. C. KOTHE MILACH
33
marcadores do tipo: RAPD (“Random Amplified Polymorphic DNA”);
SCAR (“Sequence Characterized Amplified Regions”) ou ASA (Amplified
Specific Amplicon); Microssatélite (ou SSR - “Simple Sequence Repeats”);
e AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism). As tecnologias de
marcadores moleculares estão evoluindo rapidamente e modificações já
existem para algumas das técnicas acima mencionadas. Contudo, os tipos
de marcadores aqui listados são os que ainda estão sendo utilizados para
caracterização de variedades. O detalhamento de cada um dos tipos de
marcadores acima citados pode ser encontrado em Milach (1998a) e
Ferreira & Grattapaglia (1995).
A técnica de RFLP é elaborada; mais demorada que as outras técnicas para
obtenção de resultados; de custo relativamente alto; e tem revelado um grau
de polimorfismo de intermediário a baixo, conforme a espécie. Mesmo
assim, os RFLPs têm sido utilizados em um grande número de estudos de
caracterização de variedades (Gebhardt et al., 1989; O’Donoughue et al.,
1994; Autrique et al., 1996) . Isso tem sido devido principalmente a sua alta
consistência e repetibilidade na obtenção dos resultados.
Os minissatélites ou locos VTNR são seqüências repetitivas de DNA,
adjacentes e em número variável (Jeffreys et al., 1985). Essa técnica é
similar a de RFLP, variando basicamente o tipo de sonda utilizado, e
apresentado as vantagens e desvantagens já apresentadas para a técnica
anterior. Uma vantagem adicional dos minissatélites é o alto grau de
polimorfismo apresentado, decorrente da variação na distribuição dos sítios
de restrição, das sondas utilizadas, e do número e tipos das seqüências
repetitivas. De fato, utilizando apenas uma sonda de minissatélite, Nybom
et al. (1990) caracterizaram quatro variedades de Malus sp., quatro de
Prunus serotina e oito de Rubus sp.
A técnica de RAPD, dentre as apresentadas, é a de menor custo, número de
etapas, e tempo para obter os resultados; e é fácil de implementar. Essa,
contudo, tem a desvantagem de ser de repetibilidade baixa e pouco
consistente de um laboratório para o outro, o que dificulta a comparação de
dados obtidos em diferentes locais. Assim, cuidados devem ser tomados na
padronização da técnica no laboratório para a caracterização de variedades.
O nível de polimorfismo obtido com RAPDs varia grandemente com a
espécie em questão, e tem sido utilizada com sucesso na caracterização de
variedades de cevada (Tinker et al., 1993; Penner et al., 1998), e arroz
(MacKill, 1995), entre outras.
Marcadores SCAR são amplificados com primers específicos,
desenvolvidos com base em seqüências já mapeadas ou caracterizadas
(Paran & Michelmore, 1993). Muitos desses primers são obtidos da
conversão de marcadores RAPD em SCAR. Essa conversão em geral
resulta na diminuição do nível de polimorfismo obtido por SCAR.
Contudo, isso pode ser amenizado com a digestão com enzimas de restrição
dos produtos amplificados; e com o sequenciamento das bandas
monomórficas e subseqüente desenvolvimento de primers que amplificam
seqüências mais variáveis entre os genótipos. A técnica de SCAR é muito
34
semelhante a de RAPD, com a vantagem de ser mais consistente e
desvantagem de envolver o desenvolvimento de primers, o que eleva o
custo.
Os Microssatélites envolvem o desenvolvimento de primers
específicos, que é um processo elaborado e caro. Mas uma vez que
estes estejam disponíveis, o custo da técnica assemelha-se a de RAPD,
com exceção de que os géis para resolver os fragmentos de DNA
devem ser de policrilamida e esses são de custo mais elevado. A maior
vantagem dessa técnica é o elevado polimorfismo revelado, o que a
torna uma das melhores opções para uso na caracterização de
variedades, especialmente em germoplasma aparentado e de baixa
variabilidade.
ASPECTOS IMPORTANTES
NA CARACTERIZAÇÃO POR
MARCADORES
MOLECULARES
Por fim, a técnica de AFLP possui grande capacidade para detecção de
variabilidade genética e uso em caracterização de variedades. De fato,
tem sido utilizado com sucesso em girassol para essa finalidade
(Hongtrakul et al, 1997). Entre as vantagens do uso desta estão o alto
grau de polimorfismo e o mais alto número de marcadores obtidos por
gel analisado. AFLP é a mais elaborada das técnicas de PCR, necessita
gel de policrilamida para resolução dos fragmentos e é protegida por
patente.
Várias questões devem ser consideradas na caracterização de
variedades com marcadores moleculares para um determinada espécie.
Entre elas estão: Que tipo de marcador utilizar? Qual é o número
mínimo de marcadores necessários para caracterizar um grupo de
variedades? Quanto tempo será necessário para obter a caracterização
de uma nova variedade?
As respostas para essas perguntas dependem de uma série de
considerações. Em primeiro lugar, o nível de polimorfismo varia
muito de uma espécie para outra. Em espécies em que os níveis de
polimorfismo são relativamente altos, como é o caso da aveia
hexaplóide cultivada (Milach et al., 1997), um número menor de um
tipo de marcador como RFLP (que não é o sistema mais polimórfico
existente) é suficiente para a caracterização de variedades. De fato,
utilizando apenas 18 sondas de RFLP com uma enzima de restrição,
O’Donoughue et al. (1994) conseguiram distinguir, em 100%, 83
variedades Norte-americanas de aveia. As 18 sondas revelaram 205
locos genéticos polimórficos entre as variedades analisadas,
evidenciando o alto nível de polimorfismo. No caso da soja, para
distinguir 10 variedades, foram necessários utilizar seis clones de
RFLP (com três enzimas de restrição) e sete primers de RAPD (Prabhu
et al., 1997). Mesmos assim apenas 36 locos polimórficos foram
identificados. Também o número de variedades a serem caracterizadas
35
S. C. KOTHE MILACH
é importante. Quanto maior o número de variedades, maior deve ser o
número de locos polimórficos para diferencia-las.
O polimorfismo detectado para uma espécie varia muito com o tipo de
marcador utilizado. Por exemplo, em arroz, o número de locos
polimórficos detectados por uma sonda de minisatélite (Zhou &
Gustafson, 1995) foi superior que aquele obtido por primer de RAPD
(Cao & Oard, 1997). A diferença entre esses tipos de marcadores
ocorre em outras espécies vegetais.
O tempo para caracterizar uma nova variedade depende basicamente
do: tipo de marcador a ser utilizado (enquanto que a análise de RFLP
pode levar até 3 semanas, a de RAPD leva apenas um dia); número de
pessoas envolvidas; e número de variedades a serem caracterizadas.
PROTEÇÃO DE VARIEDADES
Conforme já mencionado, para uma variedade ser registrada e
protegida no Brasil, ela deve alcançar os critérios de distinção,
uniformidade e estabilidade. Os mesmos critérios são utilizados
internacionalmente (Bayle, 1983).
O potencial de uso de marcadores moleculares para a caracterização de
variedades com fins de proteção é enorme, como têm revelado
trabalhos com diversas espécies vegetais (Milach, 1998b).
Segundo Smith & Smith (1992), na Europa, onde a proteção de
variedades é feita a mais tempo, até a data da publicação daquele
artigo, os descritores morfológicos ainda eram a base da caracterização
de variedades para a maioria das espécies. Contudo, na Inglaterra, os
padrões eletroforéticos de gliadinas têm sido utilizados junto com os
descritores morfológicos para distinção de variedades de trigo; e novas
variedades com padrões idênticos de gliadinas não são recomendadas.
Na França, desde 1990 os dados de padrões isoenzimáticos são
requeridos para a identificação e registro de novas linhagens de milho,
havendo planos de solicitar os padrões de marcadores de DNA. Mesmo
assim, o uso de marcadores moleculares para registro de novas
variedades ainda é limitado, mesmo em países onde a proteção de
variedades já é praticada a bastante tempo. No entanto, com a recente
disponibilidade de técnicas de DNA que revelam alto nível de
polimorfismo e consistência nos resultados, é provável que os
marcadores moleculares passem a ser incluídos no registro de novos
genótipos.
Cabe ainda salientar que a padronização das técnicas moleculares será
passo fundamental para a comparação de genótipos dentro de cada
espécie, pois variações nos resultados de caracterização molecular
podem ocorrer em função de ajustes nas mesmas. De fato, em países
com tradição na proteção de variedades, os protocolos de análise de
laboratório têm sido padronizados (Draper, 1987).
36
CONSIDERAÇÕES FINAIS
A demanda pela caracterização molecular ou o “fingerprinting” de
genótipos tende a crescer nos próximos anos no Brasil, especialmente em
decorrência da Lei de Proteção de Variedades. Devido a necessidade de
técnicas padronizadas e técnicos treinados para conduzir a caracterização
molecular, é provável que a maioria dos programas e empresas de
melhoramento de plantas do país busquem a contratação do serviço de
laboratórios especializados. Vários desses laboratórios já existem em
instituições públicas e privadas no Brasil e poderão satisfazer essa
demanda. O importante, contudo, é que sejam estabelecidos padrões
mínimos para condução das análises laboratoriais para cada espécie e tipo
de marcador utilizado. O ideal seria que para a mesma espécie e marcador
em questão, esses padrões fossem nacionais. Na impossibilidade disto
ocorrer, haverá necessidade do “fingerprint” de uma variedade vir
acompanhado dos procedimentos utilizados na sua determinação.
Além de obter a caracterização de variedades, os programas de
melhoramento que adotarem o uso de descritores de DNA serão
beneficiados com informações adicionais sobre o nível de diversidade e a
constituição genética do germoplasma existente.
LITERATURA CITADA Y
CONSULTADA
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IDENTIFICACIÓN
GENÉTICA DE
FRUTALES DE PROPAGACIÓN
AGÁMICA : EL CASO DE LAS VIDES
EN C HILE
La identificación genética de cultivares ha adquirido gran
relevancia en las últimas décadas, en buena medida debido al
interés de los obtentores de cultivares, quienes necesitan proteger o
patentar estos materiales (Staub y Meglic, 1993) y en parte debido
a las demandas propias de un mercado internacional, que entre
otros aspectos exige que se certifique la identidad y pureza de los
productos expendidos (Meredith, 1996).
Patricio Hinrichsen
Laboratorio de Biotecnología
INIA - La Platina
La identificación de cultivares requiere de una metodología rápida,
precisa, reproducible y de un costo razonable (Morell et al., 1995).
Tradicionalmente, se ha recurrido a distintos tipos de marcadores
genéticos para este propósito, partiendo por los ya clásicos
descriptores de características morfológicas de las plantas (tamaño,
formas y colores de diferentes tejidos), hasta otras formas más
sutiles de expresión génica, como análisis citogenéticos, análisis de
metabolitos secundarios, o identificación de los patrones de
proteínas o isoenzimas. El último y más reciente eslabón en esta
cadena corresponde a los marcadores genéticos basados en la
identificación de polimorfismos de ADN, conducentes a obtener un
fingerprinting o patrón genético propio de cada cultivar (Staub et
al., 1996). Cabe destacarse aquí que estos marcadores tienen una
serie de otras aplicaciones, además del fingerprinting, como la
caracterización de la diversidad genética de germoplasma, la
preparación de mapas de ligamiento genético y el apoyo al
mejoramiento genético mediante el seguimiento de alelos de loci
asociados a caracteres de interés.
En esta ocasión, se describirán algunos trabajos relacionados al uso
de marcadores moleculares basados en la reacción de PCR para la
caracterización genética de especies frutales, específicamente para
diferenciar los cultivares de vid más importantes en Chile, así como
la diferenciación de clones de uno de estos cultivares (Cabernet
Sauvignon), seleccionados por presentar diferencias en la estructura
del racimo. En particular, se discutirá la eficiencia de dos métodos
40
IDENTIFICACION GENETICA DE FRUTALES DE PROPAGACION AGAMICA: EL
CASO DE LAS VIDES EN CHILE
“masivos” que recurren a partidores de PCR de diseño aleatorio, como
son RAPD (random amplified polymorphic DNA; Williams et al., 1990)
y AFLP (amplified fragment lenght polymorphism; Vos et al., 1995), y se
comparará con los resultados obtenidos con microsatélites o SSR (Tautz,
1989; Thomas et al., 1993).
Antecedentes ampelográficos han indicado que existirían errores en la
identificación de ciertos grupos de cultivares. De estos grupos, los más
importantes son algunos cultivares usados para vino tinto, como Cabernet
Sauvignon, Cabernet Franc, Merlot, Carmenere, Pinot Noir, etc.,
cultivares para vino blanco como Sauvignon Blanc, Chardonnay,
Riesling, Chenin Blanc, Gewurstraminer, etc., y cultivares de uva de
mesa, tales como Thompson Seedless (Sultanina), Black Seedless,
Superior, Perlette, Flame Seedless, Ruby Seedless., etc. Incluidos los
genotipos mencionados, se han caracterizado cerca de 60 cultivares
usando los tres métodos mencionados.
DIFERENCIACIÓN
GENÉTICA DE CULTIVARES
DE VID
Al realizar un trabajo de esta índole, hay una serie de etapas iniciales que
se deben optimizar, entre las cuales se debe desarrollar un protocolo de
preparación de ADN en cantidad y calidad apropiados. Además, es
deseable que se pueda usar cualquier tejido de la planta, dado que
usualmente se usan hojas en desarrollo, sólo presentes durante la
primavera y el verano. En nuestro laboratorio fue adaptado un protocolo
descrito por Lodhi et al. (1994) que entrega ADN que permite hacer
cualquiera de las reacciones enzimáticas propias de los protocolos de
marcadores, no sólo la reacción de PCR que es común a todas estas
metodologías, sino también digestiones con enzimas de restricción y
ligaciones, en el caso del AFLP.
Por otra parte, los métodos basados en la amplificación de secuencias
anónimas (RAPD y AFLP) requieren de una etapa de selección de
aquellos partidores de PCR que sean más informativos en cada especie,
bajo condiciones experimentales específicas. En el caso de RAPD se
encontraron numerosos partidores que ni siquiera mostraron productos de
amplificación bajo las condiciones ensayadas. Dieciocho partidores de
RAPD (de 80 ensayados inicialmente sobre tres genotipos elegidos
aleatoriamente) fueron apropiados para vid. En el caso de AFLP, esta
etapa de “preselección de partidores” no fue considerada dado que en
cada reacción se genera un número muy alto de productos de
amplificación; de haberlo hecho, sus valores de heterocigocidad podrían
haber sido aún mayores que lo detectado (Cuadro 1).
Las Figuras 1, 2 y 3 ilustran la separación electroforética de fragmentos
de ADN usando RAPD, AFLP y SSR, respectivamente. Dado que la vid
es una especie muy heterocigota, se constató que no era difícil detectar
polimorfismos entre los diferentes genotipos, usando cualquiera de los
41
P. HINRICHSEN
Número de (combinaciones de)
partidores
Número de loci estudiados
Bandas observadas totales (BO)
Bandas polimórficas (BP)
BP/BO (%)
RM
Hp
Hav
E
MI
RAPD
AFLP
SSR
18
344
103
29.94
19.1
0.61
0.19
5.72
1.09
4
290
86
29.66
72.5
0.25
0.07
21.5
1.60
11
11
88
88
100
1
0.74
1
0.74
Cuadro 1.
Comparación entre
RAPD, AFLP y
SSR como métodos
para diferenciar
genéticamente
cultivares de vid.
tres métodos. De esta manera, cualquier cultivar puede ser diferenciado de
todos los otros 60 genotipos considerados en este estudio, ya sea usando
RAPD, AFLP o SSR.
PERFILES DE RAPD DE CULTIVARES DE VID
St
1
2
3
4
5
6
7
8
9 10 11 12
13 14 15 16 17 18 19
20 21
Figura 1. Patrones de RAPD de 21 genotipos obtenido con el partidor OPB-04 (5’-GGACTGGAGT-3’). Se
destacan ocho bandas polimórficas (flechas amarillas) sobre un total de más de 20 bandas totales, separadas
en un gel de agarosa al 1,5% y teñidas con bromuro de etidio.
42
AFLP DE CULTIVARES DE VID
Figura 2. Patrón de amplificación de AFLP de 51 genotipos de vid con la combinación de AFLP PE1C/
PM1D (AGT/GGT). A la izquierda están indicadas 16 bandas polimórficas separadas en un gel de
poliacrilamida al 6% y teñidas con plata.
43
P. HINRICHSEN
PATRONES DE MICROSATELITES DE CULTIVARES DE VID
1 2
3
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13
14 15 16 17
18 19
VVMD5
240-226
VVMD6
214-194
Figura 3. Patrón de amplificación de vides usando microsatélites. Los productos de dos reacciones de PCR (VVMD-5 y
VVMD-6; “duplex”) se separaron en un gel de poliacrilamida al 6% y se tiñeron con plata. El rango de tamaños de los alelos
de cada locus se indica a la izquierda.
SELECCIÓN DE UNA
METODOLOGÍA DE
TIPIFICACIÓN GENÉTICA
EN VIDES
A pesar de que todas las metodologías fueron capaces de diferenciar los
cultivares, los métodos de naturaleza aleatoria (particularmente RAPD)
carecen de una característica importante: un apropiado grado de
reproducibilidad que permita el intercambio de información entre
laboratorios. Esta condición es propia de los microsatélites (SSR), por lo
que debiera transformarse en el método de referencia, en tanto se disponga
en la especie en cuestión de suficientes marcadores para resolver un
número importante de cultivares, como sucede en vides. AFLP ha
demostrado también ser de utilidad, aunque por las dificultades inherentes
a la técnica, su uso debiera quedar reservado sólo para casos de
consanguinidad muy estrecha, como es el caso de la diferenciación de
cultivares derivados por mutaciones somaclonales (como los diferentes
Pinot) o la identificación de clones de un mismo cultivar.
Además de estas consideraciones generales, se han definido una serie de
parámetros que permiten comparar los diferentes marcadores (Powell et
al., 1996), como el número de polimorfismos que se pueden tener en
promedio en una reacción (valor E), la proporción de bandas polimórficas
sobre el total observado o “Razón múltiple” (RM), o la frecuencia de
polimorfismos para cada locus estudiado (BP/BO), relacionado a la
heterocigocidad observada (Hav). El índice que resume estos factores es
44
denominado “Índice de un Marcador” (MI), y es propio para cada especie.
De acuerdo a Powell et al. (1996), éste debiera ser el factor a considerar
cuando se quiere elegir un método de análisis genómico, sin embargo este
concepto es estrictamente aplicable cuando se trata de estudios de
diversidad genética. En el caso de la identificación genética de cultivares,
el tema que nos preocupa en esta ocasión, la situación es diferente y
aunque sugerentes, estos valores deben ser complementados con los otros
factores detallados más arriba. El cuadro siguiente resume esta
información. Este análisis comparativo consideró 103 polimorfismos
obtenidos con 18 partidores de RAPD, 86 bandas informativas obtenidas
con cuatro combinaciones de partidores de AFLP y el análisis de 11 loci
polimórficos de SSR, los que en conjunto generaron 88 alelos diferentes.
Cabe destacarse que en el caso de los microsatélites (SSR), bastaron sólo
dos de estos marcadores para diferenciar todos los genotipos estudiados
(n=60).
LA IDENTIFICACIÓN
GENÉTICA APLICADA A
PROBLEMAS
PRODUCTIVOS
Como se mencionó en las primeras líneas, aplicando criterios
ampelográficos (esencialmente por la forma de las hojas) se ha
sugerido que ciertos cuarteles de parrones comerciales tendrían un
porcentaje de mezclas de genotipos, muchas veces no
identificados. Para estudiar esta situación desde un punto de vista
genético, se analizó un número de plantas de estos huertos,
básicamente de cepas para vinos tintos y principalmente del
cultivar Merlot. Los resultados han demostrado que efectivamente
existe un porcentaje de plantas que está mal indexado. Por
ejemplo, fue corriente detectar plantas con el patrón de alelos
correspondiente al raro cultivar Carmenere, casi no existente a
nivel comercial (en Francia se cultivan unas cinco ha en total).
También se encontró en una ocasión plantas que, habiendo sido
importadas desde California, EEUU, como Merlot (información
aportada por los productores), se trataba de una mezcla de
Cabernet Franc y Cabernet Sauvignon. Estos antecedentes son
interesantes por cuanto indican que el problema de la
identificación de los cultivares parece ser global y no exclusivo de
un determinado país, región o viverista, y por otra parte, queda
abierta la posiblidad de que usando estos marcadores moleculares
se puede (i) estimar si los huertos son “genéticamente
homogéneos”, o de lo contrario calcular la incidencia de cada
genotipo en cada viñedo, y (ii) desarrollar nuevos viveros a partir
de plantas que estén genéticamente certificadas. Esta última
opción está siendo actualmente implementada por viveristas
chilenos.
P. HINRICHSEN
45
Otra aplicación interesante ha sido la determinación de patrones
genéticos con el propósito de caracterizar un cultivar usado desde
mucho tiempo, y en este sentido protegerlo de ser patentado (nótese
que este es el caso opuesto a lo que se observa más corrientemente,
es decir, que el obtentor o quien ha licenciado un cultivar requiere del
patrón molecular del mismo para su protección). En este contexto, se
realizó la caracterización del cultivar Black Seedless, de origen
desconocido, y que es cultivado casi exclusivamente en Chile desde
hace bastantes años. El patrón de alelos de microsatélites resultó
diferente de todos los cultivares tipificados a la fecha, coincidiendo
con resultados independientes de investigadores españoles (J.L.
Cenis, comunicación personal) en tres loci. Esta evidencia permitirá
a los productores nacionales contar con un elemento de juicio que les
permita defender sus derechos a nivel internacional, dado que la
probabilidad de que dos cultivares compartan todos sus alelos en 12
loci diferentes es bajísima, en el orden de 1:500 a 1:10-11 (Bowers y
Meredith, 1997).
DIFERENCIACIÓN DE
CLONES
Dado que actualmente numerosos cultivares son comercializados
como clones específicos, diferenciados por una o más características
productivas, se propuso también desarrollar la capacidad de
diferenciar estos genotipos particulares. En este caso, sí es
importante disponer de un método que permita encontrar una gran
cantidad de información en cada reacción, característica que es
propia de AFLP.
Para verificar esta hipótesis, se comparó la capacidad discriminativa
de los tres métodos (RAPD, AFLP y SSR) sobre una colección de
clones de Cabernet Sauvignon, cuya principal diferencia (aparte del
origen geográfico, distintos valles de la región central de Chile)
radicaba en la estructura del racimo, un carácter de gran interés
productivo. Los 12 microsatélites ensayados mostraron una perfecta
homogeneidad entre los clones; algo similar fue encontrado al usar
algunos partidores de RAPD para analizar las mismas muestras. Sin
embargo, con una serie de partidores de AFLP fue posible detectar
bandas que discriminaron un tipo de clon de los otros (resultados no
mostrados). Antes de establecer esta metodología como la forma de
identificación genética para clones de un cultivar, se debe dejar
establecida la combinación de partidores de AFLP a usar en cada
cultivar y/o grupo de clones, o alternativamente, se puede
caracterizar mediante secuenciación la banda de interés, para diseñar
partidores de PCR que reconozcan clones específicos.
46
LITERATURA CONSULTADA
Y CITADA
NOTA: Algunos de los resultados y
conceptos vertidos en este
manuscrito son parte de las
siguientes publicaciones (en prensa
o sometidas):
• Hinrichsen, P., Narváez, C., Valenzuela,
•
J., Muñoz, C., Bowers, J.E. &
Meredith, C.P. (1999). Fingerprinting
of grape cultivars grown in Chile:
Comparison of methods based on
anonymous sequences and a set of
microsatellite loci. Acta Horticulturae,
en prensa.
Narváez, C., Valenzuela, J., Muñoz, C. e
Hinrichsen, P. (1999). Comparación de
RAPD y AFLP como métodos de
identificación genética de vid basada
en el estudio de fragmentos genómicos
anónimos. Agricultura Técnica,
sometido.
BOWERS, J.E. & MEREDITH, C.P. 1997. The parentage of a classic wine
grape, Cabernet Sauvignon. Nature Genetics 16:84-87.
LODHI, M.A., YE, G.-N., WEEDEN, N.F. & REISCH, B.I. 1994. A simple
and efficient method for DNA extraction from grapevine cultivars and
Vitis species. Plant Molec. Biol. Rep. 12:6-13.
MEREDITH, C.P. 1996. What is Petite Sirah? Practical Win. Vineyard March/
April:1-2
MORELL, M.K., PEAKALL, R., APPELS, R., PRESTON, L.R. & LLOYD,
H.L. 1995. DNA profiling techniques for plant variety
identification. Aust. J. Exp. Agric. 35:807-819.
POWELL, W., MORGANTE, M., ANDRE, C., HANAFEY, M., VOGEL, J.,
TINGEY, S. y RAFALSKI, A. 1996. The compa-rison of RFLP, RAPD,
AFLP and SSR markers for germoplasm analysis. Molec. Breed. 2:255263.
STAUB, J.E. & MEGLIC, V. 1993. Molecular genetic markers and their
legal relevance for cultivar discrimination: A case study in
cucumber. HortTechnology 3:291-300.
STAUB, J.E., SERQUEN, F.C. y GUPTA, M. 1996. Genetic markers, map
construction, and their application in plant breeding. HortScience
31:729-741
TAUTZ, D. 1989. Hypervariability of simple sequences as a general source
for polymorphic DNA markers. Nucleic Acids Res. 17:6463-6471.
VOS, P., HOGERS, R., BLEEKER, M., REIJANS, M., van de LEE, T.,
HORNES, M., FRITJERS, A., POT, J., PELEMAN, J., KUIPER, M. Y
ZABEAU, M. 1995. AFLP: a new technique for DNA fingerprinting.
Nucleic Acids Res. 23:4407-4414.
WILLIAMS, J.G.K., KUBELIK, A.R., LIVAK, K.J., RAFALSKI, J.A. y
TINGEY, S.V. 1990. DNA polymorphism amplified by arbitrary primers
are useful as genetic markers. Nucleic Acids Res. 18:6531-6535.
CAPÍTULO IV
CERTIFICACIÓN
DE
MATERIALES VEGETALES
LA
CERTIFICACIÓN DE PLANTAS
COMO INSTRUMENTO DE
CALIDAD
Una de las estrategias que se ha desarrollado en forma muy importante en
la agricultura contemporánea, a los efectos de lograr alcanzar los máximos
niveles de productividad y competitividad, pasa por lograr la
disponibilidad de materiales de propagación que cumplan con niveles
adecuados de calidad.
Dentro de este concepto de calidad se incluyen aspectos fitosanitarios
dado que existen plagas que afectan directamente la posibilidad de
expresión del potencial productivo de un cultivo y su longevidad, y de
identidad genética que permitan contar con la certeza en cuanto a que el
producto que se pretende obtener sea efectivamente el deseado.
Estos dos aspectos que hacen a la calidad de los materiales de propagación
cobran particular importancia en aquellos cultivos que se propagan
vegetativamente, es decir, que a partir de una fuente conocida tanto en
cuanto a su condición sanitaria como a su identidad varietal, pueden
obtenerse millones de individuos que mantengan las condiciones del
material original o inicial.
Para dar adecuadas garantías en cuanto a la calidad de los materiales de
propagación, es necesario desarrollar e implementar Programas de
Certificación que, respondiendo a una Norma Técnica (Estándar),
establecen las condiciones que se deben cumplir para obtener los
materiales de propagación requeridos.
Jacques Borde
INASE - Materiales de
Propagación Vegetativa
DGSA - Departamento de
Mejora Fitosanitaria
Alfredo Fossali
DGSA - Programa Nacional de
Certificación de Cítricos.
En términos generales, los Programas de Certificación consisten en definir
las condiciones que, a partir de un Material Inicial, se establecen etapas de
multiplicación del mismo a los efectos de obtener los volúmenes
requeridos cumpliendo con las condiciones establecidas.
El Material Inicial puede obtenerse a partir de materiales locales
seleccionados sobre la base de sus características productivas y
comportamiento agronómico o a partir de materiales introducidos.
Frecuentemente los materiales locales deben ser sometidos a Programas
de Saneamiento de forma tal de eliminar aquellas plagas que afectan su
calidad.
50
LA CERTIFICACION DE PLANTAS COMO INSTRUMENTO DE CALIDAD
En el caso de materiales foráneos a introducirse, deben ser sometidos a
Programas de Cuarentena que, además, garanticen la no introducción de
plagas inexistentes en un país o región y que pueden comprometer la
viabilidad de un cultivo.
Al material candidato a ser incluido en un Programa de Certificación como
Material Inicial se le debe establecer su condición fitosanitaria de manera
de corroborar si cumple con los requerimientos establecidos.
La condición fitosanitaria del Material candidato se establece aplicando las
metodologías de diagnóstico más adecuadas. En algunos casos se dispone
de metodologías rápidas, fiables y económicas (Serología, sPAGE, etc.) y
en otros se debe recurrir a metodologías que, manteniendo su fiabilidad,
implican un mayor tiempo y mayores costos (diagnóstico en plantas
indicadoras) o son difícilmente rutinizables (Ej.:PCR).
En función de estos diagnósticos puede requerirse la aplicación de técnicas
que permitan liberar de las plagas detectadas a ese material de interés.
Normalmente se recurre al cultivo de tejidos, quimioterapia y
termoterapia, ya sea en forma individual o combinándolas.
Salvados todos estos requisitos que aseguran la calidad fitosanitaria de
los materiales, se conforman los Bloques Fundacionales, los que dan
origen a las futuras multiplicaciones, con el objetivo de incrementar su
disponibilidad.
Los Bloques de incremento
deberán cumplir con requisitos
específicos que minimicen los
riesgos de contaminación y serán
sometidos a controles periódicos
que den garantías del
mantenimiento de la calidad
deseada a lo largo de todo el
proceso.
J. BORDE y A. FOSSALI
51
En cuanto a la Identidad Genética del material, el propio proceso de
multiplicación clonal a partir de una fuente conocida, proporciona un
importante nivel de garantía en cuanto al mantenimiento de la identidad
genética de dichos materiales. Las permanentes inspecciones a los Bloques
de Fundación y a los de Incrementos, así como la posibilidad de realizar
post-controles (instalación de parcelas, cambio de copa) permiten reunir las
garantías de calidad genéticas requeridas.
En resumen, los Programas de Certificación permiten poner a
disposición de los sectores productivos materiales de propagación que
cumplan con estándares de calidad establecidos, ya sea, recurriendo a
materiales locales así como posibilitando la introducción segura de material
foráneo y permitiendo alcanzar niveles de productividad y adecuación a las
exigencias de los mercados que garanticen su competitividad y
sostenibilidad.
CERTIFICACIÓN DE VARIEDADES:
LA VISIÓN DE UPOV
EVOLUCIÓN HISTÓRICA
La protección de las obtenciones vegetales es un concepto que se ha
desarrollado en este último siglo, como necesidad social de incentivar la
actividad creadora del fitomejorador a través de un reconocimiento de
dicha actividad como beneficiosa para el conjunto social, que se traduce
en la concesión de un monopolio temporal de explotación de su creación
vegetal.
La tradición atribuye a los estados papales la función de vanguardia. Sin
embargo, el edicto de 1833 relativo a las declaraciones de nuevas
invenciones y descubrimientos en materia de arte (tecnología) y
agricultura era de naturaleza general y nunca fue aplicado.
A principios de siglo en los Estados Unidos de América y en Europa en
1904 y en 1911 la industria presentó las primeras solicitudes de
variedades vegetales. Así, en E.U.A. se presentaron diversos proyectos de
ley en 1906, 1907, 1908 y 1910 sin éxito, hasta que en 1930 culminaron
los esfuerzos por colocar al obtentor de variedades vegetales en pie de
igualdad con el inventor o el autor, con la aprobación de la Ley de
patentes de plantas, la que fue modificada en 1952 y 1954. Este es un
sistema sui generis que anticipa en muchos aspectos el Convenio de la
UPOV.
LA UPOV
Yael Jadue Díaz
Departamento de Semillas,
Servicio Agrícola Ganadero,
Chile
Es una organización intergubernamental con sede en Ginebra, que fue
establecida por el Convenio Internacional para la Protección de las
Obtenciones Vegetales que se firmó en París en 1961 y entró en vigor en
1968. El Convenio se revisó en 1972, 1978 y en 1991. Sus estados
miembros se han comprometido a otorgar derechos a los obtentores de
nuevas variedades vegetales de acuerdo a los principios establecidos en el
Convenio, y por tanto sobre una base armonizada.
54
CERTIFICACION DE VARIEDADES: LA VISION DE UPOV
Cualquier estado con una legislación de protección de variedades
vegetales apropiada tiene la oportunidad, siendo miembro de la UPOV,
de compartir y de beneficiarse de la experiencia combinada de los
estados miembros y de contribuir a la promoción mundial de la mejora
vegetal.
El Convenio contiene disposiciones sobre las condiciones básicas que
deben incluirse en la legislación para la protección de las variedades de
aquellos países que deseen adherirse a la Unión, lo que lleva, en sí
mismo, hacia un cierto nivel de armonía en las leyes de los Estados
miembros.
La cooperación de los Estados miembros es fundamental,
particularmente para el examen de la distinción, homogeneidad y
estabilidad (DHE), traduciéndose en una función armonizadora en la
preparación de directrices del DHE para cada especie.
Para llevar a cabo sus funciones la UPOV establece los siguientes
órganos:
El Consejo
Está constituido por representantes de los países miembros de la Unión y
al que también asisten países no miembros así como organizaciones no
gubernamentales en calidad de observadores. Cada miembro que es un
Estado tiene un voto en el Consejo. En virtud del Acta de 1991, también
existe la posibilidad de que algunas organizaciones intergubernamentales
pasen a ser miembros de la Unión. El Consejo, que se reúne de forma
ordinaria una vez al año da su opinión sobre la conformidad de las
legislaciones nacionales sobre protección con el Convenio de la UPOV,
aprueba el programa de trabajo y el presupuesto anual.
Comité consultivo
Sólo asisten los representantes de los Estados miembros, quedando
excluidos los observadores y cuyo papel fundamental es analizar la
compatibilidad de las legislaciones de los países que desean ser
miembros de la UPOV con el Convenio.
Comité jurídico y administrativo
Se reúne cuando es necesario interpretar alguna norma o disposición del
Convenio.
Comité técnico
Encargado de la adopción de las directrices para la realización del
examen DHE de las nuevas variedades. Este comité tiene además los
55
Y. JADUE
siguientes Grupos de trabajo técnicos encargados de discutir la elaboración
o revisión de Directrices de examen en campos específicos:
LA PROTECCIÓN DE LAS
OBTENCIONES VEGETALES
EN VIRTUD DE LA UPOV Y
DEL ACTA DE 1991
l
Grupo de trabajo sobre plantas agrícolas.
l
Grupo de trabajo técnico sobre sistemas de
automatización y programas de computación.
l
Grupo de trabajo técnico sobre plantas frutales.
l
Grupo de trabajo técnico sobre plantas ornamentales
y árboles forestales.
l
Grupo de trabajo técnico sobre hortalizas.
l
Grupo de trabajo técnico sobre técnicas moleculares
y bioquímicas.
La protección de las obtenciones vegetales, también denominada “el
derecho del obtentor ” es el derecho que se concede al obtentor de una
nueva variedad a explotarla en exclusiva, lo que se traduce en el incentivo
al desarrollo de la agricultura, horticultura y silvicultura. Es así, que
estadísticas recientes demuestran que el 40% del incremento general de la
productividad agrícola se debe a la utilización de variedades mejoradas,
variedades que son el resultado de programas de mejora vegetal que
requieren cuantiosas inversiones en personal especializado, instalaciones
adecuadas y aportación de dinero líquido, a lo largo de varios años.
Requisitos para la protección
La variedad ha de ser nueva (novedad), distinta, homogénea y estable y
deberá disponer de una denominación adecuada:
Novedad
En la fecha de presentación de la solicitud de protección en un Estado de
la Unión, el material de reproducción o de multiplicación vegetativa o un
producto de cosecha de la variedad protegida no deberá haber sido
ofrecida en venta o comercializada, con el consentimiento del obtentor, en
el territorio de dicho estado por más de un año, o por más de seis años en
el caso de vides, árboles forestales, frutales y ornamentales, con inclusión,
en cada caso, de sus portainjertos, o por un período anterior superior a
cuatro años en el caso de otras plantas.
Distinción
Sea cual sea el origen, artificial o natural, de la variación inicial que ha
dado lugar a la variedad, ésta debe poder distinguirse claramente por uno o
varios caracteres importantes de cualquier otra variedad, cuya existencia
sea notoriamente conocida en el momento en que se solicite la protección.
56
Homogeneidad
Se considera homogénea la variedad si es suficientemente uniforme en sus
caracteres pertinentes, a reserva de la variación previsible habida cuenta
de las particularidades de su reproducción sexuada o de su multiplicación
vegetativa.
Estabilidad
Se considera estable la variedad si sus caracteres pertinentes se mantienen
inalterados después de reproducciones o multiplicaciones sucesivas, en
caso de un ciclo particular de reproducción o de multiplicaciones, al final
de cada ciclo.
Denominación de la Variedad
Una variedad debe recibir una denominación que se deberá inscribir en el
registro al mismo tiempo que se produzca la concesión del título. Esta
deberá ser genérica, debe permanecer libremente utilizable, debe permitir
identificar la variedad y ser la misma para todos los países miembros de la
UPOV.
Diferentes formas de examen DHE
Es condición obligatoria que previo a la concesión de la protección, exista
un examen para verificar que se cumplan los requisitos de Distinción,
Homogeneidad y Estabilidad. Existen tres formas aprobadas de examen
DHE:
l
Cuando la Oficina u Organismo oficial realiza los ensayos
y pruebas a campo tendientes a obtener la información
sobre la variedad. Se diseñan y evalúan los ensayos,
comparando la nueva variedad con la “Colección de
referencia”.
l
Cuando la Oficina u Organismo oficial realiza el examen
con la información suministrada por otros, generalmente
por el solicitante. Los ensayos son conducidos por el
solicitante de acuerdo a las directrices establecidas
oficialmente, luego las evaluaciones se realizan en oficina
con el apoyo muchas veces de programas
computacionales en los cuales se tiene toda la información
para comparar la nueva variedad con la “Colección de
referencia”.
l
Sistema mixto (combinación de los anteriores).
Ambito de protección
El poseedor de un título de propiedad, tiene el derecho de impedir
que terceros, sin su consentimiento puedan, respecto del material
de multiplicación o reproducción de la variedad protegida:
57
Y. JADUE
l
Producir o reproducir.
l
Preparar a los fines de producción o multiplicación.
l
Ofrecer en venta.
l
Vender o comercializar de cualquier forma.
l
Exportar.
l
Importar.
l
Poseer para cualquiera de los fines mencionados.
Se requerirá autorización para los actos anteriores con respecto del
material de la cosecha si se cumplen los siguiente supuestos:
l
Obtención por utilización no autorizada de la variedad.
l
Cuando el obtentor no pudo ejercer razonablemente su
derecho con respecto a dicho material de multiplicación.
Estos derechos del titular se extenderán a:
l
La variedad protegida.
l
La variedad que no se distinga claramente de ella.
l
Variedades cuya producción se requiera el uso repetido de la
variedad protegida.
l
Variedades esencialmente derivadas.
Excepciones al derecho del obtentor
No se requerirá la autorización del obtentor para los siguientes
actos:
l
Actos realizados en el ámbito privado y con fines comerciales.
l
Actos realizados con fines experimentales.
l
Actos con fines de creación de una nueva variedad y su
comercialización, a menos que la variedad sea esencialmente
derivada de la variedad protegida.
l
Reservar y utilizar para sí mismo el producto del cultivo de la
variedad, “privilegio del agricultor”.
58
LAS VARIEDADES
ESENCIALMENTE
DERIVADAS
Las nociones de “variedad esencialmente derivada” y “dependencia” se
introdujeron en el Acta de 1991 con el objetivo fundamental de mantener
la capacidad del sistema de protección de las obtenciones vegetales de
promover las actividades de mejora de las plantas, creando una relación
equitativa entre obtentores y entre titulares de derecho de obtentor y
titulares de patentes.
Una variedad (en forma muy breve) es un conjunto vegetal distinto,
homogéneo y estable. La distinción se establece sobre la base de caracteres
que tienen o no una relación con el valor agronómico o tecnológico de la
variedad, o un interés económico. Basta la diferencia relativa a un carácter
calificado como importante para llegar a la conclusión de que hay
distinción de una variedad en relación con otra.
A manera de ejemplo se pueden citar las siguientes situaciones de
variedades esencialmente derivadas:
l
Un obtentor ha creado, luego de un largo trabajo de mejoramiento, una
variedad nueva de clavel rojo que es atractiva comercialmente. Los
competidores pueden obtener variantes de esta variedad con una
inversión nula o limitada, buscando o provocando mutaciones dentro
de la variedad. Si esta mutación provocara el cambio de color rojo a
blanco de las flores, esta correspondería a una nueva variedad y podría
competir con la inicial sin pagar nada a su obtentor, ejerciendo una
actividad susceptible de asimilarse a la competencia desleal.
l
Un obtentor ha creado una línea de maíz que resulta ser excelente
pariente para la creación de variedades híbridas. Los competidores
podrían producir variantes con una inversión limitada, “convirtiendo”
la descendencia mediante un programa de retrocruzamiento, con una
planta que presente un carácter de herencia simple (por ejemplo:
filamentos que salen de la espiga rojos y no amarillos), obteniendo una
descendencia idéntica a la inicial, salvo para el color de las sedas.
El concepto de “ Variedad esencialmente Derivada” establece que:
l
La exención del obtentor se mantiene en su integridad.
l
Una “ Variedad esencialmente Derivada”, puede ser sometido a la
autorización del obtentor de la variedad inicial; en otras palabras el
derecho del obtentor relativo a la variedad inicial se extiende a las
variedades esencialmente Derivadas y éstas son dependientes de la
variedad inicial.
59
Y. JADUE
UTILIZACIÓN DE
MARCADORES
MOLECULARES EN EL
REGISTRO DE VARIEDADES
PROTEGIDAS
Los principales tipos de marcadores son: morfológicos, citogenéticos,
peptídicos, isoenzimáticos, RFLPs (Restriction Fragment Lenght
Polymorphisms) y los derivados de la aplicación de la PCR (Polymerase
Chain Reaction). Cada tipo de marcador tiene sus características
específicas que lo hacen adecuado para unas aplicaciones y no tanto para
otras.
En lo referente a la mejora vegetal los marcadores genéticos han sido
ampliamente utilizados para:
l
Estudiar la variabilidad presente en las poblaciones, en su estructura
genética y las relaciones filigenéticas.
l
Estudiar el sistema genético de las especies (tipo de reproducción,
proporción de alogamía, grado de consanguinidad, etc.).
l
Identificar y seleccionar genotipos deseables.
l
Localización de genes que controlan caracteres cualitativos de interés
agronómico.
l
Clonaje de genes de interés, cuyos productos de expresión son
desconocidos, mediante “genética inversa” a partir de la obtención de
dos marcadores estrechamente ligados a ambos lados del gen.
l
Disección de los caracteres cuantitativos, e identificación de los genes
que los controlan.
l
El seguimiento en la naturaleza del microorganismo y plantas
modificadas genéticamente.
l
Patente y protección de los cultivares y variedades. Los marcadores
pueden ser usados tanto para la defensa de los derechos del obtentor,
como criterios para el control de calidad. Esta herramienta, en primera
instancia, tendría una serie de ventajas frente a la descripción
morfológica, al no depender de la edad de las plantas, la parcela,
estado sanitario, clima, etc. Además, el análisis genético se puede
hacer en estadíos muy tempranos de desarrollo, requiriendo de poco
material y con resultados rápidos, facilitando la comprobación de la
uniformidad de las nuevas variedades, estimando las diferencias
genéticas con variedades registradas más cercanas (agrupamiento).
A pesar de todas las ventajas señaladas anteriormente respecto al uso de
marcadores moleculares, aún existen una serie de factores que limitan su
uso como una herramienta que pudiera reemplazar a la descripción
morfológica. Es así, que se ha podido demostrar que si dos variedades
difieren a nivel morfológico también difieren a nivel de marcadores. Sin
embargo, si estas diferencias son escasas a nivel morfológico también lo
serán a nivel molecular, sin considerar la importancia que las
características morfológicas pudieran tener desde el punto de vista
60
agronómico, para ser consideradas como una nueva variedad. Por lo
tanto queda por decidir ¿cuán diferente debe ser genéticamente una
variedad respecto a las registradas para ser admitida en el Registro?
(¿Al menos un gen, un porcentaje de sus genes?).
Finalmente las bases sobre las cuales se debe trabajar para que los
marcadores moleculares sean una herramienta útil para defender el
derecho del obtentor son:
l
Contar con una “Colección de Referencia”.
l
Determinar los marcadores más apropiados según la especie.
l
Estandarizar la forma de trabajo al aplicar alguna técnica molecular
para asegurar la repetibilidad.
l
Complementar la descripción morfológica.
PROTECCIÓN DE LAS
OBTENCIONES VEGETALES
EN EL MUNDO
Actualmente hay 37 Estados miembros de la UPOV:
Alemania, Argentina, Australia, Austria, Bélgica, Bulgaria, Canadá, Chile,
Colombia, Dinamarca, Ecuador, Eslovaquia, España, Estados Unidos de
América, Federación de Rusia, Finlandia, Francia, Hungría, Irlanda, Israel,
Italia, Japón, México, Noruega, Nueva Zelanda, Países Bajos, Paraguay,
Polonia, Portugal, República Checa, Reino Unido, Sudáfrica, Suecia,
Suiza, Trinidad y Tobago, Ucrania, Uruguay.
Otros 18 Estados tienen legislación en la materia pero no son aún
miembros de la UPOV: Belarús, Bolivia, Brasil, China, Croacia, Estonia,
Georgia, Kenya, Kasakhstan, Kirguistan, Letonia, Lituania, Moldova,
Marruecos, Nicaragua, Perú, Venezuela, Uzbekistán y Zimbabwe.
Finalmente los Estados siguientes están preparando legislación en la
materia: Costa Rica, Cuba, Egipto, Filipinas, Grecia, India, Indonesia,
Kazajstan, Malasia, Pakistán, República de Corea, Rumania, Tailandia,
Tanzania, Turquía, Vietnam y Zambia.
61
C. L. VILLARROEL VOGT
SITUACIÓN
ACTUAL SOBRE LA
IDENTIFICACIÓN Y CERTIFICACIÓN
DE VARIEDADES EN B OLIVIA
ANTECEDENTES
SITUACIÓN ACTUAL DE LOS
SISTEMAS DE
IDENTIFICACIÓN VARIETAL
EN BOLIVIA
Carmen L. Villarroel Vogt
Instituto Boliviano de
Tecnología Agropecuaria,
Bolivia
Bolivia por sus variables condiciones topográficas y climáticas, y por las
características de su flora natural, constituye un importante centro de
diversidad genética vegetal. Ante el riesgo de extinción de las variedades,
ecotipos, razas y aún especies locales, conservados tradicionalmente por
los agricultores, diferentes Institutos de Investigación han realizado
esfuerzos para una adecuada conservación y caracterización. Actualmente
se cuenta con unas 10.000 entradas de 50 especies diferentes bajo
condiciones de conservación. Gran parte de este material genético ha sido
seleccionado por su alto potencial en cuanto a sus características de
adaptación, alto rendimiento y tolerancia a factores bióticos y abióticos,
con fines de producción de semilla de alta calidad. Asimismo, ha sido
utilizado en la generación de nuevas variedades (mejoramiento
convencional), como en el caso del maíz, quínua y papa.
Caracterizaciones morfológicas
En el caso de tubérculos andinos (papa, oca, papalisa e isaño), PROINPA
ha iniciado las caracterizaciones morfológicas con la ayuda de descriptores
del IPGRI, con la finalidad de identificar duplicados y conocer la
diversidad genética existente. Este tipo de evaluaciones se ha realizado con
el objetivo de contar con series de evaluaciones morfológicas sobre el
mismo genotipo, lo que permitió verificar eventuales asociaciones para
evaluar y conocer las colecciones del germoplasma en función de la
variabilidad de algunos genes responsables de transmitir particulares
características al fenotipo, indicado por su estabilidad genética. En
relación a otras especies de importancia, como el caso de frutales, maíz y
quínua, también se han realizado caracterizaciones morfológicas, para la
identificación de variedades.
Caracterizaciones bioquímicas
Se han utilizado técnicas bioquímicas de electroforesis de proteínas y
esterasas, para apoyar los resultados de la caracterización morfológica
62
SITUACION ACTUAL SOBRE LA IDENTIFICACION Y CERTIFICACION DE
VARIEDADES EN BOLIVIA
(grupos morfológicos), de tubérculos andinos. No se cuenta con
información en relación a otros cultivos.
Caracterizaciones moleculares
No se dispone de técnicas moleculares para identificación varietal. Sin
embargo, a través del Subprograma Biotecnología del PROCISUR, existen
fondos para la adquisición de un equipo (termociclador). Actualmente,
Bolivia como miembro observador, no se encuentra en condiciones de
capacitar personal en esta técnica, debido a la limitación presupuestaria.
Asimismo, es necesario definir la técnica molecular a utilizarse, en función
a las especies y variedades de interés.
REGISTRO NACIONAL DE VARIEDADES Y LA PROTECCION
DE OBTENTORES DE VARIEDADES VEGETALES
El Registro Nacional de Variedades
El Registro Nacional de Variedades (RNV) es obligatorio para todos
aquellos que deseen producir semillas, vale decir que el sistema oficial de
Certificación de semillas solamente aceptará certificar variedades que se
encuentren inscritas y registradas en el RNV. El Registro está establecido
mediante el artículo Nº 13 de la Resolución Secretarial Nº 064/96, y tiene
como objetivo establecer un ordenamiento general de variedades
cultivadas, variedades en desuso y otras, con la finalidad de proteger la
agricultura del país en cuanto al uso de materiales que puedan atentar
contra la producción agropecuaria.
La solicitud de registro de una variedad la realiza el obtentor en base a un
formulario, efectuando paralelamente una validación agronómica, lo cual
otorga un registro provisional.
Los requisitos para el registro de una variedad son los siguientes:
l
Solicitud de Registro debidamente llenada.
l
La variedad debe ser distinta, estable y homogénea.
l
Debe contar con resultados de los ensayos previos a
los que fue sometida la variedad para su obtención.
l
Descripción de la variedad de acuerdo a un
formulario.
l
Declaración jurada de la descripción de la variedad
ante un notario público, la cual especifique los
descriptores.
l
Material de reproducción de la variedad.
63
C. L. VILLARROEL VOGT
Los aspectos de descriptores morfológicos, en los procesos de registro y
verificación de identidad genética de cultivos, están basados en las
“Directrices para la Ejecución del Examen de la Distinción, la
Homogeneidad y la Estabilidad de Variedades” de la UPOV.
La Protección de Obtentores de Variedades Vegetales (POV)
En la Resolución antes mencionada (064/96), en el artículo 15, se norma la
Protección de Obtentores de Variedades Vegetales (POV), a través de este
mecanismo y de resoluciones anteriores que desde 1994 se cuenta con
legislación en la materia. Esta resolución se encuentra dentro del marco de
la Decisión 345 de la ex Junta del Acuerdo de Cartagena y también está de
acuerdo con las distintas actas de la Unión Internacional para la Protección
de Obtentores de Variedades Vegetales (UPOV).
Es de interés nacional el pertenecer a la UPOV, y los trámites de anexión se
encuentran en su última etapa, se espera que esto se concrete a finales de
1998.
A diferencia del Registro, la Protección no es obligatoria y está destinada a
proteger la inversión en investigación, para de esta manera estimular a la
iniciativa privada a invertir en investigación y desarrollo de nuevas
variedades. Por otro lado buenas variedades resultado de la investigación
en países amigos podrán ingresar más fácilmente, si sus obtentores saben
que en nuestro país podrán encontrar un retorno justo por su trabajo.
Los requisitos son similares a los del Registro, salvo que la variedad
además de ser distinta, estable y homogénea deberá ser nueva.
Adicionalmente a través del Ministerio de Justicia, se están siguiendo las
gestiones para contar con una ley de obtención de variedades proyecto que
se espera terminar hasta fines del presente año (R. Gallo, Programa
Nacional de Semillas, comunicación verbal).
CERTIFICACIÓN DE
SEMILLA
Las normas de Certificación de Semillas, se establecen en cumplimiento de
las Disposiciones Legales sobre Fiscalización de Semillas en Bolivia,
según Decreto Supremo Nº 23.069 y Resolución Ministerial Nº 433/86, que
encargan a las Oficinas Regionales de Semillas, la labor de prestar un
Servicio de certificación de Semillas, con el objeto de promover la
producción y utilización de semillas de alta calidad (Programa Nacional de
Semillas).
Existen normas específicas para la certificación de semilla sexual de
diferentes especies como maíz, soya, arroz y algodón entre muchas otras.
En relación a especies de propagación agámica, únicamente existen normas
específicas para el cultivo de la papa; material de propagación de alta
calidad de otras especies como frutales (duraznero y cítricos), son
producidos bajo el aval de diferentes Instituciones de Investigación.
La evolución de estas normas es activa y actualmente se están elaborando
normas para hortalizas, forestales, ajo, haba y quínua.
CAPÍTULO V
ORGANIZACIÓN
LA
CALIDAD GENÉTICO
SANITARIA COMO INSTRUMENTO
DE LA CADENA AGROINDUSTRIAL
LA CALIDAD GENÉTICO
SANITARIA
La calidad como paradigma
La calidad como paradigma es uno de los aspectos más importantes de la
producción del futuro. En materia de producción agrícola, ésta puede
definirse de varias formas dependiendo de qué aspecto se está focalizando.
Existe una calidad técnica, definida por estándares que definen
procedimientos, descripción de atributos o valores de parámetros, los
cuales permiten caracterizar o definir a un determinado material.
Otra calidad es la percibida por el consumidor. En el acto de optar, el
consumidor realiza la evaluación de una calidad que tiene más elementos y
va más allá de la calidad técnica descripta anteriormente. La calidad
percibida tiene canales de expresión los cuales incluyen aspectos de
producción, mercado y otros relacionados a la evolución de los patrones
culturales de una sociedad. Muchas veces la calidad técnica es
generalmente un prerrequisito para una calidad percibida y es difícil
entonces de separar. También y como se describe adelante, el consumidor
puede influenciarse por determinados atributos del material y que
corresponden a la calidad derivada de las propiedades genéticas del
mismo.
Daniel Pagliano
Unidad de Biotecnología,
Instituto Nacional de
Investigación Agropecuaria
(INIA), Uruguay
La calidad genético sanitaria
La calidad técnica de un material vegetal tiene dos componentes
principales: el genético y el sanitario.
La Calidad Genética puede expresarse en general como la capacidad
productiva de un genotipo tanto en sus aspectos cualitativos y
cuantitativos. Una determinada variedad incluye en su patrimonio genético
un cúmulo de información seleccionada que la hace la opción más apta
68
LA CALIDAD GENETICO SANITARIA COMO INSTRUMENTO DE LA CADENA AGROINDUSTRIAL
para un determinado fin productivo. Una variedad es obtenida luego de
varios años de mejoramiento genético, combina información genética
precedente y es fuente de nueva variación.
La Calidad Sanitaria es el nivel de salud que determina la expresión de la
capacidad productiva de un genotipo. Se trata de prevenir las
enfermedades o sanear un material, preservando el nivel óptimo de salud.
A medida que las categorías de plantas se alejan del mayor nivel de salud
ya sea por multiplicación o cultivo, se van aumentando las cargas de
patógenos y la probabilidad de interacción con la planta hasta llegar a la
enfermedad.
La calidad podría expresarse como una función:
F (calidad) = CG x CS x PA
SB x SA
Donde:
CG: Calidad genética
CS: Calidad sanitaria
PA: Prácticas agronómicas
SB: Estrés biótico
SA: Estrés abiótico
La calidad está directamente relacionada a la calidad genético sanitaria y al
nivel de la práctica agronómica utilizada en el paquete tecnológico.
Inciden inversamente en la calidad los estrés biótico y abiótico que sufra el
cultivo.
Los factores están interaccionando y tienen efectos aditivos.
LA EVOLUCIÓN DE
PRODUCCIÓN
INTENSIVA
La producción intensiva en los países de América Latina está cambiando.
Si bien es importante reconocer los distintos tipos de productores
existentes que van desde explotaciones familiares a empresariales de alta
inversión, todos convergen o están influidos por algunos elementos de
escenario que son comunes.
Entender los factores que afectan este escenario y que están relacionados
con la calidad genético sanitaria, puede aportar nuevos elementos al
momento de proponer o evaluar un modelo de cadena de calidad. A
continuación se muestran algunos.
69
D. PAGLIANO
Nuevas variedades
La aceleración de los procesos de generación de nuevas variedades es un
elemento fundamental de los nuevos modelos de producción. Los
materiales genéticos nuevos son consecuencia de, o inducen a, las nuevas
exigencias de los mercados.
Tienen consecuencias que van desde los aspectos comerciales hasta para
constituir nuevos sistemas de liderazgo entre los productores innovadores.
La generación de materiales nuevos, la disponibilidad de germoplasma y la
tecnología para evaluarlos o lograrlos;así como la habilidad para
introducirlos en el mercado en forma rápida, son elementos que hacen a la
competitividad de las empresas o instituciones que desarrollan materiales o
servicios nuevos.
Por tanto, se espera incrementos en la oferta de nuevos materiales
vegetales y las tecnologías de evaluación de la calidad, como consecuencia
de las necesidades de diferenciar productos en el mercado.
Paquetes de producción integrados
Las nuevas variedades se acompañan de recomendaciones o paquetes
tecnológicos integrados para sistemas de producción definidos.
Generalmente se busca maximizar la ganancia genética y operacional en
un determinado ambiente, por lo que se hace necesario para alcanzar este
objetivo, que las mismas variedades se siembren o instalen en condiciones
agronómicas definidas.
Cuando más se alejen de las condiciones agronómicas recomendadas, las
nuevas variedades van a ir decreciendo su capacidad de expresar las
características seleccionadas.
Es de esperar que el material vegetal sea un elemento cada vez más
importante del paquete tecnológico para producir y que esté más
relacionado al resto de los componentes del mismo.
Postcosecha y agroindustrias
Los aspectos postcosecha son importantes en el momento de determinar la
rentabilidad de un cultivo y los proyectos productivos exitosos son
aquellos que se ensamblan perfectamente en el paso siguiente.
Las agroindustrias necesitan que se produzca un determinado estándar de
calidad como consecuencia también de la ingeniería de la infraestructura
de transformación y de la operativa comercial en sí misma, que buscan
bajar los costos. En este sentido, la demanda es quién emite la señal de lo
70
necesario. Estas señales se van a ver incrementadas por lo que aparecerán
nuevas relaciones de compromiso entre los productores y los agentes
siguientes de transformación o mercadeo.
Propiedad intelectual
Debido a los egresos por producir nuevas variedades y ponerlas a
disposición de los productores, es necesario que las inversiones, costos
operativos sean recuperados por propiedad intelectual.
Los países que no aseguren un sistema de propiedad intelectual no podrán
beneficiarse totalmente de las nuevas oportunidades.
LA CADENA DE CALIDAD
Vectores de calidad
La calidad per se es un aspecto en continua evolución, donde elementos
dinámicos se ensamblan en una cadena, que va desde la calidad
percibida de los consumidores hasta donde se genera la calidad técnica.
Esta cadena tiene distintos vectores que buscan satisfacer necesidades
distintas.
En un extremo, los consumidores buscan mejores propiedades, precios y
facilidad de consumo. La agroindustria busca cumplimiento de negocios,
constancia en las calidades acordadas y menores precios. La producción
busca elementos de rentabilidad y sostenibilidad de la empresa. Los
investigadores tienen que encontrar nuevos o dar mayor valor agregado a
los materiales existentes y que los productores conocen.
La calidad tiene tiempos distintos. Los consumidores toman decisiones
en el corto plazo. Los productores deben tomar decisiones de mediano
plazo. Una decisión de plantar un frutal involucra una expectativa que se
ubica en el futuro. Lo que se plante hoy, se cosechará por ejemplo en un
plazo de cinco años. Hay un riesgo implícito derivado del tipo de
empresa y el tiempo aquí se torna un elemento de consideración.
Los investigadores tienen que anticiparse a los mercados y los
productores, para generar u obtener el germoplasma relevante que será
luego plantado por los productores. Asimismo, el proceso de
mejoramiento genético lleva varios años, muchos más que producir, por
lo que siempre se trabaja con una visión de largo plazo.
La consolidación de una cadena de calidad debe armonizar estas
visiones para ser eficiente y económicamente sostenible.
71
D. PAGLIANO
Calidad y producción
Un productor enfrentado a la decisión del negocio se realiza preguntas
tales como:
¿Qué producir?
La decisión del cultivo y dentro del cultivo, qué variedad o
material a usar es una decisión que en el contexto del paquete
tecnológico es la más relevante. Lo que se plante hoy es lo que se
cosechará mañana.
¿Cómo producir?
El uso del mejor paquete tecnológico adecuado a cada realidad
productiva es condición sine quanum en el contexto de
competitividad de la economía.
¿Cómo comercializar?
La tecnología de comercialización es importante ya que determina
el mayor margen neto final.
Estas preguntas muchas veces no están suficientemente contestadas y son
elementos de confusión.
El productor recibe señales desde lugares como las agencias estatales de
extensión, los Institutos de Investigación, los técnicos o asesores de
empresas vendedoras de insumos, extensionistas privados, el sistema
bancario, los programas de Desarrollo nacionales, los intermediarios de
comercialización, los agentes agroindustriales, la prensa general y la
especializada, y otros canales de información. Con toda la información
debe generar en base a sus capacidades y oportunidades un proceso
complejo de definición de la tecnología que aplicará, etc.
En este sentido, se necesita un nivel mínimo de capacidad de los
productores y técnicos que permita usar un sistema de códigos en materia
de tecnología que sea eficiente, único y suficiente.
El uso de plantas de alta calidad genético sanitaria con sus respectivas
recomendaciones de uso y manejo, validadas por la experiencia y la
investigación nacional, dirigidas a mercados con oportunidades relevadas
o acordadas, aparecen como un elemento importante del paquete
tecnológico en el momento de iniciar un cultivo.
En torno a la planta de calidad se deben construir los elementos de la
cadena que aseguren el producto final.
72
Calidad operativa
La cadena para la producción de plantas de alta calidad debe ser elaborada
y mantenida por todos los involucrados, ya que de otra forma pueden
originarse retrasos o imperfecciones innecesarias. En este sentido, algunos
de los papeles de los vectores pueden expresarse como sigue.
l
Los institutos de investigación deben cumplir una función de
liderazgo tecnológico mostrando a través de modalidades como
experiencias pilotos u otras las distintas opciones disponibles.
Deben asimismo desarrollar e incrementar la capacidad de
generación o evaluación de materiales de calidad genético
sanitaria.
l
Los organismos de contralor o auditores de calidad son parte
importante de la cadena, aseguran la continuidad de la misma,
establecen y garantizan el funcionamiento de los estándares de
procedimiento. Estos organismos deben buscar a través de
propuestas de organización como los Programas de Certificación,
que los vectores se ensamblen en consenso y avancen a modelos
autocontrolados.
l
Los productores especializados y las empresas de propagación
son los que realizan la escala de la producción. Este eslabón
importante permite dar mayor operatividad y rapidez al sistema a
través de esta producción y servicios especializados.
l
Los productores usuarios deben participar en la elaboración de la
cadena, para entenderla y poder sacar la máxima ventaja de la
misma.
La participación eficiente de los vectores logrará un efecto sinérgico que
se traducirá en una ganancia operacional del sistema. El modelo debe ser
entonces multidisciplinario y sostenible.
OPORTUNIDADES DE LA
CALIDAD GENÉTICO
SANITARIA
Las oportunidades de la calidad genético sanitaria pueden resumirse en los
siguientes aspectos:
Incremento de la competitividad de los productores
Al disponer de mejor información, disponibilidad física de materiales con
garantía de calidad y oportunidades de capacitación, los productores
podrán mejorar su proyecto de producción. Verán facilitadas sus relaciones
con el resto del sistema, dimensionarán mejor y disminuirán el riesgo del
negocio productivo.
73
D. PAGLIANO
Aumento de la capacidad de las agroindustrias
Al disponer de mejor calidad y cantidad del producto requerido por la
ingeniería de transformación, las agroindustrias se beneficiarán por
reducción de costos y posibilidad de mejora en aspectos como
diversificación y dar valor agregado a los productos.
Incremento de las opciones de los consumidores
Al haber productos de mayor calidad percibida (precios, calidades
técnicas, etc), los consumidores se beneficiarán al tener una mejor
satisfacción de la demanda, lo que haría una fuerza desde la demanda para
nuevas opciones productivas, estableciendo un mecanismo de
retroalimentación y dando sostenibilidad al sistema.
A
N E X O
ESTÁNDAR
C ERTIFICACIÓN
DE
MATERIALES DE PROPAGACIÓN
CÍTRICOS
INTRODUCCIÓN
Una de las modalidades más eficaces para lograr una calidad
genético sanitaria de plantas ha sido justamente la constitución de
Programas de Certificación de Plantas.
Estos Programas integran a los actores de la cadena y trabajan sobre
la base de una visión compartida y esfuerzos sinérgicos.
Le hemos pedido al Instituto Nacional de Semillas y a la Dirección de
Protección Agrícola de Uruguay, que nos permitieran reproducir en el
Anexo que sigue, el texto del Estándar del Programa de Certificación
de Cítricos.
Lo que queremos mostrar es con un ejemplo concreto, cuáles son los
puntos principales que debe tener un Programa de este tipo y que
puede ser aplicado a cualquier especie de propagación agámica.
Estamos convencidos de que los efectos sinérgicos de modalidades
como ésta, serán de gran utilidad en la transformación productiva de
los sectores vinculados a la producción intensiva de la región.
Daniel Pagliano
INIA Las Brujas, Uruguay
TABLA DE CONTENIDO
REVISIÓN
........................................................................................................................
1
APROBACIÓN .....................................................................................................................
1
REGISTRO DE MODIFICACIONES .....................................................................................
3
DISTRIBUCIÓN ....................................................................................................................
3
I
INTRODUCCIÓN ........................................................................................................
4
1.
ÁMBITO ...........................................................................................................
4
2.
REFERENCIAS ...............................................................................................
4
3.
DEFINICIONES Y ABREVIATURAS ................................................................
5
4.
DESCRIPCIÓN ................................................................................................
9
II
REQUISITOS GENERALES ...................................................................................... 10
1.
Lista de Plagas a Considerar .......................................................................... 10
a.
Plagas A2 ............................................................................................. 10
b.
Plagas No Cuarentenarias Reguladas ................................................... 10
2.
Esquema de Certificación ................................................................................ 10
3.
Bloques de Producción y Materiales Vegetales que en ellos se producen ...... 12
4.
Niveles de Tolerancia ....................................................................................... 12
5.
Origen de la plantas incluidas en los distintos Bloque de Producción y
controles que se realizan. ............................................................................... 12
6.
Condiciones de aislamiento. ............................................................................ 14
Del Predio
.................................................................................................... 14
De los Bloques de Producción ........................................................................ 14
7.
Condiciones Generales de Cultivo. .................................................................. 16
8.
Identificación de las plantas en los Bloques de Producción. ........................... 16
9.
Acondicionamiento e identificación de los materiales producidos. ................... 17
10.
Inspecciones. .................................................................................................. 18
1
REVISIÓN
Este Estándar de Certificación de Materiales de Propagación de Cítricos está sujeto a
revisiones y modificaciones periódicas.
La fecha de la próxima revisión es:
APROBACIÓN
Este estándar de Certificación de Materiales de Propagación de Cítricos fue aprobado
por la Junta Directiva del Instituto Nacional de por Resolución de fecha....................
2
ANEXO - ESTANDAR
3
REGISTRO DE MODIFICACIONES
Este Estándar está sujeto a modificaciones periódicas.
La fecha de la próxima revisión es:
DISTRIBUCIÓN
Este Estándar es distribuido por el Programa Nacional de Certificación y Control de Materiales Cítricos de Propagación a:
• Ministerio de Ganadería, Agricultura y Pesca
• Instituto Nacional de Investigaciones Agropecuarias
• Facultad de Agronomía
• Comisión Honoraria Nacional del Plan Citrícola
• Delegados en el Grupo Técnico de Trabajo de Materiales
Cítricos de Propagación
• Organizaciones Nacionales de Protección Vegetal de los
países miembros del COSAVE
• Comité de Sanidad Vegetal del MERCOSUR
• Organizaciones de Certificación de Semillas de los países
miembros del COSAVE
• Secretaría de la Convención Internacional de Protección
Fitosanitaria – FAO
• Comité de Sanidad Vegetal del Cono Sur
• Asociación Uruguaya de Viveristas de Cítricos
• Comité de Semillas de ALADI
• Comité de Semillas del MERCOSUR
• Cámara Uruguaya de Semillas
• Asociación Nacional de Productores de Semillas
4
ANEXO - ESTANDAR
I
INTRODUCCIÓN
1.-
ÁMBITO
Este Estándar de Certificación de Materiales de Propagación de Cítricos
incluyendo los géneros Citrus, Poncirus, Fortunella y sus híbridos, se aplica para la producción de yemas, semillas y plantas certificadas en las diversas categorías.
2.-
REFERENCIAS
-
Certification scheme. Virus-free or virus-tested fruit trees and roostocks.
Part I Basic scheme and its elaboration. Bulletin OEPP/EPPO. Bulletin
21. 267-278. 1991
-
Certification Scheme. Virus-free or virus-tested fruit trees and roostocks.
Part II. Table of viruses and vectors. Bulletin OEPP/EPPO. Bulletin 22.
255-263. 1992.
-
Certification Secheme. Virus-free or virus-tested fruit trees and roostocks.
Part III. Testing methods for virus or fruit trees presented in the EPPO
region. Bulletin OEPP/EPPO. Bulletin 22. 265-275. 1992.
-
Certification scheme. Virus-free or virus –tested fruit trees and roostocks.
Part IV. Tecnical appendices and table of content. Bulletin OEPP/EPPO.
Bulletin 22. 277-283. 1992
-
Decreto 133/92 de fecha 30 de marzo de 1992
-
Decreto 210/89 de fecha 5 de mayo de 1989
-
Decreto 508/84 de fecha 14 de noviembre de 1984
-
Decreto 84/83 de fecha 16 de mayo de 1983
-
Decreto 854/985 de fecha 30 de diciembre de 1985
-
Ley 15.554
-
Ley 15.173
-
Glosario de Términos Fitosanitarios. Comité de Sanidad Vegetal del
Cono Sur – COSAVE. Marzo 1995.
-
Graft-trasmissible diseases of citrus. Handbook for detection and diagnosis. ROISTACHER C. N. IOCV – FAO. 286 p. 1991.
-
Guidelines for the Safe Movement of Citrus Germplasm. FRISON M. A.
and TAHER M. M. (eds) 1991. FAO- IPGRI. TEchnical Bulletin. Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación.
Roma. ITALIA.
5
3.
-
NAPPO Compendium of Phytosanitary Terms. NAPPO Doc. No. 96027. February 1996.
-
Principios para la reglamentación de las plagas de calidad (Nocivas)
en el comercio Regional. COSAVE. Estándar Nº 2.2 - Agosto 1994.
-
Resolución del Poder Ejecutivo de fecha 22 de junio de 1983
-
Resolución de la D.S.P.A. de fecha 11 de marzo de 1994
DEFINICIONES Y ABREVIATURAS
Almácigo
Almácigo para
Fundación
Almácigo para
Incremento I
Almácigo para
Incremento II
Bloque de Producción instalado a partir de la siembra de Semillas Certificadas con destino a la obtención de Plantines .
Almácigo instalado con el objetivo de producir Plantines
para Fundación.
para Incremento I.
para Incremento II.
Almácigo para Vivero
de Certificación Almácigo instalado con el objetivo de producir Plantines
para Vivero de Certificación.
AI I
Abreviación de Almácigo para Incremento I.
AI II
Abreviación de Almácigo para Incremento II.
AF
Abreviación de Almácigo para Fundación.
AV
Abreviación de Almácigo para Vivero de Certificación.
BAPS
Abreviación de Bloque de Árboles Productores de
Semillas.
6
ANEXO - ESTANDAR
Bloque de Árboles
Productores de
Semillas
Bloque de Producción constituido por Plantas Certificadas de los cuales se obtienen Semillas Certificadas de portainjertos.
Bloque de
Incremento I
Bloque de Producción constituido por plantas originadas a partir de Yemas para Incremento I injertadas
sobre Plantines para Incremento I, destinado a la producción de Yemas para Incremento II.
Bloque de
Incremento II
Bloque
Fundación
Bloque de Producción constituido por plantas originadas a partir de Yemas para Incremento I o Yemas
para Incremento II injertadas sobre Plantines para
Incremento II, destinado a la producción de Yemas
Certificadas.
Bloque de Producción constituido por plantas originadas a partir de Yemas de Material Inicial injertadas
sobre Plantines para Fundación, destinado a la producción de Yemas de Incremento I.
BF
Abreviación de Bloque Fundación.
BI I
Abreviación de Bloque de Incremento I.
BI II
Abreviación de Bloque de Incremento II.
Certificación
Proceso técnico de supervisión y verificación realizado
por la Entidad Certificadora, destinado a certificar la
Condición Fitosanitaria, Identidad Genética y Calidad
de los materiales de propagación en función de los
Estándares aprobados.
Certificado
Documento Oficial que certifica la condición de los materiales de propagación de acuerdo al Estándar.
Condición
Sanitaria
Ausencia, presencia o nivel en que las plagas se presentan en un individuo o conjunto de individuos.
7
Cultivar
Entidad
Certificadora
Estándar
Conjunto de plantas de un solo taxón botánico del rango
más bajo conocido, que se define por la expresión de
caracteres resultantes de un cierto genotipo o de una
cierta combinación de genotipos, que se distingue de
cualquier otro conjunto de plantas por la expresión de
por lo menos uno de dichos caracteres y que se considera como una unidad, habida cuenta de su aptitud a
propagarse sin alteraciones.
Organización encargada de conducir el proceso de Certificación.
Documento establecido por consenso y aprobado por
un cuerpo reconocido, que suministra, para uso común y
repetido, reglas, lineamientos o características para las
actividades o sus resultados, con el propósito de alcanzar el grado óptimo de orden en un contexto.
Etiqueta o Rótulo Marbete destinado a identificar el material certificado en
relación con un Certificado.
Germoplasma
Vegetales destinados a programas de mejoramiento o
a su conservación.
Material Inicial
Material de Propagación proveniente de un Programa de Saneamiento y debidamente identificado y descrito.
Material de
Propagación
Medidas
Fitosanitarias
Todo órgano vegetal y sus partes (semillas, yemas, etc)
que se destinan a la multiplicación de los vegetales.
Cualquier legislación, reglamentación o procedimiento
oficial que tenga el propósito de prevenir la introducción
y/o la diseminación de plagas.
Oficial
Establecido, autorizado o realizado por una organización oficial.
Plaga
Cualquier especie, raza o biotipo de vegetales, animales o agentes patogénicos, nocivos para los vegetales o
productos vegetales.
8
ANEXO - ESTANDAR
Plaga
Cuarentenaria
Plaga No
Cuarentenaria
Regulada
Plaga
Reglamentada
Planta
Plaga que puede tener importancia económica para el
área que corre el riesgo que esa plaga entraña cuando
aún la plaga no existe o, si existe, no está extendida y
se encuentra bajo control oficial.
Plaga no cuarentenaria cuya presencia en las plantas
para plantación influye en el uso a que se destinan esas
plantas con repercusiones económicamente inaceptables y que, por lo tanto, está regulada en el territorio de
la parte contratante importadora.
Plaga cuarentenaria o plaga no cuarentenaria reglamentada.
Plantas vivas y parte de ellas, incluyendo las semillas y
el germoplasma.
Planta Certificada Planta producida en un Vivero de Certificación obtenida por injerto de una Yema Certificada en un Plantín
Certificado.
Plantín CertificadoPlanta sin injertar obtenida a partir de una semilla certificada o a partir de una estaca o vareta extraída de
un Bloque de Incremento II y enraizada, cultivada
cumpliendo con los requerimientos de un Almácigo
para Vivero de Certificación.
Plantín para
Fundación
Plantín para
Incremento I
Plantín para
Incremento II
Planta sin injertar obtenida a partir de una semilla certificada cultivada cumpliendo con los requerimientos
de un Almácigo para Fundación.
Planta sin injertar obtenida a partir de una semilla certificada cumpliendo con los requerimientos de un Almácigo para Incremento I.
Planta sin injertar obtenida a partir de una semilla certificada cultivada cumpliendo con los requerimientos
de un Almácigo para Incremento II.
9
PNCC
Programa de
Saneamiento
Semilla
Certificada
Vareta o estaca
Vivero de
Certificación
Yemas
Certificadas
Abreviación de Programa Nacional de Certificación de
Cítricos.
Conjunto de actividades conducentes a la eliminación
de enfermedades transmisibles en los materiales de
propagación y a la confirmación de los resultados en
función de los Estándares correspondientes.
Son las que proceden de Bloques de Árboles Productores de Semillas.
Trozo de rama con yemas, destinado a la propagación,
ya sea por injerto de yema, púa o mediante el
enraizamiento del mismo.
Bloque de Producción instalado con el cometido de
producir Plantas Certificadas, constituido por plantas
originadas a partir de Yemas Certificadas injertadas
sobre Plantines Certificados.
Son yemas producidas en un Bloque de
Incremento II.
Yemas Fundación Son yemas extraídas del Material Inicial.
4.-
Yemas para
Incremento I
Son yemas producidas en un Bloque Fundación.
Yemas para
Incremento II
Son yemas producidas en un Bloque de Incremento I.
DESCRIPCIÓN
El presente Estándar presenta:
•
La lista de plagas A2 y No Cuarentenarias Reguladas en el ámbito nacional.
•
El Esquema de Certificación a aplicarse.
•
La categorización de los Materiales de Propagación producidos.
10
ANEXO - ESTANDAR
II
•
Las condiciones de aislamiento que cumplen los Bloques de
Producción de Materiales para las distintas categorías,
las inspecciones que se realizan especificando el objetivo de las
mismas y los momentos en que se realizan.
•
La metodología de muestreo a utilizar especificando el momento en
que se realiza la extracción.
•
Los niveles de tolerancia para las plagas consideradas en las distintas
categorías.
•
Los métodos analíticos a utilizar en los casos que corresponda, a
aplicar en la implementación del Programa Nacional de Certificación
de Cítricos.
REQUISITOS GENERALES
1.-
Lista de Plagas a Considerar
a.
Plagas A2
Xanthomonas axonopodis pv citri Bacteria de la Cancrosis de los Cítricos
b.
2.
Plagas No Cuarentenarias Reguladas
CCAVd
Viroide de la Cachexia – Xiloporisis de los Cítricos
CEVd
Viroide de la Exocortis de los Cítricos y relacionados
CPsV
Complejo de la Psorosis de los Cítricos
CTV
Virus de la Tristeza de los Cítricos
Esquema de Certificación
En la producción de materiales de propagación certificados oficialmente,
se aplica el siguiente esquema:
11
PROGRAMA DE
CUARENTENA
PROGRAMA DE
SANEAMIENTO
MATERIAL
INICIAL
YEMAS PARA
FUNDACIÓN
BLOQUE
FUNDACIÓN
BLOQUE DE
ÁRBOLES
PRODUCTORES
DE SEMILLAS
YEMAS PARA
INCREMENTO I
BLOQUE DE
INCREMENTO I
SEMILLAS
CERTIFICADAS
Fundación
Increm. I
Increm. II
BLOQUE DE
INCREMENTO II
V. Certific.
YEMAS
CERTIFICADAS
VIVERO DE
CERTIFICACIÓN
PLANTAS
CERTIFICADAS
ALMACIGOS
YEMAS PARA
INCREMENTO II
12
ANEXO - ESTANDAR
3.
Bloques de Producción y Materiales Vegetales que en
ellos se producen
El presente Estándar considera la instalación de los siguientes Bloques
de Producción y las siguientes categorías de Materiales Vegetales que en
ellos se producen. Esta información se presenta en el Cuadro 1.
Cuadro 1.
Bloques de Producción y Materiales que en cada uno de ellos se
producen.
BLOQUE DE PRODUCCIÓN
MATERIAL VEGETAL
BLOQUE FUNDACIÓN
YEMAS PARA INCREMENTO I
BLOQUE DE INCREMENTO I
YEMAS PARA INCREMENTO II
BLOQUE DE INCREMENTO II
YEMAS CERTIFICADAS
BLOQUE DE ÁRBOLES PRODUCTORES
DE SEMILLAS
SEMILLAS CERTIFICADAS
ALMACIGOS
FUNDACIÓN
PARA FUNDACIÓN
INCREMENTO I
PARA INCREMENTO I
INCREMENTO II
VIVERO DE
CERTIFICACIÓN
VIVERO DE CERTIFICACIÓN
4.
PLANTINES
PARA INCREMENTO II
CERTIFICADOS
PLANTAS CERTIFICADAS
Niveles de Tolerancia
Para todas las categorías, los niveles de tolerancia para las plagas consideradas son del 0%.
5.
Origen de la plantas incluidas en los distintos Bloque de Producción
y controles que se realizan
Se presenta, en el Cuadro 2, el origen de las plantas que integran los distintos Bloques de Producción y se describen los controles, tanto sanitarios
como de Identidad Genética, que en cada uno de ellos se realizan.
13
Cuadro 2.
Origen de las plantas en cada Bloque de Producción y Controles
Sanitarios y de Identidad Varietal.
ORIGEN DE LAS
PLANTAS
CONTROLES SANITARIOS
Inspección individual, en los
momentos de mayor brotación,
para detección de síntomas de
las plagas consideradas.
BLOQUE
FUNDACIÓN
BLOQUE DE
INCREMENTO I
Yemas:
provenientes del
Material Inicial
injertadas sobre
Plantines para
Fundación.
Yemas
provenientes del
Bloque Fundación
injertadas sobre
plantines para
Incremento I.
Yemas
provenientes del
Bloque Fundación
o del Bloque de
Incremento I
BLOQUE DE
injertadas sobre
INCREMENTO II
plantines para
Incremento II o de
categorías
superiores.
BLOQUE DE
ÁRBOLES
PRODUCTORES
DE SEMILLAS
ALMACIGOS
VIVERO DE
CERTIFICACIÓN
Yemas
provenientes de
cualquiera de los
Bloques de
cualquier
Categoría
injertadas sobre
plantines
certificados o de
categorías
superiores.
Semillas
Certificadas
YemasCertificadas
o de categorías
superiores
injertadas sobre
plantines
Certificados o de
categorías
superiores.
Tristeza y Psorosis: Testaje
anual individual.
Cancrosis: Testaje anual
individual para confirmación de
inexistencia de bacteria
asintomática.
Viroides: Testaje cada 3 años.
Inspección visual individual en
los momentos de mayor
brotación para detección de
síntomas de enfermedades
transmisibles por injerto.
Tristeza: Test del 5% de cada
Clon con tamaño de muestra
mínimo de 2 plantas.
Cancrosis: Testaje anual por clon
para confirmación de inexistencia
de bacteria asintomática.
Inspección visual individual en
los momentos de mayor
brotación para detección de
síntomas de enfermedades
transmisibles por injerto.
Tristeza: Test sobre 2% de cada
Clon con tamaño de muestra
mínimo de 5 plantas.
CONTROLES DE
IDENTIDAD GENÉTICA
Inspección visual de las
características
descriptivas del cultivar.
Establecimiento a
campo, en condiciones
normales de cultivo, de
plantas realizadas con
Yemas para Fundación
o cambios de copa con
Yemas para Fundación.
Inspección visual
detallada de las
características
descriptivas de cada
cultivar del Bloque.
Inspección visual
detallada de las
características
Cancrosis: Testaje anual por
cultivar para confirmación de
inexistencia de bacteria
asintomática.
Inspección visual en los
momentos de mayor brotación
para detección de síntomas de
enfermedades transmisibles por
semillas.
Psorosis: Testaje individual
anual.
Inspección visual para detección
de síntomas de las plagas
consideradas con especial
atención a la presencia de
hongos de suelo (Ej.:
Phytophthora).
Tests confirmatorios si
corresponde.
Inspección visual para detección
de síntomas de las plagas
consideradas con especial
atención a la presencia de
hongos de suelo (Ej.:
Phytophthora).
Tristeza: Test sobre el 0,5% de
cada Clon con un tamaño mínimo
de muestra de 10 plantas por
cultivar.
Inspección visual para
detección de plantines
de origen cigótico,
anormales o fuera de
tipo.
Inspección visual
detallada de las
características
14
ANEXO - ESTANDAR
6.
Condiciones de aislamiento.
Del Predio
a.
Ubicación
Los Predios donde se instalan Bloques de Producción de Materiales de Propagación de Cítricos cumplen con la normativa vigente en
cuanto a la prohibición de instalación de los mismos en Zonas de
Alto Riesgo por Cancrosis.
b.
Desinfección al Ingreso
Se realiza la desinfección de personas, vehículos, implementos y
herramientas al ingreso al Predio donde se instalan Bloques de Producción con un bactericida adecuado (Ej.: Amonio Cuaternario).
De los Bloques de Producción
a.
Ubicación, condiciones de aislamiento y plazo de utilización
En el Cuadro 3, se presentan las condiciones de aislamiento (∗ ) y
plazo máximo de utilización de cada Bloque de Producción.
b.
Desinfección de herramientas de corte.
En el Cuadro 4 se presentan las instancias de desinfección que se
realizan con Hipoclorito de Sodio para evitar la contaminación de
los materiales en los Bloques de Producción.
Cuadro 4.
Instancias de desinfección de herramientas de corte
según Bloque de Producción.
BLOQUE FUNDACIÓN
BLOQUE DE
INCREMENTO I
BLOQUE DE
DESINFECCIÓN
ENTRE PLANTAS
DESINFECCIÓN
ENTRE LOTES
SI
SI
-----
SI
SI
-----
SI
-----
SI
BLOQUE DE ÁRBOLES
PRODUCTORES DE
SEMILLAS
SI
SI
-----
VIVERO DE
CERTIFICACIÓN
SI
-----
SI
ALMÁCIGOS TODAS
LAS CATEGORÍAS
SI
-----
SI
INCREMENTO II
*
DESINFECCIÓN
PREVIA
Otras condiciones de aislamiento no contempladas en el presente estándar pueden ser
consideradas particularmente, a los efectos de equivalerlas a las establecidas en el Cuadro 3.
15
Cuadro 3.
Condiciones de aislamiento y plazo de utilización para cada
Bloque de Producción.
CONDICIONES DE
AISLAMIENTO
BLOQUE
FUNDACIÓN
ALMÁCIGO
FUNDACIÓN
PLAZO DE UTILIZACIÓN
Plantas en macetas individuales con
sustratos esterilizados en recintos
cubiertos a prueba de insectos vectores y Indefinido
sin piso de tierra.
Doble puerta.
Sistema de desinfección a la entrada.
Distancia a otros cultivos comerciales de
cítricos: 1000 metros
No corresponde
Circulación mínima necesaria de
personal.
Recintos cubiertos a prueba de insectos
INCREMENTO I vectores y doble puerta.
Sistema de desinfección a la entrada.
BLOQUE DE
Dos años desde la injertada. Superado
el mismo podrá utilizarse como Bloque
de Incremento II por dos años más.
Distancia a otros cultivos comerciales de
Cítricos: 500 metros.
ALMÁCIGO
INCREMENTO I
Circulación mínima necesaria de
personal.
No corresponde
En recintos cubiertos de manera tal que
le confieran cierta protección contra
insectos vectores, con sistema de
desinfección a la entrada la distancia a
otros cultivos cítricos es de 100 metros.
Tres años desde la injertada.
BLOQUE DE
INCREMENTO
II
ALMÁCIGO DE
INCREMENTO II
A campo, la distancia a otros cultivos
comerciales de cítricos es de 500 metros. No corresponde
BLOQUE DE
ÁRBOLES
A campo la distancia a otros cultivos
PRODUCTORES comerciales de cítricos es de 50 metros.
DE SEMILLAS (∗)
Indefinido
VIVERO DE
CERTIFICACIÓN
A campo la distancia a otros cultivos
No corresponde
comerciales de cítricos es de 100 metros.
ALMÁCIGO DE
VIVERO DE
CERTIFICACIÓN
∗
Hasta tanto estos Bloques se instalen y entren en producción, se exceptúan del
cumplimiento de las exigencias de aislamiento autorizándose la utilización de semillas
obtenidas a partir de árboles testados y hallados libres de Psorosis.
16
ANEXO - ESTANDAR
7.
Condiciones Generales de Cultivo.
En los Bloques de Producción existen condiciones adecuadas para lograr
un correcto desarrollo de las plantas y un control eficiente de plagas.
Las herramientas de corte no se utilizan en Bloques de Producción de diferente categoría.
8.
Identificación de las plantas en los Bloques de Producción.
En el Cuadro 5 se establecen los criterios a aplicar para la identificación
de las plantas de los diferentes Bloques de Producción y la información
mínima que figura.
Cuadro 5.
Identificación de las plantas en los distintos Bloques de
Producción.
CRITERIO DE
IDENTIFICACIÓN
BLOQUE FUNDACIÓN
BLOQUE DE
Individual de cada planta y
código de colores
INCREMENTO I
BLOQUE DE ÁRBOLES
PRODUCTORES DE
SEMILLAS
BLOQUE DE
INCREMENTO II
VIVERO DE
CERTIFICACIÓN
ALMÁCIGOS TODAS
LAS CATEGORÍAS
INFORMACIÓN
Código PNCC, Identificación del
Cultivar e identificación de la
planta (A, B, C, etc)
Código PNCC, identificación del
cultivar e identificación de la
planta (A, B, C, etc) de la que se
extrajeron los injertos.
Identificación del Bloque donde
se produjeron los injertos.
Código PNCC, identificación del
cultivar e identificación de la
planta
Por conjunto de plantas
derivadas de un mismo clon
Código PNCC e identificación
del cultivar
Por conjunto de plantas
derivadas de un mismo clon
injertadas sobre el mismo
portainjerto
Por conjunto de plantines
obtenidos de semillas del mismo
cultivar y mismo origen
del cultivar del injerto y Código
PNCC e identificación del
cultivar del portainjerto
del cultivar
17
9.
Acondicionamiento e identificación de los materiales producidos
Todos los materiales producidos en el marco del PNCC están debidamente etiquetados y acondicionados. En la Tabla 6 se establecen los criterios a aplicar para el acondicionamiento e identificación de estos materiales de propagación factibles de ser producidos. (Cuadro 6)
Cuadro 6.
Acondicionamiento de loa materiales producidos e información que
debe figurar en los respectivos rótulos o etiquetas.
CRITERIO DE
IDENTIFICACIÓN
INFORMACIÓN de la
ETIQUETA
Nº de Etiqueta
Identificación del Cultivar
Código PNCC
Planta del Bloque Fundación de
la que derivan.
Identificación del Bloque
Categoría del Material
Cantidad de Yemas
Fecha de Cosecha
Empresa Productora
YEMAS INCREMENTO I
YEMAS INCREMENTO II En bolsas
YEMAS CERTIFICADAS
Nº de Etiqueta
Código PNCC
Cantidad de Yemas
Fecha de Cosecha
Empresa Productora
SEMILLAS
CERTIFICADAS
Nº de Etiqueta
Código PNCC
Kilogramos de semilla
Fecha de Cosecha
Empresa Productora
PLANTINES
Nº de Etiqueta
Código PNCC
Cantidad
Fecha de arrancado
Empresa Productora
PLANTAS
CERTIFICADAS
En manojos de hasta 50
unidades
Individual
Nº de Etiqueta
Empresa Productora
Mes y Año
Del Injerto:
•
•
Código PNCC
Del Portainjerto:
•
•
Código PNCC
18
ANEXO - ESTANDAR
10.
INSPECCIONES
En el proceso de certificación se realizan las inspecciones requeridas en
los momentos y con los objetivos que se indican en el Cuadro 7.
Cuadro 7. Inspecciones: momentos y objetivos
MOMENTO
A la siembra de semillas
certificadas
Durante desarrollo de los
plantines en almácigo
Al arranque de los plantines
Al enviverado de los
plantines
Durante el desarrollo de los
plantines en vivero
A la injertación
Luego de 20 días de la
injertación
A la reinjertación (si
corresponde y sólo en
Viveros de Certificación)
Previo a la extracción de
yemas (Bloques Fundación
y de Incremento)
A la extracción de yemas
Previo al arranque de
plantas
Al arranque de las plantas
Cosecha de fruta
Extracción de semillas
OBJETIVO
Control del cumplimiento de las
condiciones de aislamiento del lugar
donde se instalará el almácigo, del
Origen del Material utilizado y de la
identificación de las parcelas.
Detección de síntomas posiblemente
ocasionados por las plagas consideradas
y de plantines fuera de tipo.
Control de la calidad y del rotulado de los
materiales producidos.
Control del cumplimiento de las
condiciones de aislamiento, del Origen
del Material utilizado y de la identificación
de las parcelas.
Detección de síntomas ocasionados por
las plagas consideradas y de plantines
fuera de tipo y control de las condiciones
generales del cultivo.
Control del origen de los materiales a
injertar y de la identificación de las
plantas o parcelas (según corresponda).
OBSERVACIONES
Inspección obligatoria a
realizarse al instalar
almácigos en sus distintas
categorías.
Control de prendimiento de los injertos.
Control del origen de los materiales y de
la reinjertación con materiales
pertenecientes al mismo clon del injerto
no prendido.
Detección de síntomas posiblemente
ocasionados por las plagas consideradas
y estimación de producción de material.
las plagas consideradas y de plantas
fuera de tipo y control de las condiciones
generales del cultivo.
las plagas consideradas, estimación de
producción de materiales, control de
operativa asegurando identidad genética.
Control de la operativa asegurando la
identidad genética de los lotes, envasado
y rotulado.
En todas las instancias de Inspección se realiza el control del cumplimiento de medidas
de aislamiento tales como desinfección al ingreso al predio, desinfección al ingreso a
los Bloques de Producción, existencia de herramientas de uso exclusivo, etc.
Esta publicación del PROCISUR, tiene un tiraje de 600 ejemplares y se terminó de
imprimir en la ciudad de Montevideo, Uruguay, en el mes de mayo de 1999.
Diagramación y armado: Cristina Díaz
Impresión: Imprenta Boscana S.R.L.
Depósito Legal Nº 314.424

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