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DESENVOLVIMENTO DO TESTE DE IMUNOFENOTIPAGEM
PARA A CONTAGEM DE LINFÓCITOS TCD4+.
Marli Sidoni
Bio‐Manguinhos/Fiocruz
Panorama da AIDS no Brasil  656.701 casos de aids notificados desde de 1980 a junho de 2012.
 36 mil novos caso/ano em média.
 Taxa de prevalência de 0,4% de HIV na população geral.  Aproximadamente 11,5 mil óbitos por ano.
 Investimento em Prevenção, Tratamento e Diagnóstico pelo MS:
≈1 bilhão e 200 mil reais
(780 milhões destinaram‐se ao fornecimento de medicamentos)
 217 mil pessoas tem acesso ao tratamento para a aids de forma gratuita.
Fonte: Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais/SVS/MS
Monitoramento de esquemas terapêuticos a serem utilizados na infecção pelo HIV
Monitoramento de esquemas terapêuticos a serem utilizados na infecção pelo HIV
Uma única empresa fornece os kits para a Rede Nacional de Laboratórios de CD4+CD8+/MS
Objetivo:
Desenvolver um kit alternativo de contagem de linfócitos T CD4+ e implantação na Rede Nacional de Laboratórios de CD4 + /CD8 +.
Linha do tempo
2012
Conclusão da Etapa I do contrato
Avaliação de outros citometros de fluxo
2011
Assinatura do contrato com CIM/Cuba
2010
2009
2008
2013
4º escopo‐
Modelo”on source”
Kit Quadriplex
Validação do anti‐CD45 do CIM/Cuba
3º escopo‐ Inclusão do anti‐CD45 no kit de BM
Inclusão das microesferas no kit de BM
Inicio dos processos de conjugação dos AcMn em BM
2007
2006
2005
2004
2º escopo‐ FK – negociações interrompidas Fornecimento de Produto + Equipamentos (citometros de fluxo com 1 laser‐ 3 cores)
Identificação do CIM/Cuba e FK como fornecedor dos hibridomas.
Contato com possíveis fornecedores dos hibridomas secretores dos AcMn – sem sucesso
28 de maio de 2004‐ Diário Oficial da União‐ MS
1º escopo‐ Fornecimento de anti‐CD3/CD4/CD8 conjugados para o MS.
Conjugação dos anticorpos monoclonais a fluorocromos
• anti‐CD3
• anti‐CD4
FITC
PE
• anti‐ CD8
PE/CY7
Cy5
• anti‐ CD45
Avaliação dos AcMn conjugados em BM frente aos disponibilizados para a Rede Nacional de Laboratórios de CD4+CD8+
anti‐CD3 anti‐CD4
anti‐CD8
anti‐CD45
BM
BM
BM
BM
BD
BD
BD
BD
IM= Média Geométrica Positivo – Média Geométrica Negativo
2 x Desvio Padrão do Negativo
Avaliação das microesferas comerciais frente as disponibilizadas para a Rede Nacional de Laboratórios de CD4+CD8+ (valores percentuais) Avaliação das microesferas comerciais frente as disponibilizadas para a Rede Nacional de Laboratórios de CD4+CD8+ (contagem absoluta) Procedimento técnico para a execução do ensaio
50µL
de
sangue
total
20µL de
AcMn
conjugados
Incubar /15 min/
TA/escuro
450µL de
solução de
lise
Incubar /15
min/ TA/escuro
50µL de
microesferas
comerciais
Aquisição e analise
no citometro de fluxo
Composição do Kit (AcMn + Conjugação + T. Lise + T. Lavagem + Microesferas + Assist. Téc. Produto)
Estudo de Viabilidade Equipamentos e Assistência Técnica
Técnica e Econômica
Treinamentos + Workshop
Custos Indiretos
EVTE
Conclusão
Os insumos para o kit em desenvolvimento em Bio‐Manguinhos
poderá ser utilizado visando o monitoramento da evolução clínica de
indivíduos infectados pelo HIV ou quando da introdução de terapias com
antirretrovirais em novos pacientes. Esse monitoramento possibilita a adoção
de terapias preventivas às infecções oportunistas e busca a efetividade do
tratamento.
Cumpre ressaltar que, é necessário negociar os equipamentos e assistência
técnica (citômetros de fluxo e acessórios), seguindo o modelo “one source”‐
Produto + Equipamentos + Serviço + treinamentos + Gerenciamento de rede
complexa, estoques etc) para implantação do kit nos laboratórios da Rede
Nacional de Laboratórios CD4+CD8+ .
Agradecimentos
1. Lab.de AIDS e Imunologia Molecular/ Depto. de Imunologia/IOC
Dra. Mariza Morgado
Dra. Carmem Gripp
Monick Lindenmeyer Guimarães
2. Lab. de Imunoparasitologia/Depto. de Imunologia/IOC
Dr. Álvaro Luiz Bertho
3. PDTIS – Programa de Desenvolvimento Tecnológico em Insumos para a Saúde
RID‐ Rede de Desenvolvimento de Insumos para Diagnóstico “Contribuir para a melhoria dos padrões de saúde
pública
brasileira,
por
meio
de
inovação,
desenvolvimento tecnológico e produção de
imunobiológicos e prestação de serviços para atender
prioritariamente às demandas de saúde do país”.
Obrigada. [email protected]