Apresentação do PowerPoint - Encontro de Jovens Pesquisadores
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Apresentação do PowerPoint - Encontro de Jovens Pesquisadores
XXII Encontro de Jovens Pesquisadores e IV Mostra Acadêmica de Inovação e Tecnologia USO DE ETANOL NA RECUPERAÇÃO E PURIFICAÇÃO DO LACTOBIONATO DE SÓDIO OBTIDO POR ENZIMAS IMOBILIZADAS DE Zymomonas mobilis PROBIC/FAPERGS Daniela Cauzzi Rodrigues, Natalia Moreno Conceição Beraldo, Sabrina Carra, Mauricio Moura da Silveira, Eloane Malvessi Instituto de Biotecnologia – Laboratório de Bioprocessos Projeto: GFOR2 E-mail: [email protected] INTRODUÇÃO METODOLOGIA ANALÍTICA: Ácido lactobiônico: ácido orgânico de alto valor comercial, utilizado na área médica e cosmética (SUMIMOTO e KAMADA, 1990; KIM e KIM, 2003; • Concentração de células: gravimetria BARQUET et al., 2006). • Substratos e produtos da precipitação: HPLC – coluna Aminex HPX87H, fase móvel H2SO4 0,50 mM, vazão 0,6mL/min, 60°C. Sorbitol: poliálcool empregado na indústria farmacêutica e de alimentos (SILVEIRA e JONAS, 2002). Consistem em produtos da bioconversão de lactose e frutose, respectivamente, em reação catalisada pelas enzimas glicose frutose oxidorredutase (GFOR) e gluconolactonase (GL) de Zymomonas mobilis (ZACHARIOU e SCOPES, 1986). Ao final da bioconversão, os produtos devem ser separados da mistura reacional que contém, ainda, substratos residuais. RESULTADOS Recuperação de lactobionato de sódio do caldo de bioconversão com células imobilizadas de Zymomonas mobilis, utilizando 75 e 60% (v/v) de etanol. OBJETIVO Avaliar a recuperação e purificação de lactobionato de sódio obtido por enzimas imobilizadas de Zymomonas mobilis por precipitação com etanol. MATERIAL E MÉTODOS Microrganismo: Zymomonas mobilis ATCC 29191 Meio de cultivo: glicose e sais nutrientes (Malvessi et al., 2006) Cultivo de Z. mobilis (5,5L, 30°C,400rpm, 12h, pH 5,5 Inóculo (0,45L), 30°C, 200rpm, 12h Ativação celular Imobilização celular em alginato de cálcio Permeabilização celular (CTAB 0,2% (m/v)) Caldo de bioconversão: produtos formados e substratos residuais Bioconversão: 20g/L de células; 200mL de solução frutose (0,6mol/L) + lactose (0,7mol/L); pH6,4; 39°C PRECIPITAÇÃO 4°C, 24h Sobrenadante Precipitação 1 2 3 A 86 75 67 Recuperação em triplicatas (%) Etanol 75% (v/v) Etanol 60%(v/v) B C A B 91 88 83 82 82 81 67 67 74 72 58 61 Purificação de lactobionato de sódio do caldo de bioconversão com células imobilizadas de Zymomonas mobilis, utilizando 75 e 60% (v/v) de etanol, após três precipitações. Triplicatas Etanol 75% (v/v) Etanol 60% (v/v) A 81 99 B 61 86 C 70 94 CONCLUSÕES O processo de precipitação com etanol é viável para a recuperação e purificação do lactobionato de sódio obtido via processo de bioconversão com células imobilizadas de Z. mobilis. Nas condições avaliadas, foi observado que a vazão de adição de etanol, temperatura e a mistura influenciaram o rendimento em lactobionato obtido com a precipitação em etanol. Perspectivas: otimização do método usando Box-Behnker Design (BBD), com a avaliação do efeito da temperatura, teor e vazão de adição do solvente sobre o rendimento final de lactobionato. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS Análises Precipitação com etanol 60 e 75% (v/v), agitação magnética Precipitado Ressuspenso em água destilada A etapa de precipitação foi repetida 3 vezes, obtendo-se precipitados (1, 2 e 3) e sobrenadantes (1, 2 e 3) em cada batelada. Todos os testes foram realizados em triplicata. C 82 68 55 BARQUET, A. P.; FINCH, A. P.; KOESTERS, L. S. Rev. Bras. Farm. 87:67-73, 2006 KIM, I.; KIM, S. Int . J. Pharm. 257:195-203, 2003 MALVESSI et al Braz. Arch. Biol. Technol. 49: 139-144, 2006 SILVEIRA, M.M.; JONAS, R. Appl. Microbiol. Biotechnol. 59:400-408, 2002 SUMIMOTO, R.; KAMADA, N. Transpl. Proc. 22:2198-2199, 1990 ZACHARIOU, M.; SCOPES, R. K. J. Bacteriol.3:863-869, 1986 APOIO